Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:17:44Z : No. of bitstreams: 1 souza_ff_dr_botfmvz.pdf: 2099202 bytes, checksum: f4b636446831c1c7dd26bf9e83e952f8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo foram utilizados 20 cães, sem raça definida, de fertilidade desconhecida, com pesos variando entre 15 e 20 Kg, sorologicamente negativos para leptospirose e brucelose canina. Após um período de condicionamento, foram colhidos seis ejaculados de cada cão, por manipulação digital do pênis, sendo três antes da deferentectomia e três após. O sêmen foi imediatamente analisado após a colheita, considerando os seguintes parâmetros: volume, cor, motilidade progressiva, vigor espermático, porcentagem de espermatozóides morfologicamente normais, pH, integridade de membrana (teste hiposmótico e coloração com sondas fluorescentes). Foram determinadas as concentrações de proteínas totais, cloretos totais, cálcio, potássio e sódio. A SDS-PAGE foi realizada utilizando-se duas concentrações de poliacrilamida, 13% e 22%, no gel de separação. Os géis foram corados com coomassie azul brilhante R-250, suas imagens digitalizadas e avaliadas num programa analisador de imagens, onde foram estimados os pesos moleculares e a densidade óptica integrada de cada banda, para cada amostra. Uma correlação negativa foi verificada entre o potássio e a motilidade progressiva, vigor espermático, resultados do teste hiposmótico e porcentagem de espermatozóides com integridade de membrana na coloração com sondas fluorescentes. Apenas o cálcio mostrou-se significativamente mais elevado após a deferentectomia. Foi verificado um total de 37 bandas antes da deferentectomia e 35 após. Antes da deferentectomia, encontrou-se uma correlação positiva e significativa entre duas bandas protéicas, B4 (67 kDa) e a B5 (58,6 kDa) e a motilidade progressiva, vigor espermático, porcentagem de espermatozóides morfologicamente normais, resultados do teste hiposmótico e porcentagem de espermatozóides com integridade de membrana na coloração com sondas fluorescentes... . / In this study 20 mixed breed dogs (15 to 20 Kg of body weight) of unknown fertility were used. The dogs were negative in leptospyrosis and brucelosis tests. After a conditioning time, were collected six ejaculated of each dog by digital manipulation of penis, being three before and three after deferentectomy. Immediately, the semen was analyzed considering the following parameters: volume, color, spermatic motility, vigor, morphological forms of the spermatozoa, pH and membrane integrity (hypoosmotic test and fluorescent stain). The concentrations of total proteins, total chlorides, calcium, potassium and sodium were determined. The SDS-PAGE of each seminal plasma sample was carried out using two polyacrylamide concentrations, 13% and 22%, in the separation gel. The gels were stained with coomassie blue brilliant R-250, the images were digitalized and evaluated in a analyzer software, where the molecular weights were estimated, in accordance with a standard applied in each gel. The integrated optic density of each band for each sample was determined. A negative correlation was verified between the potassium and the spermatic motility, vigor, results of the hypoosmotic test and percentage of spermatozoa with integrity of membrane in the fluorescent stain. The calcium concentrations after of deferentectomy were significantly higher than before. A total of 37 bands before deferentectomy and 35 after were observed. Before the deferentectomy, a positive correlation was verified between two bands, B4 (67 kDa) and the B5 (58,6 kDa), and the spermatic motility, vigor, percentage of normal spermatozoa, results of the hypoosmotic test and percentage of spermatozoa with integrity of membrane in the stain fluorescent. Three bands were significantly different before and after the deferentectomy (B3, of 73,5 kDa, B29, of 7,8 kDa and B27, 3,6 kDa). Keywords: Dog; Seminal Plasma; Proteins; Electrophoresis, Electrolites.

Orientador: Maria Denise Lopes / Resumo: Neste estudo foram utilizados 20 cães, sem raça definida, de fertilidade desconhecida, com pesos variando entre 15 e 20 Kg, sorologicamente negativos para leptospirose e brucelose canina. Após um período de condicionamento, foram colhidos seis ejaculados de cada cão, por manipulação digital do pênis, sendo três antes da deferentectomia e três após. O sêmen foi imediatamente analisado após a colheita, considerando os seguintes parâmetros: volume, cor, motilidade progressiva, vigor espermático, porcentagem de espermatozóides morfologicamente normais, pH, integridade de membrana (teste hiposmótico e coloração com sondas fluorescentes). Foram determinadas as concentrações de proteínas totais, cloretos totais, cálcio, potássio e sódio. A SDS-PAGE foi realizada utilizando-se duas concentrações de poliacrilamida, 13% e 22%, no gel de separação. Os géis foram corados com coomassie azul brilhante R-250, suas imagens digitalizadas e avaliadas num programa analisador de imagens, onde foram estimados os pesos moleculares e a densidade óptica integrada de cada banda, para cada amostra. Uma correlação negativa foi verificada entre o potássio e a motilidade progressiva, vigor espermático, resultados do teste hiposmótico e porcentagem de espermatozóides com integridade de membrana na coloração com sondas fluorescentes. Apenas o cálcio mostrou-se significativamente mais elevado após a deferentectomia. Foi verificado um total de 37 bandas antes da deferentectomia e 35 após. Antes da deferentectomia, encontrou-se uma correlação positiva e significativa entre duas bandas protéicas, B4 (67 kDa) e a B5 (58,6 kDa) e a motilidade progressiva, vigor espermático, porcentagem de espermatozóides morfologicamente normais, resultados do teste hiposmótico e porcentagem de espermatozóides com integridade de membrana na coloração com sondas fluorescentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: In this study 20 mixed breed dogs (15 to 20 Kg of body weight) of unknown fertility were used. The dogs were negative in leptospyrosis and brucelosis tests. After a conditioning time, were collected six ejaculated of each dog by digital manipulation of penis, being three before and three after deferentectomy. Immediately, the semen was analyzed considering the following parameters: volume, color, spermatic motility, vigor, morphological forms of the spermatozoa, pH and membrane integrity (hypoosmotic test and fluorescent stain). The concentrations of total proteins, total chlorides, calcium, potassium and sodium were determined. The SDS-PAGE of each seminal plasma sample was carried out using two polyacrylamide concentrations, 13% and 22%, in the separation gel. The gels were stained with coomassie blue brilliant R-250, the images were digitalized and evaluated in a analyzer software, where the molecular weights were estimated, in accordance with a standard applied in each gel. The integrated optic density of each band for each sample was determined. A negative correlation was verified between the potassium and the spermatic motility, vigor, results of the hypoosmotic test and percentage of spermatozoa with integrity of membrane in the fluorescent stain. The calcium concentrations after of deferentectomy were significantly higher than before. A total of 37 bands before deferentectomy and 35 after were observed. Before the deferentectomy, a positive correlation was verified between two bands, B4 (67 kDa) and the B5 (58,6 kDa), and the spermatic motility, vigor, percentage of normal spermatozoa, results of the hypoosmotic test and percentage of spermatozoa with integrity of membrane in the stain fluorescent. Three bands were significantly different before and after the deferentectomy (B3, of 73,5 kDa, B29, of 7,8 kDa and B27, 3,6 kDa). Keywords: Dog; Seminal Plasma; Proteins; Electrophoresis, Electrolites. / Mestre

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-17T11:59:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 405604 bytes, checksum: 783a646364e842546441c0e45e7ed73e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T11:59:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 405604 bytes, checksum: 783a646364e842546441c0e45e7ed73e (MD5) Previous issue date: 2005-08-01 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O experimento foi conduzido no Setor de Caprinocultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa, com o objetivo de avaliar o efeito da curva de resfriamento em função do diluente utilizado na conservação do sêmen caprino armazenado a 5o C. Foram utilizados quatro reprodutores caprinos adultos das raças Parda Alpina e Saanen, sendo dois de cada raça. O sêmen foi coletado pelo método da vagina artificial. O ejaculado foi dividido em duas partes iguais, e cada uma das partes foi diluída com um dos respectivos diluentes. Foram utilizados os seguintes diluentes: um à base de leite desnatado e outro à base de gema-de-ovo (citrato-gema). Após o envase em palhetas francesas de 0,25 mL, as amostras foram submetidas a duas curvas de resfriamento, sendo uma com taxa de resfriamento de -0,033o C/minuto e a outra com -0,5 o C/minuto , até alcançar a temperatura de 5oC, e analisadas a cada 8 horas, durante um período de 48 horas. A eficiência na preservação celular teve influência direta das curvas de resfriamento, quando associadas aos diluentes utilizados. O diluente citrato- gema, quando utilizado em conjunto com as curvas lenta (CR 1) ou rápida (CR 2), foi o que melhor preservou as células espermáticas ao longo do tempo de armazenamento. O diluente leite desnatado obteve melhor taxa de preservação das células, quando associado à curva de resfriamento rápida (CR 2). A taxa de resfriamento de -0,5o C/minuto (CR 2) proporcionou melhor manutenção da viabilidade espermática, quando o sêmen foi armazenado a 5oC, durante 48 horas. / The aim of this study was to evaluate the effect of different cooling rates and diluents in the conservation of goat sperm viability stored at 5o C during 48 hours. The semen of two Saanen and Alpine goats were collected by an artificial vagina and than assigned into four treatments. Treatment 1 (T1): Egg- yolk diluent (YOD) + Low cooling rate (LCR; -0.33°C / minute); T2: Egg-yolk diluent + high cooling rate (HCR; -0.05°C / minute); T3: Skimmilk Diluent (SMD) + LCR; T4, Skimmilk Diluent (SMD) + HCR. The semen was stored at 5o C and evaluated at each 8 hours until it complete 48 hours of conservation. There was effect of the two diluents and cooling rates on the conservation of the goat spermatozoa. The YOD had better conservation of the sperm integrity than the SMD. The SMD had a superior preservation when cooled in a high cooling hate. The higher cooling hate (-0.5o C/minuto) promotes a better conservation of the goat sperm viability at 5o C and during 48 hours after collected.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 652961 bytes, checksum: 0a4c25df5d112d62a6fc101c27fb0466 (MD5) Previous issue date: 2013-03-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / One of the main deleterious factors inherent to the process of canine semen freezing is the large amount of sperm membranes lesions observed in the thawing. The freezing induce some destabilization of cell membrane and changes in the conformation between membrane receptors and ionic channels, promoting the calcium influx and increasing the probability of a premature acrosome reaction (AR), that invalidate the fertilizantion of the oocyte. The calcium is the principal inducing agent of the AR in vitro, and there is not recent reports about the biochemical composition of the seminal plasm and about the calcium levels that prevent the premature AR in the frozen of the domestic dog semen too. This study aimed to evaluate the alkaline phosphatase and cationic composition in seminal plasma of the fractions of dog ejaculate; and also test the effects of calcium amount reducing in freezing medium using the EDTA as a chelating agent. The semen was collected from three half-breed dogs. The sperm-rich fraction (SRF) and the prostatic fraction (PF) were separately collected. Both samples were evaluated by spectrophotometry, measuring the concentrations of calcium, sodium, potassium, alkaline phosphatase (AP), and the freezing medium. The fresh semen was evaluated by classical tests (strength, progressive motility, morphology, and membrane integrity). The remainder was divided into three aliquots that were diluted in a freezing medium based on tris-citrate-egg yolk, glycerol and equex with different concentrations of EDTA. The first treatment did not contain EDTA, treatment 2 contained 0.1% EDTA and the third, 0.25%. The most abundant cation in seminal plasma of these dogs was sodium, followed by potassium and calcium, respectively, both in SRF and in PF, without significant difference between the concentrations of these ions in both fractions. The AP obtained in SRF was significantly higher (p <0.000001) than that obtained in PF. There was a high concentration of calcium in the freezing medium based, that was significantly reduced in the treatments with EDTA. Deleterious effects were observed in all analyzed parameters in thawed semen compared with fresh semen (progressive motility, morphology, and membrane integrity). With the use of fluorescent probes, we did not note significant difference in the percentage of the plasmatic membranes e acrosomal membranes injured among the treatments with different EDTA concentrations. The extracellular medium has high calcium concentration, and despite the EDTA had significantly reduced the extracellular calcium in those treatments that it was added, there was not acrosomal membrane injury reduction in these treatments. This may have been caused because the concentration of this cation still remained high in comparision with its concentration in the original seminal plasma. We note too that the EDTA did not presented deleterious effects on the spermatozoa inside the evaluated parameters. / Um dos principais fatores deletérios, inerentes ao processo de congelamento de sêmen canino, é a grande quantidade de lesões de membranas espermáticas observada ao descongelamento. O congelamento induz a desestabilização das membranas celulares e alterações na conformação de receptores e canais iônicos, promovendo influxo de cálcio para o citosol, aumentando a chance de ocorrer prematuramente a reação acrossomal (RA), o que pode inviabilizar a fertilização do ovócito. O cálcio é reconhecido como o principal agente indutor da RA em espermatozoides de mamíferos. Não existem relatos recentes sobre meios de congelamento de sêmen de cão que contenham concentrações de cálcio preventivas à RA prematura. Os objetivos deste estudo foram avaliar quantitativamente a concentração dos cátions cálcio, sódio e potássio e da enzima fosfatase alcalina nas frações dos ejaculados de cães e também testar o efeito da redução da quantidade de cálcio no meio de congelamento utilizando o EDTA como quelante. Utilizou-se ejaculados de três cães mestiços, coletando em separado a fração rica em espermatozoides (FR) e a fração prostática (FP). Ambas foram avaliadas por espectrofotometria para aferição das concentrações dos cátions e da FA, assim como os meios de congelamento utilizados. O sêmen fresco foi avaliado por meio de testes clássicos (vigor, motilidade, hiposmótico e morfologia espermática) e o restante foi dividido em três alíquotas para diluição em meio base de congelamento tris-citrato- gema de ovo com glicerol e equex, meio básico contendo 0,1% de EDTA e meio básico contendo 0,25% de EDTA. O cátion estudado que se apresentou mais abundante no plasma seminal foi o sódio, seguido pelo potássio e o cálcio, tanto na FR quanto na FP, não havendo diferença entre as concentrações em ambas as frações (p >0,05). A FA obtida na FR foi maior que a obtida na FP (p<0,05). Observou-se elevada concentração de cálcio no meio base de congelamento, a qual foi reduzida nos tratamentos com EDTA (p<0,05). Houve efeitos deletérios em todos os parâmetros analisados no sêmen descongelado em comparação com o sêmen fresco (vigor, motilidade, integridade de membrana plasmática e morfologia). Não foi observada diferença na avaliação de lesões nas membranas plasmática e acrossomal com uso de sondas fluorescentes entre os meios com diferentes concentrações de EDTA (p>0,05). Embora o uso de EDTA tenha reduzido o cálcio extracelular, a concentração deste cátion permaneceu alta em comparação com sua concentração original no plasma seminal, fator que pode ser responsável pela não redução de lesões de membrana acrossomal nos tratamentos com EDTA. Por outro lado o EDTA não apresentou efeito deletério sobre os espermatozoides de acordo com os parâmetros avaliados.