Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9566_1.pdf: 1795256 bytes, checksum: caf7e8bc2ea232646c796e5819fe3e55 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2001 / A presente pesquisa tem como objetivo detectar variações de DNA nos núcleos das células marcadas pela Reação Histoquímica de Feulgen, em indivíduos com diagnóstico de Neoplasias Intraepiteliais Cervicais de Graus I e II (NIC I e II) do colo do útero. A microcitometria foi realizada em lâminas preparadas provenientes de hospitais estaduais e universitário, submetidas à Reação Histoquímica de Feulgen, sendo analisadas no sistema Image Lab para a mensuração e absorbância. Os resultados encontrados entre as células neoplásicas dos graus I (NIC I) e II (NIC II) demonstraram que o método é sensível e eficiente na ajuda da quantificação entre as diferentes classificações, podendo, desta forma, auxiliar no diagnóstico das lesões do colo do útero em seu estágio inicial

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 575171 bytes, checksum: 3cf08bba8bb6a93eab8dbf41ef32bd01 (MD5) Previous issue date: 2006-02-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Capsicum genus is one of the most important members of the Solanaceae family with high economic value. Out of 25 known species, five are extensively cultivated. Capsicum annuum is the most important commercially by its agronomic value as spice. In despite of this importance, the nuclear DNA content of C. annuum is still uncertain with values from the literature ranging from 5.52 to 10.80 pg. In face of the fast development of digital image technologies in cytometry, this study proposes the utilization of these resources to reevaluate the genomic size in C. annuum. The specific objectives were: (i) to determine the reliability parameters for image cytometry analysis by performing tests of equipment stability, linearity and uniformity of nuclei integrated optical density; (ii) to apply that parameters in analysis of erythrocytes nuclei from Gallus domesticus 'Leghorn' (male and female); and (iii) to develop image cytomery methodologies for determination of the nuclear DNA content of pepper (C. annuum L. 'Fortuna Super'). Hen and rooster blood samples were prepared by using the method of smear preparation. The slides were stained with Feulgen reaction and they were used to perform the quality control procedures and integrated optical density measurements. Root tips of C. annuum were fixed, stained with Feulgen reaction and squashed on a microscope slide. Once the parameters of the reliability for performing image cytometry were established, the application of those standardizations in the chicken red blood cells suggested that this technique allows identification of differences in the nuclear DNA content between rooster and hen. Analysis of variance demonstrated that the 4.32% difference obtained was significant and it was attributed to sexual chromosomes heteromorfism. C. annuum analyses allowed the calculation of integrated optical density values, and they were in iccordance with the international standards for DNA image cytometry. The 2C DNA value for C. annuum 'Fortuna Super', using Pisum sativum as the internal standard, was 8.10 pg. This data differs in 2% from the previously obtained by flow cytometry for the same plant population. Besides, the value obtained in this study differs in16% and 28% from those 2C values previously published by image cytometry and in 7% and 32% for flow cytometry. These results include information about C. annuum genome that can be useful in breeding programs, genome sequencing projects and for comparative studies of genome evolution. / Capsicum é um dos gêneros mais importantes economicamente da família Solanaceae. Das 25 espécies descritas, cinco são extensivamente cultivadas. Capsicum annuum é a mais importante comercialmente, pelo seu valor agronômico como especiaria. Apesar da sua importância, valores de conteúdo de DNA conflitantes, que variam de 5,52 a 10,80 pg, têm sido descritos para essa espécie. Diante dos avanços dos equipamentos digitais nas análises de citometria de imagem, o presente trabalho propôs o estabelecimento desses recursos para reavaliar o tamanho do genoma em C. annuum. Os objetivos específicos foram: (i) o estabelecimento de parâmetros de confiabilidade para análises em citometria de imagem, por meio da realização de testes de estabilidade do equipamento, linearidade e uniformidade da densidade óptica integrada dos núcleos; (ii) aplicação dessa calibração em núcleos de eritrócitos de Gallus domesticus Leghorn (macho e fêmea); e (iii) desenvolvimento de metodologias de citometria de imagem para determinação do conteúdo de DNA em pimentão (C. annuum L. Fortuna Super ). Lâminas de esfregaço de sangue de galinha e galo submetidas à reação de Feulgen foram utilizadas nos testes de calibração e para a determinação da densidade óptica integrada. As preparações citogenéticas de pimentão foram feitas pela técnica de esmagamento de meristemas radiculares submetidos à reação de Feulgen. Uma vez estabelecidos os parâmetros de confiabilidade para a realização da citometria de imagem, a aplicação dessas padronizações em análises de núcleos de eritrócitos de ave permitiu identificar diferenças de 4,32% no conteúdo de DNA nuclear entre machos e fêmeas de G. domesticus. Análise de variância demonstrou que a diferença encontrada era significativa, e essa foi atribuída ao heteromorfismo dos cromossomos sexuais. As análises de citometria de imagem em C. annuum permitiram o cálculo da densidade óptica integrada, atendendo aos parâmetros internacionalmente adotados para esse tipo de estudo. O conteúdo de DNA estimado para C. annuum Fortuna Super , utilizando Pisum sativum Ctirad com o padrão interno, foi de 8,10 pg. Esse valor difere em 2% do obtido previamente por citometria de fluxo, utilizando-se material nuclear foliar da mesma população de plantas. Além disso, o valor obtido difere em 16% e 28% dos valores 2C obtidos por citometria de imagem descritos na literatura e em 7% e 32% dos relatados por citometria de fluxo. Esses resultados abrangem informações acerca do genoma dessa espécie, que podem ser úteis em programas de melhoramento e seqüenciamento e em estudos evolutivos.

The bromeliad family comprises about 3,000 species distributed in 58 genera and 3 subfamilies: Pitcarnioideae, Bromelioideae and Tillandsioideae. The increasing demand of the market has been responsible for increasing the production and sale of bromeliads. However the illegal extraction is still dramatically reducing existing species. This fact, coupled with the devastation of Brazilian ecosystems, has caused irreparable losses in diversity. Considering this fact, have a basis with stored genetic material for future studies is very important. The main reason for the establishment and maintenance of a germplasm bank is to store and make available germplasm and provide information regarding certain accessions. The aim of the work was to perform the molecular characterization of accessions of native bromeliads prospected in Sergipe State, using tools such as RAPD and ISSR molecular markers and flow cytometry. The collections were performed in four counties of the Sergipe state (Itabaiana, Frei Paulo, Simão Dias e Poço Redondo), whose locations were mapped with the use of a GPS and the individuals were kept in a greenhouse, composing a Active Germplasm Bank (AGB). For molecular analyzes young leaves were collected and used for DNA extraction. Eleven ISSR primers and 13 RAPD primers were used to characterize the prospected accessions. Analyses by flow cytometry were performed for the determination of DNA content, using young leaves and extraction of nuclei was performed following the method of Dolezel. ISSR and RAPD markers detected large genetic variability among the accessions of the AGB. The estimation of the DNA content obtained by flow cytometry of the bromeliad accessions collected in four municipalities of Sergipe State allowed the distinction of two groups (group 1 = 1,59 pg and group 2 = 1,057 pg). / A família bromeliácea compreende aproximadamente 3.000 especies, distribuídas em 58 gêneros e 3 subfamílias: Pitcarnioideae, Bromelioideae e Tillandsioideae. A crescente demanda de mercado tem sido responsável pelo aumento da produção e comercialização das bromélias. No entanto o extrativismo ilegal ainda existente está reduzindo drasticamente as espécies. Esse fato, somado à devastação dos ecossistemas brasileiros, tem causado perdas irreparáveis na diversidade. Diante desse fato, ter uma base com material genético guardado para futuros estudos é muito importante. A principal razão para o estabelecimento e a manutenção de um banco de germoplasma é armazenar e disponibilizar germoplasma e prover informações a respeito de determinado acesso. O objetivo do trabalho foi realizar a caracterização molecular dos acessos de bromélias nativas prospectadas no Estado de Sergipe, empregando ferramentas como marcadores moleculares RAPD, ISSR e citometria de fluxo. As coletas foram realizadas em quatro municípios do Estado de Sergipe (Itabaiana, Frei Paulo, Simão Dias e Poço Redondo), cujos locais foram mapeados com o auxílio de GPS e os indivíduos foram conservados em casa de vegetação, compondo um Banco Ativo de Germoplasma (BAG). Para as análises moleculares folhas jovens foram coletadas e utilizadas para a extração do DNA. Onze iniciadores ISSR e 13 iniciadores RAPD foram utilizados para a caracterização dos acessos prospectados. As análises por citometria de fluxo foram realizadas para a determinação do conteúdo de DNA, usando folhas jovens e as extrações dos núcleos foram realizadas seguindo o método de Dolezel. Os marcadores ISSR e RAPD detectaram ampla variabilidade genética entre os acessos do BAG. A estimativa do conteúdo de DNA obtido pela citometria de fluxo dos acessos de bromélias coletados nos quatro municípios de Sergipe possibilitou a distinção de dois grupos (grupo 1 = 1,59 pg e grupo 2 = 1,057 pg).