Made available in DSpace on 2016-08-29T15:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_8926_Tese - Juliana Brambilla Carnielli Trindade.pdf: 24757261 bytes, checksum: 0f32961de8457764e57a980e25aa13ad (MD5) Previous issue date: 2015-06-16 / Leishmaniose visceral (LV) é uma doença sistêmica, fatal se não tratada, causada por parasitas protozoários do gênero Leishmania complexo donovani, o qual abriga a espécie L. (L.) chagasi. O tratamento da LV conta com poucas opções terapêuticas, incluindo os antimoniais pentavalentes, anfotericina B e a miltefosina. A miltefosina é a primeira droga de administração oral registrada para o tratamento da leishmaniose e tem sido utilizada com sucesso para o tratamento de LV na Índia. Contudo, diferenças na sensibilidade à miltefosina tem sido relatada em espécies de Leishmania clinicamente relevantes. Os mecanismos de resistência à miltefosina estão sendo elucidados em linhagens experimentais de Leishmania spp. resistentes a esta droga. Entretanto, os mecanismos de resistência natural à miltefosina em isolados clínicos de Leishmania são pouco conhecidos e explorados. Nesse contexto, o presente estudo utilizou as abordagens proteômica e genômica com o objetivo de identificar diferenças a nível molecular entre isolados de L. (L.) chagasi obtidos de pacientes que apresentaram diferentes respostas ao tratamento com miltefosina, visando contribuir para o entendimento do mecanismo molecular envolvido na resistência natural a essa droga. A análise comparativa dos perfis proteicos obtidos por 2D-DIGE, detectou 46 spots proteicos diferencialmente expressos entre os isolados obtidos de um paciente que apresentou cura e de um paciente que apresentou falha ao tratamento com miltefosina. A análise por espectrometria de massas (MALDI/ToF-ToF) permitiu a identificação de 32 spots com identificação de uma única proteína, os quais correspondem a 22 proteínas não redundantes. A maioria das proteínas com expressão aumentada no proteoma do isolado resistente à miltefosina estão associadas com a homeostase do sistema redox, resposta ao stress, proteção à apoptose e translocação de drogas. A análise genômica, realizada com isolados de L. (L.) chagasi obtidos de pacientes que apresentaram cura clínica (n=14, grupo cura) ou falha ao tratamento (n=12, grupo recidiva) com miltefosina, identificou um elevado número de SNPs e InDels entre os isolados analisados. Entretanto, assim como a análise do número de cópias de cromossomos, esses não foram capazes de discriminar completamente os isolados obtidos de pacientes que apresentaram diferentes desfechos clínicos ao tratamento com miltefosina. A análise de variação estrutural do número de cópias de genes (dose), entre os grupos cura e recidiva, identificou diferenças significativas (p < 0,01) em 93 grupos ortólogos (OG5). Dentre esses, foi avaliado o envolvimento da deleção dos genes in tandem LinJ.31.2370, LinJ.31.2380, LinJ.31.2390 e LinJ.31.2400 no fenótipo de resistência de L. (L.) chagasi à miltefosina. Foi demonstrado que o processo de deleção do locus contendo esses genes in tandem ocorre por recombinação homóloga e, aparentemente não é induzido por pressão da droga miltefosina. A reexpressão individual desses genes em um isolado do grupo recidiva que não os continham, revelou que nenhum desses genes interfere no fenótipo de susceptibilidade in vitro da forma promastigota à miltefosina. Além disso, a análise de clones separados de isolados de L. (L.) chagasi (heterogêneo em relação à presença desses genes), mostrou que as formas promastigotas de clones que possuem esses genes são menos susceptíveis à miltefosina do que clones que não os possuem. Esses dados, assim como os da análise proteômica, sugerem que o mecanismo de resistência natural à miltefosina nos parasitas Leishmania spp. é complexo e multifatorial.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:57:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4118_1.pdf: 5176013 bytes, checksum: 8fd4305c9e441f0bafca3cb13cd213c0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Hymenolobium petraeum é uma espécie pertencente a família leguminosae e conhecida popularmente como angelim-amarelo, angelim-aroeira, angelim-pedra, angelimvermelho e murarema. A madeira é muito utilizada na medicina popular na cura de úlceras, bem como na indústria madeireira para construção civil por sua alta durabilidade e resistência ao ataque de cupins, fungos e outros parasitas. Os extrativos em ciclohexano, acetato de etila e etanol foram avaliados segundo sua bioatividade, frente a larvas de Aedes aegpti. Apenas o extrato em acetato de etila apresentou uma significativa atividade larvicida. A total mortalidade das larvas foi observada nas concentrações (10, 100 e 250 ppm) deste extrato. Nele foram identificados alguns constituintes químicos, através de análises espectroscópicas, GC-MS, ESI-MS, 1HRMN e 13C-RMN uni e bidimensionais e em comparação com os dados da literatura. Os compostos identificados foram: palmitato de etila e estearato de metila, 1 pterocarpeno (HP-1) anidrotuberosina, 2 coumestanos: (HP-2) coumestrol e (HP-3) sophorocoumestano A e uma isoflavona impura (HP-4) daidzeina, todas descritas pela primeira vez nesta espécie. A composição química desta madeira foi quantificada sendo obtidos 52% de celulose e hemicelulose, 33,65% lignina total, 9,05% de extrativos e 0,8% de cinzas. A identificação de lignina foi determinada por análise elementar, RMN de 1H e IV, sendo observado um conteúdo de 40% de unidades siringila e 60% de guaicila, típicos de madeiras folhosas. As substâncias isoladas no extrato em acetato de etila foram submetidas à atividade larvicida e constatou-se que (HP-1) causou a mortalidade de 71 ±8% das larvas na concentração de 100 ppm, 43 ±6% em 50 ppm e 18±2% em 10 ppm e (HP-4) apresentou 88 ±2% em 10 ppm e nas concentrações de 50 e 100 ppm a mortalidade foi total. A natural resistência desta madeira ao ataque de fungos da podridão branca foi avaliada utilizando-se, Phanerochaete chrysosporum, Pycnoporus sanguineus, Schizophyllum communee, Lentinula edodes e Trametes vellosa, e não foi observado crescimento de nenhum dos fungos testados tanto na madeira com extrativos como com a madeira livre de extrativos

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-02-26T16:29:32Z No. of bitstreams: 1 PGPV16MA201.pdf: 1766426 bytes, checksum: 690f1c316be4d0c67b20c202af9f3b70 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-26T16:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV16MA201.pdf: 1766426 bytes, checksum: 690f1c316be4d0c67b20c202af9f3b70 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Capes / Soybean is a commodity produced by the United States, Brazil and Argentina countries, which together account for about 70% of the cultivated area. Its use is primarily for soybean meal and cooking oil production. In order to cultivate it, the soybean farmer faces several difficulties, abiotic and biotic factors, among them the need for management of insect pests, which usually is accomplished by the use of chemical control. Excessive use of chemical control brings harm to human and animal health, selection of resistant individuals and environmental degradation, thus, management alternatives should be studied. This work was divided into three chapters, the goal of the 1st chapter was to do a crop scouting, observing the occurrence of lepidopteran pests and their natural enemies in four and eight commercial plantations of soybean in the crops of 2013/14 and 2014/15 respectively located in the South Plateau and Midwest of Santa Catarina. Collected insects were taken to the Entomology Laboratory CAV / UDESC for identification and larval development. In the 2nd chapter, it was verified the natural resistance of the soybean cultivars BR 36, ND 5909RG, BMX TurboRR and Benso 1RR to Chrysodeixis includens, evaluating the antibiosis effect in leaves, consume preference among new leaves, old leaves and soybean pods for 24 hours and larval development in the leaves structures and soybean pods on antibiosis tests. In the 3rd chapter, it was evaluated the susceptibility of three populations of C. includens collected in the crop of 2014/15, which were compared with a susceptible reference collected in the crop of 2013/14, using the active ingredients flubendiamide and methomyl and defined the diagnostic concentrations for monitoring the susceptibility of C. includens. The crop scouting in the commercial areas showed that the Noctuidae family stood out with 67.1% of the total in the South Plateau in the crop of 2013/14, 57.0 and 90.5% in the South Plateau and Midwest respectively in the crop of 2014/15. There was a predominance of Plusiinae subfamily insects, in especial the species C. includens during the two crop years. The natural biological control accounted 69.7% in the South Plateau in the area of Capão Alto, crop of 2013/14. The primary parasitoid collected during the two crop years was Copidosoma sp. In the antibiosis tests, the cultivar Benso 1RR showed a significant effect, providing a longer period for larval development. In the preference test with new leaf, old leaf and soybean pod, the preference of C. includens was the old leaf. The preference test showed that there was a consumption of the soybean pods, however it was the least preferred structure. When pod was provided as the only source of food no larval development was observed. The bioassays showed that there are differences in susceptibility among populations, with resistance ratio up to 15.2 and 12.0 times for flubendiamide and methomyl respectively. The diagnostic concentrations that caused 95% mortality of the susceptible population for susceptibility monitoring were 180 mg /l water for flubendiamide and 3.200 mg /l water for methomyl. In order to make a sustainable management of caterpillars in soybean, there is a necessity to incorporate alternatives to reduce the use of synthetic insecticides and thus minimize the harmful effects of its intrinsic use, among them, the mortality of natural enemies and evolution of insect resistance to insecticides / A soja é uma “commodity” produzida principalmente pelos países Estados Unidos, Brasil e Argentina que juntos são responsáveis por cerca de 70% da área cultivada. A sua utilização é, principalmente, para a produção de farelo de soja e óleo de cozinha. Para o seu cultivo, o sojicultor enfrenta diversas dificuldades, por fatores abióticos e bióticos, dentre elas a necessidade de manejo dos insetos-praga que, geralmente, é realizado pelo uso do controle químico. O uso excessivo do controle químico traz malefícios a saúde humana e animal, seleção de indivíduos resistentes e degradação ambiental, com isto alternativas de manejo devem ser estudadas. Assim este trabalho foi dividido em três capítulos, o objetivo do 1°capítulo foi realizar o levantamento da ocorrência de lepidópteros-praga e seus inimigos naturais em quatro e oito lavouras comerciais de soja nas safras 2013/14 e 2014/15, respectivamente, localizadas no Planalto Sul e Meio Oeste de Santa Catarina. Os insetos coletados foram encaminhados ao Laboratório de Entomologia CAV/UDESC para identificação e desenvolvimento larval. No 2° capítulo foi verificada a resistência natural das cultivares comerciais de soja BR 36, ND 5909RG, BMX TurboRR e Benso 1RR a Chrysodeixis includens, avaliando o efeito de antibiose de folhas, preferência de consumo entre folhas novas, folhas velhas e vagens por 24h e o desenvolvimento larval nas estruturas de folhas e vagens em testes de antibiose. No 3° capítulo foi avaliada a suscetibilidade de três populações de C. includens coletadas na safra 2014/15, comparando com a suscetível de referência, coletada na safra 2013/14, para os princípios ativos flubendiamida e metomil e definida as concentrações diagnósticas para o monitoramento da suscetibilidade de C. includens. No levantamento dos insetos nas lavouras comerciais a família Noctuidae se destacou com 67,1% no Planalto Sul na safra 2013/14, 57,0 e 90,5% no Planalto Sul e Meio Oeste, respectivamente, na safra 2014/15. Houve predominância de insetos da subfamília Plusiinae, com destaque para C. includens durante as duas safras de cultivo. O controle biológico natural representou até 69,7% no Planalto Sul na área de Capão Alto na safra 2013/14, com o Copidosoma sp. sendo o principal parasitoide coletado durante as duas safras. No teste de antibiose, a cultivar Benso 1RR apresentou efeito significativo, proporcionando um maior período para o desenvolvimento larval. No teste de preferência com folha nova, folha velha e vagem da soja, a preferência de C. includens foi pela folha velha. Para a vagem, houve consumo no teste de preferência, porém sendo a estrutura menos preferida. Quando foi fornecida a vagem como a única fonte de alimento não houve desenvolvimento larval. Para os bioensaios, foi verificado que houve diferenças na suscetibilidade entre as populações avaliadas, apresentando razão de resistência de até 15,2 e 12,0 vezes para flubendiamida e metomil respectivamente. As concentrações diagnósticas que causaram 95% da mortalidade da população suscetível foram 180 mg de flubendiamida/L de água e 3.200 mg de metomil/L de água. Para o manejo sustentável de lagartas na soja, há necessidade de incorporar alternativas para a redução no uso de inseticidas sintéticos, visando minimizar os efeitos maléficos intrínsecos ao seu uso, entre eles a mortalidade de inimigos naturais e a evolução da resistência de insetos a inseticidas