Orientador: Maria Cecilia F. de Arruda Veiga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-22T02:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dellias_MarceloRicardoAzevedo_M.pdf: 2599557 bytes, checksum: 1561a28687d5f8265a515127973e21f7 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Trabalhos têm relacionado antiinflamatórios com alterações gástricas. Este trabalho foi realizado com o intuito de verificar a influência de antiinflamatórios esteróides (betametasona) e não esteróides (indometacina e diclofenaco de potássio) sobre a secreção gástrica de ratos. Quarenta ratos (Wistar), machos com 120 dias de idade, pesando em média 380g, foram submetidos a jejum de 72 horas, e a seguir anestesiados com éter, e submetidos à ligação do piloro e administração oral (intragástrica) de 0,5ml de soro fisiológico; 0,5ml de solução de indometacina (3mg/kg de peso); 0,5ml de solução de diclofenaco de potássio (2mg/kg de peso); O,5ml de solução de betametasona (O,5mg/kg de peso) respectivamente Grupos I, li, 111 e IV. Após 4 horas, os animais foram sacrificados e o estômago removido para coleta do suco gástrico, no qual foram avaliados os seguintes ítens: pH, volume, acidez livre, acidez total e atividade péptica. Resultados: Volume (ml) e pH: G-I ,01 e 1,44); G-II (8,08 e 1,08); G-III (6,83 e 1,27); G-IV (4,53 e 1,82; acidez livre e total (J.lEq/4h): G-I (434,75 e 572,34); G-II (907,26 e 1021,72); G~III (736,39 e 830,83); G-IV (339,15 e 458,17*); Atividade Péptica (UE/4h): G-I (6,32); G-II (4,21 *>. G-III(6,51); G-IV (5,24*>. Estatísticamente significativo em relação ao controle (50/0 ) - 1 UE = 0,2/-1 de pepsina. A indometacina interferiu na secreção ácida do estômago, induzindo um aumento significativo da acidez livre/total, e conseqüentemente, uma redução de pH e uma inibição da atividade péptica. A betametasona, da mesma forma afetou a secreção gástrica, induzindo um aumento de secreção ácida do estômago porém, em menor grau que a indometacina, e não interferiu na atividade péptica. Por outro lado o diclofenaco de potássio, não alterou a atividade péptica nem o volume de suco gástrico, mas a Urylentou, significativamente, o pH, indicando menor secreção ácida, embora a redução da acidez livre e total não tenha sido significativo em relação aos controles / Abstract: In an attempt to check the influence of anti-inflammatory on gastric alteration, a lot of work has been done. The present study was undertaken to verify the influence of steroidal (betametasone) and nonsteroidal (indomethacin and diclofenac of potassium) anti inflammatories on gastric secretion. Forty male rats (Wistar), with 120 days of age, weighting 380 g, were deprived of food but allowed free access to tap water for 72 hours. After that, they were anesthesiated with eter, and submitted not only to an operation to join their pyloros, but also to an oral admnistration (intragastrically) of 0,5ml of physiological serum; 0,5ml of indomethacin solution (3mg/kg of weight); 0,5ml of diclofenac of potassium solution (2mg/kg of weight); 0,5ml of betametasone solution (0,5mg/kg of weight); respectively Groups I, 11, 111 and IV. After 4 hour, the animais were sacrificed, their stomachs were removed, and the gastric juice was colected to be analysed second the following itens: pH, volume, free acidity, total acidity and peptic activity. Results: Volume (ml) and pH: G-I (5,01 and 1,44); G-II (8,08* and 1,08 / Mestrado / Fisiologia e Biofisica do Sistema Estomatognatico / Mestre em Ciências

Orientador: Maria Cecilia Ferraz de Arruda Veiga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-25T21:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kawaguchi_JulioTakashi_M.pdf: 2082933 bytes, checksum: 2aa0ae6c42fa4bfc4cdc5c67154e69b3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Muitos estudos têm relacionado os antiinflamatórios com alterações gástricas. Com o objetivo de apresentar alguma contribuição nesta área de pesquisa é que nos propusemos a investigar a influencia de antiinflamatórios sobre a secreção gástrica de ratos. Foram utilizados neste experimento, quarenta ratos (Wistar), machos com 120 dias de idade, pesando em média 350 gramas, os quais foram submetidos a jejum de 72 horas, e a seguir anestesiados com éter, e submetidos à ligação do piloro. Após 4 horas foi coletada a secreção gástrica para análise. O soro fisiológico e as drogas forma administradas por sonda gástrica, num volume de 0,5 ml, após a ligadura do piloro, de acordo com as seguinte distribuição:GRUPO I - Soro Fisiológico; GRUPO TI - Indometacina; GRUPO li Detlazacort; GRUPO N - Meloxicam. Após o experimento, o suco gástrico foi coletado para a avaliação do pH, volume, acidez livre, acidez total e atividade péptica.Resultados: Volume (ml) e pH : G-I ( 5,80 e 1,72 ); G-TI ( 9,72 e 1,18 ); G-li ( 8,79 e 2,11 ); G-N ( 6,63 e 2,13 ) Acidez livre e total (llEq/4h): G-I - ( 438,08 e 572,70 ); G-TI - ( 878,02 e 989,00); G-li - ( 462,97 e 600,97); G-N - (375,37 e 460,36 ) Atividade Péptica ( UE/4h ): G-I- ( 6,25 ); G-TI - ( 4,17 ); G-li - ( 5,87 ); G-N - ( 4,76 ). A I I indometacina aumentou o volume do suco gástrico reduziu o pH e aumentou a acidez livre e acidez total, sinalizando claramente, para uma indução a secreção clorídrica pelas células parietais , e reduziu significativamente a atividade péptica. O meloxicam não aumentou o volume de suco gástrico e não alterou a atividade péptica e aumentou significativamente o pH, o que pode indicar uma redução na secreção gástrica ácida. O deflazacort aumentou o volume de suco gástrico e o pH e não apresentou diferença significativa em relação aos controles no que se refere a acidez livre e total. Da mesma forma que o meloxicam, o deflazacort não alterou a atividade péptica. Desta forma, no que se refere ao principal efeito adverso dos antiinflamatório, que é a agressividade a mucosa gástrica, dos antiinflamatórios testados neste trabalho, o meloxicam mostrou-se o menos efetivo em induzir alterações nos parâmetros da secreção gástrica analisados / Abstract: Many studies have established a relationship between anti-inflammatory medications and gastric reactions. Our objective is to contribute to this research area by investigating the influence ofanti-inflammatory medications on the gastric secretion of rats. Forty 120-day-old male Wistar rats were used. They weighed 350 grams and were submitted to a 72-hour fasting. Then, they were anesthetized with ether and had their pylorus ligated. After 4 hours, the gastric secretion was collected and taken to analysis. The physiological sodium chloride solution and the drugs were given via gastric probe after the pylorus ligature at a 0.5-ml-volume leveI, according to the following distribution: GROUP I - physiological sodium chloride solution; GROUP II - Indomethacin; GROUP li - Deflazacort; GROUP IV - Meloxicam. After the experiment, the gastric juice was collected and its pH, free acidity, total acidity and peptic acidity were evaluated. The results were: volume (ml) and pH: G-I (5,80 and 1,72), G-II (9,72 and 1,18), G-li (8,79 and 2,11), G-IV (6,63 and 2,13); free acidity and total acidity (lillq/4h): G-I - (438,08 and 572,70), G-II - (878,02 and 989,00), G-li - (462,97 and 600,97), G-IV - (375,37 and 460,36), peptic activity (UE/4h): G-I (6,25), G-II (4,17), G-ill (5,87), G-IV (4,76). Indomethacin made the gastric juice volume increase and the pH decrease and it also increased the free and total acidity evidencing a chlorinous secretion induction by the parietal cells and a peptic activity reduction. Meloxicam did not make the gastric juice volume increase or the peptic activity change, but it increased the pH significantly, what may indicate a reduction gastric secretion. Deflazacort increased the gastric juice volume and the pH, but the ftee and total acidity were not changed significantly in comparison to the controls. As Meloxicam, Deflazacort did not chage the peptic activity. Thus, regarding the main adverse reactions of the use of anti-inflammatory medications, which is aggression to the gastric mucus, among the medications tested in this work, Meloxicam presented the less changes in the gastric secretion parameters analyzed. / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / A tese de doutorado intitulada “Avaliação dos efeitos citotóxicos e antiproliferativos da secreção cutânea e de peptídeos bioativos do anuro Physalaemus nattereri (steindachner, 1863)” desenvolvida por Andréa Cruz e Carvalho sob a orientação da profa. Dra. Mariana S. Castro teve o apoio financeiro do CNPq (processos n°. 563972/2010-6, Edital MCT/CNPQ/FNDCT/FAPS/MEC/CAPES/PRÓ-CENTROOESTE nº 31/2010, n°. 302925/2012-0, Produtividade em Pesquisa - PQ – 2012 e n°. 407801-2013, Rede Centro-Oeste De Pós-Graduação , Pesquisa E Inovação - REDE PRÓ-CENTRO-OESTE), da FAPDF (processo n°. 193. 000.461/2011, Edital MCT/CNPQ/FNDCT/FAPS/MEC/CAPES/PRÓ-CENTRO-OESTE nº 31/2010), do CNPq por meio da concessão de bolsa de estudos (nível doutorado), da FINEP (CT-INFRA) E DA FUB-UNB. / As secreções cutâneas de anuros são fontes naturais de peptídeos antimicrobianos. A realização de novas pesquisas nessa área tem revelado que alguns peptídeos com atividade antimicrobiana também apresentam efeitos tóxicos sobre células tumorais. O objetivo do presente estudo foi investigar o potencial terapêutico da secreção cutânea de Physalaemus nattereri sobre células tumorais e determinar os mecanismos da ação citotóxica sobre céluluas de melanoma murino da linhagem B16F10. Nossos resultados demonstraram que a secreção bruta reduz a viabilidade de células B16F10, causando alterações na morfologia celular, (p.ex., arredondamento e encolhimento), ruptura da membrana plasmática, redução do potencial de membrana mitocondrial e parada do ciclo celular na fase S; tais mudanças em conjunto sugerem que as células tumorais morreram por apoptose. A secreção cutânea também foi submetida ao fracionamento cromatográfico empregando RP-HPLC e as frações eluídas foram avaliadas quanto à suas atividades antiproliferativas e antimicrobiana. Três frações ativas exibiram componentes de massa molecular compatíveis com peptídeos. Os três componentes majoritários presentes em tais frações foram purificados por RP-HPLC e analisados por MALDI-TOF/MS. Tais peptídeos mostraram-se ativos sobre bactérias e células tumorasi e foram identificados como pertencentes ao grupo das nattererinas, peptídeos antibacterianos previamente isolados desse animal por nosso grupo. Embora, o mecanismo específico envovlido na redução da viabilidade celular e citotoxicidade após o tratamento com essa secreção bruta ainda não seja conhecido, podemos supor que a atividade de moléculas, como peptídeos, presentes nessa secreção seja efetivos contra as células de melanoma murino (B16F10). Considerando-se a necessidade crescente por novas drogas anticâncer, o presente estudo fortemente reforça a validade do uso da secreção cutânea de P. nattereri como uma rica fonte de novas moléculas anticâncer, principalmente peptídeos. / Anuran secretions are rich natural sources of antimicrobial peptides. The emergence of new research in this area has shown that some peptides with antimicrobial activity also exert toxic effects against cancer cells. The aims of this study were to investigate the therapeutic potential of Physalaemus nattereri skin secretion against cancer cells, and to verify the mechanisms of its cytotoxic action on the murine melanoma cell line B16F10. Our results demonstrated that the crude secretion reduces the viability of B16F10 cells, causing changes in cell morphology (e.g., round shape and structure shrinkage), rupture of the plasma membrane, reduction in mitochondrial membrane potential, fragmentation of DNA, and cell cycle arrest in Sphase; together, these changes suggest that tumor cells die by apoptosis. This skin secretion was also submitted to chromatographic fractionation using RP-HPLC and the eluted fractions were assayed for antiproliferative and antibacterial activities. Three active fractions showed molecular masses components with a molecular range compatible to peptides. Thes major petidic components present on these fractions were purified by RP-HPLC and analysed by MALDI-TOF/MS. These peptides were active against bacteria and cancel cells, and were identified as nattererins, antibacterial peptides previously isolated from this animal by our group. Although, the specific mechanism causing the reduction in cell viability and cytotoxicity after treatment with the crude secretion is still unknown, we can consider that the activity of molecules, such as peptides, within the secretion is effective against murine melanoma (B16F10) tumor cells. Considering the growing need for new anticancer drugs, the present data strongly reinforce the validity of crude secretion of P. nattereri as a rich source of new anticancer molecules, mainly peptides.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-13T14:54:38Z No. of bitstreams: 1 2016_CésarAugustoPríasMárquez.pdf: 13896752 bytes, checksum: 0f77b4787c74c9521a4b65abcfbac820 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-13T16:37:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CésarAugustoPríasMárquez.pdf: 13896752 bytes, checksum: 0f77b4787c74c9521a4b65abcfbac820 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T16:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CésarAugustoPríasMárquez.pdf: 13896752 bytes, checksum: 0f77b4787c74c9521a4b65abcfbac820 (MD5) / No presente trabalho foi avaliado pela primera vez o potencial anticâncer da secreção cutânea do anuro sul-americano Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824). O fracionamento por RP-HPLC de secreções de indivíduos coletados na Colômbia e no Brasil permitiu a caracterização dos perfis cromatográficos das duas populações, obtendo-se registros das massas moleculares monoisotópicas de vários peptídeos presentes nessas secreções. Testes de atividade antimicrobiana realizados com a secreção de indivíduos da Colômbia levaram ao isolamento e à caracterização química e biológica de dois novos peptídeos da família das hilinas. Estes peptídeos, denominados de HCC76 e HCC77 apresentam cadeia polipeptídica curta, são altamente hidrofóbicos, possuem baixa cationicidade e são propensos a formarem estruturas em α-hélice anfipática. Versões sintéticas dos dois peptídeos (HCC76 e HCC77(K)) foram usadas para a determinação das suas concentrações inibitórias mínimas (MICs) em bactérias e fungos e da concentração hemolítica 50 % (HC50) em hemácias humanas. Os peptídeos HCC76, HCC77(K) e dois análogos deste último, denominados HCC77(K)1 e HCC77(K)2, tiveram seus efeitos antiproliferativos avaliados sobre células aderentes de mamíferos. Adicionalmente foram utilizados nesses ensaios dois peptídeos sintéticos da família das ocelatinas (ocelatina-F1 e G16OCP1), isolados previamente de secreções de anuros do gênero Leptodactylus. Os resultados mostram que os peptídeos HCC76 e HCC77(K) possuem grandes diferenças quanto à sua atividade biológica em bactérias e células de mamíferos, enquanto os dois análogos do peptídeo HCC77(K) conservaram a atividade em células aderentes de mamífero e tiveram melhora na potência, com relação a este. De forma similar, os peptídeos G16OCP1 e ocelatina-F1 mostraram diferenças quanto à sua atividade em células cancerosas e normais de mamíferos. Ensaios utilizando citometria de fluxo e microscopia de contraste de fase mostram que os peptídeos HCC77(K) e ocelatina-F1 induzem morte celular em uma linhagem de melanoma murino por um processo que envolve apoptose, com evidência de fragmentação de DNA e alteração do potencial de membrana mitocondrial e, no caso do peptídeo HCC77(K), efeitos na membrana plasmática e no ciclo celular. / The present study assessed, for the first time, the anticancer potential of the skin secretion of the South American anuran Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824). Fractionation of skin secretions of Colombian and Brazilian specimens by RP-HPLC allowed the characterization of chromatographic profiles of those two populations, while obtaining records of the monoisotopic molecular masses of several peptides present in these secretions. Antimicrobial activity assays performed using the secretion obtained from specimens collected in Colombia led to the isolation and chemical and biological characterization two new peptides belonging to hylins family. These peptides, named HCC76 and HCC77, are short-chain, highly hydrophobic, lowly cationic, and exhibit propension to adopt amphipatic α-helix structures. Synthetic forms of these two peptides (HCC76 and HCC77(K)) were used for determination of minimum inibitory concentrations (MICs) on bacteria and fungi, and also for determination of hemolytic concentration 50 % (HC50) on human erythrocytes. The peptides HCC76, HCC77(K) and two analogs of the last one, were used in assays assessing their antiproliferative effects on adherent mammalian cells. Additionally, two synthetic peptides (ocellatin-F1 and G16OCP1) belonging to the ocellatin family, previously isolated from the skin secretions of Leptodactylus spp. were used in the same tests. The results show that HCC76 and HCC77(K) have great differences regarding their biological activity on bacteria and mammalian cells, while the two HCC77(K)-derived analogs maintained activity on mammalian adherent cells and had a better potency compared to HCC77(K). Similarly, the peptides G16OCP1 and ocellatin-F1 showed differences regarding their biological activity on normal and cancerous mammalian cells. Assays using flow cytometry and phase-contrast microscopy show that the peptides HCC77(K) and ocellatin-F1 lead to cell death on a murine melanoma cell line through a process involving apoptosis, with evidence of DNA fragmentation and disruption of mitochondrial membrane potential; and also, in the case of HCC77(K), effects on the plasma membrane and cell cycle. / En este trabajo se evaluó por primera vez el potencial antitumoral de la secreción cutánea del anuro suramericano Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824). El fraccionamiento por RP-HPLC de secreciones de individuos colectados en Colombia y Brasil permitió la caracterización de los perfiles cromatográficos de las dos poblaciones, obteniéndose registros de las masas moleculares monoisotópicas de varios péptidos presentes en estas secreciones. Ensayos de actividad antimicrobiana, realizados con la secreción de individuos colombianos, condujeron al aislamiento y a la caracterización química y biológica de dos nuevos péptidos de la familia de las hilinas. Estos péptidos, denominados HCC76 y HCC77, presentan cadena polipeptídica corta, son altamente hidrofóbicos, poseen baja cationicidad y son propensos a formar estructuras en α-hélice anfipática. Versiones sintéticas de los dos péptidos (HCC76 y HCC77(K)) fueron usadas para la determinación de sus concentraciones inhibitorias mínimas (MICs) en bacterias y hongos, así como de sus concentraciones hemolíticas 50 % (HC50) en eritrocitos humanos. Los péptidos HCC76 y HCC77(K), así como dos análogos de este último, denominados HCC77(K)1 y HCC77(K)2, fueron usados para evaluar su efecto antiproliferativo en células adherentes de mamíferos. Adicionalmente fueron utilizados en esos ensayos, dos péptidos sintéticos de la familia de las ocelatinas (ocelatina-F1 y G16OCP1), aislados previamente de secreciones de anuros del género Leptodactylus. Los resultados muestran que los péptidos HCC76 y HCC77(K) poseen grandes diferencias con relación a su actividad biológica en bacterias y células de mamífero, mientras los dos análogos del péptido HCC77(K) conservan su actividad en células adherentes de mamífero, mejorando su potencia respecto a este. Ensayos usando citometría de flujo y microscopía de contraste de fase muestran que los péptidos HCC77(K) y ocelatina-F1 inducen muerte celular en un linaje de melanoma murino através de un proceso que involucra apoptosis, con evidencia de fragmentación de DNA y alteración del potencial de membrana mitocondrial y, en el caso del péptido HCC77(K), efectos sobre la membrana plasmática y el ciclo celular.

Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Banca: Simone Biagio Chiacchio / Banca: Fernando José Benesi / Resumo: Os ovinos são muito susceptíveis às doenças pulmonares, sendo a broncopneumonia mais frequente e responsável por desencadear intensa resposta inflamatória, sistêmica e local, principalmente neutrofílica. O objetivo deste estudo foi analisar a resposta inflamatória sistêmica e pulmonar de ovinos portadores de broncopneumonia moderada e grave e as atividades neutrofílicas através dos testes estimulado (NBT-E) ou não (NBT-NE), com Tetrazólio Nitroazul, no sangue periférico e no lavado traqueobrônquico. Para isso, por exame clínico, 50 ovinos foram selecionados e subdivididos em três grupos: G1 - animais sadios (n=19); G2 - portadores de broncopneumonia moderada (n=21); e G3 - portadores de broncopneumonia grave (n=10). A resposta inflamatória sistêmica foi avaliada pela interpretação do exame físico, leucograma e fibrinogênio plasmático. A resposta inflamatória local, por sua vez, pela associação das alterações respiratórias ao exame físico específico e à celularidade do lavado traqueobrônquico (LTB). A atividade dos neutrófilos sanguíneos dos grupos G1 e G2 foi percentualmente semelhante e a daqueles do LTB nula. O G3 apresentou diminuição da porcentagem de neutrófilos sanguíneos ativados e atividade de NBT significativa dessas células no LTB. Nestas condições experimentais, os resultados demonstraram que o exame clínico minucioso e a associação dos sinais clínicos são fidedignos para a graduação dos estágios da broncopneumonia; a gravidade das respostas inflamatórias, sistêmica e local, é dependente do grau de comprometimento pulmonar e há tendência à leucocitose neutrofílica e ao aumento do número de células nucleadas no LTB conforme a gravidade da doença; há redução do número de neutrófilos ativos circulantes e presença destes no LTB nas broncopneumonias graves / Abstract: Ovine are highly susceptible to lung diseases, being bronchopneumonia the most frequent and responsible for triggering intense inflammatory response, systemic and local, mainly neutrophilic. The aim of this study was analyze lung and systemic inflammation of moderate and severe bronchopneumonia affected ovine and the neutrophilic activity through stimulated (S-NBT) and not stimulated (NS-NBT) assays with Nitroblue Tetrazolium, on peripheral blood and on tracheobronchial lavage (TBL). For that, 50 animals were selected and divided based on clinical examination into three groups: G1 - healthy animals (n=19), G2 - moderate bronchopneumonia (n=21), and G3 - severe bronchopneumonia (n=10). The systemic inflammation was evaluated by the interpretation of physics parameters, white blood cells (WBC) counts and plasma fibrinogen. The local inflammatory response, in turn, by the association of respiratory abnormalities on physical examination and the TBL cellularity. The systemic neutrophils activity from G1 and G2 were similar, and the lung neutrophils activity was null. The G3 showed a reduction of the activated systemic neutrophils rate, and expressive activity of these cells on the TBL. On these experimental conditions the results showed that a detailed clinical examination associated with the clinical signs is a reliable method for the graduation of the bronchopneumonia severity; the gravity of the local and systemic inflammation relies on the lung commitment degree and there is a tendency to neutrophilic leukocytosis and increase of the nucleated cells number on the TBL, associated with the illness severity; there is a reduction of active circulating neutrophils and its presence on the TBL when the animal is stricken by severe bronchopneumonia / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-10Bitstream added on 2014-06-13T20:11:39Z : No. of bitstreams: 1 martins_mta_me_botfmvz.pdf: 1314468 bytes, checksum: 684105e46814a1ad77b0ce2b64c9c305 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os ovinos são muito susceptíveis às doenças pulmonares, sendo a broncopneumonia mais frequente e responsável por desencadear intensa resposta inflamatória, sistêmica e local, principalmente neutrofílica. O objetivo deste estudo foi analisar a resposta inflamatória sistêmica e pulmonar de ovinos portadores de broncopneumonia moderada e grave e as atividades neutrofílicas através dos testes estimulado (NBT-E) ou não (NBT-NE), com Tetrazólio Nitroazul, no sangue periférico e no lavado traqueobrônquico. Para isso, por exame clínico, 50 ovinos foram selecionados e subdivididos em três grupos: G1 – animais sadios (n=19); G2 – portadores de broncopneumonia moderada (n=21); e G3 – portadores de broncopneumonia grave (n=10). A resposta inflamatória sistêmica foi avaliada pela interpretação do exame físico, leucograma e fibrinogênio plasmático. A resposta inflamatória local, por sua vez, pela associação das alterações respiratórias ao exame físico específico e à celularidade do lavado traqueobrônquico (LTB). A atividade dos neutrófilos sanguíneos dos grupos G1 e G2 foi percentualmente semelhante e a daqueles do LTB nula. O G3 apresentou diminuição da porcentagem de neutrófilos sanguíneos ativados e atividade de NBT significativa dessas células no LTB. Nestas condições experimentais, os resultados demonstraram que o exame clínico minucioso e a associação dos sinais clínicos são fidedignos para a graduação dos estágios da broncopneumonia; a gravidade das respostas inflamatórias, sistêmica e local, é dependente do grau de comprometimento pulmonar e há tendência à leucocitose neutrofílica e ao aumento do número de células nucleadas no LTB conforme a gravidade da doença; há redução do número de neutrófilos ativos circulantes e presença destes no LTB nas broncopneumonias graves / Ovine are highly susceptible to lung diseases, being bronchopneumonia the most frequent and responsible for triggering intense inflammatory response, systemic and local, mainly neutrophilic. The aim of this study was analyze lung and systemic inflammation of moderate and severe bronchopneumonia affected ovine and the neutrophilic activity through stimulated (S-NBT) and not stimulated (NS-NBT) assays with Nitroblue Tetrazolium, on peripheral blood and on tracheobronchial lavage (TBL). For that, 50 animals were selected and divided based on clinical examination into three groups: G1 – healthy animals (n=19), G2 – moderate bronchopneumonia (n=21), and G3 – severe bronchopneumonia (n=10). The systemic inflammation was evaluated by the interpretation of physics parameters, white blood cells (WBC) counts and plasma fibrinogen. The local inflammatory response, in turn, by the association of respiratory abnormalities on physical examination and the TBL cellularity. The systemic neutrophils activity from G1 and G2 were similar, and the lung neutrophils activity was null. The G3 showed a reduction of the activated systemic neutrophils rate, and expressive activity of these cells on the TBL. On these experimental conditions the results showed that a detailed clinical examination associated with the clinical signs is a reliable method for the graduation of the bronchopneumonia severity; the gravity of the local and systemic inflammation relies on the lung commitment degree and there is a tendency to neutrophilic leukocytosis and increase of the nucleated cells number on the TBL, associated with the illness severity; there is a reduction of active circulating neutrophils and its presence on the TBL when the animal is stricken by severe bronchopneumonia

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:49:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 felipe_dias_ioc_dout_2015.pdf: 17815555 bytes, checksum: 3b15613d9b3c466858df68fcfd19809d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esquistossomose mansoni é uma doença crônica causada pela infecção parasitária por trematódeos da espécie Schistosoma mansoni que induz a formação de granulomas exsudativos. Durante a resposta granulomatosa, eosinófilos são ativados e recrutados para os sítios inflamatórios e desempenham suas funções através da liberação de produtos derivados de seus grânulos de secreção. Estes grânulos têm morfologia única e armazenam um número expressivo de citocinas e proteínas catiônicas previamente sintetizadas, principalmente proteína básica principal (MBP-1). MBP-1 tem sido implicada na imunoregulação de células imune e combate aos parasitos em diversas infecções helmínticas. Embora os mecanismos de desgranulação de eosinófilos murinos e humanos frente à doenças alérgicas encontrem-se bem estabelecidos, ainda não se conhece como estas células liberam seus produtos em resposta à infecções helmínticas. Devido à essa escassa informação, a ultraestrutura de eosinófilos murinos e humanos foi avaliada com ênfase em seus processos de desgranulação frente à infecção por S. mansoni. Fragmentos de fígado e intestino grosso de camundongos fêmeas Swiss Webster (SW) infectadas por 100 cercárias de S. mansoni, assim como biópsias de pacientes infectados com a forma crônica da doença foram processados e analisados por técnica histológica avançada (inclusão em resina glicolmetacrilato), e através de microscopia eletrônica de transmissão (MET). Eosinófilos foram encontrados em diferentes estágios dos granulomas tanto hepáticos quanto intestinais de camundongos SW com 57 e 115 dias de infecção e, constituiram a principal população de células inflamatórias. Foram encontrados os 3 processos de secreção nos eosinófilos teciduais murinos, ativados pela infecção mansônica, sendo o processo de \201Cpiecemeal degranulation\201D (PMD), o mais predominante PMD foi caracterizada pelo aumento do número de grânulos específicos em esvaziamento em relação aos grânulos intactos e em fusão. Eosinófilos hepáticos murinos foram submetidos à técnica de immunonanogold para marcação de MBP-1, a qual foi detectada na maioria dos grânulos específicos. Destes grânulos, MBP-1 foi amplamente distribuída entre os grânulos exibindo alterações morfológicas típicas de PMD e em vesículas de transporte, incluindo \201CEosinophil Sombrero Vesicles (EoSVs)\201D em associação com estes grânulos. Além disso, MBP-1 foi localizada na matriz extracelular, indicando a ocorrência de liberação extracelular desta proteína por PMD. Eosinófilos humanos provenientes de biópsias da mucosa retal apresentaram grânulos específicos com alterações ultraestruturais e presença de EoSVs ao redor e em contato com os mesmos. Estes grânulos foram encontrados dentro dos eosinófilos e na matriz extracelular adjacente, sugerindo que a secreção de produtos destes grânulos ocorra através de processo semelhante à desgranulação por PMD. Em conjunto, nossos resultados demonstram a importância dos esoinófilos na fase aguda e crônica da infecção por S. mansoni e identificam a desgranulação por piecemeal (liberação de moléculas específicas de forma seletiva e regulada) como o principal processo de secreção em resposta à infecção. Isto é importante para a compreensão das vias intracelulares envolvidas com a liberação de produtos estocados nos grânulos de eosinófilos durante respostas inflamatórias disparadas por infeções helmínticas / Schistosomiasis is a well known chronic and parasitic disease caused by trematoda specie Schistosoma mansoni infection which triggers exsudative granuloma formations. During granulomatous response, eosinophis are activated and recruited to inflammatory sites where they play your functions by release of secretory granule-derived products. These granules have unic morphology and storage an expressive number of pre-formed cytokines and cationic proteins, mainly major basic protein-1 (MBP-1). MBP-1 has been implicated in immune cells immunoregualtion and action against parasites in many helminthic infections. Although murine and human eosinophil degranulation mechanisms front of allergic disorders have been established, none knows how these cells release their products in response to helminthic infections. Due to this lack of information, the ultrastructure of murine and human eosinophils was evaluated with focus on their degranulation processes front of S. mansoni infection. Liver and large intestine fragments from female Swiss Webster (SW) mice infected with 100 S. mansoni cercarie, as well as, biopsies from chronic infected pacients were processed and analysed by advanced histologic technique (inclusion in glycol methacrylate resin), and by transmission electron microscopy (TEM). Eosinophils were found in both hepatic and intestinal different granuloma stages from 57 and 115 post-infection SW mice and, consisted the main inflammatory cells population. Three secretory processes were found in murine tissue eosinophils, activated by mansonic infection, being the “piecemeal degranulation” (PMD), the most predominant. PMD was characterized by the augment of emptying specific granules number in comparison to intact and fused granules. Murine hepatic eosinophils were submitted to immunonanogold technique to label MBP-1, which was detected in the majority of the specific granules. Of these granules, MBP-1 was widely distributed between granules with PMD-like morphologic alterations and in transport vesicles, including Eosinophil Sombrero Vesicles (EoSVs) in association with these granules. Moreover, MBP-1 was localized in the extracellular matrix, pointing to a extracellular releasing of this protein by PMD. Human eosinophils from retal mucosal biopsies showed ultrastructurally altered specific granules and presence of surronuded and attached EoSVs. These granules were found within eosinophils cytoplasm and at the adjacent extracellular matrix, suggesting a PMD-like degranulation of these granule products. Together, our results demonstrate the importance of eosinophils in the acute and chronic phases of S. mansoni infection and identify piecemeal degranulation (regulated and selective releasing of specific molecules) as the main secretion process in response to infection. This is important for the understanding of intracellular ways involved with granule-stored products release of eosinophils during inflammatory responses triggered by helminthic infections.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-14Bitstream added on 2015-01-26T13:30:41Z : No. of bitstreams: 1 000793012.pdf: 590115 bytes, checksum: ed882cd22177020eacb824774d3bea52 (MD5) / Introdução - Apesar de controvérsias, a máscara laríngea passou a ser utilizada em larga escala em laparoscopias. Nas ginecológicas, em especial, que têm no aumento da pressão intra-abdominal, associado à posição de céfalo-declive empregada durante o procedimento, fatores com potencial de risco de provocar regurgitação de conteúdo gástrico, com possibilidade de comprometimento de vias aéreas, faz-se necessária uma avaliação para a ocorrência de tal fenômeno. Objetivo - Avaliar a segurança do uso da máscara laríngea, em laparoscopia ginecológica, com relação ao risco de regurgitação de conteúdo gástrico, medindo o pH das secreções de hipofaringe, durante o procedimento anestésico-cirúrgico. Método - Foram avaliadas 80 pacientes submetidas à anestesia geral para laparoscopia ginecológica, com acesso a via aérea garantida pelo uso da máscara laríngea ProSeal (MLA-ProSeal). As secreções da hipofaringe foram coletadas por aspiração através do tubo de drenagem esofágica, para medida do pH, em vários momentos do ato anestésico-cirúrgico. Utilizamos as fitas medidoras de pH de 2 a 9 – Merck, Darmstadt – Alemanha e um ph-metro de bancada foi utilizado em caso de dúvidas. O pH ≤ 4,1 foi considerado como positivo para regurgitação de conteúdo gástrico. Resultados - Após análise das medidas do pH das secreções de hipofaringe, não se encontrou nenhum valor de pH ≤ 4,1. O pH das secreções variou com médias de 6,34 a 6,50 nos diversos momentos medidos, compatível com o pH normal da saliva. Conclusão - Com os resultados obtidos, concluiu-se que a máscara laríngea ProSeal é uma alternativa segura para a realização do ato anestésico em cirurgia laparoscópica, nos pacientes que não apresentem fatores de risco para regurgitação de conteúdo gástrico / Introduction: Although controversial, the laryngeal mask is now widely used for laparoscopies. In gynecological laparoscopy, in particular, there is an increase in the intra-abdominal pressure associated with the head-down position used during the procedure and an increase in the potential risk factors for the regurgitation of gastric contents with the potential to compromise the airways, and therefore, the occurrence of such phenomena during gynecological laparoscopy needs to be evaluated. Objectives - To evaluate the safety of using a ProSeal laryngeal mask airway (LMA-P) during gynecological laparoscopy, assessing the risk of regurgitation of gastric contents by measuring the pH of secretions in the hypopharynx during the anesthetic/surgical procedure. Methods - In total, 80 patients were evaluated who were under general anesthesia for gynecological laparoscopy in which airway access was maintained using a ProSeal laryngeal mask airway. Secretions in the hypopharynx were collected by aspiration using an esophageal drainage tube to measure their pH at various times during the anesthetic/surgical procedure. We used pH test strips, pH 2-9 (Merck, Darmstadt, Germany), and in case of any doubts, a pH meter was also used. A pH of ≤ 4.0 was considered positive for the regurgitation of gastric contents. Results - None of the pH measurements of analyzed secretions in the hypopharynx had a pH of ≤ 4.0. The mean pH of the secretions varied from 6.34 for the lower means to 6.50 for the higher means when measured at different time points, which are comparable to the normal pH of saliva. Conclusion - From these results, we conclude that the ProSeal laryngeal mask airway is a safe alternative for anesthesia during laparoscopic surgery for patients without risk factors for the regurgitation of gastric contents

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2015-01-26T13:30:19Z : No. of bitstreams: 1 000799031.pdf: 1906719 bytes, checksum: 976b66db01630faaa3a62fcc63b16668 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença ulcerosa péptica é um comprometimento da mucosa gástrica e duodenal de pacientes decorrente do ataque de fatores lesivos endógenos e/ou exógenos sobre este tecido. Dentre os fatores endógenos que favorecem o surgimento desta doença, destacam-se o enfraquecimento da barreira mucosa e o déficit de seus componentes protetores (como o muco e o bicarbonato) que, conseqüentemente contribuem para o avanço dos fatores lesivos sobre a mucosa péptica desprotegida. Entretanto, o freqüente e progressivo contato que os indivíduos têm com os fatores exógenos, como o uso constante de medicamentos (drogas antiinflamatórias não-esteroidais, antibióticos, dentre outros), o aumento na produção de ácido gástrico e o ataque da bactéria Helicobacter pylori são apontados como os mais freqüentes indutores de lesões ulcerosas. O estudo de novos compostos oriundos de plantas medicinais potencializa a descoberta de novos protótipos que podem ser utilizados na terapêutica. Estudos anteriores realizados no Laboratório de Ensaios Biológicos com Produtos Naturais (UNESP/Botucatu) caracterizaram fitoquimicamente o óleo essencial de Citrus aurantium, uma espécie medicinal que possui fortes indicativos de uso popular para gastrites e distúrbios do trato gastrintestinal, apontando a presença do monoterpeno ~-mirceno (1.43%) como um dos constituintes minoritários de sua composição. A proteção promovido pelo \3-mirceno, na dose de 7.5 mg/kg, variou de 60 a 86% de proteção da mucosa gástrica e duodenal o que representa uma ação equivalente a 13 vezes à promovida pela cimetidina (dose 100 mg/kg) ou 4 vezes o efeito do lansoprazol (30 rng/kg), duas drogas antiulcerogênicas padrão usadas na terapêutica. A etapa seguinte foi elucidar outros mecanismos de ação deste monoterpeno que envolveu a caracterização se sua propriedade antissecretória e cicatrizante gástrica. Para um melhor entendimento do trabalho, os resultados ...

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-04-26T16:08:11Z No. of bitstreams: 1 2017_LuzElenaTrianaVidal.pdf: 2903643 bytes, checksum: f3ab54636d42cbaaf15629d3af2ceef1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-26T21:42:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_LuzElenaTrianaVidal.pdf: 2903643 bytes, checksum: f3ab54636d42cbaaf15629d3af2ceef1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T21:42:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_LuzElenaTrianaVidal.pdf: 2903643 bytes, checksum: f3ab54636d42cbaaf15629d3af2ceef1 (MD5) / A pele dos anfíbios é um tecido especializado na produção de diversas moléculas como peptídeos antimicrobianos, imunomoduladores, aminas biogênicas e hormônios. Esses compostos bioativos podem ser considerados de interesse biotecnológico e alternativas terapêuticas. O objetivo do presente estudo foi identificar e caracterizar peptídeos e proteínas presentes na secreção cutânea do anfíbio Dendropsophus columbianus (Boettger, 1892), relacionados aos mecanismos de defesa contra patógenos. A primeira abordagem consistiu no fracionamento clássico da secreção cutânea por RP-HPLC. Todas as frações cromatográficas obtidas foram avaliadas quanto à capacidade de inibir a proliferação bacteriana e analisadas por MALDI-TOF/TOF. Um único e novo (sem similaridade de sequência com peptídeos anotados) peptídeo antimicrobiano neutro foi assim isolado e denominado Dendropsofina 1 (Dc 1). Posteriormente, foram desenhados dois análogos catiônicos (Dc 1.1 e Dc 1.2) que mantiveram a estrutura anfipática de Dc 1. Dc 1 e seus dois análogos exibiram atividades antibacterianas moderadas e sem efeitos hemolíticos e citotóxicos em células de mamífero. O Análogo Dc 1.2 exibiu uma maior atividade antibacteriana, o que pode estar relacionado ao seu maior teor de α-hélice e estabilidade térmica em condição experimental hidrofóbica, comparando com Dc 1 e Dc 1.1. O peptídeo nativo Dc1 poderia ser usado como um modelo alternativo para desenvolver novos AMPs. Numa segunda abordagem, mais moderna e de alta acurácia, foi realizado o primeiro estudo proteômico e peptidômico abrangente da secreção cutânea utilizando nanoLC-MS/MS do tipo Orbitrap Elite™. Os dados foram processados através dos softwares PEAKS e Blast2GO. Foram identificadas 1248 proteínas presentes na secreção cutânea de D. columbianus, 127 proteínas foram categorizadas como associadas ao sistema de defesa e 19 relacionadas à resposta contra microrganismos. Mediante zimografia foram detectadas e posteriormente identificadas três hidrolases ativas na secreção total, as quais podem estar relacionadas com o processamento de peptídeos de defesa. Os resultados do peptidoma permitiram determinar um novo grupo de peptídeos endógenos a D. columbianus, com alta similaridade de sequência com Dc 1, que foram nomeados como dendropsofinas. As dendropsofinas Dc2, Dc7, DC13, Dc 17, Dc 18 e Dc 19 não apresentaram atividade contra bactérias nem fungos. No entanto, Dc 2 e Dc 18 foram capazes de ativar neutrófilos humanos. Essa atividade poderia estar associada a uma modulação do sistema imune em D. columbianus. Esta via de defesa altamente conservada em vertebrados, abre perspectivas quanto ao uso dessas novas moléculas na terapia de doenças infecciosas. / Amphibian skin is a tissue specialized in the production of various molecules such as antimicrobial peptides, immunomodulators, biogenic amines and hormones. These bioactives compounds could be considered of biotechnological interest and new therapeutic alternatives. The aim of the present study was to identify and characterize peptides and proteins present in the cutaneous secretion of the amphibian Dendropsophus columbianus (Boettger, 1892), related to pathogen defense mechanisms. The first approach consisted of the classical fractionation of cutaneous secretion by RP-HPLC. All chromatographic fractions obtained were evaluated for their ability to inhibit bacterial proliferation and analyzed by MALDI-TOF / TOF. A single new antimicrobial neutral peptide was thus isolated and named Dendropsophin 1 (Dc 1), with no sequence similarity with annotated peptides. Subsequently, two cationic analogues (Dc 1.1 and Dc 1.2) keeping the amphipathic structure of Dc 1 were designed. Dc 1 and its two analogues exhibited moderate antibacterial activities and no hemolytic and cytotoxic effects in mammalian cells. Dc 1.2 exhibited slightly improved antibacterial properties that could be related to the higher content of α-helix and thermal stability compared to Dc 1 and Dc 1.1 in hydrophobic experimental condition. The native peptide Dc 1 could be used as an alternative model to develop new AMPs. In a second modern high-throughput approach, the first comprehensive proteomic and peptidomic study of cutaneous secretion was performed by nanoLC-MS/MS using Orbitrap Elite™ mass spectrometer. Data were processed using PEAKS and Blast2GO programs. 1248 proteins present in the cutaneous secretion of D. columbianus were identified, 127 proteins were categorized associated with the defense system and 19 related to the response against microorganisms. Three hydrolases from the total secretion were detected by zymography and subsequently identified, which could be related to the processing of peptides of defense. The peptidome results allowed determining a new group of peptides endogenous to D. columbianus, with high sequence similarity with Dc 1, which were named as Dendropsophins. The dendropsophins Dc 2, Dc 7, Dc 13, Dc 17, Dc 18 and Dc 19 showed no activity against bacteria or fungi. However, Dc 2 and Dc 18 are able to activate human neutrophils. This activity could be associated to a modulation of the immune system in D. columbianus. This pathway of defense, highly conserved in vertebrates, opens further perspectives regarding the use of these new molecules in the therapy of infectious diseases.