Les salmonelles non-typhoïdes sont responsables de la majorité des toxi-infections alimentaires collectives en Europe. Elles sont le plus souvent dues à la consommation de produits alimentaires d'origine animale. L'antibiothérapie est réservée aux patients fragilisés (enfants, personnes âgées ou immunodéprimés). Les fluoroquinolones sont les molécules de choix dans les cas d'infection causés par des souches résistantes à plusieurs familles d'antibiotiques. C'est particulièrement le cas des souches du sérovar Typhimurium de lysotypes DT104 et DT204 multirésistantes. L'émergence de souches résistantes aux fluoroquinolones pose un problème thérapeutique majeur en médecine humaine et vétérinaire. Les principaux mécanismes mise en oeuvre pour résister aux antibiotiques sont l'expulsion de l'antibiotique hors de la cellule par efflux actif et la modification des enzymes cibles des fluoroquinolones (la gyrase et la topoisomérase IV). Le système d'efflux AcrAB-TolC est un mécanisme essentiel dans la multirésistance aux antibiotiques chez E. Coli. Les gène acrAB font effectivement partie d'un ensemble de gènes régulés par les opérons mar, sox et rob. La surexpression de ce système entraine une augmentation importante du niveau de résistance à plusieurs familles d'antibiotiques. Ceci se produit suite à l'apparition de mutatoins dans les régulateur globaux mar et sox, ainsi que dans le régulateur local acrR de ce système. Par homologie avec ce qui se passe chez E. Coli, les opérons mar et sox pourraient controler l'expression de la pompe AcrAB-TolC chez S.Typhimurium DT104. On a pu mettre en évidence que l'inactivation de marRA ou soxRS n'a aucun effet dans le phénotype de résistance de S.Typhimurium DT104, suggérant que ces régions ne participent pas dans l'acquisition d'un phénotype de résistance, ou encore dans la régulation su système AcrAB-TolC. / Nontyphoidal salmonellae are accountable for :most foodborne infections in Europe and other developped countries. Infection with salmonella is often associated with consumption of foods of animal origin. Antibiotic treatment is not requiered for salmonella gastroenteritis but is essential for patients at high risk of extra-intestinal disease. For many years chloramphenicol, ampicillin, strepromycin, sulfonamides and tetracycline were drugs of choice. The emergence of Salmonella gastroenteritis resistant to these antibiotics has limited theirs therapeutics value. Althouth, fluoroquinolones have proven effective alternatives to treat multidrug resistant straint particularly S.Typhimurium DT104 et 204, résistance to these agents has also emerged. This has been a serious problem both in human and veterinary medicine. In salmonella, fluoroquinolones resistance has been attributed to mutations in the genes coding for gyrase, and topoisomerase IV and also to active efflux pumps. The efflux pump AcrAB is known to play a major role in multidrug rresistance. In E.Coli, acrAB expression is regulated at the lowest level by the local repressor AcrR and at a more glogal level it is regulated by stress conditions and by global regulators like MarA, SoxS or Rob. Overexpression pump AcrAB can confer resistance to wide range of antimicrobial agents and organic solvents which occurs as a result of mutations in one of the genes coding for the regulators. In contrast to E. Coli, mutations in the regulotry regions were not found in multidrug resistant S.Typhimurium overexpressing acrAB genes. Overexpression of ramA also confers multidrug resistance through the activation of acrAB expression in Salmonella entrica. Nonetheless, little knowledge is available with regard to the involvement of mar, sox and ram regions in multidrug and fluoroquinolones resistance in Salmonella entrica.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-26T17:18:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese doutorado Alexsandra Scavuzzi.pdf: 8878953 bytes, checksum: 50dba197129c93a6d62fed598bc1f2d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T17:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese doutorado Alexsandra Scavuzzi.pdf: 8878953 bytes, checksum: 50dba197129c93a6d62fed598bc1f2d1 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Foi investigada a ocorrência de genes de resistência a quinolonas (qnrA, qnrB e qnrS), a presença de mutações em gyrA, gyrB e parC, a expressão de bombas de efluxo (acrB e acrF) e mutações no gene ramR, como também foi avaliado alterações ultraestruturais provocadas pela polimixina B, meropenem e pela associação entre polimixina B e meropenem em isolados de Klebsiella pneumoniae portadores de blaKPC-2 provenientes de infecção e colonização, em pacientes de hospitais de Recife-PE, Brasil. Trinta isolados de K. pneumoniae foram selecionados para este estudo, destes, seis isolados foram selecionados para seqüenciamento de DNA e dois foram selecionados para detecção de alterações ultraestruturais. A detecção dos genes qnr, acrB e acrF foram realizadas por PCR seguidas por sequenciamento de DNA. As mutações em ramR e nas QRDRs de gyrA, gyrB e parC foram detectadas por sequenciamento, a expressão das bombas de efluxo foi determinada por RT-PCR e as alterações ultraestruturais foram detectadas por microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Dos isolados analisados, 73,3% (n=22) apresentaram o gene qnrB, sendo detectadas por seqüenciamento as variantes qnrB1 e qnrB12. Esse é o primeiro relato publicado da presença de genes qnrB1 e qnrB12 com blaKPC-2 em K. pneumoniae, como também o primeiro relato mundial da presença do gene qnrB12 em K. pneumoniae. Foram observadas mutações em gyrA S83 em dois isolados e mutação em ramR em um isolado. Todos os isolados apresentaram genes para as bombas de efluxo acrB e acrF. A RT-PCR realizada mostrou que as bombas estavam sendo expressas. Quando submetidos à concentração clinicamente relevante para meropenem, a análsie de microscopia eletrônica mostrou que os isolados apresentaram alterações morfológicas, retração do material citoplasmático, incapacidade de divisão celular, rompimento da parede celular e extravasamento do conteúdo citoplasmático. Quando submetidos à concentração clinicamente relevante de polimixina B os isolados apresentaram perda de membrana celular, retração do material citoplasmático, extravasamento do conteúdo citoplasmático e presença de compartimento membranares. Quando submetidos à concentração clinicamente relevante de meropenem associado com polimixina B, os isolados apresentaram uma maior intensidade das alterações ultraestruturais visualizadas. Portanto, foi observada uma maior alteração celular quando os isolados eram submetidos à associação de meropenem e polimixina. Os resultados obtidos são preocupantes porque foram detectados isolados de K. pneumoniae portadores do gene blaKPC-2, qnrB, mutação em gyrA, expressão de bombas de efluxo acrB e acrF e mutação em ramR, infectando e colonizando pacientes, podendo ser importantes reservatórios para disseminação de diversos mecanismos de resistência no ambiente hospitalar.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-04-16T14:40:02Z No. of bitstreams: 1 FernandaNomiyamaFigueiredoDissertacao2018.pdf: 2178476 bytes, checksum: 23f38c14567d00ff189eaef20f904495 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2018-04-16T14:40:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FernandaNomiyamaFigueiredoDissertacao2018.pdf: 2178476 bytes, checksum: 23f38c14567d00ff189eaef20f904495 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T14:40:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandaNomiyamaFigueiredoDissertacao2018.pdf: 2178476 bytes, checksum: 23f38c14567d00ff189eaef20f904495 (MD5) Previous issue date: 2018-03-06 / Klebsiella pneumoniae is one of the main bacterial agents that may cause infections related to health care assistance. K. pneumoniae frequently carries the resistance gene K. pneumoniae carbapenemase (KPC). Currently, tigecycline can be considered one of the last therapeutic options for KPC, but reports of tigecycline-resistant KPC isolates are on the rise, being indicated as most common mechanism the increased AcrAB-TolC efflux pump system expression. However, molecular tigecycline resistance mechanisms associated to AcrAB-TolC still remains obscure. Thus, the main goal of this study was to verify if tigecycline resistance can be related to the presence of mutations in the regulatory genes of AcrAB-TolC, AcrR and RamR. Therefore, 32 K. pneumoniae isolates were used, identification and antibiogram performed using Vitek 2 systems. The minimum inhibitory concentrations were confirmed using E-test. Primers were designed in order to verify mutations within AcrR and RamR genes. PCR analysis showed that the mutations found within these genes were transversions (94% for AcrR and 90% for RamR) and transitions (6% for AcrR and 10% for RamR). Nevertheless among the mutations, no distinction between tigecycline susceptible and resistant isolates was found. Some of the transversions caused change in the amino acid encoding 6 in AcrR and 15 in RamR. Presence of these types of mutations evaluation can be seen as the first bacterial resistance study step, as it may be caused by oxidative damage for bacterial DNA, frequently caused by antibiotic selective pressure. Tigecycline resistance found in this study`s clinical isolates may be associated to alterations in another genes that can trigger mechanisms associated to this antibiotic. / Klebsiella pneumoniae consiste em um dos principais agentes bacterianos causadores de infec????es relacionadas ?? assist??ncia ?? sa??de (IRAS). K. pneumoniae carrega frequentemente o gene de resist??ncia K. pneumoniae carbapenemase (KPC). Atualmente, a tigeciclina pode ser considerada uma das ??ltimas op????es terap??uticas para KPC, mas os relatos de isolados de KPC resistentes a tigecilina est??o em ascens??o, sendo a hiperexpress??o da bomba de efluxo AcrAB-TolC indicado como mecanismo mais comum. No entanto, os mecanismos moleculares de resist??ncia ?? tigeciclina associada ao AcrAB-TolC permanecem obscuros. Desta forma o objetivo deste trabalho foi verificar se a resist??ncia a tigeciclina pode estar relacionada ?? presen??a de muta????es nos genes ArcR e RamR, reguladores de AcrAB-TolC. Para tanto, 32 isolados de K. pneumoniae foram utilizados, sendo a identifica????o e o antibiograma feitos utilizando o sistema Vitek 2. A confirma????o das concentra????es inibit??rias m??nimas (CIMs) foram realizadas por E-test. Iniciadores foram desenhados para verifica????o de muta????es nos genes (AcrR e RamR). As an??lises por PCR mostraram que as muta????es encontradas nos genes AcrR e RamR foram substitui????es por transvers??o (94% e 90% para AcrR e RamR respectivamente) e transi????o (6% e 10% para AcrR e RamR respectivamente), por??m n??o foi identificada distin????o da presen??a de muta????es entre isolados sens??veis e resistentes a tigeciclina. Algumas tranvers??es ocasionaram mudan??a na codifica????o do amino??cido, sendo 6 em AcrR e 15 em RamR. A avalia????o da presen??a desses tipos de muta????es consiste em um primeiro passo para o estudo da resist??ncia bacteriana, j?? que pode ser causada por dano oxidativo ao DNA bacteriano, frequentemente ocasionado por press??o seletiva dos antibi??ticos. A resist??ncia a tigeciclina encontrada nos isolados cl??nicos do presente estudo, provavelmente pode estar associada a altera????es em outros genes desencadeadores de mecanismos de resist??ncia a tigeciclina.