Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / P. salmonis es la bacteria responsable de la enfermedad denominada “piscirickettsiosis”, una de las principales amenazas para la industria acuícola de salmones en Chile. La gran tasa de mortalidad que produce la enfermedad en los sistemas productivos justifica la necesidad de entender cómo el agente es capaz de diseminarse y de persistir en los peces. Es así que los métodos moleculares se presentan como una vía rápida de diagnóstico mediante el uso de sus diferentes herramientas. Mediante el uso de herramientas de alineamiento de secuencias genéticas, se logró identificar la secuencia codificante, nunca antes descrita, del gen constitutivo sdhA, ampliamente estudiado en diversos organismos y utilizado en estudios como marcador de viabilidad celular y bacteriana. El presente estudio, utilizando qPCR realizó la comparación de la expresión del gen sdhA en los tejidos hepático, renal, esplénico y cultivo celular infectado, mostrando una expresión significativamente mayor en riñón y cultivo celular infectado, y por otra parte, familias de peces Salmo salar con una susceptibilidad diferencial a la enfermedad / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1120608

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El virus de la anemia infecciosa del salmón (ISAv; Orthomixoviridae: Isavirus), es un agente etiológico que produce un cuadro clínico sistémico y letal únicamente en el salmón del Atlántico (Salmo salar), caracterizado por causar anemia grave y hemorragia de diversos órganos. Los primeros casos de esta enfermedad se reportaron en Noruega, en 1984. Desde el mes de julio de 2007 se han reportado continuos brotes de la enfermedad en el territorio nacional, centrándose en las regiones X y XI. Durante el periodo comprendido entre los meses de enero a diciembre del año 2008, se muestrearon branquias, riñón anterior y corazón, de distintos centros de agua dulce y de mar de una empresa salmonera con centros ubicados entre la Región del Maule (VII) hasta la Región de Aysén del General Carlos Ibáñez del Campo (XI). Estas muestras fueron luego analizadas por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa reversa en tiempo real (Real time RT-PCR), con el fin de detectar la presencia del virus ISA. Además, se recolectó información epidemiológica (indicadores productivos y ambientales) durante el muestreo y posteriormente a éste, a través de los registros computarizados de cada centro productivo. De esta forma fue posible establecer así una completa base de datos para ser analizada estadísticamente. Se encontró una relación inversamente proporcional a la presentación de brote de ISAv asociado a las siguientes variables: Peso al brote (p=0,047), peso al traslado (p=0,032) y promedio diario de oxígeno disuelto (p=0,025). Las variables que se relacionaron directamente proporcional con la presentación de brotes fueron: días de ayuno (p=0,006); carga promedio de Caligus rogercressegy por pez y por centro (p=0,011), cantidad de meses en producción en mar por generación antes de presentar brote (p=0,004 y p=0,005); y mortalidad acumulada a las ocho semanas antes del brote (p=0,03). Además, se observó una mayor incidencia de la enfermedad durante los meses de primavera y se correlacionó positivamente el índice de predación de los sitios de cultivo con los días de ayuno (p=0,011)

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La anemia infecciosa del salmón (ISA) es una enfermedad sistémica causada por un orthomyxovirus, la cual tiene un fuerte impacto económico-productivo en el salmón del Atlántico. Actualmente, existen comercialmente disponibles varias vacunas contra ISA, sin embargo, todas estas formulaciones son de carácter inyectable, generando estrés en los peces y dejándolos susceptibles a efectos adversos producto de la inyección y el manejo. En el presente trabajo, se evaluó una vacuna experimental contra ISA de entrega oral, que contiene como antígenos la hemoaglutinina-esterasa y la proteína de fusión del virus. Los resultados indican que la vacunación oral es capaz de inducir una protección efectiva frente al desafío con un aislado chileno de alta virulencia, correlacionado con la inducción de anticuerpos IgM específicos contra el virus. Por otra parte, la vacuna fue incapaz de modular la expresión del transcrito con rol antiviral Mx, indicando la importancia de la respuesta humoral en la supervivencia a la enfermedad. Este estudio provee nuevo conocimiento sobre la protección entregada por una vacuna oral contra ISA, siendo de ayuda en el desarrollo de nuevos métodos preventivos o validación de los ya existentes / Laboratorio de Investigación y Desarrollo Biológicos CENTROVET

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La Necrosis Pancreática Infecciosa (IPN) es una enfermedad viral altamente contagiosa que afecta a los salmónidos, causando grandes mortalidades en individuos jóvenes. Se ha observado que la resistencia a esta enfermedad tiene un fuerte componente genético, identificado por un loci de rasgos cuantitativos (QTL) dentro del grupo de ligamiento 21. El objetivo de este trabajo consiste en identificar huellas de selección asociadas con la resistencia a IPN en poblaciones chilenas de salmón del Atlántico. Para esto se genotiparon cuatro poblaciones, calculando el desequilibrio de ligamiento (LD) dentro del grupo de ligamiento 21, buscando si existían diferencias para la región asociada al QTL. Los resultados mostraron que existen diferencias significativas en esta región en una de las poblaciones. De este modo se podría concluir que ésta población se vio sometida a un proceso selectivo de el o los genes presentes en la región responsable de la resistencia a IPN, modificando la estructura genética de la zona, presentando una huella de selección. Estos resultados muestran que ha existido un proceso selectivo para éste rasgo, que puede ser identificable a nivel del genoma. Sin embargo, es necesario tomar en cuenta la influencia de un proceso de admixtura, por lo que los resultados deben tomarse con precaución

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / A fines de 1998 y principios de 1999 comienzan a aumentar significativamente el número de casos de peces salmonídeos de cultivo con Deformaciones en la Mandíbula, provocando gran impacto y desconcierto en los diferentes centros de cultivo del sur de nuestro país. La enfermedad se manifestó en la fase de engorda en mar afectando principalmente a la especie Salmo salar o comúnmente llamada Salmón del Atlántico. En este estudio observacional de tipo retrospectivo de casos y controles, se ha trabajado con 64 grupos de peces de Salmón del Atlántico, en los cuales se determinan posibles factores de riesgo asociados a la enfermedad, así como se obtiene una visión global de cómo repercute esta enfermedad en los centros afectados y su comportamiento en términos epidemiológicos. Dentro de los factores de riesgo se exploraron aquellos propios de los peces como origen de procedencia de la ova y cepas o variedades posiblemente relacionadas. También se analizaron factores ambientales como época o estación y temperatura del agua en su ingreso a la fase de mar. Aspectos de manejos de la industria como peso de ingreso de los peces, drogas administradas a la biomasa y, la relación entre las diferentes enfermedades que afectan a estos organismos y la deformación mandibular también fueron analizadas. Por último, se han hecho análisis simples del comportamiento de la enfermedad en torno a las características de la mortalidad de peces con DM, eficiencia de conversión alimentaria y rendimiento de estos grupos, reflejados en el peso promedio mensual de la masa

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La Pancreatitis Necrótica Infecciosa (IPN) es una enfermedad distribuida mundialmente que afecta a distintas especies de salmónidos, siendo uno de los más susceptibles el salmón del Atlántico (Salmo salar). En Chile, así como en otros países, es una de las principales causas de mortalidad, especialmente durante la fase de crianza de agua dulce. Considerando la importancia económica de dicha enfermedad para la salmonicultura nacional, el propósito de este estudio es determinar las fuentes de (co) variación genética de la resistencia a IPN y el peso corporal; y así estimar la respuesta correlacionada en resistencia debida a la selección directa por peso corporal de alevín. Se utilizó un modelo de estudio de desafío experimental en el Laboratorio de Virología de la Universidad de Santiago de Chile. Un total de 4.310 alevines (pertenecientes a 29 familias de propios hermanos) se enfrentó al virus del IPN (IPNv) mediante inmersión. La crianza inicial después de la incubación, se llevó a cabo en la Unidad Experimental de la “Universidad de Chile”, en Castro. Se utilizó un modelo bivariado para la estimación de los parámetros genéticos para peso corporal y resistencia a IPN (medida como días hasta la muerte). El peso corporal fue obtenido inmediatamente después de la muerte; mientras que la resistencia a IPN se consideró como una variable normal a través del tiempo. Se obtuvo varianza genética significativa tanto para peso corporal como resistencia a IPN, con heredabilidades que alcanzan a 0,66 ± 0,19 y 0,56 ± 0,32; respectivamente. Los valores relativamente grandes de estas estimaciones de los parámetros es probable que se deban por los efectos ambientales comunes. Una correlación genética significativa de -0,68 ± 0,11 se encontró entre ambas características. Los resultados muestran que seleccionar directamente por resistencia entregaría una respuesta correlacionada negativa para peso corporal; mientras que, la selección hecha antes de la fase de agua dulce para aumentar el peso corporal, tendría un gran impacto en disminuir la resistencia a IPN del salmón del Atlántico. / Proyecto CORFO-INNOVA (0CT6 PP-10)

Memoria para optar al título de Bioquímico / El desarrollo de la salmonicultura chilena ha sido acompañado por la aparición de una serie de patologías. Actualmente, la enfermedad infecciosa responsable de las mayores mortalidades y el consiguiente impacto económico en la industria, es la Septicemia Rickettsial de los Salmónidos (SRS) o piscirickettsiosis. Debido a que los tratamientos con antibióticos no han proporcionado un control eficaz de los brotes infecciosos, se han desarrollado vacunas como método de prevención contra la enfermedad. Sin embargo, la eficacia de vacunas comerciales basadas en bacterinas de Piscirickettsia salmonis, ha mostrado resultados variables, y la información sobre la efectividad de formulaciones experimentales basadas en proteínas recombinantes y en ácidos nucleicos en pruebas experimentales y de campo es escasa, lo cual pone de manifiesto la necesidad de investigar nuevas alternativas en el desarrollo de vacunas. El objetivo central de este estudio fue comparar el efecto de una formulación basada en complejos inmunes con P. salmonis inactivada con el de una formulación preparada con la bacterina libre, sobre el sistema inmune de salmón del Atlántico (Salmo salar). De esta forma, se evaluaron algunos parámetros de la respuesta inmune innata como el estallido respiratorio de los leucocitos y la actividad de la lisozima, los cuales no se habían estudiado previamente con este patógeno y en el modelo animal empleado. Además, se evaluó la respuesta inmune humoral adquirida, comparando el nivel de anticuerpos en peces inmunizados. La inmunización con complejos inmunes tuvo un efecto positivo sobre los mecanismos innatos, ya que indujo una mayor actividad de los leucocitos comparado con la bacterina libre, lo cual fue demostrado por el aumento de la actividad de la lisozima en suero, y la producción de ión superóxido. Por otro lado, no se detectaron diferencias significativas en la producción de anticuerpos entre los grupos inmunizados y el grupo control, y la respuesta observada en este grupo pudo deberse a la exposición previa de salmón del Atlántico a microorganismos que comparten estructuras antigénicas con P. salmonis, lo cual fue demostrado en el ensayo de aglutinación por la reactividad cruzada de los sueros con Arthrobacter sp. y Flavobacterium psychrophilum. En general, bajo las condiciones del estudio, la formulación con la bacterina libre mostró una tendencia a disminuir las respuestas innatas y adquiridas, sugiriendo un efecto inmunosupresor de P. salmonis en salmón del Atlántico. La estimulación de leucocitos de salmón in vitro, no mostró diferencias significativas entre los tratamientos con complejos inmunes y la bacterina libre. Sin embargo sugirió una respuesta dependiente de la dosis agregada. Para cumplir con los objetivos planteados fue necesario implementar una serie de técnicas inmunológicas que permitirán, en próximos estudios, correlacionar los resultados obtenidos en los distintos ensayos con el nivel de protección inducido y su duración, de manera que aumentará nuestro conocimiento de la inmunología de Salmo salar, y hará posible predecir la efectividad de vacunas experimentales en etapas tempranas posteriores a la inmunización / Development of Chilean salmon industry has been accompanied by the appearance of a series of diseases. Today, the infectious disease responsible of the highest mortalities and the resulting economic losses of the industry is salmonid rickettsial septicemia (SRS) or piscirickettsiosis. Because the antibiotic therapies have failed to provide an effective control system of outbreaks, vaccines have been developed as a prevention method. However, effectiveness of commercial vaccines based on P. salmonis bacterins, has shown variable results, and there is a lack of information about the effectiveness of experimental vaccines based on recombinant proteins or nucleic acids in laboratory and field trials, which reveals the need of research on new approaches in the field of vaccine development. The central aim of this study was to compare the effect of a formulation based in immune complexes of inactivated P. salmonis with the effect of another one prepared with the free bacterin, on the immune system of Atlantic salmon (Salmo salar) Therefore, some innate parameters as leucocyte respiratory burst and lysozyme activity, where evaluated. This parameters had not been previously studied with this pathogen and in the fish model employed. In addition, the adaptive humoral immune response was evaluated by comparing the antibody levels in immunized fish. Immunization with immune complexes had a positive effect on innate mechanisms, and led to a greater activity of leucocytes, which was shown by the increased lysozyme activity in serum, and superoxide anion production. On the other hand, statistically significant differences in antibody production were not detected between immunized and control groups, and the observed response inside this group may be due to previous exposure of Atlantic salmon to microorganisms that share antigenic structures with P. salmonis, which was shown by the crossreactivity of the assessed sera with Arthrobacter sp. and Flavobacterium psychrophilum in the agglutination assay. Under the conditions of this study, the free bacterin based formulation showed a tendency to diminish the innate and acquired immune responses, suggesting an immunosuppressive effect of P. salmonis on Atlantic salmon. In vitro stimulation of salmon leucocytes didn’t show significant differences between treatments with immune complexes or bacterin alone. However, it suggested a dose-dependent response. To achieve the aims of this study, it was necessary to develop several immunological techniques which will allow, in future researches, make a correlation between the obtained results of all this different assays with the induced protective level and its duration, in such a way that will increase our knowledge of Salmo salar immunology, and will allow the prediction of experimental vaccines effectiveness at early stages after immunization