As indústrias farmacêuticas que utilizam salas limpas, em seus processos produtivos, devem controlar ao máximo o nível de contaminantes microbiológicos, baseada na legislação RDC 210 que determina o cumprimento das diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico das Boas Práticas para a Fabricação de Medicamentos. Diante deste cenário, a proposta deste trabalho é avaliar o processo de fumigação com o reagente formaldeído, para a limpeza e desinfecção de salas limpas do Instituto de Tecnologia de Imunobiológicos Bio-Manguinhos. Então, foram desenvolvidas as seguintes etapas: diagnóstico com as indústrias farmacêuticas para traçar um perfil quanto ao uso da fumigação; quantificação de resíduos gerados; avaliação da exposição dos operadores ao formaldeído que é cancerígeno e acompanhamento dos resultados do monitoramento ambiental do ar e de superfícies, inicialmente na sala limpa do SEFBC, cuja atividade principal é a formulação de vacinas bacterianas e biofármacos, após a implantação do espaçamento da fumigação. Os resultados discutidos na presente dissertação mostraram, que a maior parte das indústrias farmacêuticas, não realiza a desinfecção por intermédio da fumigação e que o resíduo gerado neste processo é o mais crítico. E, sobretudo, o monitoramento microbiológico do ar e de superfícies da sala limpa do SEFBC, a partir da metodologia adotada de espaçamento da fumigação, comprovou que não é necessário o emprego deste processo de forma rotineira, para garantir os níveis exigidos de limpeza e desinfecção da respectiva área / Pharmaceutical industries that use clean rooms for their productive processes, must control to a maximum the level of microbiological contaminants, based on RDC 210 legislation that determines the fulfillment of lines in the directions established by the Technical Regulation Program for a Good Medicine Manufacturing. Ahead to this scene, the purpose of this work was to evaluate the process of fumigation with reacting formaldehyde, for the cleanness and disinfection of clean rooms of the Bio-Manguinhos Institute of Technology of Imunobiológicos. Then, the following stages had been developed: diagnosis with the pharmaceutical industries in order to get a scenario on the use of fumigation; quantification of the residues generated; evaluation of the exposition of operators to formaldehyde, a cancerigenous agent, and screening of the results of the environment monitoring of the air and surfaces, initially in the clean room of the SEFBC, in the areas of biopharmaceuticals formulation, and after a proper implementation of a fumigation process, at pre-defined intervals. The results thus obtained showed that most of the pharmaceutical industries no longer use disinfection for fumigation and that the residues generated in this process is the most critical problem. The overall microbiological monitoring of the air and surfaces of SEFBC clean room, according to the proposed methodology for fumigation, proved that the use of this process as a routine is not essential to guarantee the demanded levels of cleanness and disinfection of the respective areas

As indústrias farmacêuticas que utilizam salas limpas, em seus processos produtivos, devem controlar ao máximo o nível de contaminantes microbiológicos, baseada na legislação RDC 210 que determina o cumprimento das diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico das Boas Práticas para a Fabricação de Medicamentos. Diante deste cenário, a proposta deste trabalho é avaliar o processo de fumigação com o reagente formaldeído, para a limpeza e desinfecção de salas limpas do Instituto de Tecnologia de Imunobiológicos Bio-Manguinhos. Então, foram desenvolvidas as seguintes etapas: diagnóstico com as indústrias farmacêuticas para traçar um perfil quanto ao uso da fumigação; quantificação de resíduos gerados; avaliação da exposição dos operadores ao formaldeído que é cancerígeno e acompanhamento dos resultados do monitoramento ambiental do ar e de superfícies, inicialmente na sala limpa do SEFBC, cuja atividade principal é a formulação de vacinas bacterianas e biofármacos, após a implantação do espaçamento da fumigação. Os resultados discutidos na presente dissertação mostraram, que a maior parte das indústrias farmacêuticas, não realiza a desinfecção por intermédio da fumigação e que o resíduo gerado neste processo é o mais crítico. E, sobretudo, o monitoramento microbiológico do ar e de superfícies da sala limpa do SEFBC, a partir da metodologia adotada de espaçamento da fumigação, comprovou que não é necessário o emprego deste processo de forma rotineira, para garantir os níveis exigidos de limpeza e desinfecção da respectiva área / Pharmaceutical industries that use clean rooms for their productive processes, must control to a maximum the level of microbiological contaminants, based on RDC 210 legislation that determines the fulfillment of lines in the directions established by the Technical Regulation Program for a Good Medicine Manufacturing. Ahead to this scene, the purpose of this work was to evaluate the process of fumigation with reacting formaldehyde, for the cleanness and disinfection of clean rooms of the Bio-Manguinhos Institute of Technology of Imunobiológicos. Then, the following stages had been developed: diagnosis with the pharmaceutical industries in order to get a scenario on the use of fumigation; quantification of the residues generated; evaluation of the exposition of operators to formaldehyde, a cancerigenous agent, and screening of the results of the environment monitoring of the air and surfaces, initially in the clean room of the SEFBC, in the areas of biopharmaceuticals formulation, and after a proper implementation of a fumigation process, at pre-defined intervals. The results thus obtained showed that most of the pharmaceutical industries no longer use disinfection for fumigation and that the residues generated in this process is the most critical problem. The overall microbiological monitoring of the air and surfaces of SEFBC clean room, according to the proposed methodology for fumigation, proved that the use of this process as a routine is not essential to guarantee the demanded levels of cleanness and disinfection of the respective areas

Orientador: Jose de Assis Fonseca Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Petrus_RodrigoRodrigues_D.pdf: 1772681 bytes, checksum: a2e739a7a3e2168d1c5de3ebe70fed22 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo desta pesquisa consistiu na adaptação e avaliação do desempenho de um sistema asséptico piloto para leite fluido em garrafa plástica. O sistema foi avaliado através da identificação e monitoração sistemática de pontos de controle do processo, testes de esterilidade comercial, análises sensorial e físico-química do produto e avaliação da embalagem. Os pontos de controle foram monitorados antes e simultaneamente aos processamentos, a saber: tratamento térmico do leite; conformidade operacional da sala de envase, incluindo pressurização, taxa de movimentação de ar, contagem de partículas totais e microrganismos no ar e avaliação de limpeza e sanificação de superfícies; análise microbiológica da água de enxágüe da linha de processamento e envase, análise das embalagens e de sua água de enxágüe. Quatro lotes de 150L de leite com pH próximo a 6,7 foram processados entre 135 a 144ºC durante 10s em um trocador de calor a placas e acondicionados assepticamente em garrafas de polietileno de alta densidade (PEAD) de 500mL, em uma sala limpa ISO classe 7. A assepsia das embalagens foi feita através de aspersão de uma mistura contendo 0,5% de ácido peracético e 0,8% de peróxido de hidrogênio a 30ºC/10s. O leite processado através do sistema asséptico piloto avaliado foi comparado ao leite longa vida comercial em embalagens cartonadas e em garrafas plásticas de PEAD de alta barreira, aplicando-se testes de aceitação sensorial. Os resultados da avaliação dos pontos de controle do processo indicaram um bom desempenho apresentado pelo sistema desenvolvido, justificado pelas baixas contagens ou ausência de microrganismos nos pontos avaliados. Dos 4 lotes processados, 2 atingiram a esterilidade comercial, baseado nos critérios físico-químicos e microbiológicos adotados. A vida útil do produto, estimada através de testes sensoriais, atingiu 4 semanas para os dois primeiros lotes produzidos, 8 semanas para o lote 3 e 11 semanas para o lote 4. A opacidade das embalagens utilizadas na pesquisa foi de 90%, inferior a opacidade das embalagens comerciais, que foi de 100%. Portanto, a barreira à luz foi considerada insuficiente para a embalagem em avaliação, em virtude da elevada sensibilidade do leite à fotoxidação. Concluiu-se que o sistema asséptico piloto avaliado correspondeu às expectativas de desempenho, devendo, entretanto, ser submetido à implementação de melhorias em sua infra-estrutura para que possa ser eventualmente disponibilizado para processamentos em pequena escala, visando a produção de leite comercialmente estéril acondicionado em garrafas plásticas / Abstract: The objective of this research was the adaptation and performance evaluation of a pilot aseptic system for liquid milk filled into plastic bottles. The system was evaluated by identifying and systematically monitoring the process control points, by commercial sterility tests, sensory, physical and chemical analyses of the product and an evaluation of the packaging. The control points were monitored before and during process as follows: heat treatment of the milk; operational conformity during filling in the aseptic room including pressurization, air movement rate, total and viable particle count and evaluation of surface cleanliness and sanitation; microbiological analyses of the rinsing waters used in the process and filling lines and an analysis of the packages and their rinsing water. Four 150L batches of milk with pH values of about 6.7 were heat processed between 135 and 144°C for 10s in a plate heat exchanger and filled aseptically into 500mL high density polyethylene (HDPE) bottles in an ISO class 7 clean room. The aseptic condition of the bottles was obtained by spraying with a mixture containing 0.5% peracetic acid and 0.8% hydrogen peroxide for 10s at 30°C. The processed milk using the pilot aseptic system was compared by sensory analysis with commercial long life milk filled into carton-type packages and plastic bottles. The results of the microbial evaluation of the control points indicated good performance of the system developed based on the low counts and absence of microorganisms at some evaluated points. Of the 4 batches processed, 2 attained commercial sterility based on the physical-chemical and microbiological criteria adopted. The shelf life of the product, estimated according to the sensory tests, was 4 weeks for the first two batches processed, 8 for batch 3 and 11 for batch 4. The opacity of the packaging used was 90%, lower than that of commercial packaging, which was 100%. Thus the light barrier property was considered inadequate considering the high sensitivity of milk to the photooxidation. It was concluded that the pilot aseptic system evaluated corresponded to the performance expectations, however, it should be submitted to some implementations of improvements in its infrastructure in order to be recommended for small-scale commercially ile milk production / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

As salas limpas são amplamente empregadas em indústrias farmacêuticas destinadas a fabricar medicamentos e dispositivos estéreis. Nós empregamos coloração de Gram e cromatografia gasosa de ésteres metílicos de ácidos graxos extraídos de células íntegras de microrganismos ambientais para caracterizar e identificar bactérias isoladas em 50 salas limpas diferentes projetadas para a fabricação de medicamentos estéreis e para fornecer um perfil de ácidos graxos das espécies mais comuns de bactérias isoladas. Uma análise estatística nos permitiu corroborar estudos anteriores e confirmar que cocos Gram positivos é o grupo mais relevante de microrganismos presentes nas salas limpas avaliadas. A espécie predominante é Micrococcus luteus, isolada de salas classe B e de pessoal, seguida de Staphylococcus cohnii em classe C, Bacillus subtilis em classe A e Staphylococcus hominis em classe D. Os perfis de ácidos graxos destas bactérias são, na maioria, consistentes com as bibliotecas padrão. Nós também tentamos estabelecer uma correlação entre a estação do ano e o nível de contaminação, embora a análise de variância tenha mostrado que não há diferença significativa entre o nível de contaminação no decorrer das estações. Além do mais, análises repetidas com um aumento gradual de massa celular nos permitiram concluir que a quantidade ótima de material celular necessário para extração de ácidos graxos varia com a espécie de bactéria. Finalmente, um estudo comparativo de algumas bactérias incubadas em diferentes temperaturas confirmou que o perfil de ácidos graxos é altamente influenciado pela temperatura. Portanto, nós acreditamos que este trabalho possa contribuir para identificar e compreender a comunidade bacteriana de algumas salas limpas farmacêuticas. / Clean rooms are largely employed in pharmaceutical companies whose purpose is to produce sterile drugs and devices. We employed Gram staining and gas chromatography of fatty acid methyl esters extracted from whole cells of environmental isolates to characterize and identify bacteria isolated in each of 50 different clean rooms designed for the manufacturing of sterile medicinal products and to provide a fatty acid profile of the most common species of isolated bacteria. Statistical analysis allowed us to corroborate previous studies and confirm that Gram-positive cocci are the most relevant group of microorganisms inside the studied clean rooms. The predominant species is Micrococcus luteus, isolated from Grade B zones and from personnel, followed by Staphylococcus cohnii in Grade C, Bacillus subtilis in Grade A and S. hominis in Grade D. Fatty acid profiles of these bacteria are, to a great extent, consistent with standard libraries. We also attempted to establish a correlation between season and level of contamination, although variance analysis showed that there is no significant difference on the level of contamination throughout seasons. Furthermore, repeated analysis with a gradual increase in cell mass allowed us to conclude that the optimal amount of cell material depends on the species of the bacteria studied. Finally, a comparative study with some bacteria incubated in different temperatures confirmed that fatty acid profile is highly influenced by temperature. Therefore, we believe that this work can contribute to identify and understand the bacterial community of some pharmaceutical clean rooms.

As salas limpas são amplamente empregadas em indústrias farmacêuticas destinadas a fabricar medicamentos e dispositivos estéreis. Nós empregamos coloração de Gram e cromatografia gasosa de ésteres metílicos de ácidos graxos extraídos de células íntegras de microrganismos ambientais para caracterizar e identificar bactérias isoladas em 50 salas limpas diferentes projetadas para a fabricação de medicamentos estéreis e para fornecer um perfil de ácidos graxos das espécies mais comuns de bactérias isoladas. Uma análise estatística nos permitiu corroborar estudos anteriores e confirmar que cocos Gram positivos é o grupo mais relevante de microrganismos presentes nas salas limpas avaliadas. A espécie predominante é Micrococcus luteus, isolada de salas classe B e de pessoal, seguida de Staphylococcus cohnii em classe C, Bacillus subtilis em classe A e Staphylococcus hominis em classe D. Os perfis de ácidos graxos destas bactérias são, na maioria, consistentes com as bibliotecas padrão. Nós também tentamos estabelecer uma correlação entre a estação do ano e o nível de contaminação, embora a análise de variância tenha mostrado que não há diferença significativa entre o nível de contaminação no decorrer das estações. Além do mais, análises repetidas com um aumento gradual de massa celular nos permitiram concluir que a quantidade ótima de material celular necessário para extração de ácidos graxos varia com a espécie de bactéria. Finalmente, um estudo comparativo de algumas bactérias incubadas em diferentes temperaturas confirmou que o perfil de ácidos graxos é altamente influenciado pela temperatura. Portanto, nós acreditamos que este trabalho possa contribuir para identificar e compreender a comunidade bacteriana de algumas salas limpas farmacêuticas. / Clean rooms are largely employed in pharmaceutical companies whose purpose is to produce sterile drugs and devices. We employed Gram staining and gas chromatography of fatty acid methyl esters extracted from whole cells of environmental isolates to characterize and identify bacteria isolated in each of 50 different clean rooms designed for the manufacturing of sterile medicinal products and to provide a fatty acid profile of the most common species of isolated bacteria. Statistical analysis allowed us to corroborate previous studies and confirm that Gram-positive cocci are the most relevant group of microorganisms inside the studied clean rooms. The predominant species is Micrococcus luteus, isolated from Grade B zones and from personnel, followed by Staphylococcus cohnii in Grade C, Bacillus subtilis in Grade A and S. hominis in Grade D. Fatty acid profiles of these bacteria are, to a great extent, consistent with standard libraries. We also attempted to establish a correlation between season and level of contamination, although variance analysis showed that there is no significant difference on the level of contamination throughout seasons. Furthermore, repeated analysis with a gradual increase in cell mass allowed us to conclude that the optimal amount of cell material depends on the species of the bacteria studied. Finally, a comparative study with some bacteria incubated in different temperatures confirmed that fatty acid profile is highly influenced by temperature. Therefore, we believe that this work can contribute to identify and understand the bacterial community of some pharmaceutical clean rooms.

A espectrometria de massas baseada na tecnologia MALDI-TOF (do inglês, matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight) (MALDI-TOF MS) tem sido cada vez mais incorporada à rotina de identificações microbiológicas nos laboratórios farmacêuticos de controle de qualidade, principalmente para as atividades do Programa de Monitoramento Ambiental de Salas Limpas. Isso porque o longo tempo necessário para a obtenção dos resultados por meio de métodos convencionais tem incentivado a procura por técnicas que permitam métodos rápidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a adequação da técnica MALDI-TOF MS para a identificação de bactérias isoladas do ambiente de salas limpas utilizadas em algumas etapas da produção de uma vacina viral. Treze espécies bacterianas conhecidas, normalmente isoladas das salas limpas estudadas, e cinco cepas ATCC foram identificadas pela técnica MALDI-TOF MS e por uma técnica bioquímica (BBL Crystal®). O desempenho da técnica MALDI-TOF MS foi superior ao da técnica bioquímica na identificação correta das espécies bacterianas (88,89% e 38,89%, respectivamente) e produziu menos identificações não confiáveis (5,55% e 22,22%, respectivamente). Os resultados evidenciaram que a técnica MALDI-TOF MS pode ser implementada para identificação rotineira de bactérias em um laboratório de controle de qualidade farmacêutico. Entretanto, a dependência de bases de dados exige estudos adicionais de isolados não identificados e, se apropriado, a adição destes a uma base de dados interna. O aperfeiçoamento de métodos de identificação microbiana é muito relevante no contexto de salas limpas, pois permitem ações corretivas e proativas essenciais para garantir a segurança microbiológica do processamento asséptico. / Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been increasingly introduced in routine microbiological identifications of pharmaceutical quality control laboratories, mainly for the activities of the Environmental Monitoring Program of Clean Rooms. The long time needed to obtain the results through conventional methods has stimulated the search for techniques that allow rapid methods, as MALDI-TOF MS. Thus, the objective of this work was to evaluate the suitability of the MALDI-TOF MS technique for the identification of bacteria isolated from the environment of clean rooms used in some stages of the production of a viral vaccine. Thirteen bacterial species commonly isolated from clean rooms studied and five strains ATCC were identified by MALDI-TOF MS technique and by a biochemical technique (BBL Crystal® System). Performance of MALDI-TOF MS was better than biochemical technique for correct species identifications (88.89% and 38.89%, respectively) and produced fewer unreliable identifications (5.55% and 22.22%, respectively). MALDI-TOF MS can be implemented for routine identification of bacteria in a pharmaceutical quality control laboratory. However, as a database-dependent system, maybe some isolated not identified by this technique must be additionally studied and, if appropriate, added to an in-house database.

A espectrometria de massas baseada na tecnologia MALDI-TOF (do inglês, matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight) (MALDI-TOF MS) tem sido cada vez mais incorporada à rotina de identificações microbiológicas nos laboratórios farmacêuticos de controle de qualidade, principalmente para as atividades do Programa de Monitoramento Ambiental de Salas Limpas. Isso porque o longo tempo necessário para a obtenção dos resultados por meio de métodos convencionais tem incentivado a procura por técnicas que permitam métodos rápidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a adequação da técnica MALDI-TOF MS para a identificação de bactérias isoladas do ambiente de salas limpas utilizadas em algumas etapas da produção de uma vacina viral. Treze espécies bacterianas conhecidas, normalmente isoladas das salas limpas estudadas, e cinco cepas ATCC foram identificadas pela técnica MALDI-TOF MS e por uma técnica bioquímica (BBL Crystal®). O desempenho da técnica MALDI-TOF MS foi superior ao da técnica bioquímica na identificação correta das espécies bacterianas (88,89% e 38,89%, respectivamente) e produziu menos identificações não confiáveis (5,55% e 22,22%, respectivamente). Os resultados evidenciaram que a técnica MALDI-TOF MS pode ser implementada para identificação rotineira de bactérias em um laboratório de controle de qualidade farmacêutico. Entretanto, a dependência de bases de dados exige estudos adicionais de isolados não identificados e, se apropriado, a adição destes a uma base de dados interna. O aperfeiçoamento de métodos de identificação microbiana é muito relevante no contexto de salas limpas, pois permitem ações corretivas e proativas essenciais para garantir a segurança microbiológica do processamento asséptico. / Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been increasingly introduced in routine microbiological identifications of pharmaceutical quality control laboratories, mainly for the activities of the Environmental Monitoring Program of Clean Rooms. The long time needed to obtain the results through conventional methods has stimulated the search for techniques that allow rapid methods, as MALDI-TOF MS. Thus, the objective of this work was to evaluate the suitability of the MALDI-TOF MS technique for the identification of bacteria isolated from the environment of clean rooms used in some stages of the production of a viral vaccine. Thirteen bacterial species commonly isolated from clean rooms studied and five strains ATCC were identified by MALDI-TOF MS technique and by a biochemical technique (BBL Crystal® System). Performance of MALDI-TOF MS was better than biochemical technique for correct species identifications (88.89% and 38.89%, respectively) and produced fewer unreliable identifications (5.55% and 22.22%, respectively). MALDI-TOF MS can be implemented for routine identification of bacteria in a pharmaceutical quality control laboratory. However, as a database-dependent system, maybe some isolated not identified by this technique must be additionally studied and, if appropriate, added to an in-house database.