Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Maria Alice Zacarias do Amaral.pdf: 561949 bytes, checksum: 5d68f71db6c659eda036f9c9e229e902 (MD5) Previous issue date: 2008-06-20 / Funda??o Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / With the objective of evaluating the knowledge of milk producers who have received instructions about Efficiency Test and strategic control of cattle ticks by Embrapa Milk Cattle, and those who haven't, there were interviewed, on this present study, by means of questionnaires, 163 producers from the first case, mostly belonging to the state of Minas Gerais, from which 48.5% of the properties with herds up to 100 head of cattle, and 57.3% of the producers belonging to cooperatives; and, 93 producers from the second case, belonging to the estate of Minas Gerais, from which 40.9% producers belong to a cooperative and 92.4% of the properties have herds up to 100 head of cattle. After descriptive analysis and variable crossings, it was determined that among those who had knowledge of strategic control, 157 (98.7%) applied the acaricide indicated by the efficiency test, and 144 (92.9%) affirmed following strategic control, but only 12 (7%) demonstrated understanding of all the stages of strategic control. On the second case, for 96.4% of the producers the determining moment of treatment was the infestation degree of ticks, 67.2% producers choose the acaricide based on advertisements. Other variables tested about biology and control did not demonstrate significant association. The worrisome aspect is that, mostly in the answers considered to be wrong, it is evident that proprietors believe to have knowledge on the subject. The result of this false knowledge is such that they continue to commit control mistakes, in the application of products and don't search for help or a better explanation because they do not see the need to. These data demonstrate the existence of flaws in the proprietors knowledge of biology and cattle tick control. / Objetivando avaliar os conhecimentos dos produtores de leite que receberam instru??es sobre Teste de Efic?cia e controle estrat?gico do carrapato bovino pela Embrapa Gado de Leite e dos que n?o receberam, foram entrevistados, no presente trabalho, por meio de question?rios, 163 produtores de leite do primeiro caso, na maioria pertencentes ao Estado de Minas Gerais, sendo que 48,5% das propriedades com rebanho at? 100 cabe?as de gado, e 57,3% produtores pertencentes a uma cooperativa; e 93 produtores de leite do segundo caso, pertencentes ao Estado de Minas Gerais, sendo que 40,9% produtores pertencentes a uma cooperativa e 92,4% das propriedades com rebanho at? 100 cabe?as de gado. Ap?s an?lise descritiva e cruzamento de vari?veis, constatou-se que dentre os conhecedores do controle estrat?gico, 157 (98,7%) aplicaram o carrapaticida indicado pelo teste de efic?cia, e 144 (92,9%) afirmaram terem seguido controle estrat?gico, mas apenas 12 (7%) demonstraram compreender todas as fases do controle estrat?gico. No segundo caso, 96,4% dos produtores, o que determinava o momento do tratamento era o grau de infesta??o de carrapatos, 67,2% escolhe o produto carrapaticida pela propaganda. Foi constatado que o grau de instru??o aumenta a preocupa??o em adquirir equipamentos melhores para a ordenha e os cuidados no preparo do carrapaticida. As demais vari?veis testadas sobre a biologia e controle levantados n?o demonstraram associa??o significativa. O preocupante ? que, principalmente nas respostas consideradas erradas, fica evidenciado que os propriet?rios acreditam ter conhecimento do assunto. O resultado desse falso conhecimento ? que continuam errando no controle e na aplica??o dos produtos e n?o procuram ajuda ou maiores esclarecimentos por n?o verem necessidade. Esses dados demonstraram que h? falhas no conhecimento dos propriet?rios em rela??o ? biologia e ao controle do carrapato bovino.

Sabe-se que a hemoglobina é uma rica fonte de peptídeos antimicrobianos (hemocidinas). A primeira hemocidina derivada da hemoglobina bovina caracterizada em carrapatos foi o peptídeo Hb33-61, que é ativo contra bactérias gram-positivas e fungos. Acredita-se que tais hemocidinas sejam geradas proteoliticamente no intestino do carrapato. Neste trabalho nós caracterizamos bioquimicamente uma catepsina D, designada BmAP. A análise da expressão gênica por qPCR mostrou que ela é expressa predominantemente no intestino. Através de LC-MS/MS, determinamos a especificidade de clivagem da BmAP utilizando Hb bovina, e verificamos que resíduos hidrofóbicos foram preferencialmente clivados nos subsítios P1 e P1. Também investigamos a especificidade de clivagem da catepsina L intestinal BmCL1, utilizando uma biblioteca combinatória de tetrapeptídeos e através de hemoglobinólise in vitro. A BmCL1 preferiu resíduos alifáticos no P2 e polares no P1 e P1. Além disso, hidrolisou a cadeia da Hb bovina entre A63/A64, gerando peptídeos com estrutura primária similar ao Hb 33-61. A hemoglobinólise com a BmAP e/ou BmCL1 resultou na formação de algumas hemocidinas, corroborando a hipótese do seu envolvimento na geração endógena de peptídeos antimicrobianos. / It is known that hemoglobin is a rich source of antimicrobial peptides (hemocidins). The first hemoglobin-derived hemocidin characterized in ticks was the peptide Hb33-61, which is active against Gram-positive bacteria and fungi. It is believed that hemocidins are endogenously generated in the tick gut. In this work we biochemically characterized a cathepsin D, designated BmAP. Expression analysis by qRT-PCR showed that it is expressed predominantly in the gut. Through LC-MS/MS, we determined the cleavage specificity of BmAP using bovine hemoglobin, and we verified that hydrophobic residues were preferentially cleaved at the subsites P1 and P1. We also investigated the cleavage specificity of the intestinal cathepsin L BmCL1, using a positional scanning synthetic combinatorial library and through in vitro hemoglobinolysis. BmCL1 preferred aliphatic residues at P2 and polar residues at P1 and P1. Also, it hydrolysed the subunit of bovine hemoglobin at A63/A64, generating peptides with a primary structure similar to Hb 33-61. Hemoglobinolysis with BmAP and/or BmCL1 resulted in the formation of some hemocidins, corroborating the hypothesis that these proteinases are involved in the endogenous generation of antimicrobial peptides

A hemoglobina possuí um grande potencial antimicrobiano, sendo os peptídeos antimicrobianos (AMPs) derivados de proteínas contêm o grupamento heme denominados hemocidinas. O carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus é capaz de adquirir e processar grandes quantidades de sangue para seu metabolismo. Neste trabalho, purificamos hemocidinas produzidas no tubo digestório do carrapato. Identificamos 10 fragmentos da hemoglobina bovina que possuem atividade contra Candida albicans (Hb 1-94, 3-94, 1-87, 93-141, 102-141, 103-141, 107-141, 104-141 e 98-114 e Hb\"beta\" 127-145). Determinamos que todos os peptídeos apresentam um alto conteúdo de aminoácidos básicos, além de uma estrutura secundária em \"alfa\"-hélice, características encontradas em outros AMPs. Verificamos também que as duas principais proteases que atuam na produção das hemocidinas são uma cisteíno- e uma aspártico-proteinase. A identificação de diversas hemocidinas, no tubo digestório de R. (Boophilus) microplus, indica uma possível participação das hemocidinas na proteção contra microorganismos / The hemoglobin posses a great potential as an antimicrobial, being denominated hemocidins the antimicrobial peptides (AMPs) derived from heme containing proteins. The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is capable of processing large amounts of blood to its own metabolism. In this work we purified the hemocidins that are produced in the tick gut. We identified 10 fragments from bovine hemoglobin that presents activity towards Candida albicans (Hb 1-94, 3-94, 1-87, 93-141, 102-141, 103-141, 107-141, 104-141 e 98-114 e Hb\"beta\" 127-145). We determined that all the peptides presents a high content of basic amino acids, besides a secondary structure in \"alfa\"-helix conformation, characteristics found in other AMPs. We also verified that a cistein- and an aspartic-protease are the two main proteases involved on the production of these hemocids. The identification of several hemocidins in the gut of R. (Boophilus) microplus, suggests that these AMPs may play a role in the defense of the tick against microorganisms

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV07MA022.pdf: 204417 bytes, checksum: 03ef70e1c1888475b7a6459fa03a0b63 (MD5) Previous issue date: 2007-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aims of this study were to evaluate the degree of resistance of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to cypermethrin and amitraz in the Santa Catarina Plateau, and to develop a technique for the evaluation of acaricides by larvae immersion. Engorged female ticks, collected between January 2004 and May 2006, were sampled from 20 ranches in the Santa Catarina Plateau (samples by convenience) and also received directly from ranchers (20 samples). Engorged females were submitted to in vitro immersion tests in cypermethrin (0.015%) and amitraz (0.025%) acaricides. The results indicated resistance of R. (B.) microplus to cypermethrin and amitraz to be rising in bovine herds in the Santa Catarina Plateau. To carry out the larvae immersion test, 30 engorged females were collected in a ranch in Lages. Larvae used in the immersion test were obtained from 10mg of eggs placed into 5ml disposable syringes, previously prepared and kept in controlled conditions of laboratory (27 + 1 0C and 80 + 10% UR), and collected between the third and the twelfth day of oviposition. Seven to ten days old larvae were submitted to the acaricide laboratory test, in ten replications, by their immersion in eight dilutions of commercial acaricides (amitraz or cypermethrin), for 30 seconds; for each replication and commercial product, a control group was immersed in distilled water. Results were evaluated 24 hours after each treatment by counting the number of live and dead larvae. The lethal dose (LD50) was obtained from a regression curve by the Sigma Plot program. The proposed acaricide laboratory test procedures by larvae immersion offered promising results for the evaluation of acaricides, proving useful for the calculation of the mean LD50 for cypermethrin and amitraz / A realização deste trabalho teve como objetivos avaliar a situação da resistência doRhipicephalus (Boophilus) microplus à cipermetrina e ao amitraz no Planalto Catarinense e desenvolver uma técnica de avaliação de carrapaticidas por imersão de larvas. No período de janeiro de 2004 a maio de 2006, foram coletadas amostras de teleóginas em bovinos de 20 propriedades, no Planalto Catarinense (amostras por conveniência) e recebidas 20 amostras de teleóginas enviadas por produtores rurais. Foram realizados testes in vitro de imersão de teleóginas em acaricida à base de cipermetrina (0,015%) e amitraz (0,025%). Constatou-se que a resistência do carrapato R. (Boophilus) microplus aos carrapaticidas cipermetrina e amitraz é crescente no rebanho bovino do Planalto Catarinense. Para a realização do teste de imersão de larvas foram coletadas 30 teleóginas de bovinos de uma propriedade rural do município de Lages. As larvas utilizadas no teste de imersão foram obtidas de ovos da postura do terceiro ao décimo segundo dia, que foram acondicionados 10mg por seringa, descartável de 5ml, previamente preparadas e mantidas em câmara climatizada até a eclosão das larvas. Para o teste carrapaticida foram utilizadas larvas de sete a dez dias submetidas à imersão, por 30 segundos, em oito diluições de produtos carrapaticidas comerciais à base de amitraz e de cipermetrina, cada uma com dez repetições. O grupo controle para cada repetição e produto, foi imerso em água destilada. A leitura foi realizada 24 horas após o tratamento com a contagem de larvas vivas e mortas. O cálculo da dose letal 50 foi realizado a partir da linha de regressão, utilizando o programa Sigma plot . A metodologia proposta para o teste carrapaticida por imersão com larvas apresentou resultados promissores para avaliação de carrapaticidas e pode ser utilizada para calcular a média da dose letal50 para os acaricidas à base de cipermetrina e amitraz

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA032.pdf: 934515 bytes, checksum: aaff1e02f75a4eaee8f281f36d4eccb2 (MD5) Previous issue date: 2010-03-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present work consists of an analysis of the selective control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus by fipronil, the cost reduction for such control and the measurement of the efficiency of that acaricide after three years of administration. The experiment was taken from May 2007 to april 2009 in a cattle farm 25 kilometers away from Lages, Santa Catarina state , in two areas of native pasture naturally infested by R. (B) microplus. Forty cattle were divided in two groups of 20 animals each. At each 14 days the female ticks, bigger than 4,5 mm located in the right side of the cattle bodies were counted. The result of that counting was multiplied by two. Fipronil 1% pour on was then administered. In the so-called Conventional Group all the cattle were treated when the average reached more than 40 female ticks per animal. In the so-called Selective Group, on the other hand, only the animals molested by more than 40 ticks received the dose. For both groups the prescription was albendozale sulfoxide )5 mg/kg), under skin administration (when the parasitic infection reached more than 250 eggs per gram EPG). At each 28 days the cattle s weight was checked for the cost/benefit analysis. It was verified a difference of doses of the acaricide on the Conventional group comparing the Selective one six doses of antihelmintics were administered for both groups. It was also verified that the cattle of the Selective Group gained 13.39 kg, on the average, more than the animals of the Conventional Group a significant difference (more than 5%) between the average weight of the two lots was not evidenced. In the experiment selective to verify the efficiency of the Fipronil 1%, 20 cattle, European-bred, were divided: ten animals infested by engorged female larva with selective (SG) and the other ten were infested by engorged female larva with selective (SG) and the other ten were infested by engorged female larva conventional (CG). Later, randomly, five animals were chosen for SG and CG control and five for SG and CG administration, infested according to the Agriculture, Cattle Breeding and Supplying Brazilian Ministry standards. The animals were infested by a minimum of 2.500 larva of an identified cepa of R. (B.) microplus, aged 10 to 21 days old. All ticks emerged from the bodies of the animals were collected from day minus-3 to day plus-23 of the experiment. These ticks were later counted and incubated so the viability of their eggs could be examined. The efficiency of the acaricide on the Fipronil 1% - basis calculated for the group infested by the SG cepa was 77.74%; for the group infested by the CG cepa, that as administered 14 treatments in three years of use, was 79,32%. The repressed-reproduction average was 22.57% for the SG group amd 22.47% for the CG group. On a Student s t test basis, significance 5%, the groups didn t show a statistic difference / A realização deste trabalho teve como objetivos avaliar o método de controle Seletivo do Rhipicephalus (Boophilus) microplus com fipronil, reduzir os custos com o seu controle e avaliar a eficácia deste carrapaticida após três anos de uso. O experimento foi realizado em uma propriedade rural a 25 km de Lages/SC, de maio de 2007 a abril de 2009, em duas invernadas de campo nativo, naturalmente infestadas com R. (B.) microplus. Utilizaram-se 40 bovinos que foram divididos em dois grupos de 20 animais. A cada 14 dias foi realizada a contagem das fêmeas maiores ou igual a 4,5mm, no lado direito do corpo dos animais, e o valor obtido, multiplicado por dois. O medicamento utilizado foi o fipronil 1% via pour on. Um grupo, denominado Convencional foi tratado todos os bovinos quando a média do grupo foi igual ou superior a 40 fêmeas, e o outro grupo, denominado Seletivo foi tratado apenas os animais que apresentaram uma infestação igual ou superior a 40. Ambos os grupos foram tratados com sulfóxido de albendazole (5mg/kg), por via subcutânea, (quando a infecção parasitária foi superior a 250 OPG. A cada 28 dias foi realizada a pesagem dos animais para análise da relação custo/benefício. Foram realizadas 20 aplicações a mais do carrapaticida no grupo Convencional em relação ao Seletivo. Ambos os grupos receberam seis tratamentos com anti-helmíntico. Foi calculado um ganho de peso médio de 13,39kg aos animais pertencentes ao Seletivo superior aos bovinos do grupo Convencional não ocorrendo diferença estatística significante entre as médias de peso dos dois lotes (significância de 5%). Um experimento para análise da eficácia do fipronil 1% foram utilizados 20 bovinos de raça européia que foram divididos: dez animais infestados com larvas provenientes das teleóginas do esquema de tratamento Seletivo (GS) e dez animais que foram infestados com larvas provenientes das teleóginas do esquema Convencional (GC), que posteriormente foram randomizados, estabelecendo 5 animais para controles (GCS) e (GCC) e 5 animais para tratados GTS e GTC. Infestados de acordo com a metodologia estabelecida pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento MAPA. Os animais foram infestados com, no mínimo, 2.500 larvas com idade entre 10 a 21 dias de uma cepa de R. (B.) microplus. As coletas totais de carrapatos desprendidos do corpo dos animais a partir do dia 3 até o dia +23 do ensaio, que foram contadas e incubadas para análise da viabilidade dos ovos. A eficácia do tratamento carrapaticida utilizando fipronil 1% calculada para o grupo infestado com a cepa GS foi 77,74% e para o grupo infestado com a cepa GC que recebeu o total de 14 tratamentos durante os três anos de uso, foi de 79,32%. A porcentagem média de inibição de reprodução calculada foi 22,57% para o GS e 22,47% para o GC, aplicando-se o teste t de Student, nível de significância de 5%, não houve diferença estatística entre os grupos

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV07MA022.pdf: 204417 bytes, checksum: 03ef70e1c1888475b7a6459fa03a0b63 (MD5) Previous issue date: 2007-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aims of this study were to evaluate the degree of resistance of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to cypermethrin and amitraz in the Santa Catarina Plateau, and to develop a technique for the evaluation of acaricides by larvae immersion. Engorged female ticks, collected between January 2004 and May 2006, were sampled from 20 ranches in the Santa Catarina Plateau (samples by convenience) and also received directly from ranchers (20 samples). Engorged females were submitted to in vitro immersion tests in cypermethrin (0.015%) and amitraz (0.025%) acaricides. The results indicated resistance of R. (B.) microplus to cypermethrin and amitraz to be rising in bovine herds in the Santa Catarina Plateau. To carry out the larvae immersion test, 30 engorged females were collected in a ranch in Lages. Larvae used in the immersion test were obtained from 10mg of eggs placed into 5ml disposable syringes, previously prepared and kept in controlled conditions of laboratory (27 + 1 0C and 80 + 10% UR), and collected between the third and the twelfth day of oviposition. Seven to ten days old larvae were submitted to the acaricide laboratory test, in ten replications, by their immersion in eight dilutions of commercial acaricides (amitraz or cypermethrin), for 30 seconds; for each replication and commercial product, a control group was immersed in distilled water. Results were evaluated 24 hours after each treatment by counting the number of live and dead larvae. The lethal dose (LD50) was obtained from a regression curve by the Sigma Plot program. The proposed acaricide laboratory test procedures by larvae immersion offered promising results for the evaluation of acaricides, proving useful for the calculation of the mean LD50 for cypermethrin and amitraz / A realização deste trabalho teve como objetivos avaliar a situação da resistência do Rhipicephalus (Boophilus) microplus à cipermetrina e ao amitraz no Planalto Catarinense e desenvolver uma técnica de avaliação de carrapaticidas por imersão de larvas. No período de janeiro de 2004 a maio de 2006, foram coletadas amostras de teleóginas em bovinos de 20 propriedades, no Planalto Catarinense (amostras por conveniência) e recebidas 20 amostras de teleóginas enviadas por produtores rurais. Foram realizados testes in vitro de imersão de teleóginas em acaricida à base de cipermetrina (0,015%) e amitraz (0,025%). Constatou-se que a resistência do carrapato R. (Boophilus) microplus aos carrapaticidas cipermetrina e amitraz é crescente no rebanho bovino do Planalto Catarinense. Para a realização do teste de imersão de larvas foram coletadas 30 teleóginas de bovinos de uma propriedade rural do município de Lages. As larvas utilizadas no teste de imersão foram obtidas de ovos da postura do terceiro ao décimo segundo dia, que foram acondicionados 10mg por seringa, descartável de 5ml, previamente preparadas e mantidas em câmara climatizada até a eclosão das larvas. Para o teste carrapaticida foram utilizadas larvas de sete a dez dias submetidas à imersão, por 30 segundos, em oito diluições de produtos carrapaticidas comerciais à base de amitraz e de cipermetrina, cada uma com dez repetições. O grupo controle para cada repetição e produto, foi imerso em água destilada. A leitura foi realizada 24 horas após o tratamento com a contagem de larvas vivas e mortas. O cálculo da dose letal 50 foi realizado a partir da linha de regressão, utilizando o programa Sigma plot . A metodologia proposta para o teste carrapaticida por imersão com larvas apresentou resultados promissores para avaliação de carrapaticidas e pode ser utilizada para calcular a média da dose letal50 para os acaricidas à base de cipermetrina e amitraz

Carrapatos da espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus causam enormes prejuízos à saúde e à produção animal. Sendo um ectoparasita hematófago, o carrapato espolia seu hospedeiro e transmite doenças. Seu parasitismo é mediado por sua saliva, que inibe as reações homeostáticas do hospedeiro à injúria local causada por sua picada. Seus hospedeiros montam respostas imunes contra esse parasita, incluindo a resposta imune mediada por anticorpos, indicando que o controle imunobiológico é possível. Contudo, o complexo farmacológico da saliva do parasita é composto por proteínas solúveis que são sabidamente pouco ou nada imunogênicos se não forem introduzidos no hospedeiro com adjuvante ou na foram agregada. Assim, dificilmente induziriam imunidade nos hospedeiros. Bovinos apresentam fenótipos contrastantes e herdáveis quanto à intensidade de infestações com carrapatos. Carrapatos alimentados em bovinos resistentes não completam a refeição de sangue, apresentando menor eficiência reprodutiva. É possível que esse desfecho seja devido à capacidade do hospedeiro resistente, mas não do suscetível, de produzir anticorpos que neutralizam componentes salivares do carrapato cruciais para realize a hematofagia. É necessário, portanto, examinar essa possibilidade. Os resultados obtidos também podem ajudar a identificar antígenos úteis para formular uma vacina anti-carrapato. Para estabelecer quais componentes salivares são reconhecidos pelos dois fenótipos de hospedeiros empregamos uma soroteca composta por soros obtidos de bovinos resistentes e suscetíveis ao carrapato em diferentes estágios do ciclo do parasito (larva, ninfa e adulto) e após uma, duas ou três ciclos de infestações. Os soros foram empregados individualmente e em forma de pools para imunodetecção por western blot de proteínas presentes em extrato de larvas não-alimentadas, saliva e glândulas salivares de fêmeas de R. microplus e separadas em uma e duas dimensões. Os resultados obtidos nos western blots 1D de saliva e de extrato de larvas não alimentadas mostraram que houve um reconhecimento diferencial dos antígenos parasitários pelos soros dos animais resistentes e suscetíveis. Os soros dos animais resistentes quando ainda eram livres de infestações (i.e., naïve) ou quando infestados com a forma larval reconheceram com maior freqüência e/ou exclusivamente certas bandas de proteínas. Resultados semelhantes foram vistos nos western blots de géis 2D de saliva e glândulas salivares de fêmeas, onde os soros dos animais resistentes ainda não infestados (i.e., naïve) reconheceram vários spots presentes nessas amostras e soros de animais resistentes infestados reconhecerem spots de forma exclusiva. Também foi observado que, apesar dos hospedeiros suscetíveis estarem expostos a grande quantidade de saliva, os soros desses animais não reconhecem um número maior de spots que os hospedeiros infestados resistentes. Por outro lado, a maioria das proteínas salivares não é reconhecida pelos hospedeiros infestados, sejam resistentes ou suscetíveis. Esses resultados indicam que os hospedeiros bovinos resistentes reconhecem de forma mais precoce que os bovinos suscetíveis certos componentes parasitários. Essa capacidade pode estar relacionada ao fenótipo de resistência ao carrapato / The cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, causes enormous losses to animal health and production. Since it is a hematophagous parasite the tick expoliates its hosts and transmits diseases. Parasitism by the tick is mediated by its saliva, which inhibits the hosts local homeostatic reactions to its bite. Hosts mount immune responses against this parasite, including antibody-mediated responses, indicating that the immunobiological control of ticks is possible. However, the pharmacological complex of saliva is composed of soluble proteins, which are known to be incapable of eliciting antibody responses if they are not introduced into the host with adjuvant or in aggregated form. Thus, salivary proteins may not be able to induce immunity in hosts. Bovines present contrasting, heritable phenotypes for tick infestations. Ticks fed on resistant hosts are unable to complete a blood meal and present a decrease in reproductive immunity. It is possible that this outcome is caused by an ability of the resistant host to produce antibodies that neutralize salivary components that are crucial to blood feeding. It is necessary, therefore, to examine this possibility. The results will also assist in the identification of protective antigens to formulate an anti-tick vaccine. In order to establish which salivary components are recognized by the two types of host phenotypes, a collection of sera derived from resistant and susceptible bovines infested one, two and three times with different developmental stages of the parasite (larvae, nymphs and adults) was employed to detect which proteins were recognized in western blots of saliva and extracts of salivary glands and unfed larvae. Western blots of tick proteins (saliva and extracts of unfed larvae) separated in one dimension showed that antigens were differentially recognized by resistant and susceptible bovines. Sera from resistant bovines still naïve or infested with larvae recognized certain protein bands exclusively or more frequently than similar sera from susceptible bovines. Similar results were seen in western blots of proteins from saliva and extracts of salivary glands separated in two dimensions, where sera from naïve, resistant bovines recognized several spots and sera from infested, resistant bovines recognized several spots exclusively. In spite of the fac that susceptible hosts are exposed to greater amounts of tick saliva, sera from these animals did not recognize a greater amount of spots than those from resistant bovines. On the other hand, the great majority of spots is not recognized by any of the different sera, be they from resistant or susceptible hosts. These results indicate that resistant bovines are able to recognize parasitic proteins earlier than susceptible bovines. This ability may, in turn, affect expression of salivary components that are crucial for the tick and may explain the phenotypes of tick infestations in bovines.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-16T18:15:18Z No. of bitstreams: 1 valeriademello.pdf: 1398962 bytes, checksum: 8f98bff81bd61634bb2f3b2081f6a2db (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T12:40:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 valeriademello.pdf: 1398962 bytes, checksum: 8f98bff81bd61634bb2f3b2081f6a2db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:40:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 valeriademello.pdf: 1398962 bytes, checksum: 8f98bff81bd61634bb2f3b2081f6a2db (MD5) Previous issue date: 2014-07-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O carrapato dos bovinos, Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini 1887) é responsável por sérios prejuízos à pecuária brasileira, considerando-se os custos do controle, perda de receita devido a menor produção de leite e carne, danos ao couro, além da transmissão de doenças. A utilização de plantas medicinais é considerada uma alternativa a resistência recorrente aos produtos químicos. Diante da necessidade de alternativas eficazes e com menores impactos ambientais o objetivo desse estudo foi desenvolver formulações de contato contendo os óleos essenciais das plantas Citronela-de-Java (Cymbopogon winterianus), Cravo-da-índia (Syzygium aromaticum) e Alecrim-da-horta (Rosmarinus officinalis) e avaliar in vitro os efeitos acaricidas em diferentes etapas do ciclo do carrapato. Para tanto foram utilizadas concentrações que variaram de 0,5 – 15,0% dos óleos essenciais incorporados nas formulações. Os carrapatos provenientes de diferentes regiões geográficas foram tratados com as formulações e avaliados os efeitos das mesmas sobre o índice de produção de ovos, a eclosão larval e a eficácia carrapaticida. Os resultados obtidos foram comparados com produtos acaricidas comerciais. Após o 20º dia do tratamento as formulações contendo o óleo essencial de citronela tiveram eficácia acaricida entre 2,09 – 55,51%, com o óleo essencial de cravo-da-índia, 92,47 - 100% e 26,44 - 40,78% com o óleo essencial de alecrim. Na associação dos óleos essenciais obteve-se eficiência de 84,68 – 90,73% para a associação do cravo-da-índia com o óleo essencial de citronela e 30,54 – 64,25% na associação de citronela com o alecrim. Os resultados demonstraram a atividade carrapaticida das formulações testadas, quando comparadas com os produtos químicos utilizados pelos produtores. Estudos in vivo necessitam ser realizados para validar a eficiência das formulações em condições de campo, visando a utilização desses produtos como uma alternativa para o controle do carrapato bovino. / The cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini 1887) is responsible for serious losses to Brazilian cattle, considering the costs of control, loss of revenue due to lower production of milk and meat, leather damage, beyond the transmission of diseases. The use of medicinal plants is considered an alternative to the applicant chemical resistance. Facing the necessity to effective alternatives with lower environmental impacts, the objective of this study was to develop contacts´ formulations containing essential oils of Citronella (Cymbopogon winterianus), Clove (Syzygium aromaticum) and Rosemary (Rosmarinus officinalis) plants and evaluate in vitro acaricidal effects on different stages of the cycle of the tick. For this purpose, concentrations were used ranging from 0.5 - 15.0% of essential oils incorporated into the formulations. Ticks from different geographic regions were treated with the formulations and their effects on the rate of egg production, larval hatching and its efficiency on ticks were evaluated. The results were compared with chemistry acaricidal products. After the 20th day of treatment formulations containing the citronella´s essential oil had acaricidal efficacy between 2.09 to 55.51 %, with the clove´s essential clove, 92.47 to 100% and 26.44 to 40,78 % with rosemary´s essential oil. The association of clove essential oil with citronella essential oil obtained efficiency from 84.68 to 90.73% and for the association of citronella oil with rosemary oil, was 30.54 to 64.25%. The results showed the acaricidal activity of the tested formulations when compared to the chemicals acaricidal products. In vivo studies need to be conducted to validate the efficiency of the formulations under field conditions in order to use these products as an alternative for the control of cattle tick.

L’Afrique de l’Ouest subit l'invasion rapide de la tique du bétail associée aux plus fortes pertes économiques au monde : Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Cette tique a été accidentellement introduite au Bénin et en Côte d’Ivoire en 2006. En 2011, des éleveurs burkinabés se plaignent de l’impossibilité de contrôler de très fortes infestations de leurs troupeaux par des tiques (entrainant morbidité et perte de poids du bétail) : il s’agit de R. microplus. Cette thèse poursuit deux objectifs clefs pour la détermination de mesures de protection de la santé du bétail. Le premier consiste à comprendre les mécanismes mis en jeu dans cette invasion par les outils de génétique des populations (e.g. tests de l’existence de couloirs d’invasions privilégiés; structure génétique des populations de tiques, estimations de tailles de populations entre zones d’introduction et front d’invasion ; distance de flux géniques par génération de tique). Le couplage de ces informations avec celles des niveaux de résistances aux acaricides utilisables en élevage permettront d’évaluer les stratégies de contrôles les plus à mêmes d’enrayer cette invasion. Le second consiste à anticiper l’impact de cette invasion sur l’épidémiologie de pathogènes vectorisés par les tiques du bétail. Il s’agira d’abord ici d’évaluer l’impact de la présence/absence de R. microplus (vectrice entre autres de Babesia bovis, B. bigemina ou Anaplasma marginale) sur la communauté autochtone de tiques du bétail. / West Africa is undergoing fast spread of the cattle tick associated with highest economic losses worldwide: Rhipicephalus (Boophilus) microplus, which was accidentally introduced in Benin and Côte d'Ivoire in early 2000s. In 2011, Burkinabe farmers complain about the impossibility of controlling very large infestations of their cattle by ticks (causing morbidity and loss of livestock weight): results of R. microplus infestation. This thesis has two key objectives for the determination of animal health protection measures. The first is to understand the mechanisms involved in this invasion by population genetic tools (e.g. tests of the existence of privileged invasions corridors, genetic structure of tick populations, population size estimates between introduction areas and invasion front, distance of gene flow by tick generation). Coupling these informations with those of resistance to the common acaricides used in farming will allow assessing of the most control strategies to stop current invasion. The second is to anticipate the impact of the invasion on the epidemiology of pathogens vectored by cattle ticks. It will be here first to assess the impact of the presence / absence of R. microplus (vector of Babesia bovis, B. bigemina and Anaplasma marginale) on the native cattle ticks’ communities.

O carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o principal vetor da riquétsia Anaplasma marginale, o agente etiológico da anaplasmose, uma doença que acomete os rebanhos e causa sérios prejuízos econômicos à pecuária no Brasil. Estabelecemos em nosso laboratório o cultivo da linhagem de células BME26 que são originárias do R. (B.) microplus e também a infecção dessas células por A. marginale, um patógeno que é naturalmente transmitido pelo carrapato. Detectamos que a expressão gênica da defensina e da ixodidina nas células é aumentada frente à infecção por A. marginale, embora nenhuma alteração da expressão gênica da microplusina foi constatada. As células foram expostas a microorganismos inativados por calor e LPS, sendo que a expressão gênica da microplusina é aumentada frente a todos os estímulos. Na exposição das células BME26 com a bactéria Microccocus luteus, a expressão gênica da defensina e da ixodidina não foi alterada e no estimulo com leveduras a expressão gênica da ixodidina foi reprimida. Frente à infecção por A. marginale detectamos, aumento expressão da defensina e ixodidina. Os genes da microplusina e defensina foram silenciadas por RNAi em células infectadas por A. marginale, mas não houve alteração no número de riquétsias / The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the main vector of the rickettsia Anaplasma marginale, the etiological agent of anaplasmosis, a disease that affects cattle and causes serious economic losses to the Brazilian cattle industry. We established in our laboratory the embryonic cell culture line BME26 from R. (B.) microplus and infection by A. marginale, a pathogen naturally transmitted by R. (B.) microplus. We verified that defensin and ixodidin gene expression increased in these cells after an infection by A. marginale and no alteration in microplusin gene expression was detected. The BME26 cells were exposed to heat-inactivated microorganims or to LPS, microplusin gene expression increased after all stimuli. After exposure of BME26 cells to Micrococcus luteus, expression levels of defensin and ixodidin did not change and ixodidin gene expression reduced after exposure of these cells to yeast. In the infection by A. marginale we detected defensin and ixodidin gene expression. Also, microplusin and defensin genes were silenced by RNA interference (RNAi) in A. marginale-infected BME26 cells, but we did not observe alteration in the number of MSP4 rickettsias