Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T13:17:51Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Diego de Hollanda Cavalcanti Tavares.pdf: 2494574 bytes, checksum: e8dc89834e1cb3194cbb61de8f169119 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T13:17:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Diego de Hollanda Cavalcanti Tavares.pdf: 2494574 bytes, checksum: e8dc89834e1cb3194cbb61de8f169119 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / FACEPE / No Nordeste brasileiro, a Leishmaniose Visceral (LV), provocada pela infecção com a Leishmania chagasi, é um sério problema de saúde pública cujo controle depende de um diagnóstico precoce dos reservatórios caninos e indivíduos afetados. Antígenos recombinantes são a melhor solução para o uso no diagnóstico sorológico e, em trabalhos prévios, novos antígenos de L. chagasi foram identificados com este propósito. Quando analisados por reações imunoenzimáticas os mesmos apresentaram uma sensibilidade variável e uma alta especificidade no diagnóstico da LV, e em misturas com dois ou mais antígenos houve um aumento da sensibilidade sem prejuízo da especificidade. A produção de um sistema de diagnóstico com mais de um antígeno, entretanto, aumenta os custos de fabricação e padronização. Neste trabalho, partimos de genes sintéticos (dof1, dof2 e dof3) desenhados com as melhores características (domínios repetitivos, regiões polares, epítopos para MHC) de antígenos selecionados e clonados em vetores plasmidiais. A partir de várias etapas de subclonagem estes genes foram utilizados na construção de genes quiméricos, codificando para as regiões repetitivas dos antígenos em diferentes combinações (3-2-1, 3-1-2 e 1-3-2). Os genes quiméricos, clonados em vetores plasmidiais de expressão, foram usados para a produção das respectivas proteínas em Escherichia coli, fusionadas a um motivo de poli-histidinas na sua extremidade N-terminal. Após purificação, via cromatografia de afinidade, estas proteínas foram avaliadas por ensaios de ELISA-indireto com soros humanos, onde se obteve alta sensibilidade e especificidade para as três proteínas, mesmo em diluições elevadas de soro. Estes resultados confirmam o potencial de uso das proteínas quiméricas como alternativa no diagnóstico da LV.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_silvana_beutinger_marchioro.pdf: 842737 bytes, checksum: 032d940f684cacf69ead32db6268d1cc (MD5) Previous issue date: 2013-06-27 / Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) is the causative agent of enzootic pneumonia (EP) in pigs, a chronic respiratory disease characterized by low mortality and high morbidity, responsible by significant economic losses in the pig industry worldwide. M. hyopneumoniae infection can be controlled by optimizing management practices and housing conditions, as well as with the use of antibiotics and vaccination. Commercial vaccines consist of adjuvanted inactivated whole cell preparations, and are frequently used worldwide in countries with an intensive pig production. The currently available vaccines are beneficial from an economic point of view, but they do not provide a sustainable control of the disease. They cannot prevent colonization of M. hyopneumoniae in the respiratory tract, and do not significantly reduce the transmission of the pathogen. Also, little is known about the exact mechanisms of the partial protection they induce. In this context, the general aims of this thesis were to assess the mode of the action of an existing commercial vaccine on the one hand and to develop and evaluate a new recombinant vaccine against M. hyopneumoniae on the other hand, looking for more effective strategies for disease control. For development of the recombinant vaccine a chimeric protein was developed and evaluated. This protein was based on proteins known to play a role in the adhesion and that were able to induce an immune response and a partial protection against M. hyopneumoniae infection when evaluated individually. From the studies described in this thesis, it can be concluded that intramuscular vaccination with an adjuvanted bacterin is able to stimulate both systemic and local immune responses, and that the new recombinant vaccine developed against EP might be promises strategies to control the disease. / Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) é o agente etiológico da pneumonia enzoótica (EP) suína, uma doença crônica de baixa mortalidade e alta morbidade, responsável por perdas econômicas significativas na cadeia suinícola em todo o mundo. A infecção por M. hyopneumoniae pode ser controlada pela otimização das práticas de manejo e das condições de alojamento, bem como com o uso de antibióticos e vacinação. Vacinas comerciais consistem em preparações de células inteiras inativadas do agente, fornecidas com adjuvante, e são frequentemente utilizadas em todo o mundo. As vacinas disponíveis atualmente são benéficas do ponto de vista econômico, mas elas não fornecem um controle sustentável da doença. Elas não previnem a colonização do M. hyopneumoniae no trato respiratório, e não reduzem significativamente a transmissão do agente patogênico. Além disso, pouco se sabe sobre os mecanismos exatos envolvidos na proteção que elas induzem. Desta forma, os objetivos gerais desta tese foram avaliar o modo de ação de uma vacina comercial existente e desenvolver e avaliar uma nova vacina recombinante contra M. hyopneumoniae, buscando estratégias mais eficazes para o controle da doença. Para o desenvolvimento desta vacina recombinante uma proteína quimérica foi produzida, baseada em proteínas envolvidas na adesão do agente e que foram capazes de induzir uma resposta imune e uma proteção parcial contra a infecção por M. hyopneumoniae quando avaliadas individualmente, e avaliada seu potencial protetor em teste de infecção experimental de suínos. A partir dos estudos descritos nesta tese, pode-se concluir que a vacinação intramuscular com uma bacterina comercial é capaz de estimular tanto uma resposta imune sistêmica quanto local, e que a nova vacina recombinante desenvolvida contra a EP pode ser considerada uma estratégia promissora para o controle da doença.