Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-28T11:37:13Z No. of bitstreams: 1 cp113982.pdf: 1953263 bytes, checksum: 1d8dce9d2e6f0c4900532c6025c1d64c (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-28T11:39:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp113982.pdf: 1953263 bytes, checksum: 1d8dce9d2e6f0c4900532c6025c1d64c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T11:39:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp113982.pdf: 1953263 bytes, checksum: 1d8dce9d2e6f0c4900532c6025c1d64c (MD5) Previous issue date: 2009 / O sarcoma de Kaposi (KS) é um tumor vascular que pode se desenvolver em receptores de transplante de órgãos sólidos sendo resultado de uma infecção primária ou reativação de um gamaherpesvírus, o herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi, também conhecido como Herpesvírus humano 8 (HHV-8). Os objetivos deste estudo são avaliar os aspectos clínicos e epidemiológicos da infecção pelo HHV-8 em receptores de transplante renal, investigar os possíveis fatores de risco associados à infecção primária pelo HHV-8 nesta população estudada e comparar três métodos sorológicos (imunofluorescência indireta para detectar anticorpos contra antígenos nuclear latente [LANA], imunofluorescência indireta para detectar anticorpos contra antígenos da fase lítica [LÍTICO], técnica imunoenzimática para detectar anticorpos contra antígeno recombinante do capsídeo viral-ORF 65 [ELISA-LÍTICO]) e um método molecular para a detecção do HHV-8. O estudo foi realizado no Hospital do Rim e Hipertensão da Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina. Este hospital realiza uma média de um transplante renal por dia, sendo atualmente o maior centro mundial em número de transplantes realizados. Em 70% dos casos, o transplante ocorre com doador vivo relacionado. Todos os receptores soropositivos para HHV-8 previamente ao transplante e também, os receptores soronegativos, mas que possuíam doadores soropositivos para HHV-8, foram seguidos mensalmente. Os receptores soronegativos com doadores soronegativos foram avaliados no terceiro e sexto mês após o transplante para avaliar a ocorrência ou não da infecção primária causada pelo HHV-8, e seus aspectos clínico-epidemiológicos. A taxa de infecção primária encontrada no Hospital do Rim e Hipertensão – Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina foi de 6,58%. Apenas um dos receptores que soroconverteu apresentava doador soropositivo no pré-transplante. A maioria dos pacientes soroconverteu dentro dos três primeiros meses após o transplante. A infecção primária causada pelo HHV-8 se mostrou com um quadro benigno e oligossintomático. Apenas um paciente deste estudo, durante o momento da soroconversão, apresentou rash cutâneo maculopapular difuso durando em torno de uma semana, com regressão espontânea, sem nenhum outro sinal e sintoma associado. Nenhum paciente do estudo desenvolveu SK no período de dois anos de seguimento. Pela análise univariada, nenhum dos fatores de risco analisados foi associado com soropositividade entre receptores de transplante (modalidade de diálises, uso de drogas ilícitas, doenças sexualmente transmissíveis, hepatites B e C, transfusões sangüíneas prévias). Somente a faixa etária dos receptores de transplante renal associada à prevalência do HHV-8 antes do transplante renal, foi encontrada uma positividade (p=0,023), pois o vírus é mais freqüente em uma faixa etária mais avançada, sendo a média de idade destes pacientes de 44,41 anos. Esta significância estatística não se manteve quando analisados os 44 receptores soropositivos (pré e pós o transplante). A soropositividade para HHV-8 não foi associada a aumento na freqüência de infecções, rejeição aguda, perda do enxerto e óbito após o transplante renal quando comparada com pacientes soronegativos. Houve uma tendência marginal ao aumento na freqüência de neoplasias após transplante entre os soropositivos (p=0,072). O método sorológico que apresentou melhor desempenho para o diagnóstico de infecção pelo HHV-8 foi o IFA-LÍTICO, identificando 83,34% das amostras soropositivas ao HHV-8 e nos pacientes que soroconverteram foi encontrada em 100% das amostras. A PCR não se mostrou um bom método diagnóstico nesta infecção, pois só foi positiva em 0,7% das amostras estudadas. / The Kaposi sarcoma (KS) is a vascular tumor that can develop in recipients of solid tissue transplants as a result of either primary infection or reactivation of a gammaherpesvirus, the Kaposi sarcoma associated herpesvirus, also known as human herpesvírus-8 (HHV-8). The objectives of this study are to evaluate the serum conversion of infection by HHV-8 in renal transplant recipients, to investigate the potential risk factors associated to the primary infection by HHV-8 in the studied population e to compare three serological methods (indirect immunofluorescence for the detection of antibodies against latency-associated nuclear antigen [LANA], indirect immunofluorescence for the detection of antibodies against lytic phase antigen [LÍTICO], immunoenzymatic technique for the detection of antibodies against recombinant viral capsid antigen-ORF 65 [ELISA-LÍTICO]) and PCR for the detection of HHV-8. The study was conducted at Hospital do Rim e Hipertensão of Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina. Such hospital performs on average one renal transplant a day, being now the world’s largest site in number of transplants performed. In 70% of the cases the transplant is performed with a living related donor. The serum conversion rate found at Hospital do Rim e Hipertensão – Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina was 6.58%. Only one of the recipients presenting serum conversion had a serum positive donor on pretransplantation. Most patients presented serum conversion within the first three months after transplantation. Compared to the rate found by other countries, such as 12% in Switzerland, 8.6 to 9.39% in Italy and 2.09% in France, also performed in renal transplant recipients, it was considered intermediary. The primary infection caused by HHV-8 was shown with a benign and oligosymptomatic status. The patient of this study during serum conversion, presented only diffuse maculopapular rash lasting around one week, with spontaneous regression, without any other associated sign and symptom, and no patient developed SK during the two-year follow up period. According to the single variable analysis, none of the risk factors analyzed was associated to seropositivity among transplant recipients (type of dialyses, use of illegal drugs, sexually transmitted diseases, hepatitis B and C, previous blood transfusions). Positivity (p=0,023) was found exclusively at the age range of the renal transplant recipients associated to the prevalence of HHV-8 before the renal transplant, because the virus is more frequent in an advanced age range, being the average age equal to 44.41 years. Such statistical significance was not maintained when the 44 seropositive recipients were analyzed (pre- and post-transplant). Upon use of the immunosuppressive agent Daclizumab there was a statistical significance (p=0.026), in the analysis of seropositive patients (pre- and post-transplant) for HHV-8 as compared to the seronegative ones. Regarding the evaluation of acute rejection, graft loss and death among patients infected and not infected by HHV-8 after renal transplantation, there was no statistical significance. Upon the analysis of post-transplant neoplasm of patients seropositive for HHV-8 the trend towards significance was shown (p=0.072). The association of the infection caused by HHV-8 in pre- and post-transplant related to other bacterial, viral, fungal and endemic infections, there was no statistical significance. The only serological method presenting the best performance for the diagnosis of infection by HHV-8 was IFA-LÍTICO, identifying 83.34% of the HHV-8 seropositive samples. Considering two diagnostic tests, the combination of IFA-LÍTICO and ELISALÍTICO was the one presenting the best performance, identifying 100% of the seropositive samples. The PCR was not a good diagnostic method for this infection, because it was positive in only 0.7% of the studied samples.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T22:57:38Z No. of bitstreams: 1 LuandaBarbaraFerreiraCanarioDeSouza_DISSERT.pdf: 2996890 bytes, checksum: 9a5f76941d2b2ee6ded886c004b1965d (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-27T23:22:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LuandaBarbaraFerreiraCanarioDeSouza_DISSERT.pdf: 2996890 bytes, checksum: 9a5f76941d2b2ee6ded886c004b1965d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T23:22:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LuandaBarbaraFerreiraCanarioDeSouza_DISSERT.pdf: 2996890 bytes, checksum: 9a5f76941d2b2ee6ded886c004b1965d (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / A candid?ase ? uma importante manifesta??o oral em pacientes transplantados renais. Candida spp. possuem fatores de virul?ncia que contribuem para o processo infeccioso, incluindo a capacidade de aderir a c?lulas epiteliais e a forma??o de biofilme em superf?cies bi?ticas e abi?ticas. O extrato obtido a partir das folhas de Eugenia uniflora [acetona: ?gua (7:3, v/v)] tem demonstrado atividade antif?ngica contra Candida spp. Este estudo avaliou a influ?ncia do extrato de E. uniflora na ades?o ?s C?lulas Epiteliais Bucais Humanas (CEBH) e forma??o de biofilme de 42 cepas de Candida spp. isoladas da cavidade oral de pacientes transplantados renais. As cepas de Candida spp. pertencentes a um banco de microorganimos foram reativadas e reidentificadas fenotipicamente atrav?s da metodologia cl?ssica e por m?todos moleculares (genotipagem ABC e RAPD), quando necess?rio, para a conclus?o da identifica??o em n?vel de esp?cie. Para os ensaios de virul?ncia avaliados in vitro, as leveduras foram cultivadas na presen?a e aus?ncia de 1000 ?g/ mL de extrato. Uma propor??o de 10:1 c?lulas (c?lulas Candida spp. x CEBHs) foi incubada durante 1 hora a 37 ?C, 200 rpm, fixadas com formalina a 10% e o n?mero de c?lulas de Candida aderidas a 150 CEBH foram determinadas em microsc?pio ?ptico. Os biofilmes foram formados em microplacas de poliestireno na presen?a e aus?ncia do extrato. A quantifica??o foi realizada com colora??o por cristal violeta a 570 nm. Todos os isolados apresentaram-se vi?veis e na reidentifica??o fenot?pica apresentaram caracter?sticas sugestivas de cada esp?cie identificada. Duas cepas identificadas presuntivamente como Candida dubliniensis foram confirmadas como pertencentes a esta esp?cie atrav?s da genotipagem ABC, e as cepas identificadas como pertencentes ao complexo Candida parapsilosis foram diferenciadas atrav?s da genotipagem por RAPD. Candida albicans destacou-se como a esp?cie com maior potencial de ades?o ao epit?lio bucal, enquanto que C. tropicalis apresentou expressiva forma??o de biofilme. Detectamos que o extrato de E. uniflora foi capaz de reduzir a ades?o ao CEBH tanto para Candida albicans como para as esp?cies de Candida n?o-Candida albicans. Por outro lado, apenas 16 cepas de Candida spp. (36%) apresentaram a forma??o de biofilme reduzida na presen?a do extrato. No entanto, duas cepas de C. tropicalis altamente produtoras de biofilme tiveram uma redu??o expressiva na capacidade de forma??o de biofilme. Este estudo refor?a a ideia de que, al?m da inibi??o do crescimento, E. uniflora pode interferir com a express?o de alguns fatores de virul?ncia de Candida spp., e pode ser eventualmente aplicada no futuro como um poss?vel agente antif?ngico. / Candidiasis is a major oral manifestation in kidney transplant patients. Candida spp. possess essential virulence factors which contribute for the infectious process, including the ability to adhere to epithelial cells and biofilm formation. The extract obtained from the leaves of Eugenia uniflora [acetone: water (7:3, v/v)] has demonstrated antifungal activity against Candida spp. This study evaluated the influence of the extract of E. uniflora in adhesion to human buccal epithelial cells (HBEC) and biofilm formation of 42 strains of Candida spp. isolated from the oral cavity of kidney transplant patients. Candida spp. strains belonging to a culture collection were reactivated and phenotypically re-identified by classical and molecular methods (genotyping ABC and RAPD), when necessary, to complete the identification to the species level. For the virulence tests evaluated in vitro, yeasts were grown in the presence and absence of 1000 ?g/mL of the extract. A ratio of 10: 1 (Candida spp. cells x HBECs) was incubated for 1 hour at 37 ? C, 200 rpm, fixed with 10% formalin and the number of Candida cells adhered to 150 HBEC determined by optical microscope. Biofilms were formed on polystyrene microplates in the presence or absence of the extract. The quantification was performed with crystal violet staining at 570 nm. All isolates were viable and exhibited phenotypic characteristics suggestive of each species identified. Two strains presumptively identified as Candida dubliniensis belonged to this species as determined with genotyping ABC, while strains identified as belonging to the Candida parapsilosis species complex were differentiated by RAPD genotyping. Candida albicans was found to be the most adherent species to the buccal epithelia, while C. tropicalis showed remarkable biofilm formation.We could detect that the extract of E. uniflora was able to reduce adhesion to HBEC for both Candida albicans and non-Candida albicans Candida species. On the other hand, only 16 Candida spp. strains (36 %) showed reduced biofilm formation. However, two highly biofilm producer strains of C. tropicalis had an expressive reduction in biofilm formation. This study reinforces the idea that besides growth inhibition, E. uniflora may interfere with the expression of some virulence factors of Candida spp., and may be possibly applied in the future as a novel antifungal agent.