Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-05-11T16:47:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Matheus_Rosa.pdf: 1209028 bytes, checksum: 62654de726eff474d5030296a87f2216 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-12T12:18:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Matheus_Rosa.pdf: 1209028 bytes, checksum: 62654de726eff474d5030296a87f2216 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T12:18:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Matheus_Rosa.pdf: 1209028 bytes, checksum: 62654de726eff474d5030296a87f2216 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Neospora caninum, agente etiológico da neosporose, é um dos principais responsáveis por abortos em rebanhos bovinos, causando prejuízos econômicos para a agropecuária. Sendo assim, métodos de controle e diagnóstico devem ser aplicados para reduzir a disseminação do patógeno em propriedades rurais. A vacinação dos rebanhos seria uma alternativa importante, no entanto a falta de vacinas eficazes impede a aplicação deste método de controle. Diversos estudos vêm sendo realizados com o intuito de se obter vacinas mais eficazes. Vacinas recombinantes utilizando proteínas heterólogas são as mais estudas. As proteínas presentes nas roptrias (ROPs), devido a sua importância na infecção celular, formação do vacúolo parasitófago e suas características antigênicas e imunogênicas, são excelentes candidatas a antígeno vacinal. A utilização de lipoproteínas bacterianas tem recebido uma atenção especial como molécula adjuvante carreadora devido às suas propriedades imunomoduladoras. A lipoproteína Oprl de Pseudomonas aeruginosa possui a capacidade de modular a resposta imune para uma via Th1. Esta capacidade imunomoduladora quando associada a diferentes antígenos pode modular a resposta mista entre as vias Th1 e Th2. O presente estudo teve como objetivo clonar e expressar a região da NcROP2, descrita entre os aminoácidos 191 e 359, fusionada a OprI, resultando na quimera rROP2/OprI em Escherichia coli e caracterizá-la quanto a sua antigenicidade através da técnica de Western blot. A proteína recombinante produzida em Escherichia coli Rosetta (DE3) PlysS, apresentou um tamanho esperado de 50kDa. Sendo purificada e caracterizada por anticorpos monoclonais anti-histidina e sua antigenicidade reconhecida por soro de animais naturalmente infectados por N. caninum. O reconhecimento da quimera rROP2/OprI por anticorpos anti-N. caninum, revela a existência de determinantes antigênicos comuns entre a proteína recombinante e a forma nativa, sugerindo o seu uso para o desenvolvimento de uma vacina recombinante. / Neospora caninum, etiologic agent of neosporosis, is one of the main responsible for abortion in cattle herds, causing economic losses to Cattle-raising. Thus, control methods and diagnosis should be applied to reduce the spread of the pathogen among farms. Vaccination of cattle would be an important alternative; however the lack of effective vaccines prevents the application of this control method. Several studies have been conducted with the aim of develop more effective vaccines. Vaccines using recombinant heterologous proteins are the most studied. The proteins present in rhoptries (ROPs), due to its importance in cell infection, parasitófago vacuole formation and its antigenic and immunogenic characteristics, became excellent candidates for vaccine antigen. The use of bacterial lipoproteins has received particular attention as an adjuvant carrier molecule due to its immunomodulatory properties.The Pseudomonas aeruginosa Oprl lipoprotein has the ability to modulate the immune response into a Th1 pathway. This immunomodulatory capacity when associated with different antigens can modulate the mixed response between Th1 and Th2 pathways. This study aimed to clone and express the region of NcROP2 described between amino acids 191 and 359, fused OprI, producing the chimera rROP2/OprI in Escherichia coli and to characterize it its antigenicity by Western blot. Recombinant protein produced in E. coli Rosetta (DE3) pLysS, showed an expected size of ~50 kDa. The protein was purified and characterized by anti-histidine monoclonal antibodies and their antigenicity recognized by sera from animals naturally infected by N. caninum. The chimera rROP2/OprI was recognized by antibodies anti-N. caninum reviling common antigenic determinants of the recombinant protein and the its native form, suggesting its use for developing a recombinant vaccine.