Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Orchids are considered the oldest among the ornamental species, and are herbaceous and perennial plants of high commercial value. The objective of this work was to develop protocols for in vitro conservation using the slow growth technique, and acclimatization of species of the subfamily Epidendroideae (Orchidaceae) of Sergipe State. The experiments were conducted in the Laboratory of Tissue Culture and Plant Breeding, Department of Agronomic Engineering, Federal University of Sergipe. We conducted two conservation experiments, both in a completely randomized design, the first in a 4x3x2 factorial scheme, testing four concentrations of salts of MS medium (100%, 75%, 50%, 25% salts), three species (Catasetum macrocarpum, Oeceoclades maculata and Polystachya estrellensis) and two temperatures (18 and 25ºC), and the second in a 3x3x2 factorial scheme, testing three combinations of carbon sources and osmotic regulators (20 g.L-1 sucrose, 10 g.L-1 sucrose + 5 g.L-1 mannitol, 10 g.L-1 sucrose + 5 g.L-1 sorbitol), three species (C. macrocarpum, O. maculata and P. estrellensis) and two temperatures (18 and 25ºC). For acclimatization, the experiment also was conducted in a completely randomized design, testing eight substrates [sand and earthworm castings (4:1); sand, coconut coir and earthworm castings (2:2:1); sand, crushed pine bark and earthworm castings (2:2:1); sand, crushed pine bark, coconut coir and earthworm castings (2:1:1:1); sand; sand and coconut coir (1:1); sand and crushed pine bark (1:1); sand, crushed pine bark and coconut coir (2:1:1)] and two species (O. macrocarpum and C. maculata). For in vitro conservation of C. macrocarpum, O. maculata and P. estrellensis for a period of 450 days, we should use culture medium containing 25% of MS salts at a temperature of 25°C or 20 g.L-1 of sucrose at 25°C. Acclimatization of micropropagated seedlings of C. macrocarpum can be performed using sand, crushed pine bark and earthworm castings (2:2:1) as the substrate, and for O. maculata we recommend to use only sand. / As orquídeas são consideradas as mais antigas entre as espécies ornamentais, sendo plantas herbáceas e perenes e de alto valor comercial. Diante disso objetivou-se com o presente trabalho desenvolver protocolos de conservação in vitro sob crescimento lento e aclimatização de espécies da subfamília Epidendroideae (Orchidaceae) do Estado de Sergipe. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos e Melhoramento Vegetal do Departamento de Engenharia Agronômica (DEA) da Universidade Federal de Sergipe (UFS). Foram realizados dois experimentos de conservação, ambos em delineamento inteiramente casualizado, sendo o primeiro em esquema fatorial 4x3x2, testando quatro concentrações de sais do meio MS (100%, 75%, 50%, 25% dos sais), três espécies (Catasetum macrocarpum, Oeceoclades maculata e Polystachya estrellensis) e duas temperaturas (18 e 25ºC), e o segundo em fatorial 3x3x2, testando três combinações de fontes de carbono e reguladores osmóticos (20 g.L- 1 de sacarose; 10 g.L-1 de sacarose + 5 g.L-1 de manitol; 10 g.L-1 de sacarose + 5 g.L-1 de sorbitol), três espécies (C. macrocarpum, O. maculata e P. estrellensis) e duas temperaturas (18 e 25ºC). Para a aclimatização o experimento também foi implantado em delineamento inteiramente casualizado, testando oito misturas de substratos [areia e húmus de minhoca (4:1); areia, pó de coco e húmus de minhoca (2:2:1); areia, casca de pinus triturada e húmus de minhoca (2:2:1); areia, casca de pinus triturada, pó de coco e húmus de minhoca (2:1:1:1); areia; areia e pó de coco (1:1); areia e casca de pinus triturada (1:1); areia, casca de pinus triturada e pó de coco (2:1:1)] e duas espécies (C. macrocarpum e O. maculata). Para conservação in vitro de C. macrocarpum, O. maculata e P. estrellensis por um período de 450 dias, deve-se utilizar meio de cultura contendo 25% dos sais MS à temperatura de 25ºC ou 20 g.L-1 de sacarose à 25ºC. A aclimatização de plântulas de C. macrocarpum pode ser realizada utilizando areia : casca de pinus triturada : húmus de minhoca (2:2:1) como substrato e para O. maculata recomenda-se somente a utilização de areia.