Submitted by Gerson Rodrigues Raggi Pereira (geraggi@gmail.com) on 2017-03-08T21:11:23Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 2124960 bytes, checksum: 870e955bc4b41cfb8cf7165c2948e315 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-13T20:09:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_grr_me_svic.pdf: 2124960 bytes, checksum: 870e955bc4b41cfb8cf7165c2948e315 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T20:09:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_grr_me_svic.pdf: 2124960 bytes, checksum: 870e955bc4b41cfb8cf7165c2948e315 (MD5) Previous issue date: 2017-01-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Organismos marinhos são importantes fontes de novos produtos naturais e compostos bioativos com funções variadas. Entre as principais fontes de novas moléculas esta o filo dos Cnidários, com uma importante contribuição no numero de compostos descritos nos últimos anos. Bunodossoma caissarum é uma espécie de anêmona endêmica do Brasil, cujo perfil químico foi analisado. Para essa análise foram realizados uma extração hidroalcoólica e o isolamento de determinadas moléculas com técnicas cromatográficas. Os compostos isolados foram aqueles que apresentaram absorbância no comprimento de onda no UV em 310 nm e foram identificados a partir de técnicas de espectrometria de massas e ressonância magnética. Entre as substâncias encontradas estão sais piridinicos, núcleos imidazóis, caissarona e a etilglicose, moléculas com importantes papeis fisiológicos. / Marine organisms are importante sources of new natural products and bioactive compounds with various functions. The phylum Cnidaria is among the main sources of new molecules, with na importante contribution to the number of compounds described in the last years. The anemone species Bunodossoma caissarum is endemic to Brazil and had it's chemical profile analyzed. For the purpose of this analysis were done a hydroalcoolic extraction and the isolation of certain molecules by chomatographic techniques. The isolated compounds were those that displayed absorbance in the 310nm wavelength of the UV spectrum and were identified on the basis of mass spectrometry and magnetic ressonance. Among the substances found are pyridinic salts, imidazole nucleus, caissarone and ethyl glucose, which are molecules with important physiological roles.

Organismos marinhos são reconhecidos como um rico reservatório de produtos naturais com estruturas moleculares excepcionais. Neste contexto, cianobactérias e fungos endofíticos emergiram como uma fonte promissora de substâncias bioativas. O objetivo deste trabalho foi buscar por substâncias biologicamente ativas a partir de linhagem de cianobactérias marinhas coletadas em Ubatuba, litoral do estado de São Paulo (Brasil) e explorar o potencial biossintético do fungo Trichoderma atroviride (endófito isolado da alga marinha Bostrychia tenella, coletada nos costões rochosos da Praia de Fortaleza, Ubatuba, SP) por meio do cultivo misto com a linhagem de cianobactéria Geitlerinema sp CENA556. Inicialmente, cinco espécies de cianobactérias marinhas foram isoladas a partir da amostra coletada no litoral de São Paulo e então caracterizadas filogeneticamente. As linhagem codificadas como Geitlerinema sp CENA552 e Geitlerinema sp CENA556 foram cultivadas em meio mimetizando água do mar e em seguida extraídas com uma mistura de CH2Cl2/ MeOH (2:1) e em seguida AcOEt. O extrato concentrado foi particionado em fração hexano e fração MeOH/H2O (95: 5). Quatro substâncias conhecidas foram identificadas a partir da fração hexânica do extrato da linhagem Geitlerinema sp CENA552 por análises de CG-EM: 2-hexil,1-decanol, 3-octadeceno, neoftadieno e palmitato de metila . A partir da fração hexânica do extrato da linhagem Geitlerinema sp CENA556, foram identificados: dodecanal, 8-heptadeceno, palmitaldeído, neoftadieno, fitol, palmitoleato de metila, 7-hexadecenoato de metila e 9-hexadecenoato de metila. Sete substâncias foram isoladas por CLAE-DAD semipreparativa a partir da fração MeOH/H2O (95: 5) do extrato da linhagem Geitlerinema sp CENA556 e identificadas por análises de espectroscopia de RMN e espectrometria de AR-EM. Entre elas, cinco nucleosídeos conhecidos isolados pela primeira vez em cianobactérias: 2\'-deoxiuridina, timidina, adenosina, 2\'-deoxiadenosina e uridina. Além disso, dois aminoácidos: D-leucina e L-fenilalanina. O fungo Trichoderma atroviride foi cultivado isoladamente em meio arroz e Czapek e os cultivos mistos entre o fungo e a cianobactéria (linhagem Geitlerinema sp CENA556) foram realizados utilizando os mesmos meios de cultura. Os extratos CH2Cl2/ MeOH (2:1) e AcOEt reunidos provenientes do cultivo misto em meio Czapeck do fungo T. atroviride e da cianobactéria Gleiterinema sp CENA556 mostrou diferença significativa na produção de metabólitos quando comparado ao extrato do fungo e da cianobactérias cultivados individualmente. Quatro sideróforos tipo catecol foram isolados da fração MeOH/H2O (95: 5) deste extrato: agrobactina, agrobactina A, fotobactina e uma substância inédita. Agrobactina, a substância majoritária, mostrou atividade antibacteriana substancial frente a P. mirabilis, E. coli, S. saprophyticus, S. aureus e P. aeruginosa. Assim, a cianobactéria brasileira estudada Geitlerinema sp CENA556 mostrou-se promissora para o isolamento de nucleosídeos com atividade biológica. Além disso, o fungo T. atroviride provou ser uma fonte prolífica de sideróforos antimicrobianos obtidos por eliciação biológica com a cyanobactéria Geitlerinema sp CENA556. / Marine organisms are recognized as a rich reservoir of natural products with exceptional molecular structures. In this context, cyanobacteria and endophytic fungi has emerged as source of promising bioactive compounds. The aim of this work was to look for biologically active compounds from the marine cyanobacteria strains, collected in Ubatuba, coast of the São Paulo state (Brazil), and to explore the biosynthetic potential of the fungus Trichoderma atroviride (endophyte isolated from marine seaweed Bostrychia tenella, collected in the rocky Shore of Praia de Fortaleza, Ubatuba, SP) by coculture with the cyanobacteria strain Geitlerinema sp CENA556. Initially, five species of marine cyanobacteria were isolated from the sample collected at the coast of São Paulo, and then characterized phylogenetically. Among them, the strains coded as Geitlerinema sp CENA552 and Geitlerinema sp CENA556 were cultured in mimicking seawater medium and extracted with a mix of CH2Cl2/ MeOH (2:1), and then EtOAc. The concentrated extract was partitioned into hexane fraction and MeOH/H2O (95: 5) fraction. Four known compounds were identified from the hexane fraction of the Geitlerinema sp CENA552 extract by GC-MS analysis: 2-hexyl-1-decanol, 3-octadecene, neophytadiene, and methyl palmitate. Similarly, the compounds dodecanal, 8-heptadecene, palmitaldehyde, neophytadiene, phytol, methyl palmitoleate, methyl 7-hexadecenoate, and methyl 9-hexadecenoate were identified from the hexane fraction of the Geitlerinema sp CENA556 extract. Starting of MeOH/H2O (95: 5) fraction of Geitlerinema sp CENA556 extract, seven compounds were isolated by semi preparative HPLC-PDA and identified by NMR spectroscopy and HR-MS analysis. Among them, five known nucleosides first isolated from cyanobacteria: 2\'-deoxyuridine, thymidine, adenosine, 2\'-deoxyadenosine, and uridine. Also two amino acids: D-leucine and L-phenylalanine. Trichoderma atroviride was grown alone in rice and Czapeck media and the coculture between the fungus and the cyanobacteria (Geitlerinema sp CENA556) were performed using the same media. The CH2Cl2/ MeOH (2:1) and EtOAc pooled extract from the coculture of the fungus T. atroviride and the cyanobacteria Gleiterinema sp CENA556 in Czapek medium shows significant difference in the metabolites production when compared to individually cultured fungus and cyanobacteria. Four catechol type siderophores were isolated from MeOH/H2O (95: 5) fraction of this extract: agrobactin, agrobactin A, photobactin and one novel compound. Agrobactin, the major compound, showed substantial antibacterial activity against P. mirabilis, E. coli, S. saprophyticus, S. aureus and P. aeruginosa. Thus, the studied brazilian cyanobacteria Geitlerinema sp appeared to be promising for isolation of nucleosides with biological activity. Furthermore, the fungus T. atroviride proved to be a prolific source of antibacterial siderophores obtained by biological elicitation with the cyanobacteria Geitlerinema sp CENA556.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Monanchora arbuscula (DUCHASSAING & MICHELOTTI, 1864) (Crambeidae) à uma esponja incrustante, maciÃa ou ramificada com atà 15 cm de altura. Cor, variando de salmÃo a vermelho vivo ou rosa claro, provida de canais esbranquiÃados conspÃcuos. Estudos anteriores de M. arbuscula levaram a obtenÃÃo de alguns alcalÃides guanidÃnicos policÃclicos; ptilocaulina, 8b-hidroxiptilocaulina, dehidrobatzelladina C, crambescidina 800 e isoptilocaulina. Neste trabalho, o extrato hidroalcoÃlico da esponja M. arbuscula, coletada no Parque Estadual Marinho âPedra da Risca do Meioâ, na costa Fortalezense, foi particionado com CH2Cl2/H2O (3:1) fornecendo assim o extrato bruto, o qual foi submetido a uma partiÃÃo lÃquido-lÃquido utilizando os solventes Ãter de petrÃleo, diclorometano, acetato de etila e metanol. Sucessivas cromatografias em gel de sÃlica, SEPHADEX LH-20 e/ou HPLC das fraÃÃes diclorometano, acetato de etila e metanol levaram ao isolamento dos alcalÃides guanidÃnicos mirabilina B, 8b-hidroxiptilocaulina, ptilocaulina, 1,8a;8b,3a-desidro-8βâhidroxiptilocaulina, 1,8a;8b,3a-desidro-8α-hidroxiptilocaulina, 3,3a;8b,8a-desidro-8-hidroxiptilocaulina. Mirabilina B, 1,8a;8b,3aesidro- 8βâhidroxiptilocaulina e 1,8a;8b,3a-desidro-8α-hidroxiptilocaulina estÃo sendo citados pela primeira vez para a espÃcie e 3,3a;8b,8a-desidro-8-hidroxiptilocaulina, no melhor do nosso conhecimento, à inÃdito na literatura. Ensaios para a avaliaÃÃo da atividade citotÃxica frente as linhagens de cÃlulas tumorais cÃlon (HCT-8), melanona (MADMB-435), leucemia (HL-60) e glioblatoma (SF-295), indicaram atividade para o extrato bruto, fraÃÃes e os compostos isolados ptilocaulina e 8b-hidroxiptilocaulina. O alcalÃide 8b-hidroxiptilocaulina mostrou-se ativo aos fungos Microsporum canis e Trichophyton rubrum, enquanto ptilocaulina ao Microsporum canis. Mirabilina B mostrou atividade leishmanicida frente a Leishmania chagasi e amazonesis. As estruturas das substÃncias isoladas foram elucidadas atravÃs de mÃtodos espectroscÃpicos, principalmente RMN, incluindo seqÃÃncias de pulsos uni e bidimensionais e comparaÃÃo com dados da literatura. / Monanchora arbuscula (DUCHASSAING & MICHELOTTI, 1864) (Crambeidae) is an incrustant sponge, massive or branched with 15 cm high. Its color ranges from salmon to bright red or light pink with white conspicuous channels. Previous studies of M. arbuscula led to the isolation of some polycyclic guanidine alkaloids; ptilocaulin, 8bhydroxyptilocaulin, dehydrobatzelladine C, crambescidin 800 and isoptilocaulin. In this work, the hydroethanol extract from M. arbuscula collected at â Pedra da Risca do Meioâ Marine State Park, in Fortaleza coast zone was partitioned with CH2Cl2/H2O (3:1) affording the crude extract which was submitted to liquid-liquid partition using petroleumether, dichloromethane, ethyl acetate and methanol as the solvents. Successive chromatograghy over silica gel, SEPHADEX LH-20 and/or HPLC of all solvent fractions led to the isolation of the guanidine alkaloids: mirabilin B, 8bβ-hydroxyptilocaulin, ptilocaulin, 1,8a;8b,3a-didehydro-8βâhydroxyptilocaulin, 1,8a;8b,3a-didehydro-8α-hydroxyptilocaulin, 3,3a;8b,8a-didehydro-8-hydroxyptilocaulin. Mirabilin B, 1,8a;8b,3adidehydro- 8βâhydroxyptilocaulin, 1,8a;8b,3a-didehydro-8α-hydroxyptilocaulin are reported for the first time for the species while 3,3a;8b,8a-didehydro-8-hydroxyptilocaulin has not being reported in the literature yet. Pharmacological assays revealed weak citotoxic activity against 4 cancer cell lines: HCT-8 (human colon carcinoma), MADMB-435 (melanoma), HL-60 (human leukemia) and SF-295 (glioblastoma). The assays indicated activity for the crude extract, several fractions and the isolated compounds ptilocaulin and 8bβ-hydroxyptilocaulin. The alkaloid 8b-hydroxyptilocaulin indicated antifungal activity against Microsporum canis and Trichophyton rubrum, while ptilocaulin against Microsporum canis, Mirabilin B antiprotozoal activity against Leishmania chagasi and amazonesis. Structure elucidation of the isolated substances was performed through spectroscopic methods, mainly NMR, including uni and bidimensional pulses sequences, and comparison with data from literature.

ALENCAR, Daniel Barroso de. Prospecção química da macroalga marinha verde Ulva fasciata Delile. 2010. 68f. Dissertação (Mestrado em Engenharia de Pesca)-Centro de Ciências Agrária,Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Maria Naires Souza (marianaires@ufc.br) on 2011-11-11T19:22:22Z No. of bitstreams: 1 2010-dis-dbalencar.pdf: 1843830 bytes, checksum: d2be4a7f57929369252c5c735b5c6d2c (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2011-11-16T15:00:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010-dis-dbalencar.pdf: 1843830 bytes, checksum: d2be4a7f57929369252c5c735b5c6d2c (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-16T15:00:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010-dis-dbalencar.pdf: 1843830 bytes, checksum: d2be4a7f57929369252c5c735b5c6d2c (MD5) Previous issue date: 2010-08-27 / Marine macroalgae have been considered promising sources of bioactive compounds. These compounds exhibit different biological properties, such as antibacterial, antifungal, antiviral, anti-inflammatory, antihelminthic, antileshmaniose, antimalaria, antioxidants, and antitumor. Their use as medicine has spurred the interest of many researches. The objective of this work was to carry out a phytochemistry investigation of the ethanolic extract of green marine macroalga Ulva fasciata. The plant material was collected in April 2008 at Pacheco Beach, Caucaia-CE. Macroalgae in natura were dehydrated in an air-circulation oven at 40°C for 15 hours. After the drying process, the material was cut into small pieces. 500 grams were submitted to a cold extraction with hexane (UFH) followed by an extraction with 70% ethanol (UFE). Both isolation and purification from fixed constituents were performed using a combination of classic chromatographic techniques. Three samples were isolated and named UF-1, UF-2 and UF-3. The presence of a major constituent (86.17%) with retention time of 24.940 min was observed in the first sample (UF-1), and its mass spectrum was characterized by the molecular ion M+ 284. The GC-MS analysis suggestion and the comparison of its spectrum with literature reinforce its identification as ethyl hexadecanoate with a similarity index of 96%. Compounds UF-2 and UF-3 have been taken to the Northeastern Center of Application and Use of Nuclear Magnetic Resonance (CENAUREMN) of Federal University of Ceara, to determine the chemical structure by spectroscopy techniques such as uni- and bidimensional (1H, 1H-COSY, gs-HMQC, gs-HMBC, ROESY, NOESY and TOCSY) 1H-NMR and 13C-NMR, as well as mass spectrometry (MS). / As macroalgas marinhas são consideradas fontes promissoras de compostos bioativos para estudos fitoquímicos. Tais compostos possuem diferentes propriedades biológicas, funcionando como antibacterianos, antifúngicos, antivirais, anti-inflamatórios, anti-helmínticos, antileishmaniose, antimalária, antioxidantes, antitumorais cuja utilização como fármacos tem despertado o interesse de muitos pesquisadores. O objetivo deste trabalho foi realizar a investigação fitoquímica do extrato etanólico da macroalga marinha verde Ulva fasciata. O material foi coletado em abril de 2008, na Praia do Pacheco, no município de Caucaia-CE. As macroalgas in natura foram desidratadas em estufa com recirculação de ar a 40°C por 15 horas e, em seguida, trituradas, obtendo-se 500 g, os quais foram submetidos primeiramente a uma extração a frio com hexano (UFH), e posteriormente com etanol a 70% (UFE). Para o isolamento e a purificação dos constituintes fixos foi empregada uma combinação de técnicas cromatográficas clássicas em que foram isolados UF-1, UF-2 e UF-3. Na amostra UF-1 foi observada a presença de um constituinte majoritário (86,17%) com tempo de retenção de 24,940 min, cujo espectro de massas o caracterizou por apresentar o íon molecular M+ 284. A sugestão fornecida pela análise CG-EM e a comparação visual do espectro do composto analisado com os da literatura, bem como pela proposta mecanística de formação dos principais fragmentos reforçaram sua identificação como hexadecanoato de etila com um índice de similaridade de 96%. Os compostos UF-2 e UF-3 foram encaminhados para o Centro Nordestino de Aplicação e Uso da Ressonância Magnética Nuclear (CENAUREMN) da Universidade Federal do Ceará, para a determinação sua estrutura química através de técnicas espectroscópicas de RMN 1H e 13C uni- e bidimensionais (1H, 1H-COSY, gs-HMQC, gs-HMBC, ROESY, NOESY e TOCSY), bem como por espectrometria de massa (EM).

Orientador: Fernando Antonio Santos Coelho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-07T03:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_BrunoRicardoVilacha_M.pdf: 1423792 bytes, checksum: 7de8ab5e57971637382e0a11e87dbdf0 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Napalilactona e Patilactona A são dois sesquiterpenóides espirolactônicos isolados de fontes marinhas. Esses sesquiterpenos, biogeneticamente derivados de um esqueleto carbônico do tipo aristoleno, apresentam em suas estruturas quatro centros estereogênicos contínuos e diferem apenas na substituição do heteroátomo (Cl versus OH) vizinho à unidade espiro g-butirolactônica. Como parte de um programa de pesquisa direcionado à síntese de alguns produtos naturais, descrevemos, nesse trabalho, um estudo focado no desenvolvimento de um método direto, que permitiria a preparação de um alceno funcionalizado, opticamente ativo. Esse intermediário pode ser usado para a síntese assimétrica dos dois sesquiterpenos. Devido ao elevado custo da (S)-(-)-pulegona, iniciamos esse trabalho com a (R)-(+)-pulegona, como um sistema modelo. O nosso objetivo principal era estabelecer uma estratégia sintética que mais tarde pudesse ser extrapolada para a síntese dos sesquiterpenos citados. Baseado nos dados anteriormente descritos pelo nosso laboratório para a síntese racêmica da Patilactona A, realizamos uma seqüência de reações na tentativa de se formar esse alceno funcionalizado. De acordo com a rota sintética partindo da (R)-(+)-pulegona, o intermediário seleneto foi preparado em 9 etapas com um rendimento global de 12%. Em vista do sucesso na síntese de intermediários avançados a partir da (R)-(+)-pulegona, esta mesma sequência sintética pôde ser usada na síntese assimétrica da (+)-Napalilactona, usando como material de partida a (S)-(-)-pulegona / Abstract: Napalilactone and Pathylactone A are two sesquiterpenoids spirolactones isolated from marine corals. These sesquiterpenes, biogenetically derivable from an aristolene carbon skeleton, show in their structures four contiguous stereocenters and differ only in the nature of heteroatom substituent (Cl versus OH) adjacent to the spirolactone ring junction. As part of a research program directed toward the total synthesis of some marine natural products, we describe in this work a study focused on the development of a straightforward method, which would allow the preparation of an optically active functionalized alkene. This key intermediate could be used for the asymmetric synthesis of both sesquiterpenes. Owing to the high cost of (S)-pulegone, we began this work using (R)-pulegone as a model system. Our aim was to establish a synthetic strategy that later could be surpassed for the synthesis of the sesquiterpenes cited. Based on data previously described from our laboratory for the racemic synthesis of Pathylactone-A, we carried out a sequence of reactions in an attempt to form the functionalized alkene. According to the synthetic route from (R)-(+)-pulegone, the intermediate selenide was prepared in 9 steps with overall yield of 13%. In view of the success in the synthesis of advanced intermediates from (R)-pulegone, this same synthetic sequence could be used for the asymmetric synthesis of (+)-Napalilactone, using as starting material the (S)-(-)-pulegone / Mestrado / Quimica Organica / Mestre em Química

Orientadores: Regianne Umeko Kamiya, Reginaldo Bruno Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T03:23:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_BrunadeAraujo_M.pdf: 718582 bytes, checksum: 4999de5a34cfebba63ad6e57d6621afa (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Streptococcus mutans é o principal agente etiológico da cárie dental. A busca por novos agentes antimicrobianos naturais capazes de inibir os principais mecanismos de virulência de S. mutans, como a síntese e tolerância a ácidos e a formação de biofilme dental pode representar uma importante estratégia de prevenção e tratamento desta infecção. Estudos recentes confirmaram que produtos naturais de origem marinha possuem significativa atividade antimicrobiana contra microrganismos patogênicos. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar a atividade antimicrobiana de extratos ou frações purificadas obtidos a partir de invertebrados e microrganismos marinhos associados sobre S. mutans e outros estreptococos orais como S. sobrinus e S. sanguinis, pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Adicionalmente, avaliamos a influência de extratos e/ou frações ativas sobre a formação de biofilme e sobre a expressão dos genes associados aos principais fatores de virulência de S. mutans UA159 e um isolado clínico da espécie. Foram analisados genes associados com a capacidade de formação de biofilme (gtf B/C, gbpB), com a síntese de ácidos (ldh) e com tolerância ao estresse ácido (dnaK, groEL, ATPase). De 768 frações/extratos testados cerca de 10% inibiram de 50% a 100% do crescimento microbiano de estreptococos orais (com CIM e CBM inferiores a 500 ìg/mL). Dentre os extratos e frações utilizadas, foram selecionados um extrato (DR(M3)6) e duas frações purificadas (PcS2d e DR-MSP- 10d-P3) com atividade antimicrobiana e CIM/CBM inferiores a 125 µg/ml sobre S. mutans, para avaliação da atividade sobre fatores de virulência da espécie. Nas concentrações 7ìg/mL, 31ìg/mL e 62ìg/mL, as frações PcS2d, DR-MSP-10d-P3 e o extrato DR(M3)6, respectivamente, inibiram a formação do biofilme sem interferir no crescimento planctônico das duas cepas analisadas, em adição o tratamento com os respectivos antimicrobianos, nestas mesmas concentrações por 30 minutos, resultou principalmente na redução da expressão dos genes gtfB, gbpB, dnaK e ATPase em proporções diferentes para as cepas S. mutans UA 159 e o isolado clinico. Em conclusão, as substâncias avaliadas, principalmente as frações purificadas podem futuramente ser empregadas como potenciais anticariogênicos/cariostáticos, entretanto mais estudos serão necessários para tal aplicabilidade. / Abstract: Streptococcus mutans are the principal etiologic agent of dental caries. The search for new natural antimicrobial agents capable of inhibiting the mechanisms of virulence of S. mutans, as synthesis and tolerance to acid and dental biofilm formation may represent an important strategy for prevention and treatment of this infection. Recent studies have confirmed that natural products of marine origin have significant antimicrobial activity against pathogenic microorganisms. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of extracts or purified fractions obtained from marine invertebrates and microorganisms associated on S. mutans and other oral streptococci such as S. sobrinus and S. sanguinis by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). Additionally, we evaluated the influence of extracts and / or active fractions on the formation of biofilm and the expression of genes associated with virulence factors of S. mutans UA159 and a S. mutans clinical isolate. We analyzed genes associated with the capacity of biofilm formation (gtfB/C, gbpB), acids synthesis (ldh) and acid stress tolerance (dnaK, GroEL, ATPase). 768 fractions / extracts was tested and about 10% inhibited by 50% to 100% of the microbial growth of oral streptococci (MIC and MBC with less than 500ìg/mL). Among the extracts and fractions used were selected an extract (DR (M3) 6) and two purified fractions (PcS2d and DR-MSP-10d-P3) with antimicrobial activity and MIC / MBC less than 125ìg/mL on S. mutans, to evaluate the activity of virulence factors. At concentrations 7ìg/mL, 31ìg/mL e 62ìg/mL, the fractions PcS2d, DRMSP- 10d-P3 and extract DR (M3) 6, respectively, inhibited the formation of biofilms without interfering with planktonic growth the two strains examined, in addition to treatment with the antimicrobial agents, these same concentrations for 30 minutes, resulted in reducing the expression of genes gtfB, gbpB, dnaK ATPase in different proportions for the strains S. mutans UA159 and clinical isolate. In conclusion, substances evaluated, especially the purified fractions can further be used as anticariogenic / cariostatic potential; however, more studies are needed for this application. / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

O ambiente marinho tem sido reconhecido como uma importante fonte de metabólitos secundários biologicamente ativos. Neste contexto, fungos endofíticos associados a algas ganharam importância nas últimas décadas, como alvos alternativos para a pesquisa de produtos naturais. O presente trabalho teve como o objetivo o estudo químico e biológico de duas linhagens de fungos endofíticos associados à alga vermelha Bostrychia radicans. Inicialmente foi realizada a triagem química e biológica (atividade antitumoral e antimicrobiana) dos extratos brutos das duas linhagens selecionadas, linhagens M20 (Hypocrea lixii) e M23 (Eutypella sp), obtidos a partir de cultivos em escala piloto, tanto variando-se os meios de cultivo e bem como períodos de crescimento. O extrato da linhagem M20 cultivada em arroz apresentou potencial citotóxico interessante quando submetido a ensaios utilizando células tumorais HCT-116. Ainda, após a análise química, esta linhagem foi selecionada para o cultivo em escala ampliada, visando o isolamento e elucidação estrutural dos metabólitos secundários presentes neste fungo. O estudo químico em escala ampliada da linhagem M20, espécie Hypocrea lixii, proporcionou o isolamento e identificação de quatro metabólitos: ácido 3-hidroxi-5-metóxi-6-metil-1,3-diidro-isobenzofurano-4- carboxílico (S1), 3,7-dimetóxi-6-metil-1-oxo-1,3-diidro-isobenzofurano-4-carbaldeído (S3), galactitol (S4), convolvulol (S5), além do isolamento de dois metabólitos que ainda não foram completamente elucidados, S2 e S6. Os metabólitos S1 e S3 são metabólitos inéditos como produtos naturais. Além disso, foi possível a identificação de 14 substâncias via cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), entre elas hidrocarbonetos, ácidos graxos, inclusive insaturados, aldeídos, aldeídos ?,?-insaturados e esteróide. As substâncias S1 e S4 foram submetidas à avaliação de atividade biológica (atividade antibacteriana, antifúngica, anticolinesterásica e antitumoral), porém nenhum resultado positivo foi constatado. Foi realizada avaliação da atividade tumoral das frações da linhagem M20, e as frações M20F e M20H apresentaram atividade citotóxica seletiva para linhagens de células tumorais. Em um segundo momento foi realizado o cultivo em escala ampliada da linhagem M23 (Eutypella sp) que proporcionou o isolamento da R-5-metilmeleína (S7). Dessa forma, o estudo químico de fungos endofíticos associados à alga Bostrychia radicans mostrou-se promissor na busca de novas estruturas químicas, visto que já foram isoladas e identificadas duas estruturas inéditas como produtos naturais. / The marine environment has been recognized as an important source of biologically active secondary metabolites. In this context, endophytic fungi associated with algae gained importance in recent decades, as alternative to natural products research targets. The present work had as goal the chemical and biological study of two strains of endophytic fungi associated with red algae Bostrychia radicans. The chemical and biological screening (antimicrobial and antitumor activity) of the crude extracts of two selected strains, M20 (Hypocrea lixii) and M23 (Eutypella sp), were obtained from pilot-scale cultivation, by means of culture media and growth period variation. The M20 strain extract, grown in rice, showed an interesting cytotoxic potential front HCT -116 tumor cells and after chemical analysis, this strain was selected for cultivation on a large scale, with the purpose of secondary metabolites isolation. Chemical studies of M20 species strain Hypocrea lixii, performed on an enlarged scale, afforded the isolation and identification of four metabolites: 3-hydroxy-5-methoxy-6- methyl-1,3-dihydro-isobenzofuran-4-carboxylic acid (S1), 3,7 dimethoxy-6-methyl-1-oxo- 1,3-dihydro-isobenzofuran-4-carbaldehyde (S3), galactitol (S4), convolvulol (S5), in addition the isolation of two metabolites which have not yet been fully elucidated, S2 and S6. The S1 and S3 metabolites are novel metabolites as natural products. Furthermore, it was possible to identify 14 compounds by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), including hydrocarbons, fatty acids, besides unsaturated ones, aldehydes, ?,?-unsaturated aldehydes and steroid. The S1 and S4 compounds were subjected to biological activity evaluation (antibacterial, antifungal, antitumor and acetylcholinesterase potential), but without any positive result. Assessment of tumor activity of fractions of the M20 strain was performed, and the M20F and M20H fractions showed selective cytotoxicity to tumor cell lines. In a second step, the M23 strain (Eutypella sp) was grown on a large scale, resulting in the R-5-metilmeleina (S7) isolation. Thus, the chemical study of endophytic fungi associated to Bostrychia radicans algae proved to be promising concerning the search for new chemical compounds discovery, since it yielded two new structures as natural products.

Bostrychia tenella, proveniente dos costões rochosos da Praia Dura, no Estado de São Paulo. Para atingir este objetivo, foram realizados culturas isoladas dos microrganismos e a co-cultura entre o fungo T68 e a cianobactéria CENA139; técnicas de extração por partição volume/volume; métodos cromatográficos como cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), bem como técnicas espectroscópicas e espectrométricas de RMN 1-D e 2-D, CL-EM, CG-EM, além de desreplicação (utilizando o banco de dados MarinLit® e o Dicionário de Produtos Naturais. Foram isoladas três substâncias do fungo estudado: Esterigmatocistina, T68ARf60_a e T68ARf60_b. A micotoxina esterigmatocistina foi isolada também a partir da co-cultura entre o fungo e a cianobactéria. Este trabalho mostrou que houve interações ecológicas competitivas na cultura mista entre Cyanobium sp. CENA139 e o fungo T68, resultando na prevalência da cultura fúngica. Para finalizar, este trabalho avaliou a atividade biológica dos extratos brutos das culturas isoladas e co-cultura, não apresentando atividade antimicrobiana. Entretanto, o extrato bruto T68 mostrou-se fototóxico nos ensaios de fototoxicidade e a substância isolada esterigmatocistina foi citotóxica e fotoxóxica no mesmo ensaio, além de exercer citotoxicidade frente à linhagem tumoral HepG2 no ensaio de citotoxicidade MTT. / This study had as main objective the evaluation of the chemical and biological profiles of two strains of microorganisms, the cyanobacteria Cyanobium sp. CENA139, from Ilha do Cardoso mangroves, São Paulo State, and the endophytic fungus T68, Xylariaceae family, isolated from the red algae Bostrychia tenella, from the rocky shores at Praia Dura, São Paulo State. To accomplish this objective, we performed isolated cultures of the microorganisms and the co-culture between the fungus T68 and the cyanobacteria CENA139; partition extraction techniques; chromatographic methods such as thin layer chromatography and high performance liquid chromatography. Also, we performed spectroscopic and spectrometric techniques of NMR 1-D and 2-D, LC-MS, GC-MS, besides dereplication using data sources as MarinLit® and the Dictionary of Natural Products. Three compounds were isolated from the endophytic fungus culture: Sterigmatocystin, T68ARf60_a and T68ARf60_b. The mycotoxin sterigmatocystin was also isolated from the co-culture. This study showed that there was competitive ecological interactions between Cyanobium sp. CENA139 and the fungus T68 in the co-culture, resulting in the prevalence of the fungal culture. Finally, this study evaluated the biological potential of the crude extract from both isolated cultures and the co-culture, not exerting antimicrobial activity. Nevertheless, the T68 crude extract was shown to be phototoxic on the phototoxicity assays and the isolated sterigmatocystin was both cytotoxic and phototoxic in the same assay, besides exerting cytotoxicity on the tumor cell line HepG2 in the MTT assay.

Organismos marinhos são reconhecidos por apresentarem potencial elevado para a produção de produtos naturais com estruturas moleculares únicas. Neste âmbito marinho, os fungos endofíticos são considerados como uma fonte promissora de substâncias bioativas, apresentando moléculas oriundas do metabolismo secundário mais significativas biologicamente do que aquelas produzidas por seus hospedeiros. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação dos perfis químico e biológico do fungo endofítico Aspergillus unguis isolado da alga Palmaria decipiens, proveniente da Ilha Robert, Antártica. Para análise dos metabólitos secundários produzidos por A. unguis foram utilizados métodos cromatográficos como cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), bem como técnicas espectroscópicas e espectrométricas de RMN 1-D e 2-D, CL-EM, CG-EM, inclusive para elucidação estrutural das substâncias isoladas. Todos os dados obtidos foram comparados com aqueles descritos na literatura e/ou com aqueles apresentados no software MarinLit® e o Dicionário de Produtos Naturais. Foram isoladas três substâncias do fungo estudado: Nidulina (DEP-1), pico 4-fração 8 (DEP-2) e pico 6-fração 8 (DEP-3). Todas são moléculas da classe das depsidonas, cuja nidulina já é uma molécula reportada na literatura. As outras duas são estruturas inéditas na literatura até o presente momento, uma vez que ainda não foram encontrados dados possibilitando a comparação com moléculas conhecidas. Concomitantemente, foram realizados experimentos para avaliação da atividade biológica de extratos, frações e substância isolada. As substâncias DEP-2 e DEP-3 foram submetidas para avaliação do potencial leishmanicida. As promastigotas IC50 para DEP-2 foram 68,1 ± 8,1, com índice de seletividade de 5,7, enquanto para os amastigotas o valor foi de 55,9 ± 0,6, com índice de seletividade 6,9, em comparação com os controles Amfotericina B com IC50 promastigota 3,5 ± 0,03 com índice de seletividade 6,6 e IC50 amastigotas 5,3 ± 0,2, índice de seletividade 4, 6 e Pentamidina com IC50 promastigotas 29,9 ± 0,08, índice de seletividade 1.2 e amastigotas IC50 18,2 ± 0,6, 1,9. Para DEP-3, o IC50 para promastigotas foi de 69,6 ± 0,7, com índice de seletividade 1,2. Considerando que a IC50 para amastigotas foi de 55,0 ± 0,2, com índice de seletividade 1,6, em comparação com os controles Amfotericina B com IC50 promastigote 3,48 ± 0,03, com índice de seletividade 6,6 e IC50 amastigotas 5,3 ± 0,2, índice de seletividade 4,6. Pentamidina com promastigotas IC50 29,9 ± 0,08, índice de seletividade 1,2 e amastigotas IC50 18,2 ± 0,6; índice de seletividade 1,9. O DEP-1 foi submetido para a avaliação da fotoestabilidade e fototoxicidade como considerado foto estável com uma queda na fotoestabilidade inferior a 0,1. E a DEP-2 e a DEP-3 estavam em mistura foram enviadas para análise da atividade microbiana e concluiu-se que há atividade sinérgica contra S. aureus, uma vez que o DEP-2 sozinha apresentou CIM de 100 ?g / mL e em mistura foi obtido CIM de 6,25 ?g / mL. / Marine organisms are recognized by present high potential for the production of natural products with unique molecular structures. In this context, the endophytic fungi are considered as a promising source of bioactive compounds, showing molecules from the secondary metabolism more biologically meaningful than those produced by their hosts. Within this context, this work had as main objective the evaluation of the chemical and biological profiles of the endophytic fungus Aspergillus unguis isolated from the alga Palmaria decipiens, from Robert Island, Antarctica. For analysis of secondary metabolites produced by A. unguis chromatographic methods were used as thin-layer chromatography (CCD) and high performance liquid chromatography (HPLC), as well as spectroscopic and spectrophotometric techniques such as NMR 1-D and 2-D, LC-MS, GC-MS, including for structural elucidation of isolated substances. All the data obtained were compared with those described in the literature and/or with those presented in the MarinLit ® software and the Dictionary of Natural Products. From the studied fungi, three substances were isolated: Niduline (DEP-1), peak-4 fraction-8 (DEP-2) and peak-6 fraction-8 (DEP-3). All molecules present depsidone skeleton, whose Niduline is the most molecule reported in the literature. The other two are unpublished structures in the literature up to the present time, since until now it has not yet been found enabling data for comparison with known molecules. At the same time, experiments were performed to evaluate the biological activity of extracts, fractions and isolated substance. The substances DEP-2 and DEP-3 were submitted to test to evaluate the leishmanicidal potential. The promastigotes IC50 for DEP-2 was 68.1 ± 8.1, with selectivity index was 5.7; while for amastigotes the value was 55.9 ± 0.6, with selectivity index 6.9, compared with controls Amphotericin B with IC50 promastigote 3,5 ± 0,03 with selectivity index 6.6, and IC50 amastigotes 5.3 ± 0.2; selectivity index 4.6 and Pentamidine with IC50 promastigotes 29.9 ±0.08, selectivity index 1.2 and IC50 amastigotes 18.2 ± 0.6, selectivity index 1.9. For DEP-3 the IC50 for promastigotes was 69.6±0.7, with selectivity index 1.2; whereas the IC50 for amastigotes was 55.0±0.2, with selectivity index 1.6, compared with controls Amphotericin B with IC50 promastigote 3.48 ± 0.03, with selectivity index 6.6 and IC50 amastigotes 5.3 ± 0.2, selectivity index 4.6. Pentamidine with IC50 promastigotes 29.9 ±0.08, selectivity index 1.2 and IC50 amastigotes 18.2 ± 0.6, selectivity index 1.9. DEP-1 was submitted for evaluation of photostability and phototoxicity as considered photostable with a drop in photostability of less than 0.1. Since the compounds DEP-2 and DEP-3 were sent in a mixture for analysis of the microbial activity and it was concluded that there is a synergistic activity against S. aureus, since DEP-2 alone had a MIC of 100 ?g/mL and in mixture obtained a MIC of 6.25 ?g/mL.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / As macroalgas marinhas sÃo consideradas fontes promissoras de compostos bioativos para estudos fitoquÃmicos. Tais compostos possuem diferentes propriedades biolÃgicas, funcionando como antibacterianos, antifÃngicos, antivirais, anti-inflamatÃrios, anti-helmÃnticos, antileishmaniose, antimalÃria, antioxidantes, antitumorais cuja utilizaÃÃo como fÃrmacos tem despertado o interesse de muitos pesquisadores. O objetivo deste trabalho foi realizar a investigaÃÃo fitoquÃmica do extrato etanÃlico da macroalga marinha verde Ulva fasciata. O material foi coletado em abril de 2008, na Praia do Pacheco, no municÃpio de Caucaia-CE. As macroalgas in natura foram desidratadas em estufa com recirculaÃÃo de ar a 40ÂC por 15 horas e, em seguida, trituradas, obtendo-se 500 g, os quais foram submetidos primeiramente a uma extraÃÃo a frio com hexano (UFH), e posteriormente com etanol a 70% (UFE). Para o isolamento e a purificaÃÃo dos constituintes fixos foi empregada uma combinaÃÃo de tÃcnicas cromatogrÃficas clÃssicas em que foram isolados UF-1, UF-2 e UF-3. Na amostra UF-1 foi observada a presenÃa de um constituinte majoritÃrio (86,17%) com tempo de retenÃÃo de 24,940 min, cujo espectro de massas o caracterizou por apresentar o Ãon molecular M+ 284. A sugestÃo fornecida pela anÃlise CG-EM e a comparaÃÃo visual do espectro do composto analisado com os da literatura, bem como pela proposta mecanÃstica de formaÃÃo dos principais fragmentos reforÃaram sua identificaÃÃo como hexadecanoato de etila com um Ãndice de similaridade de 96%. Os compostos UF-2 e UF-3 foram encaminhados para o Centro Nordestino de AplicaÃÃo e Uso da RessonÃncia MagnÃtica Nuclear (CENAUREMN) da Universidade Federal do CearÃ, para a determinaÃÃo sua estrutura quÃmica atravÃs de tÃcnicas espectroscÃpicas de RMN 1H e 13C uni- e bidimensionais (1H, 1H-COSY, gs-HMQC, gs-HMBC, ROESY, NOESY e TOCSY), bem como por espectrometria de massa (EM). / Marine macroalgae have been considered promising sources of bioactive compounds. These compounds exhibit different biological properties, such as antibacterial, antifungal, antiviral, anti-inflammatory, antihelminthic, antileshmaniose, antimalaria, antioxidants, and antitumor. Their use as medicine has spurred the interest of many researches. The objective of this work was to carry out a phytochemistry investigation of the ethanolic extract of green marine macroalga Ulva fasciata. The plant material was collected in April 2008 at Pacheco Beach, Caucaia-CE. Macroalgae in natura were dehydrated in an air-circulation oven at 40ÂC for 15 hours. After the drying process, the material was cut into small pieces. 500 grams were submitted to a cold extraction with hexane (UFH) followed by an extraction with 70% ethanol (UFE). Both isolation and purification from fixed constituents were performed using a combination of classic chromatographic techniques. Three samples were isolated and named UF-1, UF-2 and UF-3. The presence of a major constituent (86.17%) with retention time of 24.940 min was observed in the first sample (UF-1), and its mass spectrum was characterized by the molecular ion M+ 284. The GC-MS analysis suggestion and the comparison of its spectrum with literature reinforce its identification as ethyl hexadecanoate with a similarity index of 96%. Compounds UF-2 and UF-3 have been taken to the Northeastern Center of Application and Use of Nuclear Magnetic Resonance (CENAUREMN) of Federal University of Ceara, to determine the chemical structure by spectroscopy techniques such as uni- and bidimensional (1H, 1H-COSY, gs-HMQC, gs-HMBC, ROESY, NOESY and TOCSY) 1H-NMR and 13C-NMR, as well as mass spectrometry (MS).