Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The purpose of this study was to conduct a phytochemical study of the crude extract of the leaves of the species Pilocarpus pennatifolius derived the genus Pilocarpus, popularly known as jaborandi or agouti-white. This species is widely distributed in the Americas, in the state of Rio Grande do Sul in natural plant formations in the central region and has use in folk medicine in the treatment of glaucoma and digestive diseases. In this work were isolated molecules of which the chromatographic profile were studied by column chromatography and TLC, the identification and confirmation of the compounds, by analysis of diffraction X-rays, NMR 1H and 13C one and two dimensional, rotation optical of index and fusion points. The bergapten 24 and xanthotoxin 25 compounds belonging to the class of furanocoumarins were isolated in the acid ether fraction with different solvent gradient (CHCl3-MeOH 1% for bergapten e CHCl3-MeOH 5% for xanthotoxin). The imidazole alkaloid G01-20 was first isolated in pennatifolius Pilocarpus species, derived from the basic fraction acetate gradient solvent of CHCl3-MeOH 15%. Throught the hydrodestilation was the extraction of essential oils of the species P.pennatifolius in the different seasons, with the intention of compare the chemically the same as seasonality. The main constituents were found ��-humolene and E-caryophyllene. While limonene manifests itself only the winter and summer at low concentrations. The antimicrobial activities of metabolites, fractions, extract and essential oils showed good antimicrobial potential against some microorganimos. The xanthotoxin metabolite when tested against their antioxidant capacity showed a good antioxidant potential. / A proposta deste trabalho foi realizar um estudo fitoquímico do extrato bruto das folhas da espécie Pilocarpus pennatifolius, derivada do gênero pilocarpus, conhecida popularmente como jaborandi ou cutia-branca. Essa espécie encontra-se amplamente distribuída no continente americano, no estado do Rio Grande do Sul em formações vegetais naturais na região central e tem uso na medicina popular no tratamento de glaucoma e enfermidades digestivas. Nesse trabalho foram isolados compostos dos quais foram estudados o perfil cromatográfico, por cromatografia em coluna e CCD, e a identificação por análise de difração de raios-X, RMN de 1H e 13C uni e bidimensional, índice de rotação óptica e ponto de fusão. Os compostos begapteno 24 e xantotoxina 25 pertencente a classe das furanocumarinas, foram isolados da fração etérea ácida com diferentes gradientes de solvente (CHCl3-MeOH 1% para o bergapteno e CHCl3-MeOH 5% para a xantotoxina). O alcaloide imidazólico G01 20 foi isolado pela primeira vez na espécie Pilocarpus pennatifolius, obtida da fração Acetato Básica com gradiente de solvente CHCl3-MeOH 15%. Através da hidrodestilação, fez-se também, a extração dos óleos essenciais da espécie P. pennatifolius nas diferentes estações do ano, com o intuito de comparar a constituição química do mesmo quanto a sazonalidade. Os principais constituintes encontrados foram ��-humuleno e E-cariofileno. Ao passo que o limoneno se manifesta apenas no inverno e verão em baixas concentrações. As atividades antimicrobiana dos metabólitos, frações, extrato e óleos essenciais apresentaram bons potenciais antimicrobiano frente a alguns microorganimos. O metabólito xantotoxina quando testada frente a sua capacidade antioxidante apresentou um bom potencial antioxidante.

Pilocarpus pennatifolius Lemmaire (Rutaceae) é uma espécie nativa que ocorre nas regiões Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do Brasil, e é popularmente conhecida por jaborandi. Essa e outras espécies de Pilocarpus encontram-se em risco de extinção devido ao extrativismo (uso como planta medicinal) e ao desmatamento. O cultivo in vitro de P. pennatifolius foi realizado como uma alternativa para a produção de pilocarpina (princípio ativo do jaborandi). A cultura de células foi obtida em meio MS semi-sólido, suplementado com sacarose, como fonte de carbono, e tendo como reguladores de crescimento BAP, IAA e NAA. O tempo de duplicação da cultura de calos foi de 22 dias. A concentração do alcalóide, determinada por técnicas cromatográficas, foi de aproximadamente 0,1 µg/ mg de biomassa. Os ensaios enzimáticos referentes à biossíntese da pilocarpina tiveram como objetivo elucidar a etapa inicial de formação do anel imidazólico, além da localização desta reação na planta. Os experimentos realizados indicaram a presença da enzima histidina amino-transferase (HAT, EC 2.6.1.38) cuja atividade catalítica foi de 46,09 nKat/ mg de proteína, apenas no extrato protéico das raízes de P. pennatifolius. A determinação da composição do óleo essencial por CG e CG/EM indicou como constituintes majoritários os hidrocarbonetos tridecano (56,8 %) e pentadecano (25,5 %). Os sesquiterpenos não oxigenados constituíram cerca de 15 % do óleo obtido. / Pilocarpus pennatifolius Lemmaire (Rutaceae) is a native Brazilian species which is commonly known as jaborandi. This species is endangered due to its exploitation as medicinal plant and the increasingly deforestation. A callus culture of P. pennatifolius was established as an alternative source for pilocarpine production (the active compound of jaborandi). The cell culture was obtained in a semi-solid media, supplemented with sucrose as carbon source and as growth regulators, BAP, IAA e NAA. The doubling time for the callus culture was determined as 22 days. The concentration of the alkaloid, obtained by chromatographic techniques was ca. 0.1 µg/ mg dry weight. The enzymatic assays related to pilocarpine biosynthesis were carried out with the aim to elucidate the imidazole ring formation beyond identify the site were this reaction takes place. The results indicated the presence of the enzyme histidine ammonia transferase (HAT, EC 2.6.1.38) only in the protein extract obtained from the roots of P. pennatifolius. The catalytic activity for this enzyme was 46.09 nKat/ mg protein. Volatile constituents from the leaves were analyzed by GC and GC/MS and the major compounds were determined as the hydrocarbons tridecane (56.8 %) and pentadecane (25.5 %). Almost 15 % of the total composition was constituted of non-oxygenated sesquiterpenes.

Pilocarpus pennatifolius Lemmaire (Rutaceae) é uma espécie nativa que ocorre nas regiões Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do Brasil, e é popularmente conhecida por jaborandi. Essa e outras espécies de Pilocarpus encontram-se em risco de extinção devido ao extrativismo (uso como planta medicinal) e ao desmatamento. O cultivo in vitro de P. pennatifolius foi realizado como uma alternativa para a produção de pilocarpina (princípio ativo do jaborandi). A cultura de células foi obtida em meio MS semi-sólido, suplementado com sacarose, como fonte de carbono, e tendo como reguladores de crescimento BAP, IAA e NAA. O tempo de duplicação da cultura de calos foi de 22 dias. A concentração do alcalóide, determinada por técnicas cromatográficas, foi de aproximadamente 0,1 µg/ mg de biomassa. Os ensaios enzimáticos referentes à biossíntese da pilocarpina tiveram como objetivo elucidar a etapa inicial de formação do anel imidazólico, além da localização desta reação na planta. Os experimentos realizados indicaram a presença da enzima histidina amino-transferase (HAT, EC 2.6.1.38) cuja atividade catalítica foi de 46,09 nKat/ mg de proteína, apenas no extrato protéico das raízes de P. pennatifolius. A determinação da composição do óleo essencial por CG e CG/EM indicou como constituintes majoritários os hidrocarbonetos tridecano (56,8 %) e pentadecano (25,5 %). Os sesquiterpenos não oxigenados constituíram cerca de 15 % do óleo obtido. / Pilocarpus pennatifolius Lemmaire (Rutaceae) is a native Brazilian species which is commonly known as jaborandi. This species is endangered due to its exploitation as medicinal plant and the increasingly deforestation. A callus culture of P. pennatifolius was established as an alternative source for pilocarpine production (the active compound of jaborandi). The cell culture was obtained in a semi-solid media, supplemented with sucrose as carbon source and as growth regulators, BAP, IAA e NAA. The doubling time for the callus culture was determined as 22 days. The concentration of the alkaloid, obtained by chromatographic techniques was ca. 0.1 µg/ mg dry weight. The enzymatic assays related to pilocarpine biosynthesis were carried out with the aim to elucidate the imidazole ring formation beyond identify the site were this reaction takes place. The results indicated the presence of the enzyme histidine ammonia transferase (HAT, EC 2.6.1.38) only in the protein extract obtained from the roots of P. pennatifolius. The catalytic activity for this enzyme was 46.09 nKat/ mg protein. Volatile constituents from the leaves were analyzed by GC and GC/MS and the major compounds were determined as the hydrocarbons tridecane (56.8 %) and pentadecane (25.5 %). Almost 15 % of the total composition was constituted of non-oxygenated sesquiterpenes.