Les piwi-interacting RNAs (piRNA) interagissent avec les protéines qui font partie de la branche PIWI de la famille des Argonautes. Ils participent à la répression des transposons dans la ligne germinale. Chez la souris, les protéines PIWI sont indispensables pour la fertilité des mâles et sont responsables de la méthylation de l'ADN au niveau des promoteurs des transposons. Les piRNA sont produis à partir de deux mécanismes: la biogenèse primaire et le cycle d'amplification ping-pong. Nous avons fait des études fonctionnelles sur deux protéines qui participent à la voie des piRNA: l'hélicase d'ARN MOV10L1 et l'immunophiline FKBP6. Nous avons décrit le rôle de MOV10L1 en tant que facteur de biogenèse primaire. La disruption génétique du domaine hélicase de MOV10L mène à une activation des transposons et à une perte de la méthylation de l'ADN. Ainsi, les piRNA ne sont pas produits chez le mutant, ce qui suggère que MOV10L1 est essentielle pour la biogenèse des piRNA. Tdrd1 interagit avec les protéines PIWI et joue un rôle dans la voie des piRNA en recrutant quelques facteurs à partir de son domaine MYND N-terminal. Nous avons montré que le domaine MYND de Tdrd1 interagit avec FKBP6, une protéine qui appartient à une famille d'isomérases de prolines qui sont présentes dans des complexes de chaperonnes. Les études biochimiques réalisées indiquent que FKBP6 est inactive et qu'elle utilise son domaine isomérase comme un module structural qui interagit avec les protéines PIWI, alors qu'elle interagit avec Hsp90 avec son domaine TPR. L'analyse d'une souris mutante pour fkbp6 a révélé une dérépression des transposons et une perte de la méthylation de l'ADN, mais peu d'effets sur la biogenèse primaire. Ces résultats sont en accord avec un rôle de FKBP6 en aval de Tdrd1, et nous pouvons penser que ce rôle pourrait être le recrutement de Hsp90 pour participer au cycle d'amplification ping-pong. / Piwi-interacting RNAs (piRNAs) associate to members of the PIWI clade of Argonaute proteins and are responsible for silencing of transposable elements in animal germ lines. In mouse, PIWI proteins mediate DNA methylation at the level of transposon promoters and are required for male fertility. piRNAs are produced through two biogenesis pathways, known as primary processing and ping-pong amplification cycle. This study focuses on the functions of two PIWI-associated proteins: the putative RNA helicase MOV10L1 and the immunophilin FKBP6. Here, the role of MOV10L1 as a primary piRNA processing factor is described. Genetic disruption of MOV10L1's RNA helicase domain results in male-specific sterility and derepression of retrotransposons due to reduction of DNA methylation. A complete loss of piRNAs is observed in the mutant, pointing to a pivotal role of MOV10L1 in piRNA biogenesis. Tdrd1 associates with PIWI proteins and has been suggested to play a role in the piRNA pathway by recruiting some factor through its N-terminal MYND domain. We show that Tdrd1's MYND domain interacts with FKBP6, which belongs to a family of prolyl isomerases present in chaperone complexes. Biochemical studies suggest FKBP6 is inactive and uses its prolyl isomerase domain as a structural module for binding PIWI proteins, while binding Hsp90 through its TPR domain. Analysis of an fkbp6 mutant mouse reveals transposon derepression and loss of DNA methylation, but little defects in primary piRNA biogenesis. These results are consistent with a role of FKBP6 downstream of Tdrd1, and we speculate that it might recruit Hsp90 to PIWI complexes to mediate ping-pong amplification cycle.

Les ARNs interagissant avec Piwi (ARNpi ou piRNA en anglais pour Piwi-interacting RNAs) interagissent avec les protéines de la branche PIWI de la famille des Argonautes. Ils participent à la répression des transposons dans la ligne germinale. Les ARNpi sont produits à partir de deux mécanismes: la biogenèse primaire et le cycle d'amplification Ping-Pong. Plusieurs questions fondamentales sur la biogenèse et la fonction des piRNAs sont encore ouvertes. Le travail de ce mémoire est concentré sur deux caractéristiques au niveau de la séquence dans les populations des ARNpi, le U1-biais et le biais de brin, dont les origines restent mystérieuses. Nos analyses ont révélé de nouvelles fonctions au protéines Piwi, dont les domaines MID et PIWI jouent un rôle essentiel dans la définition des deux biais. La structure cristalline du domaine MID de MIWI montre que l'uridine peut être favorisé comme premier nucléotide au niveau de l'extrémité 5' des ARNpi. De la même manière, nos résultats obtenus grâce aux études in vivo des protéines Piwi de Bombyx mori démontrent que le module MID-PIWI est essentiel pour déterminer le bias de brin des ARNpi s'associant avec les protéines Piwi. De plus, nous avons confirmé le rôle de la méthylation de la région N-terminale des protéines Piwi pour leur localisation dans la cellule. Ensemble, ces résultats offrent de nouveaux détails pour la compréhension de la biogenèse des ARNpi.Les protéines Piwi ne sont pas les seuls composants dans la voie des ARNpi. Des tests génétiques ainsi que des analyses biochimiques ont identifié plusieurs éléments impliqués dans la voie des ARNpi, cependant leurs fonctions restent obscures. J'ai étudié la protéine Vreteno, contenant des domaines Tudor, qui est impliquée dans le processus de biogenèse primaire des ARNpi. En utilisant la lignée cellulaire BmN4, nous avons identifié in vivo un complexe contenant Vreteno, des longues molécules d'ARN antisens, pouvant representer les précurseurs des ARNpi associés avec Siwi, ainsi que d'autres composants de la voie ARNpi, comme Ago3, BmTdrd12 et Spindle-E. De plus amples analyses sont nécessaires pour comprendre les fonctions de Vreteno dans la voie des ARNpi.Enfin, nous avons également étudié le rôle de l'hélicase à ARN Vasa dans la voie des piRNAs. Nos résultats démontrent que Vasa assemble un complexe régulé par l'ATP sur le ARN messager des transposons, afin de produire de nouveaux ARNpi secondaires avec orientation sens. En étudiant les différentes étapes de la voie des ARNpi, nos analyses ont fourni des informations importantes pour la compréhension de la biogénèse des ARNpi. / Piwi-interacting RNAs (piRNAs) associate to members of the PIWI clade of Argonaute proteins and are responsible for silencing of transposable elements in animal germ lines. piRNAs are produced through two biogenesis pathways, known as primary processing and Ping-Pong amplification cycle. There are many fundamental questions regarding piRNA biogenesis and function that are unsolved. In this thesis I have been focusing on the presence of two sequences features in piRNA populations, the U1-bias and the strand-bias, whose determination is not understood. Our analyses have revealed new features of the Piwi proteins, whose MID and PIWI domains play an essential role in the definition of both piRNA biases. The crystal structure of the MID domain of MIWI shows that uridine can be favored as the first nucleotide at the 5' end, while our in vivo results on Bombyx mori Piwi proteins demonstrate that the MID-PIWI module is essential to determine the strand bias of piRNAs that associate to the Piwi protein. Moreover we have confirmed the role of the methylation status of the N-terminus of Piwi protein for determining their localization. Altogether these findings provide new insights in the understanding of piRNA biogenesis.Piwi proteins are not the only components acting in the piRNA pathway. Genetic screenings and biochemical analyses have identified several other factors, which have been involved in the piRNA pathway, but whose functions remain elusive. I have focused on the Tudor domain-containing protein Vreteno, which has been involved in the primary biogenesis pathway. Using BmN4 cells, we have identified an in vivo complex of Vreteno, containing long antisense RNA molecules, which might represent the precursor of Siwi-piRNAs, and other piRNA known factors, like Ago3, BmTdrd12 and Spindle-E. Further analyses are required for the understanding of Vreteno functions in the piRNA pathway.Finally, we have also investigated the role of the RNA helicase Vasa in the piRNA pathway. Our results show that Vasa assembles an ATP-gated Ping-pong complex on transposon mRNAs to generate new sense-oriented secondary piRNAs. By looking at different step in the piRNA pathway our analyses have provided important insights for the understanding of the piRNA biogenesis.

Les piARN (Piwi-interacting RNAs) sont des petits ARN spécifiques des cellules germinales qui fonctionnent en tant que gardiens de l'intégrité du génome. La biogenèse des piARN est relativement mal comprise comparée à celle des miARN et des siARN. Des études approfondies conduites chez la souris et la drosophile ont conduits à la proposition de deux modèles de biogenèse des piARN: la voie primaire et la voie secondaire. Un grand nombre de facteurs protéiques ont été identifiés pour être impliqués dans ces deux voies. Dans cette thèse, nous nous concentrons sur les études fonctionnelles de deux facteurs protéiques nouvellement identifiés, Tdrd12 et Exd1, dans les voies piARN. Les protéines à domaine « Tudor » constituent la plus grande famille de protéines impliquées dans la voie des piARN. Au cours de cette étude, nous avons identifié une nouvelle protéine contenant un domaine « Tudor », Tdrd12, qui est essentielle pour la biogenèse secondaire des piARN chez la souris. Tdrd12 interagit avec MILI et Tdrd1 pour former un complexe. La perte de fonction de Tdrd12 provoque une stérilité spécifique des mâle et conduit à l'activation des transposons, en raison de l'altération de la production de piARN chez la souris. MIWI2 dépourvue de piARN est ensuite délocalisée du noyau vers le cytoplasme, ce qui induit une réduction de la méthylation de l'ADN.Dans l'étude de la fonction moléculaire de Tdrd12 dans la lignée cellulaire BmN4 qui est dérivée des ovaires de Bomby mori (ver à soie), nous avons identifié un facteur associé à Tdrd12 contenant un domaine exonucléase, Exd1 (Exonulcease domain-containing 1), comme un nouveau facteur dans la voie piRNA. Tdrd12 interagit avec Exd1 et Siwi via son domaine hélicase à ARN et le 2ème domaine « Tudor » respectivement. Exd1 forme un homodimère via son hélice C-terminale. Les expériences biochimiques ont révélées que Exd1 est une nucléase inactive et qu'elle possède une activité de liaison de l'ARN. Fait intéressant, Exd1 est un gène qui a évolué rapidement avec des longueurs différentes de la partie C-terminale dans différentes espèces. En particulier, l'orthologue de Exd1 chez Drosophilid est dépourvu du domaine LSM dans son l'extrémité N-terminale, ce qui aboli son interaction avec Tdrd12. L'inactivation du gène CG11263 chez la mouche n'a pas d'effet sur l'expression du transposon et la fertilité. L'étude génétique chez la souris serait utile pour révéler le rôle biologique de Exd1 dans la voie des piARN. / Piwi-interacting RNAs (piRNAs) are germline specific small RNAs that function as guardians of genomic integrity. piRNA biogenesis is poorly understood relative to miRNA and siRNA biogenesis. Extensive studies of piRNA pathway in mice and Drosophila have led to the proposal of two piRNA biogenesis models: primary and secondary piRNA biogenesis pathways. A large number of protein factors have been identified to be involved in the piRNA pathways. In this thesis study, we focus on the functional studies of two newly identified protein factors, Tdrd12 and Exd1, in the piRNA pathways. Tudor domain containing proteins constitute the largest protein family in the piRNA pathway. Here we found a new Tudor domain protein, Tdrd12, which is essential for secondary piRNA biogenesis in mice. Tdrd12 interacts with MILI and Tdrd1 to form a complex. Loss-of-function of Tdrd12 leads to the male specific sterility and transposon activation, due to the impaired piRNA production in mice. MIWI2 depleted of piRNAs is mislocalized in the cytoplasm from the nucleus, and results in the reduced DNA methylation.In the molecular function study of Tdrd12 in Bomby mori (silkworm) ovary derived cell line-BmN4, we identified Tdrd12 associated factor, Exonulcease domain-containing 1 (Exd1), as a new factor in the piRNA pathway. Tdrd12 interacts with Exd1 and Siwi via its RNA helicase domain and 2nd Tudor domain respectively. Exd1 form homodimer via its C-terminal helix. Biochemical assay revealed that Exd1 is an inactive nuclease and possess RNA binding activity. Interestingly, Exd1 is a fast evolving gene with various C-term lengths from different species. Particularly, Exd1 ortholog in Drosophilid lacks Lsm domain at the N-termini, which abolish its interaction with Tdrd12. Disruption of CG11263 gene in flies has no effect on transposon expression and fertility. Genetic study in mice would be helpful to reveal the biological role of Exd1 in piRNA pathway.

Vector control is an essential and effective approach for controlling transmission of vector-borne diseases. However, increasing resistance to insecticide and drugs suggests that new strategies to control vector-borne diseases are needed. One possible strategy involves replacing mosquito populations with disease-resistant transgenic mosquitoes. Transposable elements (TEs) are an important component in this new strategy due to their ability to integrate exogenous DNA into chromosomes. They could potentially be useful tools in assisting the spread of disease-resistant genes in mosquito populations. This research focuses on two related subjects, TEs and their regulation. The first subject is on a Long Terminal Repeat (LTR) retrotransposon in the African malaria mosquito, Anopheles gambiae, namely Belly. The second subject focuses on the characterization of piwi genes in the dengue and yellow fever mosquito, Aedes aegypti. For the first subject we characterized Belly by identifying the two identical LTRs and one intact open reading frame. We also defined the target site duplications and boundaries of the full-length Belly element. This novel retrotransposon has nine full-length copies in the An. gambiae sequenced genome and their nucleotide similarity suggests that there has been fairly recent retrotransposon. We have shown that Belly is transcribed and translated in An. gambiae. Single LTR circles were recovered from An. gambiae cells, which is consistent with active transposition of Belly. The second subject focuses on the piwi genes of Ae. aegypti. We found nine potential piwi genes in Ae. aegypti and two in An. gambiae. Phylogenetic analysis suggests that these piwis formed two subgroups and gene duplication within each group occurred after the divergence between the two mosquito species. RT-PCR and transcriptome analysis showed Ago3 as well as all the seven tested piwi genes were expressed either in germline tissues or developing embryos. Differential expression patterns were observed. While most piwis were transcribed in the ovaries, testis, and embryos, two piwis appear to have a zygotic expression. Three piwi genes (piwi 3, piwi 4, and Ago3) were also detected in adult somatic tissues of Ae. aegypti. The expansion of the number of piwi genes in Ae. aegypti compared to An. gambiae and D. melanogaster may be correlated with a larger genome size and greater amount of TEs. The finding of piwi expression in adult somatic tissues is intriguing. It is possible that these piwi genes were expressed in the adult stem cells. It is also possible that they may be involved with anti-viral defense. Both of these hypotheses require further testing. / Master of Science

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This diploma thesis is addresed to the Evaluation of PIWI variety for making a white wine. The theoretical part describes phenophases of grapevines, the basic quantitative and qualitative parameters. The following part clarifies the characterization of the PIWI and describes the grape breeding in Czech republic and in abroad. The experiment was performed in location of Mendeleum in Lednice na Morave. There were observed seven interspecific and three conventional varieties of grape. In the practise part I evaluate the phenophasis and I analize a quantitative parameters such as sugar content, titrate acids, pH, tartaric acid, malic acid, assimilated nitrogen, total flavanols and antiradical activity. The all results of these analysis are elaborated and evaluated in the charts and graphs.

This thesis focuses on the protection of vine against fungal diseases. Application of alternative means in the form of aqueous extracts from ordinary available plant of their effect on health status Piwi varieties. The theoretical part of this thesis describes the most important fungal diseases of grapes. Further they are described interspecific varieties, which were used for the experiment. Literary part is devoted to the preparation of herbal liquors and extracts of herbs and their active substances in a plant extracts. The experimental part is devoted to the influence of herbal preparations on the health of Piwi varieties. Results were statistical and analytical evaluated. Monitored parameters were comparison with all tested variants.

Influence of rootstock variety on nutrient intake and quality of selected PIWI variety The thesis looks into a research of the rootstocks and their influence on the minerals in various phenophases at two PIWI varieties (Hibernal and Cerason). Furthermore it deals with the influence of the rootstocks on the qualitative parameters (sugar content, acids, assimilable nitrogen). The research was implement on an experiment in the school vineyard of Mendel University, Faculty of Horticulture in Lednice. There is a suitable advice to the various rootstocks in a conclusion.

Les protéines Piwi sont exprimées dans les gonades (testicules et ovaires) des animaux où elles s'associent à des petits ARN nommés piRNAs (Piwi-interaction RNAs) et répriment les éléments transposables, défendant ainsi de l'intégrité du génome. En effet, les animaux knock-out pour les protéines Piwi montrent une perte de piRNAs et une activation des éléments transposables avec des conséquences catastrophiques: l'arrêt du développement des cellules germinales, due potentiellement à des dommages du génome qui entraîne l'infertilité. Le « Silencing » est réalisé soit par l'activité endonucléase guidée par les piRNAs de la protéine Piwi cytosolique ou par le recrutement de la machinerie de répression transcriptionelle sur les loci génomiques des cibles par Piwi nucléaire. La biogenèse des piRNAs peut être divisée en deux voies, une primaire et une secondaire. De longs ARN précurseurs simple-brin sont transformés en piRNAs matures de 25-30 nt qui sont chargés dans les protéines Piwi. Une fois chargée avec le piRNA, Piwi se lie aux transcrits de transposons ayant la séquence complémentaire et les clive en générant deux ARN, dont l'un peut être chargé dans une nouvelle protéine Piwi, produisant un piRNA secondaire. Des études génétiques ont identifié plusieurs facteurs protéiques essentiels à ce processus. Certain de ces facteurs sont des hélicases à ARN dont le rôle spécifique reste inconnu, principalement parce que ce sont des enzymes dynamiques et l'identification de leurs cibles et leurs partenaires protéiques avec des approches biochimiques standards est difficile.Dans la première partie de cette thèse nous décrivons comment l'introduction d'une mutation ponctuelle dans la boîte DEAD de l'hélicase à ARN Vasa (DEAD à DQAD) peut bloquer son activité in vivo et figer le complexe transitoire de biogenèse qui contient VASA et les deux protéines Piwi responsables de la biogenèse secondaire.La résolution de la structure de VASADQ en complexe avec l'ATP ou l'AMPPNP a révélé les détails moléculaires de cette inhibition et a expliqué le phénotype observé in vivo. VASADQ a un taux d'hydrolyse de l'ATP réduit, car après hydrolyse, le phosphate libre est bloqué à l'intérieur du site actif en raison d'une liaison hydrogène supplémentaire formée avec la Gln mutée. La réduction de l'hydrolyse de l'ATP se traduit par une faible liaison à l'ARN mesurée par des expériences biophysiques. L'introduction de la même mutation chez l'homologue murin de VASA (MVH) produit un phénotype de dominant négatif où MVHDQ est agglutinée sur le complexe RNP contenant les protéines Piwi et les piRNAs.Dans la deuxième partie de cette thèse, nous avons introduit la même mutation dans TDRD9, une autre hélicase à ARN impliquée dans la voie des piRNAs mais dont la fonction est inconnue. Nous avons d'abord exprimé, purifié TDRD9 et montré que la mutation dans son domaine hélicase DEVH à DQVH abolit complètement son activité ATPase sans impacter sur sa stabilité. Par la suite, nous avons généré une souris Knock-in et analysé son phénotype. Les souris Knock-in mâles sont stériles et présentent un blocage au début de la spermatogenèse qui est probablement une conséquence des dommages de l'ADN générés par l'activation des éléments transposables. Ces éléments, comme Line-1, présentent un défaut de méthylation à leur loci génomiques, mais qui ne semble pas être contrôlé par la voie piRNA dans le mutant, étant donné que les protéines Piwis sont correctement chargées avec les piRNAs dérivés de Line-1.Dans l'ensemble, nous avons étudié le rôle moléculaire de deux hélicases à ARN dans la voie des piRNAs, nous avons élucidé le rôle de VASA et nous montrons que l'activité ATPase de TDRD9 est essentielle pour la régulation des transposons au cours de la spermatogenèse de la souris. / PIWI proteins are expressed in the gonads (testis and ovary) of animals where they associate with PIWI-interacting RNAs (piRNAs) and silence transposable elements, defending the integrity of the genome. Indeed, animal knock-outs of Piwi proteins display a loss of piRNAs and activation of transposon sequences with catastrophic consequences: block in germ cell development potentially due to genome damage, resulting in infertility. Silencing is achieved either by piRNA-guided endonuclease activity of cytosolic Piwi protein or by recruitment of transcriptional repression machinery on target genomic loci by nuclear Piwi. Biogenesis of piRNAs can be divided in primary and secondary pathway. Primary pathway describes how long single-stranded RNA precursors are processed into mature 25-30 nt piRNAs and loaded into Piwi proteins. Piwi-loaded piRNAs bind and cleave complementary transposon transcripts generating two RNA products, one of which can be loaded into a new Piwi protein, generating a secondary piRNA. Different protein factors are essential in this process as identified by genetic studies. Few of these factors are putative RNA helicases but their specific role is unknown, mainly because RNA helicase are dynamic enzymes and identification of their targets and protein partners with standard biochemical approaches is challenging.In the first part of this thesis I describe how the introduction of a point mutation in the DEAD box of the RNA helicase Vasa (DEAD to DQAD) can block its activity in vivo and freeze a transient biogenesis complex that contains Vasa and the two Piwi proteins responsible for secondary biogenesis.Crystal structure of VASADQ in complex with ATP or AMPPNP revealed the molecular details of this inhibition and explained the phenotype observed in vivo. VasaDQ has a reduced ATP hydrolysis rate because after hydrolysis the free phosphate is blocked inside the active site due to an additional hydrogen bond formed with the mutated Gln. The reduction in ATP hydrolysis is mirrored by an impaired RNA binding activity as measured with biophysical experiments. Introduction of the same mutation in the mouse homologue of Vasa (MVH) has a dominant-negative phenotype where MVHDQ is clump on an ribonucleoprotein (RNP) complex containing piRNAs and mouse Piwi proteins.In the second part of this thesis I introduce the same mutation in TDRD9, another RNA helicase involved in piRNA pathway with an unknown function. First I expressed and purified TDRD9 and showed that DEVH to DQVH mutation in its helicase domain completely abolishes its ATPase activity but do not affects its stability. Next I created a knock-in mutation in the mouse genomic locus for Tdrd9 and analysed the resulting phenotype in the mutant. Knock-in mice are male sterile with an early block in spermatogenesis that is probably a consequence of uncontrolled DNA damages generated by de-repressed transposon elements. These elements, like Line-1, fail to be correctly methylated at their genomic loci in the Tdrd9 mutant. Although Tdrd9 is important for Line-1 transposon silencing, it is likely not via a role in piRNA biogenesis since Piwi proteins are correctly loaded with Line-1 derived piRNAs. Interestingly a drop in piRNAs that derives from SINE elements is observed in the mutant, probably reflecting a role for Tdrd9 in sorting primary transcripts into MILI and MIWI2 during DNA de novo methylation.Overall I investigated the molecular role of two RNA helicases in the piRNA pathway, elucidating the role of Vasa and show that the ATPase activity of Tdrd9 is essential for transposon regulation in mouse spermatogenesis.

Les protéines Argonaute sont associées à de petits ARN et participent à la régulation de l'expression des gènes. Les protéines Piwi, sous-famille des protéines Argonaute, sont principalement exprimées dans les lignées germinales. Elles recrutent les piRNA (Piwi-interacting RNA) et assurent la stabilité du génome en inhibant les transposons. Une caractéristique des piRNA est la présence de groupes 2'-O-methyl à l'extrémité 3'. Les microARN et siRNA (small interfering RNA) de plantes, comme les siRNA de Drosophyle portent aussi cette modification qui est catalysée par l'ARN méthyl-tranférase HEN1. Son homologue murin, mHEN1, méthyle in vitro de petits ARN, mais son rôle dans la voie des piRNA n'avait pas encore été envisagé. Mon objectif était de relier mHEN1 à la voie des piRNA. J'ai démontré que mHEN1 interagit directement avec la partie N-ter de MILI mais pas avec les autres protéines Piwi de souris. La partie N-ter de MILI porte des arginines méthylées. J'ai démontré que l'interaction ne dépendait pas de la présence de cette modification, ce qui suggère que mHEN1 intervient avant la modification de MILI. Par imagerie cellulaire j'ai montré la compartimentation de HEN1 et des protéines Piwi dans des granules cytoplasmiques différents. Parallèlement, afin de caractériser les éléments de la voie piRNA, j'ai développé un nouveau modèle d'étude basé sur des embryons de poisson zèbre (Danio rerio). Ainsi, j'ai évalué le rôle de deux protéines interagissant avec les protéines Piwi, TDRD1 (Tudor-domain containing) et l'hélicase MOV10l décrits chez la souris mais pas chez le poisson zèbre. J'ai montré que l'expression de DrTDRD1, spécifique à la lignée germinale, dépend de sa partie 3'UTR. La réduction de l'expression de DrMOV10l, obtenue grâce à l'utilisation de morpholinos, entraîne la dérépression des éléments rétrotransposables des embryons en développement. Cette technique de Knock Down sera utilisée pour identifier de nouveaux éléments de la biogenèse des piRNA. / Argonaute proteins associate with small RNAs to participate in gene regulatory processes. Piwi proteins are a sub clade of Argonaute that are mainly expressed in the germ line. They bind to Piwi-interacting RNAs (piRNAs) and exert functions in genome stability through transposon silencing. One defining feature of piRNAs is the presence of a 2'-O-methyl group on the 3' terminal nucleotide. Plants microRNAs (miRNAs) and small interfering RNAs (siRNAs) as well as Drosophila siRNAs carry a similar modification, which is catalyzed by the RNA methyltransferase HEN1. The mouse homolog, mHEN1, was shown to have methylation activity for RNA substrates in vitro, but its role in the murine piRNA pathway had not been addressed. My aim was to connect mHEN1 to the piRNA pathway. I demonstrated that mHEN1 interacts directly with the N-terminus of MILI but not with the other murine Piwi proteins. The N-terminus of MILI is known to carry methylated arginines, but I show that this interaction is independent of post-translational modification of MILI. Cellular imaging experiments identified compartmentalization of the enzyme and Piwi proteins into distinct cytoplasmic granules. These studies delineated interactions between mHEN1 and piRNA pathway factors and suggest that the enzyme can act prior to the arginine methylation of MILI. In a parallel study, I developed zebrafish (Danio rerio) embryos as a model system for identifying and manipulating piRNA pathway components. To this end, I evaluated the role of the two Piwi-interacting proteins, the Tudor-domain containing protein DrTDRD1 and the putative helicase DrMOV10l described in mouse but not in zebrafish. I showed that the germ line-specific expression of DrTDRD1 is dependent of its 3'UTR. A loss of DrMOV10l by morpholino knock down results in derepression of retrotransposable elements in the developing embryos. This morpholino-based technique I set up will be used to identify new components of the biogenesis of piRNAs.