Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / Bergallia valdiviana Berg 188, perteneciente a la familia Cicadellidae, es uno de los insectos más comunes en los viñedos chilenos. En algunos individuos de B. valdiviana se ha detectado la presencia de un fitoplasma perteneciente al subgrupo ribosomal 16SrIII-J. Sin embargo, no hay informaciones acerca de su capacidad de trasmitir fitoplasmas. Durante octubre de 2012 a Junio de 2013, en un viñedo infectado con fitoplasmas ubicado en la localidad de Casablanca, Región de Valparaíso, se capturaron individuos adultos de B. valdiviana para realizar pruebas de transmisión en jaulas entomológicas utilizando plantas de vinca (Cantharanthus roseus L.) obtenidas desde semillas. Las capturas se realizaron utilizando una red entomológica. Dos de catorce pruebas resultaron exitosas en la transmisión del fitoplasma 16SrIII-J (relacionado con „Candidatus Phytoplasma pruni‟; X-disease group) a las plantas de vinca, las cuales presentaron fuertes amarilleces en hojas y desordenes en las flores. La detección e identificación del fitoplasma se realizó a través de PCR anidado, secuenciación y RFLP in silico. Los resultados del presente trabajo indican, por primera vez, que B. valdiviana es vector del fitoplasma 16SrIII-J. / Bergallia valdiviana Berg 1881, belonging to the family Cicadellidae, is one of the most common insects in Chilean vineyards. Several individuals of B. valdiviana have been previously reported to be carriers of a phytoplasma belonging to ribosomal subgroup 16SrIII-J. However, there is no information about its capacity to transmit this phytoplasma to plant hosts. From October 2012 to June 2013, a wide number of B. valdiviana adults were captured in phytoplasma infected vineyards located in the locality of Casablanca, in Valparaiso region, in order to perform transmission trials in entomological cages. Non infected periwinkles (Cantharanthus roseus L.) obtained from seeds were used as indicator plants. Catches were made using an entomological net. In 2 out of 14 trials was observed transmission of 16SrIII-J phytoplasma (related to 'Candidatus Phytoplasma pruni'; X-disease group) to periwinkle plants, which showed strong yellowing, disorders in leaves and flowers. Detection and identification of the phytoplasma was carried out by nested PCR, sequencing and in silico RFLP. The results of this study indicate for the first time, that B. valdiviana is vector of the phytoplasma 16SrIII-J.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Patología Animal. / La enfermedad de Chagas (ECh), causada por el protozoo hemoflagelado Trypanosoma cruzi, representa un importante problema de salud pública en Latinoamérica y, debido a la globalización, en países donde no existe el vector biológico. Los criterios de curación para evaluar la eficacia terapéutica durante la etapa crónica, no han sido hasta ahora, establecidos. La PCR en Tiempo Real o PCR cuantitativa (qPCR) constituye una promisoria herramienta para monitorear la carga parasitaria en pacientes con ECh crónica, dado que éstos presentan parasitemias bajas y fluctuantes. En esta tesis, se estandarizó la reacción de qPCR mediante el sistema de detección TaqMan® para la cuantificación de T. cruzi, junto con el desarrollo de un sistema de control interno endógeno (CIE) basado en la detección del cromosoma 12 humano (X12), que permite descartar resultados falsos negativos relacionados con ausencia de ADN en las muestras evaluadas mediante qPCR debido a pérdidas durante el proceso de extracción o problemas con la reacción interna de qPCR. Se evaluó además, la condición parasitológica mediante qPCR en 44 pacientes con ECh crónica en condiciones pre y post-terapia con Nifurtimox (NFX) y se comparó con las técnicas de xenodiagnóstico (XD), PCR convencional de muestras de deyecciones de triatominos de XD (PCR-XD) y sangre venosa (PCR-S). La estandarización de la reacción de qPCR dirigida a la detección de T. cruzi tuvo como resultado una sensibilidad y especificidad del 92% y 100 %, respectivamente. Mientras que el sistema CIE basado en X12 permitió descartar resultados falsos negativos. En cuanto a la evaluación de eficacia quimioterapéutica de NFX mediante qPCR, fue posible determinar que el 86,36% del universo de individuos evaluados eliminó T. cruzi o persiste con parasitemias detectables de muy bajo nivel que no son cuantificables en el rango dinámico establecido (<1 parásito/mL). Estos resultados representan un hallazgo positivo, pues si bien la mayoría de las metodologías convencionales dan cuenta de la persistencia de T. cruzi, qPCR evidencia el real y actual nivel de parasitemia circulante, por lo que debería ser considerado el principal indicador de evaluación de eficacia quimioterapéutica en el tratamiento de la ECh crónica / Chagas disease (ChD), caused by the hemoflagellate protozoon Trypanosoma cruzi, is an important public health problem in Latin America, and due to globalization, also in countries where the biological vector does not exist. Cure criteria, to be able to evaluate the efficacy of therapy during the chronic stage, so far have not been established. Real time PCR or quantitative PCR (qPCR) is a promising tool to monitor the parasite load in patients with chronic ChD, given that these patients have low and fluctuating parasitemia. In this thesis it was standardized the qPCR reaction using the TaqMan® detection system for the quantification of T. cruzi, along with the development of an endogenous internal control (EIC) system based on the detection of human chromosome 12 (X12), which eliminates false negative results related to the absence of DNA in samples evaluated with qPCR due to losses during the extraction process or problems with the internal reaction of qPCR. Furthermore, the parasitological condition of 44 patients with chronic ChD was evaluated using this method in pre and post-therapy conditions with Nifurtimox (NFX), and compared to the techniques of xenodiagnosis (XD), conventional PCR of dejection samples of XD triatomines (PCR-XD) and venous blood (PCR-B). The standardization of the qPCR reaction directed to the detection of T. cruzi showed a sensitivity and specificity of 92% and 100%, respectively, while the EIC system based on X12 allowed discounting false negatives. In terms of the evaluation of the chemo-therapeutic efficacy of NFX, qPCR showed that 86.36% of the individuals evaluated eliminated T. cruzi or had detectable parasitemia of levels too low to be quantified in the dynamic range established (<1 parasite/mL). These results represent a positive finding, since although the majority of the conventional methods detect the persistence of T. cruzi, qPCR detects the real current level of circulating parasitemia; thus this method should be considered the principal indicator of the evaluation of the chemo-therapeutic efficacy in the treatment of chronic ChD / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1100768.

Tesis presentada como parte de los requisitos para optar al Grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias, Mención Sanidad Vegetal / Entre los frutales de carozo, las principales especies cultivadas son ciruelo (Prunus domestica L.), duraznero (Prunus persica L.), nectarino (Prunus nucipersica L.), almendro (Prunus dulcis L.) y cerezo (Prunus avium L.), siendo los frutos de éste último el más comercializado y con mejor retorno económico. La producción mundial de cerezas en la temporada 2014-2015, alcanzó 2,41 millones de toneladas, cifra que va en aumento, siendo el principal productor Turquía, con 20,7% de la producción mundial en la última temporada, por otro lado, los países que muestran un mayor incremento en su producción son China y Chile (ODEPA, 2015b).