Orientador : Luiz Carlos de Almeida Rocha / Banca : Flavio Trigo Rocha / Banca : Sergio O. Ioshii / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clinica Cirúrgica / Resumo: A biópsia aspirativa com agulha fina via transretal é uma técnica minimamente invasiva, usada para obter material não somente para avaliação citológica , como também para quantificação de ADN nas células. Nos últimos anos grande importância tem sido dada para à analise do conteúdo do ADN nas células prostáticas, tanto para diagnóstico quanto para prognóstico do adenocarcinoma de próstata. Embora se discuta a precisa utilidade da analise do ADN devido a sua variação no mesmo tumor, acredita-se que tumores com uma quantidade aumentada de ADN tem uma evolução clínica pior que aqueles com valor de ADN , igual ou próximo ao normal. Neste estudo verificou-se a possibilidade de descoloração e recoloração com o método de Feulgen em preparados citológicos de arquivo. Analisou -se retrospectivamente a ploidia por citometria de imagem com Sistema de Análise Microscópica por Busca Automática 4000 e avaliou-se seu valor para diagnóstico e prognóstico do adenocarcinoma de próstata. Das lâminas consideradas satisfatór ias, que foram submet idas ao método de descoloração e coloração pelo método de Feulgen, 40,27 % foram factíveis de leitura pela citometria de imagem. O estudo da ploidia para diagnóstico precoce de adenocarcinoma de próstata não foi um bom método p=0,0436. Pacientes com diagnóstico de adenocarc inoma de próstata e histograma diplóides tiveram melhor prognóstico do que os pacientes com histogramas aneuploides p=0,0357. Palavras-Chaves : 1. Próstata; 2. Ploidia; 3. Biópsia aspirativa . / Abstract: The transrectal f ine needle aspirative biopsy is a minimally invasive technique, used to obtain material not only for cytological assessment, but also to quantify the cells. In the last years, great attention has been given to the analysis of the DNA content in the prostatic cells, for the diagnosis and for the prognosis of the prostate adenocarcinoma . Although the precise use of the DNA analysis has been discussed because of its variat ion in the same tumor , it is believed that the tumors with increased DNA quantity have a clinicai evolution worst than those of DNA with the same or almost normal values . In this study, the possibility of discoloration and recoloration was observed with the Feulgen method in cytological compounds of file . The ploidy was analyzed, retrospectively, by image cytometry with the system of Microscopic lmage A nalysis by Automatic Search 4000 and the value for the diagnosis and prognosis of prostate adenocarcinoma was assessed. Among the slides considered satisfactory , which underwent the method Feulgen of discoloration and coloration , 40,27% were feasible reading by image cytometry . The ploidy study for early diagnosis of prostate adenocarcinoma was not a good method, p = 0,0436. Patients with the diagnosis of prostate adenocarcinoma and diploid histograms had a better prognostic than the patients with aneuploid histograms, p = 0,0357. Keywords : 1. Prostate; 2. Ploidy; 3. Aspirative biopsy

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Magíster en Bioquímica Área de Especialización en Bioquímica Clínica Aplicada y Memoria para optar al Título de Bioquímico / Durante la progresión tumoral las células epiteliales malignas pierden su polaridad, disminuyen la adhesión celular, aumentan la motilidad y adquieren capacidad invasiva. Este proceso se conoce como transición epitelio mesenquimal (TEM). En el cáncer de próstata (CaP) la disminución en la expresión de e-cadherina, que es inhibida por el factor de transcripción snail, se acompaña de una serie de otros cambios que facilitan el fenotipo mesenquimal. Las moléculas de adhesión celular (MACs)sindecano 1 y sindecano 2 cambian sus patrones de expresión y localización celular en relación a la agresividad del tumor prostático. A través de un análisis in silico, se ha descrito que existen sitios putativos de unión para snail en las regiones promotoras de los genes de sindecano 1ysindecano 2. El objetivo de esta tesis es demostrar que snail se une a regiones específicas de estos promotores reprimiendo su expresión en líneas celulares de CaP. El presente trabajo se realizó utilizando líneas celulares comerciales de CaP de baja (LNCaP) y alta (PC3) capacidad tumorigénica. Se estudió la unión de snail a regiones promotoras de los genes de sindecano 1y 2, mediante ensayos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y retardo en la movilidad electroforética en ambas líneas celulares. Para determinar si snail participa en la regulación transcripcional desindecano 1 ysindecano 2 se generó mediante infección con lentivirus una línea celular, LNCaP-Snail+, con sobreexpresión de snaily mediantePCR en tiempo real e inmunofluorescencia, se determinaron los niveles mRNA y proteínassnail,sindecano 1 y sindecano 2. Complementariamente se clonóel promotor de sindecano 1para evaluar, mediante ensayos de gen reportero con actividad luciferasa, el efecto de la sobreexpresión de snail en la regulación génica sindecano 1. Los resultados obtenidos mediante ChIP en este estudio demuestran que existe una interacción de snailcon las dos zonas más próximas al sitio de inicio de la transcripción del promotor del gen de sindecano 1, pero que no existe interacción de snailcon la región promotora de sindecano 2.Se confirmó que los niveles del transcrito y proteína snail aumentanen la línea celular LNCaP-Snail+ en comparación con líneas controles. Al determinar el efecto de la sobreexpresión de snail no se observaron disminuciones en los niveles de mRNA y proteínas de las moléculas sindecano 1 y sindecano 2 cuando existía sobreexpresión de snail. El ensayo de gen reportero tampoco da cuenta de una represión en el promotor de los genes de sindecano 1en la línea celular LNCaP-Snail+. Es posible concluir que existe unión de snail con dos regiones sólo en el promotor de sindecano 1, pero no existe una disminución en la expresión de esta molécula de adhesión en la línea celular LNCaP-Snail+. En el modelo estudiado no existe una disminución en la expresión de sindecano 1 y sindecano 2 cuando se sobreexpresa snail.Se propone que snail participa en la regulación génica de sindecano 1 en conjunto con otros represores transcripcionales que aún no han sido estudiados / During tumor progression epithelial cells lose their polarity, decrease their cell adhesion, increase their motility and acquire invasive capacity. This process is known as epithelial mesenchymal transition (EMT). In prostate cancer (PCa), the loss of e-cadherin, which is inhibited by the expression of snail, is accompanied by a number of other changes that facilitate the mesenchymal phenotype. The cellular adhesion molecules (CAMs) syndecan 1 and syndecan 2 change their patterns of expression and cellular localization in relation to prostate tumor aggressiveness. Through a in silico analysis, we have described putative snail binding sites in promoter regions of syndecan 1 and 2 genes. The aim of this thesis is to demonstrate that snail binds to specific regions of these promoters repressing their expression in PCa cell lines. This work was performed using commercial PCa cell lines with low (LNCaP) and high (PC3) tumorigenic capacity. The snail binding to promoter regions of genes syndecan 1 and 2 was studied through chromatin immunoprecipitation (ChIP) and electrophoretic mobility shift assay in both cell lines. To determine whether snail participates in the transcriptional regulation of syndecan 1 and syndecan 2, a cell line (LNCaP-Snail+) with overexpression of snail was generated by infection with lentivirus, and through real time PCR and immunofluorescence, mRNA levels and protein snail, syndecan 1 and syndecan 2 were determined. Additionally promoter of syndecan 1 was cloned to evaluate, by reporter gene assays with luciferase activity, the effect of the overexpression of snail in gene regulation of syndecan 1. The results obtained by ChIP in this study show that snail interacts with the two regions closer to the start site of transcription of the gene promoter syndecan 1, but no interaction of snail with the promoter region of syndecan 2. It was confirmed that the snail transcript and protein levels increase in LNCaP-Snail+ cell line compared to controls. The snail overexpression was not reduced syndecan 1 and syndecan 2 mRNA and protein levels. The reporter gene assay result also shows no repression in the promoter of the gene of syndecan 1 in the LNCaP-Snail+ cell line. We conclude that there is snail binding with only two regions in the promoter of the syndecan 1 gene, but there is no decrease in the expression of this CAM in the LNCaP-Snail+ cell line. In this model study, snail was not involved in gene regulation of syndecan 1. It is proposed that snail is involved in gene regulation of syndecan 1 in conjunction with other repressor molecules that have not yet been studied

La Prostatectomía Radical Retropúbica (P.R.R.) constituye la forma de tratamiento quirúrgico más eficaz para los pacientes con Cáncer de Próstata localizado, siendo esta neoplasia una de las más frecuentes en nuestro país nos proponemos evaluar los resultados y complicaciones de la P.R.R. en el Hospital Militar Central durante los años 1998-2001. Para ello se revisó las historias clínicas de los pacientes sometidos a P.R.R. durante dicho periodo de tiempo, para el análisis estadístico comparativo se utilizó la prueba X². Después de analizar los resultados se concluyó lo siguiente: 1. Los pacientes con cáncer de próstata localizado sometidos a PRR en el HMC durante los años 1998-2001 han sido 30, de los cuales el 40% eran asintomáticos y el 60% tuvieron PSA entre 4 y 10 ng/ml previo a la PRR. 2. El tiempo operatorio promedio de la cirugía fue de 3h15’, siendo la complicación intraoperatoria presentada durante la PRR la pérdida sanguínea con un promedio de 850cc. 3. Las complicaciones post-operatorias tempranas han sido la fístula urinaria en el 6.7% y la infección de herida operatoria un 3.3%. 4. Las complicaciones post-operatorias tardías que se han presentado con mayor frecuencia han sido la impotencia 90% y la incontinencia urinaria de stress 30%. 5. El grado tumoral de la biopsia fue similar al de la pieza operatoria en el 70% de los pacientes en general, para los tumores bien diferenciados fue 0% ya que todos fueron subgraduados. 6. De los 30 pacientes sometidos a PRR solo 18 (60%) estuvieron confinados a la próstata. 7. El seguimiento de los pctes. sometidos a PRR reveló que el 73.3% permanecen libres de progresión de la enfermedad hasta la actualidad.

1.1.- TITULO: “Biopsia Prostatica Transrectal Ecodirigida por Sextantes en el Servicio de Radiología del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen Enero 2003 - Diciembre 2004”. 1.2 .- OBJETIVO: El objetivo de este trabajo fue determinar el Índice de Detección y las complicaciones mas frecuentes en la toma de biopsias ecodirigidas por sextantes en pacientes con sospecha de Cáncer de próstata. 1.3.- MATERIAL Y METODOS: Se realizó un estudio retrospectivo de todas las biopsias prostáticas transrectales ecodirigidas realizadas en el Servicio de Radiología del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen desde Enero 2003 a Diciembre del 2004. El procedimiento fue indicado por tacto rectal sospechoso y/o antígeno prostático > de 4 ng/ml. En el período estudiado se realizaron 112 biopsias prostáticas transrectales ecodirigidas. Para el analisis se realizaron tablas de frecuencias así como tambien de sensibilidad, especificidad y valor predictivo positivo. Se aplicaron, porcentajes, proporciones, razones y otros estadísticos. Para el tratamiento y análisis de los datos se empleo el programa SPSS v. 10. 1.4. - RESULTADOS: El rango de edad de los pacientes fue de 42 a 89 años, con un promedio de 68,4 años. El 61% de los pacientes biopsiados son < de 70 años. El 86% de los pacientes estudiados presentan APE > de 4. El 45% de los pacientes presentan tacto rectal sospechoso, de estos el 30% presentaban al menos un nódulo al tacto. La Anatomía patológica demostró Adenocarcinoma prostático en 31,5% de los casos (35 pacientes), Prostatitis Crónica en 38,4%, Hiperplasia Nodular Prostática en 16,9%, PIN de alto grado en 7,3% y 5,3% de las biopsias fueron informadas como normales. El índice de detección de cáncer fue de 31,5%. Presentan tacto rectal sospechoso 50 pacientes, hallándose en ellos 24 biopsias positivas para cáncer (VPP 48,9%). En 99 pacientes que presentan APE > 4 ng/ml se encontraron 32 biopsias positivas para cáncer (VPP 32,5%). La combinación de tacto rectal sospechoso y APE > 4 ng/ml se presentó en 40 pacientes, en ellos se detectaron 23 biopsias positivas para cáncer (VPP 57,5%). Se detectaron 8 complicaciones (7,1 %), 4 casos de sangramiento–rectorragia (2) y uretrorragia (2)– 3,5 %. Un caso de retención urinaria (0,9%) y tres casos (2,6%) con alza febril hasta 40 Grados Centígrados que fueron considerados como bacteriemia, de los cuales solo uno de ellos amerito internamiento. No hubo mortalidad asociada al procedimiento en la serie. 1.5.- CONCLUSIÓN: La revisión de las biopsias prostáticas transrectales ecodirigidas realizadas en nuestro servicio demuestra la utilidad de este procedimiento para la detección del cáncer prostático en pacientes seleccionados y presenta un rendimiento comparable al de otras series publicadas con bajos índices de complicaciones.

La Prostatectomía Radical Retropúbica (P.R.R.) constituye la forma de tratamiento quirúrgico más eficaz para los pacientes con Cáncer de Próstata localizado, siendo esta neoplasia una de las más frecuentes en nuestro país nos proponemos evaluar los resultados y complicaciones de la P.R.R. en el Hospital Militar Central durante los años 1998-2001. Para ello se revisó las historias clínicas de los pacientes sometidos a P.R.R. durante dicho periodo de tiempo, para el análisis estadístico comparativo se utilizó la prueba X². Después de analizar los resultados se concluyó lo siguiente: 1. Los pacientes con cáncer de próstata localizado sometidos a PRR en el HMC durante los años 1998-2001 han sido 30, de los cuales el 40% eran asintomáticos y el 60% tuvieron PSA entre 4 y 10 ng/ml previo a la PRR. 2. El tiempo operatorio promedio de la cirugía fue de 3h15’, siendo la complicación intraoperatoria presentada durante la PRR la pérdida sanguínea con un promedio de 850cc. 3. Las complicaciones post-operatorias tempranas han sido la fístula urinaria en el 6.7% y la infección de herida operatoria un 3.3%. 4. Las complicaciones post-operatorias tardías que se han presentado con mayor frecuencia han sido la impotencia 90% y la incontinencia urinaria de stress 30%. 5. El grado tumoral de la biopsia fue similar al de la pieza operatoria en el 70% de los pacientes en general, para los tumores bien diferenciados fue 0% ya que todos fueron subgraduados. 6. De los 30 pacientes sometidos a PRR solo 18 (60%) estuvieron confinados a la próstata. 7. El seguimiento de los pctes. sometidos a PRR reveló que el 73.3% permanecen libres de progresión de la enfermedad hasta la actualidad.

1.1.- TITULO: “Biopsia Prostatica Transrectal Ecodirigida por Sextantes en el Servicio de Radiología del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen Enero 2003 - Diciembre 2004”. 1.2 .- OBJETIVO: El objetivo de este trabajo fue determinar el Índice de Detección y las complicaciones mas frecuentes en la toma de biopsias ecodirigidas por sextantes en pacientes con sospecha de Cáncer de próstata. 1.3.- MATERIAL Y METODOS: Se realizó un estudio retrospectivo de todas las biopsias prostáticas transrectales ecodirigidas realizadas en el Servicio de Radiología del Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen desde Enero 2003 a Diciembre del 2004. El procedimiento fue indicado por tacto rectal sospechoso y/o antígeno prostático > de 4 ng/ml. En el período estudiado se realizaron 112 biopsias prostáticas transrectales ecodirigidas. Para el analisis se realizaron tablas de frecuencias así como tambien de sensibilidad, especificidad y valor predictivo positivo. Se aplicaron, porcentajes, proporciones, razones y otros estadísticos. Para el tratamiento y análisis de los datos se empleo el programa SPSS v. 10. 1.4. - RESULTADOS: El rango de edad de los pacientes fue de 42 a 89 años, con un promedio de 68,4 años. El 61% de los pacientes biopsiados son < de 70 años. El 86% de los pacientes estudiados presentan APE > de 4. El 45% de los pacientes presentan tacto rectal sospechoso, de estos el 30% presentaban al menos un nódulo al tacto. La Anatomía patológica demostró Adenocarcinoma prostático en 31,5% de los casos (35 pacientes), Prostatitis Crónica en 38,4%, Hiperplasia Nodular Prostática en 16,9%, PIN de alto grado en 7,3% y 5,3% de las biopsias fueron informadas como normales. El índice de detección de cáncer fue de 31,5%. Presentan tacto rectal sospechoso 50 pacientes, hallándose en ellos 24 biopsias positivas para cáncer (VPP 48,9%). En 99 pacientes que presentan APE > 4 ng/ml se encontraron 32 biopsias positivas para cáncer (VPP 32,5%). La combinación de tacto rectal sospechoso y APE > 4 ng/ml se presentó en 40 pacientes, en ellos se detectaron 23 biopsias positivas para cáncer (VPP 57,5%). Se detectaron 8 complicaciones (7,1 %), 4 casos de sangramiento–rectorragia (2) y uretrorragia (2)– 3,5 %. Un caso de retención urinaria (0,9%) y tres casos (2,6%) con alza febril hasta 40 Grados Centígrados que fueron considerados como bacteriemia, de los cuales solo uno de ellos amerito internamiento. No hubo mortalidad asociada al procedimiento en la serie. 1.5.- CONCLUSIÓN: La revisión de las biopsias prostáticas transrectales ecodirigidas realizadas en nuestro servicio demuestra la utilidad de este procedimiento para la detección del cáncer prostático en pacientes seleccionados y presenta un rendimiento comparable al de otras series publicadas con bajos índices de complicaciones.

El cáncer de próstata es la segunda neoplasia más común en la población masculina del mundo. El comportamiento clínico del cáncer de próstata localizado es muy variable; mientras que algunos casos tienen un tipo agresivo de cáncer que resulta en metástasis y muerte del paciente, otros tendrán un tipo indolente que se puede curar con terapias o monitorear cuidadosamente. Existen múltiples sistemas de estratificación de riesgo de mortalidad que usan parámetros clínicos, como los niveles de PSA y la Puntuación de Gleason. No obstante, estos criterios no pueden predecir adecuadamente el riesgo de recurrencia bioquímica. Los pacientes con cáncer de próstata no pueden ser dicotomizados con precisión en grupos de recurrencia bioquímica de bajo o alto riesgo mediante el uso de parámetros clínicos. Por este motivo se integró información genómica y clínica con el objetivo de identificar potenciales biomarcadores predictivos y generar firmas pronóstico que permitan una dicotomía más acertada de los pacientes. Se empleó una metodología de análisis estadístico predictivo de la recurrencia bioquímica utilizando genes relacionados con la regeneración de células madre de relevancia para la recurrencia bioquímica de cánceres, como la vía de señalización Wnt y la pluripotencia de células madre; y la contribución del parámetro clínico de la Puntuación de Gleason, de manera que se generó un firma pronóstico integrada. La firma integrada fue validada en cohortes independientes de pacientes disponibles en repositorios internacionales para ser dicotomizados en grupos de riesgo que puedan asociarse con un pronóstico bueno o malo. De esta manera, se tendrá un mejor pronóstico de los pacientes y la asignación adecuada de terapias para su tratamiento. Queda claro que el desarrollo y validación de nuevos biomarcadores para evaluar el pronóstico de recurrencia en cáncer de próstata contribuiría a mejorar la salud en la mayoría de los países independientemente de sus características sociales, económicas, culturales y epidemiológicas. / Tesis