Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cinaradecassiabrandaodemattos_tese.pdf: 2369764 bytes, checksum: d694ab0e38db337b769ea1ace729b6e3 (MD5) Previous issue date: 2012-04-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / T. gondii is an obligate intracellular parasite and cosmopolitan, whose infection congenital or acquired, results in different forms of toxoplasmosis. The clinical manifestations of this disease are nonspecific and variable. Its diagnosis essentially laboratory is aimed at pregnant women, neonates, patients with immunodeficiencies, patients with eye injury and even normal individuals. Serological methods are often used in the characterization of IgM and IgG anti-T.gondii, but those of nature of molecular favoring genetic characterization of the strains isolated from biological samples. Objectives: The overall objective of this thesis was to investigate the infection by T.gondii in the northwestern region of São Paulo state. Its specific objectives were: 1. to characterize infection in pregnant women, newborns and people with eye diseases 2. to evaluate the applicability of the method of PCR inperipheral blood sample in patients with eye diseases 3. to identify the strains from peripheral blood samples. Casuisitc and Methods: epidemiological data and samples of peripheral blood from patients treated in Outpatient Clinic of High Risk Pregnancy and Retinopathy were collected and analyzed for infection by T. gondii using serological methods (ELISA) and molecular (cnPCR and qPCR). Results: among 574 women with mean age equal to 27.2 ± 6.5, 62% (345/556) showed positive for IgG and 3.4% (n = 19/556) for IgM. In 87 mother-newborn pairs, 64.4% (n = 58) were reactive for anti-T. gondii and 2.3% (n = 2), IgM, 92.9% (52/56) had IgG avidity greater than or equal to 30%. Among 184 patients with different eye diseases, 26% (n = 49) had ocular toxoplasmosis, all reagents for IgG. The PCR (qPCR and cnPCR) applied to the analysis of peripheral blood showed sensitivity and specificity equal to 40.8% and 100%, respectively. Five patients with ocular toxoplasmosis were shown to be infected by the strain toxoDB # 65. Conclusion: The results show that the prevalence of infection with T. gondii in pregnant women, neonates and patients with eye diseases is high in the northwertern region of São Paulo state, and to estimate the rates of congenital infection in the region. In addition to describing the first time the ocular toxoplasmosis in the region, this study reinforces the importance of cnPCR and qPCR methods for the characterization of infection and laboratory strains toxoDB # 65 from peripheral blood samples of patients with chronic infection. / T. gondii é um parasito intracelular obrigatório e cosmopolita, cuja infecção de natureza congênita ou adquirida, resulta nas diferentes formas de toxoplasmose. A manifestação clínica desta doença é inespecífica e variável. Seu diagnóstico, essencialmente laboratorial, é direcionado a gestantes, neonatos, portadores de imunodeficiências, portadores de lesão ocular e mesmo indivíduos normais. Métodos sorológicos são frequentemente utilizados na caracterização de anticorpos IgM e IgG anti-T. gondii, porém aqueles de natureza molecular favorecem a caracterização gênica das cepas em isolados de amostras biológicas. Objetivos: O objetivo geral desta tese foi investigar a infecção por T. gondii na região Noroeste Paulista. Seus objetivos específicos foram: 1. caracterizar a infecção em gestantes, neonatos e indivíduos com doenças oculares; 2. avaliar a aplicabilidade do método de PCR em amostra de sangue periférico em pacientes com doenças oculares; 3. identificar as cepas a partir de amostras de sangue periférico. Casuísitca e Métodos: dados epidemiológicos e amostras de sangue periférico de pacientes atendidos em Ambulatório de Gestação de Alto Risco e Retinopatia foram coletadas e analisadas quanto à infecção por T. gondii por métodos sorológicos (ELISA) e moleculares (cnPCR e qPCR). Resultados: entre 574 gestantes com média de idade igual a 27,2±6,5, 62% (345/556) mostraram-se reagentes para IgG e 3,4% (n=19/556), para IgM. Em 87 pares mãe-bebê, 64,4% (n=58) foram reagentes para anti-T. gondii e 2,3% (n=2), para IgM; 92,9% (52/56) apresentaram IgG com avidez maior ou igual a 30%. Dentre 184 pacientes com diferentes doenças oculares, 26% (n=49) apresentaram toxoplasmose ocular, todos reagentes para IgG. O método PCR (cnPCR e qPCR) aplicado à análise do sangue periférico apresentou sensibilidade e especificidade iguais a 40,8% e 100%, respectivamente. Cinco pacientes com toxoplasmose ocular mostraram-se infectados pela cepa toxoDB#65. Conclusão: Os resultados demonstram que a prevalência de infecção por T. gondii em gestantes, neonatos e pacientes com doenças oculares é elevada na região Noroeste paulista, e permitem estimar os índices de infecção congênita na região. Além de descrever pela primeira vez a toxoplasmose ocular na região, este estudo reforça a importância dos métodos cnPCR e qPCR na caracterização laboratorial da infecção e da cepas toxoDB #65 a partir de amostras de sangue periférico de pacientes com infecção crônica.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anaiaraferreira_tese.pdf: 5113092 bytes, checksum: 6a3bf6f59ab187f632c5ffc52b74de32 (MD5) Previous issue date: 2011-09-16 / Toxoplasma gondii (T. gondii) infects humans among other ways, from the gastrointestinal tract, site of expression of ABO antigens through epistatic interactions between ABO, Secretor and Lewis genes. The toxoplasmic retinochoroiditis (TR) disease resulting from this infection is considered the main cause of posterior uveitis. Objective: To evaluate the risk factors that contribute to infection with T. gondii and development of TR. Materials and Methods: After obtaining informed consent (case 050/2009), peripheral blood and serum samples from 357 patients were analyzed. Patients were divided in two groups according to presence (n=82) or absence (n=275) of clinical diagnosis of TR. ABO and Lewis phenotyping were performed using the methods of hemagglutination in tubes and gel columns, respectively. Indirect immunofluorescence (IFI), ELISA and avidity test were used to define titration and avidity of the anti-T. gondii antibodies. The genotypes FUT2 and FUT3 were identified by PCR-RFLP and the parasite DNA by conventional PCR. Results: From the overall 357 analyzed samples, 74.8% were ELISA reagents and 25.2% were non reagent for IgG anti-T. gondii. IgM antibodies were not found and any samples. High titer (&#8805; 4000) were observed in 8.1% of the patients with TR and 1% of those with other ocular diseases (ODO) (p=0.03), whereas the values of high avidity (&#8805; 60%) were similar between the groups (p=0.44). The PCR results were positive in 21/62 (33.9%) with TR and 1/101 xviii (0.9%) among those with ODO and reagents for IgG anti-T. gondii (p<0.0001). Direct contact with cat and / or dog (p=0.009) and ingestion of raw or undercooked meat (p=0.03) were associated with infection by T. gondii but not the TR. The Le(a-b+) phenotype (p=0.03) showed a lower risk for infection, while the Le(a+b-) phenotype (p=0.08) seems to favor the development of TR. Conclusions: The results demonstrate high frequency of presumable TR among patients with ocular diseases. Besides reveal that majority of patients with TR present low titers of IgG anti-T. gondii, with high avidity and that T. gondii can be find in the peripheral blood of approximately one third of patients independent of ocular lesions resulting from toxoplasmosis. The presence of dogs and cats as well as ingestion of raw or undercooked meat increases the risk of infection by T. gondii, but does not influence the development of TR. The high Leb antigen expression reflects protective effect against infection with T. gondii, as well as the antigen Lea seems to favor the development of TR. / Toxoplasma gondii (T. gondii) infecta os seres humanos dentre outras vias, pelo trato gastrintestinal, local de expressão dos antígenos ABO por meio de interações epistáticas entre os genes ABO, Secretor e Lewis. A retinocoroidite toxoplásmica (RT), doença resultante desta infecção, é considerada a principal causa de uveíte posterior. Objetivo: Avaliar os fatores de risco que contribuem para infecção por T. gondii e desenvolvimento da RT. Materiais e Métodos: Após obtenção do termo de consentimento livre e esclarecido (parecer 050/2009), amostras de sangue periférico e soro de 357 pacientes foram analisadas. Os pacientes foram divididos em dois grupos de acordo com a presença (n=82) ou ausência (n=275) de diagnóstico clínico da RT. As fenotipagens ABO e Lewis foram realizadas por meio dos métodos de hemaglutinação em tubos e colunas de gel, respectivamente. Imunofluorescência indireta (IFI), ELISA e teste de avidez foram utilizados para definir as classes (IgM e IgG), o título e a avidez dos anticorpos IgG anti-T. gondii. Os genótipos FUT2 e FUT3 foram identificados por PCR-RFLP e o DNA do parasito por PCR convencional. Resultados: Das 357 amostras analisadas, 74,8% foram reagentes no ELISA e 25,2% não reagentes. Não foram encontradas amostras reagentes para IgM. Títulos elevados (&#8805; 4.000) foram observados em 8,1% dos pacientes com RT e em 1% daqueles com outras doenças oculares (ODO) (p=0,03), enquanto que os índices de avidez elevados xvi (&#8805; 60%) foram semelhantes em ambos os grupos (p=0,44). O PCR mostrou-se positivo em 21/62 (33,9%) com RT e em 1/101 (0,9%) daqueles com ODO, reagentes para IgG anti-T. gondii (p<0,0001). Contato direto com gato e/ou cão (p=0.009) e ingestão de carne crua ou mal cozida (p=0.03) associaram-se à infecção por T. gondii, mas não a RT. O fenótipo Le(a-b+) (p=0.03) apresentou menor risco para infecção, enquanto que o fenótipo Le(a+b-) (p=0.08) parece favorecer o desenvolvimento da RT. Conclusões: Os resultados demonstram elevada frequência de RT presumível em pacientes com doenças oculares. Além disso, revelam que a maioria dos pacientes com RT apresentam baixos títulos de anticorpos IgG anti-T. gondii, com alta avidez e que o T. gondii encontra-se no sangue circulante de aproximadamente um terço dos pacientes independente da presença de lesões oculares resultantes da toxoplasmose. A presença de cães e/ou gatos bem como ingestão de carne crua ou mal cozida eleva os riscos de infecção por T. gondii, mas não influenciam no desenvolvimento da RT. A elevada expressão do antígeno Leb reflete efeito protetor contra a infecção pelo T. gondii, assim como o antígeno Lea parece favorecer o desenvolvimento da RT.