Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-09Bitstream added on 2014-06-13T19:13:28Z : No. of bitstreams: 1 urbaczek_ac_me_arafcf.pdf: 941529 bytes, checksum: 018e3c8e75f3ede5618f06630714815e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os receptores para a porção Fc das IgG (FcgR) estão amplamente expressos nas células do sistema imune e podem estimular uma variedade de respostas efetoras. Três classes de FcgR são descritas nos humanos: FcgRI, FcgRII e FcgRIII. O neutrófilo expressa constitutivamente as isoformas FcgRIIa (CD32) e FcgRIIIb (CD16), as quais apresentam um polimorfismo funcional decorrente do polimorfismo alélico. No FcgRIIa, a substituição da histidina (H) pela arginina (R) na posição 131 resulta nas variantes polimórficas FcgRIIa- R131 e FcgRIIa-H131, que diferem quanto à capacidade de ligação à IgG2 humana. Quanto ao FcgRIIIb (CD16), o polimorfismo genético é responsável pela expressão dos antígenos de neutrófilo (NA)1, NA2 e SH e resulta em um maior número de sítios de glicosilação em NA2. O FcgRIIIb é responsável pela aproximação dos ligantes na membrana para o FcgRIIa e também interage com o receptor para complemento tipo 3 (CR3) na superfície celular. A cooperação entre os FcgRIIa/IIIb com o CR3 promove a estimulação máxima das respostas do neutrófilo, dentre elas o burst oxidativo. Uma vez que a interação FcgRIIIb/CR3 ocorre via sítio de ligação lectina-sacarídeo, o objetivo deste estudo foi avaliar se o polimorfismo alélico do FcgRIIIb poderia afetar a cooperação entre os FcgR e os CR em mediar o burst oxidativo dos neutrófilos. As freqüências dos alelos H/R-131 e NA1/NA2/SH foram analisadas por genotipagem com oligonucleotídeos alelo-específicos e reação em cadeia da polimerase e a densidade de expressão dos receptores (FcgRIIa, FcgRIIIb, CR1 e CR3) foi determinada por citometria de fluxo. A distribuição dos genótipos para o FcgRIIIb (n=169) foi NA1/NA2 (52,1%), NA2 (27,8%) e NA1 (20,1%). Dentre 174 indivíduos, apenas 6,3% apresentaram o gene SH. Quanto aos genótipos para o FcgRIIa (n=143), a distribuição... / Receptors for immunoglobulin G (FcgR) are known to be expressed on many cells of the immune system and they can trigger a variety of biological responses. Human FcgR belong to the Ig superfamily and three classes of these receptors have been recognized: FcgRI, FcgRII and FcgRIIl, with different affinities and specificities for IgG subclasses. Neutrophils express the FcgRIIa (CD32) and FcgRIIlb (CD16) isoforms, which display a functional polymorphism due to biallelic polymorphisms. In the case of FcgRIIa, an arginine (FcgRIIa-R131) or histidine (FcgRIIa-H131) at amino acid position 131 determines receptor affinity for IgG2, FcgRIIa-H131 being the isoform with highest affinity. On neutrophils, the FcgRIIIb bears the neutrophil antigen (NA) polymorphism, NA1, NA2 and SH, NA2 being the more glycosylated isoform. Cooperation of FcgRIIIb with FcgRIIa and CR3 (complement receptor type 3) is necessary for efficient neutrophil responses, including the oxidative burst. Since the FcgRIIIb/CR3 cooperation occurs via lectin-sacharide-like interaction, the aim of this study was to evaluate whether the allelic polymorphism, NA1 and NA2, could influence the cooperation of FcgRIIIb with CR3 in mediating the oxidative burst of neutrophils. FcgRIIa and FcgRIIIb genotyping analysis were performed by polymerase chain reaction with allelespecific primers and surface expressions of FcgRIIa, FcgRIIIb, CR1 and CR3 on neutrophils were determined by flow cytometry. The FcgRIIIb genotype distribution (n=169) was NA1/NA2 (52.1%), NA2 (27.8%) and NA1 (20.1%). SH gene was found in 11 (6.3%) volunteers from 174 subjects. With respect to the FcgRIIa genotype (n=143), the distribution observed was R131 (41.2%), H/R131 (38.5%) and H (20.3%). Neutrophils were stimulated with immune complexes (IC)-IgG opsonized or not with complement and the oxidative burst... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-02Bitstream added on 2014-11-10T11:58:26Z : No. of bitstreams: 1 000736350.pdf: 1151932 bytes, checksum: 4d60dd50232ef660af2db1b6ab836487 (MD5) / A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis (Pb), endêmica na América Latina. A resposta imune inata do hospedeiro contra o fungo já foi bem caracterizada e vários estudos demonstraram claramente a importância do papel desempenhado pelas células fagocíticas. O nosso laboratório têm estudado a relação entre os neutrófilos humanos (PMNs)/Pb, concentrando objetivos nos mecanismos efetores destas células contra o fungo. No entanto, nos últimos anos, os estudos demonstraram que, em adição às suas funções fagocíticas e “killing”, os PMNs podem modular e instruir a resposta imune, uma vez que estas células têm sido mostradas liberando e produzindo várias citocinas. Assim, avaliamos se PMNs estimulados com Pb podem modular a resposta imune para um padrão de resposta do tipo Th1, através da produção de IFN- (IFN-gama), bem como o papel dos receptores de reconhecimento de estruturas moleculares padrões” (PRRs), tais como o TLR2, TLR4 e Dectina-1 nesta produção. Além disso, foi perguntado se a ativação das células com as citocinas IL-12, IL-15 e IL-18 poderiam resultar em níveis aumentados dessa citocina. Os PMNs foram obtidos do sangue periférico de 20 dadores saudáveis e foram ativados ou não com IL-12, IL-15 ou IL-18 em diferentes concentrações e desafiados com a cepa (Pb18) durante 2h, 4h, 12h, 24h e 48h e avaliados para a produção de IFN-, por meio de ELISA. Em outros experimentos, os PMNs foram tratados com anticorpos monoclonais anti-TLR2, TLR4 e Dectina-1, estimulados com Pb e avaliados para a produção de IFN-. Descobrimos que o Pb induz PMNs humanos para produção de IFN-, provavelmente por ligação aos receptores TLR4 e Dectina-1 expressos por estas células. Além disso, os níveis de IFN- foram significativamente aumentado, quando as células foram ativadas com cada uma das citocinas testadas, ou uma combinação ... / Paracoccidiodomycosis is a systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), which is endemic in Latin America. The host innate immune response against the fungus has been well characterized and several studies have clearly shown the important role played by phagocytic cells. Our laboratory has studied the relationship between human neutrophils (PMNs)/ Pb, focusing the effector mechanisms of these cells against the fungus. However, in last years, studies have shown that in addition to their phagocytic and killer functions, PMNs can modulate and instruct the immune response, since these cells have been shown to produce and release several cytokines. Thus, we evaluated whether PMNs stimulated with Pb can modulate the immune response to a Th1 phenotype through the production of IFN-γ (IFN-gamma), as well as the role of “pattern-recognition receptors” (PRRs) such as TLR2, TLR4 and Dectin-1 in this production. Furthermore, we asked whether activation of the cells with the cytokines IL-12, IL-15 and IL-18 could result in increased levels of this cytokine. Peripheral blood PMNs obtained from 20 healthy donors were nonactivated or activated with IL-12, IL-15 or IL-18 in different concentrations and challenged with strain 18 Pb (Pb18) for 2h, 4h, 12h, 24h and 48h and evaluated for IFN- production, by ELISA. In other experiments, PMNs were treated with monoclonal antibodies anti-TLR2, TLR4 and Dectin-1, challenged with Pb and evaluated for IFN- production. We found that Pb induces human PMNs to produce IFN-, probably by binding to TLR4 and Dectin-1 receptors expressed by these cells. Moreover, IFN-γ levels were significantly increased when cells were activated with each of the tested cytokines or a combination of two of them, being the association IL-12 plus IL-15 the most effective. The results support our hypothesis that during infection by Pb, human PMNs via the of IFN-γ production modulate ...

Galectina-3, uma proteína que se liga a -galactosídeos, é expressa por neutrófilos e inúmeras evidências indicam que esta molécula atua como uma possível reguladora da resposta imune. Sabe-se que galectina-3 ao ligar com LPS pode levar a formação de oligômeros, que podem alterar o limiar de ativação de células da resposta imune inata. Apesar de existirem diversos estudos que mostram a influência de galectina-3 na resposta de neutrófilos frente a componentes bacterianos, os resultados são em sua maioria contraditórios e inconclusivos. Para elucidar a influência da galectina-3 na reposta imune inata a patógenos periodontais, o presente trabalho avaliou a atividade antimicrobiana in vitro de neutrófilos, isolados de camundongos selvagens (WT) ou geneticamente deficientes de galectina-3 (Gal-3KO), previamente estimulados com LPS de Aa e Pg. Os resultados não evidenciaram diferenças significativas no número de unidades formadoras de colônia (UFC) recuperadas das culturas de neutrófilos provenientes de animais deficientes de galectina-3 e do grupo controle (WT). Contudo, a estimulação de neutrófilos com LPS por 18 horas levou a redução no número de UFC recuperadas das culturas, quando comparado com as culturas estimuladas com LPS por apenas 3 horas. / Galectin-3, a protein that binds -galactosides, is expressed by neutrophils and numerous evidences indicate that this molecule acts as a possible regulator of the immune response. It is known that galectin-3 binding to LPS can lead to the formation of oligomers and thus changing the activation threshold of cells of the innate immune response. Although there are several studies that show the influence of galectin-3 in neutrophil response against bacterial components, the results are conflicting and inconclusive in their majority. To elucidate the influence of galectin-3 in the innate immune response to periodontal pathogens, the present study evaluated the in vitro antimicrobial activity of neutrophils, isolated from wild-type or galectin-3 deficient mice, previously stimulated with LPS of Aa and Pg. The results showed no significant differences in the number of colony forming units (CFU) recovered from cultured galectin-3 deficient neutrophils or control group. However, in a 18 hours time course of LPS stimulation, we observed reduction in the number of CFU, when compared to 3 hours of LPS stimulation.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-17Bitstream added on 2015-03-03T12:06:58Z : No. of bitstreams: 1 000807238.pdf: 1014789 bytes, checksum: 130b475d54b3130a40fc2df43bd56a57 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica causada pelo fungo dimófico Paracoccidioides brasiliensis, que é endêmico na América Latina. As células fagocitárias desempenham um papel importante durante a resposta imune inata contra o Pb, e se tornaram alvo de estudos neste sentido. Em especial, os neutrófilos são capazes de destruir microrganismos através de três mecanismos: fagocitose, seguida pela morte em fagolisossoma, secreção de agentes microbicidas e através do mais recente mecanismo descoberto, a netose, que consiste na liberação de redes extracelulares a partir dos neutrófilos (NETs), constituídas por proteínas granulares associadas a cromatina. Neste estudo demonstramos pela primeira vez que leveduras de P. brasiliensis induzem NETs in vitro principalmente através da ligação pelo receptor dectina-1 presente nos neutrófilos. Estas estruturas foram demonstrados através de microscopia eletrônica de varredura, e os componentes específicos das NETs: histona, elastase e DNA foram evidenciados a partir da microscopia eletrônica de imunofluorescência confocal. As leveduras foram capturadas pelas NETs, o que revelou um importante papel destas esrtruturas: impedir a disseminação do fungo. Além disso, o tratamento das co-culturas com DNAse, que degradou as NETs evidenciou aumento da sobrevivência do fungo, o que denota sua capacidade microbicida / Paracoccidiodomycosis is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, which is endemic in Latin America. Since phagocytic cells play an important role during innate immune response against this fungus, we have studied the relationship between human neutrophils (PMNs) and P. brasiliensis, focusing on the effector mechanisms of these cells. Neutrophils can destroy microrganisms using at least 3 distint mechanisms: phagocytosis followed by destruction in a phagolysossome, secretion of antimicrobial molecules, and the more recently identified netosis, involving the release of neutrophil extracellular traps ( NETs) that are constituted by chromatin associated with different granule proteins with antimicrobial activities. Here, we showed for the first time, that yeast cells from P. brasiliensis strain 18 are able to induce the release of NETs in vitro, by binding to dectin-1 receptor on human neutrophils. These structures were evidenced by scanning electron microscopy, and specific NETs compounds such as histone and elastase were shown by confocal microscopy. Fungi were ensnared by NETs, denotting the role of these structures in confining infection, avoiding dissemination. In addition, disruption of NETs by treatment of cocultures with DNAse increased the fungi survival, evidencing their killing capacity / FAPESP: 2010/17405-5

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-08Bitstream added on 2015-04-09T12:48:01Z : No. of bitstreams: 1 000814570.pdf: 325846 bytes, checksum: 38c71d9ed63b85ebabb85fe53a185b6e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Oxidative stress occurs due to an imbalance between oxidants and antioxidant defenses. Considering that dogs with leishmaniasis may develop uremia, which affects the oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils, we proposed to investigate the hypothesis that oxidative stress, alteration of oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils in dogs varies according to stage of leishmaniasis and that uremia, commonly occurs in late stages of disease, would contribute to such variations. To this, we evaluated plasma markers of oxidative stress (total antioxidant capacity, lipid peroxidation, glutathione, uric acid, bilirubin and albumin), superoxide production (method of nitroblue tetrazolium reduction and flow cytometry with the probe hydroethidine), and viability and apoptosis rate (morphological method and flow cytometry using annexin V-PE system) on neutrophils from dogs with leishmaniasis classified according to the LeishVet Consensus in moderate stage of the disease, very severe stage when uremia is installed and dogs with uremia negative for leishmaniasis, comparing them to healthy dogs. Leishmaniasis regardless of stage and uremia cause oxidative stress with reduced total antioxidant capacity, which may be related to greater induced production of superoxide and stimulated apoptosis observed in these groups. While spontaneously, neutrophils of dogs in very severe stage and with uremia had lower viability, increased apoptosis and higher lipid peroxidation, suggesting that uremia is the cause of such changes. Can be concluded that the intensity of oxidative stress does not vary with the stage of leishmaniasis, however uremic condition contributes to reduce the viability of neutrophils in late-stage dogs. Changes of neutrophil oxidative metabolism occur concomitant with oxidative stress and increased neutrophil apoptosis in both leishmaniasis and in uremia alone / FAPESP: 2011/14083-0

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000815233.pdf: 1654214 bytes, checksum: d5e117f5790352e4f036419f4f64ce17 (MD5) / O objetivo geral deste estudo foi descrever as respostas inflamatórias de jumentas Pêga ao sêmen fresco (MN), sêmen extendido (SE) e sêmen congelado (SC) de jumento, tendo como objetivo específico correlacionar esses achados com os baixos índices de gestações de jumentas Pêga por inseminação artificial (IA) com SC. Foram avaliadas diariamente 25 jumentas, através de rufiações, palpações transretais e exames ultrassonográficos durante maio de 2012 a março de 2013. Foram observados 234 estros, sendo 33 (14,22%) estros anovulatórios e 11 (4,74%) duplas ovulações; o comprimento do ciclo estral foi de 28,88±0,95 dias, com sinais externos de estro de 4,50±0,35 dias e o tempo de ovulação em relação ao término do estro de 8,0±2,45 horas entre as 25 jumentas. Diante dos resultados obtidos, as jumentas não apresentaram sazonalidade reprodutiva. Selecionaram-se 12 jumentas ao acaso, as quais foram biopsiadas em diestro para avaliação reprodutiva e nos ciclos estrais subsequentes, as mesmas foram submetidas à uma das técnicas: monta natural (MN), IA-SE e IA-SC próximo à ovulação, realizando-se biópsia endometrial 10 horas após cada evento. Os fragmentos foram conservados em formalina a 10%, solução de Bouin e solução de glutaraldeído tamponado a 10% para análise em microscopia de luz (ML), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). As amostras endometriais das jumentas em diestro apresentaram pregas e sulcos do endométrio, células microvilosas e ciliadas, livre de processos patológicos incompatíveis com a reprodução; em estro apresentaram epitélio colunar simples, evidenciando células microvilosas e células ciliadas, com núcleos ovalados, cromatina condensada e, no citoplasma, presença de mitocôndrias, vacúolos e corpúsculos elétron-densos. Formações semelhantes a bolhas estavam presentes nas superfícies das células microvilosas. As glândulas ... / The general objective of this study was to describe the inflammatory responses in Pêga Jennies from fresh (NM), extended (ES) and frozen (CS) semen from Jackass. The specific objective was to correlate these responses with low pregnancy rates in Jennies after artificial inseminations (AI) with frozen semen. Twenty five Jennies were daily evaluated by teasing, rectal examination and ultrasound from May 2002 to March 2013. Estrous cycles (n=234) were followed, with 33 (14.22%) non- ovulatory estrous and 11 (4.74%) double ovulations. The estrous cycle length was 32.68±0.76 days, with external heat signs of 4.49±0.23 days and time of ovulation in relationship to end of estrous of 5.68±7.18 hours for Jennies during the observed period. The estrous cycle was 28.88±0.95 days; with external heat signs of 4.50±0.35 days and time to ovulation in relation to end of estrous of 8.0±2.45 hours among 25 Jennies. Thus, considering the obtained results there was no reproductive seasonality. Twelve Jennies were casually selected for biopsy during diestrous being reproductively evaluated and subsequently submitted to one of those: natural mount (NM), AI- ES and AI-CS near the time of ovulations; and then submitted to endometrial biopsy 10 hours latter. Each fragment was maintained in formalin 10%, Bouin solution and Buffer glutaraldehyde 10% for Ligh Microscopy (LM), Scanning Electron Microscopy (SEM) and Transmission Electron Microscopy (TEM). The endometrial samples from Jennies in diestrous presented folds and endometrial grooves, microvillus cells and ciliated cells, free of process that could compromise reproduction. The estrous samples presented simple columnar epithelium, circled nuclei, condensed chromatin and at the cytoplasm, mitochondrial vacuoles and electro- dense corpuscles. Similar structures to blebs were present at the microvilli cell surface. The endometrial glands were completed by secretions that were shown with major evidence ...

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:41Z : No. of bitstreams: 1 000837500.pdf: 577898 bytes, checksum: 89b9ba7b17de0ecc58ba5c8cb232754d (MD5) / A família Myrtaceae vem sendo estudada quanto ao seu potencial na regulação da menstruação, dor, desordens intestinais, infertilidade, nas suas atividades antifúngica, purgativa e anticâncer, no tratamento de resfriados, tosse e em outras afecções do trato respiratório. Em meio a seus membros, as espécies de Eugenia spp., ricas em compostos fenólicos, parecem apresentar efeitos pró e anti-inflamatórios quando testados in vivo e in vitro. Dentre as células atuantes de forma pioneira na inflamação, estão os neutrófilos. Eles são um alvo de estudo no controle de processos inflamatórios agudos e crônicos, por meio da elucidação de como substâncias agem, por exemplo, nas diferentes etapas de seu recrutamento. Assim, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar o potencial efeito anti-inflamatório do extrato hidroetanólico de folhas de Eugenia aurata - EA e Eugenia punicifolia - EP, sobre atividades neutrofílicas. Foram avaliados os processos de adesão e desgranulação celular e a geração das armadilhas extracelulares neutrofílicas (NETs- Neutrophil Extracellular Traps) em neutrófilos humanos. Os resultados mostram que o EA inibe o processo de adesão, enquanto que o EP, a desgranulação, e, ademais, ambos inibem a liberação de DNA (NET), na ausência de efeito citotóxico. Tais resultados corroboram o uso desses extratos na medicina popular. Além disso, sugerem seu potencial no desenvolvimento de medicamentos fitoterápicos com propriedades anti-inflamatórias / Myrtaceae family has been studied for its potential in regulating menstruation, pain and intestinal disorders, infertility, as well as antifungal, purgative and anticancer agent, and in addition to treat colds, cough and other respiratory ailments. Amid its members, Eugenia spp species appear to have pro and anti-inflammatory effect once examined in vivo and in vitro. Among the first cells which act on inflammation site, there are the neutrophils. They are a matter of study in the controlling of acute and chronic inflammatory processes, through elucidation of how substances act, for example, in different steps of their recruitment. Therefore, the main aim of this study was to evaluate the potential anti-inflammatory effect of hydroethanolic extract of Eugenia aurata leaves - EA and Eugenia punicifolia - EP, on neutrophil activities. We evaluated the adhesion process and cell degranulation, as well NETs (Neutrophil Extracellular Traps NETs) generation in human neutrophils. The results show that EA inhibits adhesion, while EP degranulation, and further, both inhibit the release of DNA (NET), in the absence of cytotoxic effect. These results give support to the use of these extracts in the popular medicine. Furthermore, they demonstrate a potential of both extracts for the development of phytomedicines with anti-inflammatory properties

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-21Bitstream added on 2014-06-13T18:56:30Z : No. of bitstreams: 1 gomes_ac_me_araca.pdf: 617778 bytes, checksum: dc3fa0c485a53f6482fbc321ee95103f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi investigar os mecanismos envolvidos na migração de neutrófilos induzida pelo MTA para cavidade peritoneal de camundongos. Observouse que o MTA induziu migração de neutrófilos de maneira dose-dependente (0,5; 5; 50 e 100 mg/cavidade), alcançando o pico de migração 6 horas após a injeção do estímulo com a dose de 50 mg/cavidade. Esta migração foi parcialmente inibida pelo pré-tratamento dos animais com dexametasona (1 mg/Kg), BWA4C (50 mg/Kg) e U75302 (0,5 mg/Kg). Diferentemente, a Indometacina (5 mg/Kg) foi inefetiva neste processo. Verificou-se também que os animais estimulados com MTA (50 mg/cavidade) apresentaram uma liberação significativa de IL-1ß e MIP-2 no exsudato peritoneal. O pré-tratamento com Tioglicolato aumentou em cerca de 380% a população de macrófagos na cavidade peritoneal, potencializando a migração de neutrófilos induzida pelo MTA (p<0,05). O pré-tratamento com composto 48/80 depletou cerca de 75% a população de mastócitos, diminuindo a migração de neutrófilos (p<0,05). A injeção de MTA na bolha de ar subcutânea induziu uma migração de neutrófilos menor comparada à cavidade peritoneal. Estes resultados confirmam a participação de mastócitos e macrófagos na migração de neutrófilos induzida pelo MTA. A injeção de sobrenadante de macrófagos e mastócitos estimulados com MTA na cavidade peritoneal de camundongos causou significante migração de neutrófilos (p<0,05), que foi parcialmente inibida pelo pré-tratamento das células por dexametasona (10 æMolar), BWA4C (100 æMolar) e U75302 (10 æMolar) sugerindo a liberação por essas células de LTB4 e citocinas e/ou quimiocinas. Confirmando esses dados,... / The aim of this study was to investigate the mechanism involved in the neutrophil migration induced by MTA into peritoneal cavity in mice. It was observed that MTA induced a dose dependent neutrophil migration (0.5, 5, 50 and 100 mg/cavity), achieving the peak 6 hours after the stimulation with 50 mg/cavity. Neutrophil migration was inhibited by the pre-treatment with dexamethasone (1 mg/Kg), BWA4C (50 mg/Kg) and U75302 (0,5 mg/Kg). Differently indometacin (5 mg/Kg) was ineffective in this process. It was seen that the animals stimulated with MTA (50 mg/cavity) showed a significative amount of IL-1ß and MIP-2 released to the peritoneal exudate. The pretreatment with Thioglycolate 3% increased 380% the macropahge population into the peritoneal cavity, increasing the MTA-induced neutrophil migration (p<0.05). The pretreatment with 48/80 compound decreased 75% the mast cell population in the peritoneal cavity and decreased the MTAinduced neutrophil migration (p<0.05). The injection of MTA in the air-pouch cavity induced a neutrophil migration, however, the recruitment was shorter than that induced into the peritoneal cavity. These data confirm the participation of the mast cell and macrophages in the MTA-induced neutrophil migration. The injection of MTA-stimulated macrophages and mast cells supernatants into the mice peritoneal cavity induced a significant neutrophil migration that was inhibited by the pretreatment with dexamethasone (10 æMolar), BWA4C (100 æMolar) and U75302 (10 æMolar) suggesting the release of LTB4 and cytokines and/or chemokines by these cells. Besides, macrophages and mast cells MTA-induced were able to express in vitro IL-1ß MIP-2 and 5-LO mRNA. In conclusion, the neutrophil migration into mice peritoneal cavity induced by MTA was dependent on mast cells and macrophages, which expressed IL-1ß, MIP-2 and LTB4.

Galectina-3, uma proteína que se liga a -galactosídeos, é expressa por neutrófilos e inúmeras evidências indicam que esta molécula atua como uma possível reguladora da resposta imune. Sabe-se que galectina-3 ao ligar com LPS pode levar a formação de oligômeros, que podem alterar o limiar de ativação de células da resposta imune inata. Apesar de existirem diversos estudos que mostram a influência de galectina-3 na resposta de neutrófilos frente a componentes bacterianos, os resultados são em sua maioria contraditórios e inconclusivos. Para elucidar a influência da galectina-3 na reposta imune inata a patógenos periodontais, o presente trabalho avaliou a atividade antimicrobiana in vitro de neutrófilos, isolados de camundongos selvagens (WT) ou geneticamente deficientes de galectina-3 (Gal-3KO), previamente estimulados com LPS de Aa e Pg. Os resultados não evidenciaram diferenças significativas no número de unidades formadoras de colônia (UFC) recuperadas das culturas de neutrófilos provenientes de animais deficientes de galectina-3 e do grupo controle (WT). Contudo, a estimulação de neutrófilos com LPS por 18 horas levou a redução no número de UFC recuperadas das culturas, quando comparado com as culturas estimuladas com LPS por apenas 3 horas. / Galectin-3, a protein that binds -galactosides, is expressed by neutrophils and numerous evidences indicate that this molecule acts as a possible regulator of the immune response. It is known that galectin-3 binding to LPS can lead to the formation of oligomers and thus changing the activation threshold of cells of the innate immune response. Although there are several studies that show the influence of galectin-3 in neutrophil response against bacterial components, the results are conflicting and inconclusive in their majority. To elucidate the influence of galectin-3 in the innate immune response to periodontal pathogens, the present study evaluated the in vitro antimicrobial activity of neutrophils, isolated from wild-type or galectin-3 deficient mice, previously stimulated with LPS of Aa and Pg. The results showed no significant differences in the number of colony forming units (CFU) recovered from cultured galectin-3 deficient neutrophils or control group. However, in a 18 hours time course of LPS stimulation, we observed reduction in the number of CFU, when compared to 3 hours of LPS stimulation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-22Bitstream added on 2014-06-13T20:14:20Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_ts_me_araca.pdf: 548631 bytes, checksum: f32592933503d19bda6a960ab1bf825c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embora a insuficiência renal ocorra com bastante freqüência na espécie canina, não se sabe se essa condição, a semelhança do que ocorre em humano, compromete o funcionamento dos poliformonucleares (PMN). O superóxido produzido pelo metabolismo oxidativo dos PMN exerce importante papel na resposta imune inata, destruído os patógenos fagocitados, entretanto, quando em excesso age de modo deletério promovendo a aceleração da apoptose. Testou-se a hipótese de que, a semelhança do que ocorrer em humanos, as toxinas presentes no soro de cães urêmicos alteram o metabolismo oxidativo e acelera a morte celular programada dos neutrófilos de cães normais. Para tal o sangue total e polimorfonucleares isolados de dez cães sadios foram incubados com soro urêmico. A produção de superóxido foi quantificada pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) e o índice apoptótico calculado pelo método morfométrico. A produção de superóxido gerada dos neutrófilos de sangue total tratados com soro urêmico apresentou significante redução (p < 0,05). Quando isolados e incubados com soro urêmico, apenas na metade das amostras os PMN apresentaram concomitantemente diminuição da produção de superóxido e aumento do índice apoptótico. Foi possível concluir que os componentes presentes no soro urêmico alteram ex vivo o metabolismo oxidativo e a apoptose dos PMN, fortalecendo a hipótese de que cães com de insuficiência renal têm sua imunidade inata comprometida. / Although kidney failure occurs frequently on canine species, it is unknown if this condition, being similar to what occurs in human beings, jeopardized the functioning of the polymorphonuclear (PMN). The superoxide produced by the oxidative metabolism of the PMN plays an important role in the immune inherent answer, having destroyed the pathogenic phagocytized. However, when in excess it acts in a deleterious way promoting the acceleration of apoptosis. It was tested by the hypothesis that, similar to what occurs in humans, the toxins present in the serum of uremic dogs alter the oxidative metabolism and accelerates the programmed cellular death of the neutrophis of normal dogs. For that, the total blood and polymorphonuclears isolated from ten healthy dogs were incubated with uremic serum. The production of superoxide was quantified by nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) and the index apoptic was calculated by the morphometric method. The production of superoxide generated from the neutrophil of total blood treated with uremic serum presented significant reduction (P<0.05). When isolated and incubated with uremic serum, only on half of the sample the PMN presented concomitantly a reduction of production of superoxide and increase of apoptotic index. It was possible deduct that the components present in the uremic serum alter ex vivo the oxidative metabolism and the apoptosis of the PMN, consolidating the hypothesis that dogs having kidney failure have their inherent immunity jeopardized.