Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-01Bitstream added on 2015-03-03T12:06:19Z : No. of bitstreams: 1 000805035.pdf: 2411576 bytes, checksum: 9f0726883ead4b9a53b80eccde5a3661 (MD5) / Neste estudo, caracterizamos o nicho espermatogonial em carpa avaliando a expressão do amh em testículos com alta ou baixa expressão. Para tanto, vinte carpas comum adultas receberam pulsos de BrdU (5-bromo-2'-deoxiuridina), durante 3 dias consecutivos (2 injeções intraperitoneal/dia), e os testículo foram amostrados 4 horas, 1, 2 e 3 semanas após o último pulso. As espermatogônias do tipo A indiferenciada foram as únicas células germinativas capazes de reter BrdU após 3 semanas. Curiosamente, o BrdU diluiu mais rapidamente entre as espermatogônias troncoativa enquanto que nas espermatogônias troncoreserva, manteve-se estável. As espermatogônias tronco -reserva? foram localizados próximas do interstício, enquanto as espermatogônias tronco -ativa? foram encontrados na região intertubular. Algumas células de Sertoli foram BrdU-positivas depois de 3 semanas de pulso. Entre as células de Sertoli BrdU-positivas, ~ 30-40% estão livres, enquanto que ~ 60-70% estão associadas com células germinativas. Isto sugere a existência de células de Sertoli tronco, que estão localizados no nicho espermatogonial. O gene amh foi clonado e caracterizado em carpa comum e sua expressão ocorre nas células de Sertoli que envolvem espermatogônias indiferenciadas. Os hormônios folículo-estimulante e estrógeno diminuem a expressão do amh. Em animais que possuem alta expressão de amh, possuem pouca atividade proliferativa, já com elevada proliferação, os níveis de amh diminuem significativamente. Desta forma, sugere-se que a dimunuição do amh, cria uma condição permissiva para proliferação e diferenciação das espermatogônias em carpa. Tais resultados servirão de base para aplicar este conhecimento para mediar a puberdade precoce em espécies nativas/exóticas de importância econômica na aquicultura / In this study, we start characterizing the spermatogonial niche in carp by evaluating amh expression in testes with high or low proliferative activity. 20 adult carp received pulses of BrdU (5-Bromo-2’-deoxyuridine), during 3 consecutive days (2 intraperitoneal injections/day), and testis was sample dafter 4 hours, and 1, 2 and 3 weeks after the last pulse. Type Aund were the only germ cells able to retain BrdU after a long period of chase (3 weeks). Interestingly, BrdU disappeared more quickly from -active? stem cell while in -reserve? stem cell, it remained stable. The -reserve? stem cell label-retaining cells were located near the interstitium, while -active? stem cell were found in the intertubular area. Some Sertoli cells were BrdU-positive after 3 weeks of pulse. Among the slow-dividing, BrdU-positive Sertoli cells, ~30-40% are -free?, and ~60-70% associated with germ cells. This suggests the existence of Sertoli stem cells which are located in the spermatogonial niche. The amh gene was cloned and characterized in common carp, and the amh is expressed in Sertoli cells involving undifferentiated spermatogonia. The follicle stimulating hormone and estrogen decrease amh expression. It was also shown that animals with high expression of amh, have low proliferative activity. When the testes with high proliferation, amh levels decrease significantly. Thus, it is suggested that counts down the amh creates a permissive condition for proliferation and differentiation of spermatogonial in carp. These results provide a basis for applying this knowledge to mediate early puberty in exotic/native species economically important in aquaculture

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-01Bitstream added on 2014-06-13T18:50:09Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_ma_me_botib.pdf: 2954673 bytes, checksum: c990f9b8724da166aa165e88f89d2a7b (MD5) / A infertilidade acomete 10-15% dos casais em idade reprodutiva e o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos. A fertilidade masculina e o processo de espermatogênese estão diretamente relacionados à capacidade das células de Sertoli em produzir fatores determinantes para o desenvolvimento das células germinativas. Apenas as célulasde Sertolipossuem receptores paratestosteronaeFSHe, portanto, estascélulassão as principais reguladoras da espermatogênese. Estudos sugerem que 60-70% dos casos de infertilidade masculina são considerados idiopáticos, uma vez que os mecanismos moleculares envolvidos na espermatogênese ainda são desconhecidos. Estudos recentes relatam que homens oligozoospérmicos apresentam mudança no padrão de metilação do DNA nos espermatozoides,nas regiões que controlam a expressão dos genes regulados por imprintingH19 e IGF-2. Um dos grandes responsáveis para a alteração do padrão de metilação desses genes são os fatores ambientais, especialmente compostos orgânicos de alta toxicidade, como o 2,3,7,8- Tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD). Modelos experimentais de exposição (camundongos) demonstraram que o TCDD ocasiona baixa contagem espermática e atraso na puberdade. O presente estudo correlacionou a ação do composto TCDD sobre as células de Sertoli humanas (in vitro) e sua ação na região controladoras de imprinting (ICR1) dos genes H19 e IGF-2. Inicialmente foi realizada a caracterização da amostra em estudo e foi constatado que esse tipo celular apresentrameilação entre 0 a 25% e é homozigota para os sítios polimórficos dos SNPsrs2839704 e rs10732516. Após 48 de exposição ao TCDD obervou-se tendência de aumento da metilação global do DNA da linhagem HSeC e discreto aumento da metilação dos sítios 4 e 7 de ligação do fator CTCF. A análise da expressão dos genes H19 e IGF2 deve ser finalizada... / Infertility affects 10-15% of couples on reproductive age and male factor may be responsible for 30-50% of cases. Male fertility and the spermatogenesis process are directly related to the ability of Sertoli cells to produce factors for germ cells development. Only Sertoli cells have receptors for testosterone and FSH, and therefore, these cells are the main regulators of spermatogenesis. Studies suggest that 60-70% of male infertility cases are considered idiophatic, once molecular mechanisms involved in spermatogenesis are still unknown. Recent studies report that oligozoospermic men showed an alteration of the DNA methylation pattern in the sperm, specifically in regions that control gene expression of genes regulated by imprinting: H19 and IGF2. Largely responsible for changing the methylation pattern of these genes are environmental factors, specialy organic compounds with high toxicity, such as 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-pdioxin (TCDD). Experimental models of exposure (mice) showed that TCDD causes low sperm count and delayed puberty. This study correlated the action of the compound TCDD on human Sertoli cells (in vitro) and its action on imprinted control region region (ICR1) of H19 and IGF-2 genes. It was initially performed the sample characterization and it was found that this cell type shows methylation between 0-25% and it is homozygous for the polymorphic sites of SNPs rs2839704 and rs10732516. After 48h of exposure to TCDD we observed a trend to increase global DNA methylation in HSEc lineage and also a slight increase in methylation status in the CTCF binding sites 4 and 7. Analysis of H19 and IGF2 expression must be completed to the best correlation between changes in the DNA methylation pattern and expression of these genes. Despite the important results obtained in this work, it is necessary to deepen the studies involving toxic agents such as TCDD and changes... (Complete abstract click electronic access below)