Orientadores : Maria Julia Marques, Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pertille_Adriana_M.pdf: 4891333 bytes, checksum: b74b72de020a1053a52f77477edcf61d (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: No presente trabalho, avaliamos a regeneração axonal utilizando enxerto de músculo estriado esquelético imediatamente após o seu preparo com anestésico local. O nervo ciático de ratos Wistar adultos foi seccionado, obtendo uma falha de 1 cm de comprimento e seu reparo realizado através de enxerto muscular preparado com injeção de cloridrato de lidocaína 2%. O enxerto foi implantado 15 minutos ou 24 horas após o preparo e os animais foram sacrificados 60 e 120 dias pós-cirúrgico. O nervo ciático implantado foi preparado para análise através das microscopias de luz, eletrônica e confocal. A análise morfométrica mostrou diminuição no diâmetro do axônio e da fibra nervosa, como também na espessura da bainha de mielina nos dois tipos de enxerto, com diferença significativa do controle. Os valores da razão G no coto distal dos grupos 15 minutos e 24 horas não foram diferentes do nervo normal, mostrando que níveis apropriados de mielinização foram atingidos pelos axônios regenerados. A razão G foi maior na região do enxerto em ambos os grupos, sugerindo mielinização insatisfatória dos axônios. As características ultra-estruturais dos axônios regenerados e das junções neuromusculares, em todos os grupos, foram similares ao normal. Estes resultados sugerem que não existe restrição para o uso do enxerto muscular imediatamente após o seu preparo com cloridrato de lidocaína, pois este promove regeneração nervosa semelhante àquela observada quando este tipo de enxerto é utilizado 24 horas após a injeção do anestésico. A diminuição da espessura da bainha de mielina no enxerto sugere que a associação entre célula de Schwann, axônios regenerados e lâmina basal muscular pode ser melhor investigada / Abstract: We evaluated the potential of muscle autografts to perform primary nerve repair when used immediately after their preparation with lidocaine injection. The right sciatic nerve of adult Wistar rats was sectioned and muscle grafts were used 15 minutes or 24 hours after lidocaine injection, to repair a gap 1.0 cm longo Morphometric analyses showed a decrease in axon and nerve fiber diameter, as well as in myelin thickness, which were similar for both types of grafts and significantly different ftom the control. G-ratio values in the distal stump for both groups were not different ITom the normal sciatic nerve, showing that a proper leveI of mye1ination was attained by the regenerated axons. However, within the graft, the G ratio was increased in both groups, suggesting poorer myelination in the graft region. Ultrastructural profiles of intramuscular nerve bundles and neuromuscular junctions, for both 15 minutes and 24 hours after graft implantation were similar to the normal. These results suggest that there are no restrictions to the use of a muscle graft immediately after lidocaine injection, in primary nerve repair, since the results of nerve regeneration were comparable to those observed when this type of graft is used 24 hours after being prepared. The decrease in myelin thickness in the graft suggests that the associations between Schwann cells, regenerated axons and muscle basal lamina should be further investigated to improve muscle graft nerve regeneration / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T14:15:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SabhaJunior_MarioJoseJorge_M.pdf: 6435667 bytes, checksum: 67b234a3d979480c872a267ba7d42c08 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Na reparação da lesão nervosa periférica, nem sempre é possível a simples sutura dos cotos nervosos quando há perda de tecido, pois pode submeter o nervo a uma tensão excessiva, o que prejudica sua irrigação e favorece a formação de tecido cicatricial. O nervo sural tem sido utilizado como auto-enxerto, unindo os cotos do nervo lesado. Sendo a maioria dos nervos de diâmetro superior ao do nervo sural, há necessidade de se unir paralelamente vários segmentos do nervo, para auto-implantar entre os cotos do nervo lesado (enxerto em cabo). Este procedimento tem o inconveniente de conter muitos pontos de sutura, provocando maior inflamação local, sendo que a cicatrização exagerada impede o crescimento axonal e compromete o sucesso da reparação nervosa. Além disso, ocorre perda de sensibilidade na área correspondente do nervo doador. Diversos materiais têm sido estudados, com o objetivo de substituir os auto-enxertos de nervo no reparo da lesão nervosa periférica. Dentre eles, destaca-se o músculo esquelético, cuja membrana basal, apresenta características químicas e composição molecular semelhante às das células de Schwann, atuando como guia mecânico para o crescimento axonal. No presente trabalho, o músculo sóleo direito de ratos, foi submetido a injeção de cloridrato de lidocaína a: 2% (anestésico), e em seguida, estocado em baixas temperaturas (- 4°C no grupo I e - 400C no grupo lI) e após 3(três) semanas foi dissecado para a confecção de um enxerto autólogo de 1 cm de comprimento. Utilizou-se um grupo controle de animais que teve seu músculo sóleo direito tratado com anestésico local, com 24 horas de antecedência ao auto transplante (grupo ID). Após 50 dias do auto- transplante, o nervo ciático foi exposto, fixado e dividido em 2 porções: região do enxerto e coto distal, que foram analisados em microscopia de luz. A avaliação da regeneração axonal, foi realizada através da contagem direta do número de axônios mielínicos (NAM) regenerados destas duas porções do nervo ciático nos três grupos, bem como a mensuração do diâmetro dos axônios mielínicos (DAM), diâmetro das fibras mielínicas (DFM) e espessura da bainha de mielina (EBM) e razão G (RG). O presente trabalho, mostra que a regeneração axonal foi semelhante nos três grupos experimentais, sugerindo que a criopreservação do IDÚScu1o-esquelético é potencialmente útil, por permitir a criação de um banco de auto-enxertos de músculo esquelético para o reparo das lesões do nervo periférico / Abstract: In peripheral nerve regeneration it is not always possible to simply suture nerve stumps when there is loss of tissue, as this may place excessive tension on the nerve and hinder irrigation, favoring the development of scar tissue. The sural nerve has often served as auto-graft, binding the stumps of the transected nerve. As most nerves have larger diameters than the sural nerve it is necessary to join several segments in parallel for self implantation among the stumps of the damaged nerve (autologous cable graft). This procedure has the drawback of having many suture points, promoting more local inflammation and exaggerated development of scar tissue that prevents axonal growth, inhibiting the successful nerve regeneration. Furthermore, there is loss of sensitivity in the area corresponding to the donor nerve. Several materials have been tested with the objective of replacing nerve autografts in the regeneration of peripheral nerve lesion. Among them the skeletal muscle stands out, as its basal membrane presents chemical and molecular composition characteristics that are similar to those of Schwann cells, acting as a mechanical guide for axonal growth. In the present paper, rats right soleus muscle was injected with 2% lidocaine hydrochloride (anesthetic) stored at low temperatures (- 4°C in group I and - 40°C in group 11) and 3 (three) weeks later it was dissected to prepare a 1 cm long autologous graft. A control group of animals had their right soleus muscle treated with a local anesthetic 24 hours prior to self-transplant (group li). Fifty days after the self transplant the sciatic nerve was exposed, fixated and divided into 2 parts: the graft site and the distal stump, analyzed by light microscopy. The axonal regeneration evaluation was carried out by direct counting of the number of myelinated axons (NMA) regenerated ftom these two pars of the sciatic nerve in the three groups, as well as the measurement of myelinated axon diameter (MAD), myelinated fiber diameter (MFD), myelinated sheath thickness (MST) and G ratio (GR). The present study shows that axonal regeneration was similar in the three experimental groups, suggesting that cryopreservation of skeletal musc1e is potentially useful, once it a11ows the development of a skeletal musc1e autografts storage to repair the peripheral nerve injuries / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular

Orientadores: Francesco Langone, Marcelo Augusto Marretto Esquisatto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:40:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Scabora_JoseEduardo_M.pdf: 8650752 bytes, checksum: 092b5a116b39be2a38c7330cc49d94e2 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os efeitos de soluções conservadoras de órgãos (SC) sobre a estrutura e a viabilidade de enxertos de nervos periféricos são pouco conhecidos. Neste estudo investigamos a organização histológica e ultra-estrutural de enxertos após sua manutenção em dois tipos de SC e após transplante autólogo. Ratos Wistar machos foram agrupados para obtenção de nervos ciáticos normais (NN), transplantados a fresco (NF), conservados em solução de Wisconsin/Belzer ou solução de Collins, por 24 ou 72 horas a 4°C (W1,W3;C1,C3), e conservados e transplantados (W1-T,W3-T;C1-T,C3-T). Após os períodos de conservação ou transplante, os espécimes foram processados para análise ao microscópio óptico e eletrônico. A morfologia dos segmentos de nervos conservados apresentou alterações na sua estrutura comparativamente aos segmentos de nervos frescos. Foi observada redução da basofilia tecidual em todos os segmentos conservados quando comparados ao nervo normal. Esta redução foi mais acentuada no grupo C3. Os grupos W1 e W3 apresentaram aspectos semelhantes entre si. Em todos os grupos não foram observadas alterações quanto à distribuição e organização das fibras colágenas. Após 50 dias de transplante a basofilia tecidual e a celularidade foram semelhantes entre os grupos W1-T, W3-T; C1-T, C3-T e NF. Por outro lado, a vascularização nos enxertos dos grupos tratados mostrou-se aparentemente mais densa que os enxertos do grupo NF. Não foram observadas alterações nas células do perineuro, mas em todos os grupos tratados foram detectadas áreas com abundante deposição de fibras colágenas entre as camadas de células perineurais. Este fato foi especialmente mais intenso nos grupos C 1- T e C3- T. A análise ultra-estrutural revelou no grupo C3 uma acentuada desorganização das fibrilas de colágeno do endoneuro quando comparado ao grupo NN. Os grupos C 1 e C3 apresentaram maior freqüência de alterações das lamelas da bainha de mielina, comparativamente aos grupos Wl e W3, e seus axônios exibiam clara desorganização dos neurofilamentos. Não foram detectadas alterações na lâmina basal das fibras mielínicas e dos feixes amielínicos. As células de Schwann mantiveram a integridade de sua estrutura nos grupos Cl e W1. Contudo, no grupo C3 foram observadas numerosas células de Schwann exibindo vacuolização e aumento de volume do citoplasma. Os grupos W1- T e W3- T apresentaram maior densidade de fibras mielínicas e organização tecidual semelhante ao grupo NF. Por sua vez, os grupos C1-T e C3-T apresentaram grande número de mini-fascículos e colágeno endoneural. O perineuro dos diferentes grupos apresentou-se semelhante ao observado nos grupos NN e NF. As análises estrutural e ultra-estrutural mostraram que a preservação das células de Schwann e demais elementos que suportam a regeneração axonal foi superior nos enxertos conservados na solução de Wisconsin/Belzer. Estes resultados embasam estudos em andamento para a formulação de SC que viabilizem a criação de bancos de nervos para transplantes heterólogos / Abstract: The effects of the organ conservative solutions (CS) on the structure and the viability of peripheral nerve grafts are largely unknown. We investigate the histology and the ultrastructure of peripheral nerve grafts after storage in two types of CS and/or used for autologous transplantation. A group of male Wistar rats was used to obtain sciatic nerve grafts that had been conserved in Wisconsin/Belzer (W) or Collins (C) solutions, for 24 or 72 hours 4°C (WI, W3; CI, C3). Another group of animals was used to obtain tibial nerve grafts that were immediately transplanted (NF) or conserved in W or C solutions, for 24 or 72 hours 4°C, and then transplanted (WI-T, W3-T, CI-T, C3-T). After the conservation periods (24 or 72 hours) or 50 days after the transplantation the nerve grafts had been processed for light and electronic microscope analysis. The basophilia was decreased in the specimens of the groups conserved in S or C solutions when compared to normal nerves (NN). This reduction was more prominent in the C3 group. The Wl and W3 groups presented similar aspects. No alterations were observed in the distribution and organization of collagen fibers. Fifty 50 days after transplantation a similar basophilia and cellularity were found in WI-T, W3-T, CI-T, C3-T and NF groups. On the other band, the vascularization of the conserved grafts was more conspicuous than in the NF grafts. No alteration was observed in the perineurium but some intense deposition of collagen fibers was similar to that observed in nerve fibrosis has detected in all the groups. This fact was more frequent in CI-T and C3-T groups. The ultra-structural analysis of the C3 group showed a higher degree of collagen fibrils derangement in the endoneurium in relation to the normal nerves. The C 1 and C3 groups presented a higher frequency myelin sheath alterations when compared to the WI and W3 groups and the axons exhibited neurofilament derangement. None alteration was detected in the basal lamina of the myelinated or unmyelinated nerve fibers. The integrity of Schwann cells structure was maintained in the Cl and WI groups, but exhibited vacuolization and cytoplasmatic edema in C3 group. The Wl- T and W3- T groups presented a higher density of the myelinated fibers and a similar tissue organization to the NF group. The CI-T and C3-T groups presented a large number of mini-fascicles and endoneural collagen. The perineurium structure was similar to the observed in NN and NF groups. The structural and ultrastructural analysis have shown that the preservation of the Schwann cells and the other elements which support the axonal regeneration was greater in the grafts that had been conserved in the Wisconsin/Belzer solution. Our observations contribute to better known the effects of conservative solutions on peripheral nerves and support the creation of a bank of nerve grafts for heterologous transplantation / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Francesco Langone, Jose Francisco Figueiredo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T03:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carone_AntonioLuiz_M.pdf: 4209839 bytes, checksum: ac2812f726b8c72d34dcd65a44645cb7 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: As lesões traumáticas incidem com grande freqüência sobre o sistema nervoso periférico, apresentando prognóstico reservado principalmente quando ocorre transecção completa do nervo. Todavia, com o melhor conhecimento dos fenômenos celulares e moleculares envolvidos na regeneração axonal e das técnicas microcirúrgicas, tem-se buscado melhorar esse quadro. Neste sentido, tem sido objeto de investigação nos últimos anos a criação de um banco de nervos que viria facilitar o reparo de lesões nervosas com extensa perda de substância. Assim, diversos métodos vem sendo testados para a conservação dos segmentos de nervos para posterior transplante. Neste estudo foram analisados os aspectos morfológicos e quantitativos de enxertos autólogos previamente mantidos em dois tipos de solução conservadora. Foram utilizados quarenta ratos machos da linhagem Wistar, sendo que 16 deles foram subdivididos em grupos de 4 animais, que tiveram os nervos tibial esquerdo e direito removidos e mantidos em solução conservadora de Wisconsin/Belzer (4°C), por 24 ou 72 horas, ou em solução conservadora de Collins (4°C), por 24 ou 72 horas, respectivamente. Após os períodos de conservação previstos, estes nervos foram processados para análise histológica, conforme descrito a seguir. Outros 4 animais, controles, tiveram os nervos tibial direito e esquerdo removidos e imediatamente processados para histologia. Por sua vez, um grupo de 15 animais teve o nervo tibial esquerdo removido e conservado por 24 horas ou 72 horas em solução de Wisconsin/Belzer (4°C) ou solução de Collins (4°C), e posteriormente transplantado no mesmo animal para o lado direito. Outros' 5 animais, tiveram o nervo tibial esquerdo retirado e imediatamente transplantado para o lado direito. A conduta cirúrgica foi precedida sempre de anestesia profunda com pentobarbital sódico (50mg/Kg/peso) para todos os animais. Após 50 dias do transplante, os animais que receberam os enxertos nervosos foram anestesiados para exposição do respectivo enxerto e para sua fixação "in situ" com uma solução de glutaraldeído 2% e formaldeído 1 %, em tampão fosfato de sódio 0,1 M. Após serem mantidos por 24 horas nesta solução, os segmentos do enxerto foram pós-fixados em OS04 e incluídos em resina. A seguir, de cada' espécime foram obtidos cortes semi-finos da porção média do enxerto, os quais foram corados com azul de Toluidina e analisados em microscópio de luz convencional. Para a análise quantitativa dos axônios regenerados no enxerto, foram amostrados cinco campos diferentes e fotografados sob objetiva de imersão (100x). Os negativos foram copiados em papel fotográfico com o aumento final de 1625 vezes e procedeu-se a contagem dos axônios mielínicos com o auxílio de contador eletrônico. A análise histológica mostrou que a regeneração axonal, após 50 dias do transplante, estava mais avançada nos enxertos previamente mantidos nas solução de Wisconsin/Belzer, em relação aos enxertos mantidos na solução de Collins, e era semelhante à observada nos enxertos frescos. A análise da densidade de axônios mielínicos regenerados nas diferentes condições experimentais confirmou os resultados histológicos. Assim, o número de axônios mielínicos regenerados em 104µm2 de área nos enxertos previamente mantidos em solução Wisconsin/Belzer, por 24 ou 72 horas, foram, respectivamente, 433±12 e 430±32. Sendo estes resultados significamente superiores aos observados nos enxertos mantidos em solução de Collins por 24 horas (344±20b) e 72 horas (327±29 b) e semelhante aos computados nos enxertos frescos (407±1±13a). Estes resultados mostraram que a composição da solução conservadora de Wisconsin/Belzer é capaz de manter a viabilidade dos enxertos de nervos, nos períodos de tempo estudados, de maneira superior à da solução de Collins, podendo ser proposta como um meio adequado para a preservação dos nervos até o seu transplante / Abstract: Traumatic lesions are very often on peripheral nervous system, and have reserved prognostic when a loss important nerve segment occurs. However, the knowledge about the cellular and the molecular events promoting the nerve regeneration, besides the use of microsurgical techniques, gives a better perceptive to improve the peripheral nerve repair nowadays. In this scenario, several assays were done to develop a nerve bank that would be used for surgery when a graft is necessary to repair a nerve gap. In this study we investigate the morphological and quantitative aspects of the nerve regeneration across autologous nerve grafts previously stored in two types of preserve solutions. Forty Wistar male rats were used and 16 of them had the left and right tibial nerves removed and stored during 24 or 72 hours in Wisconsin/Belzer solution or in Collins solution (4°C). Following previous stórage period those nerves are processed for histology. Other 4 animals had the left and the right tibial nerve removed and immediately processed for histology. A group of 15 animals had the left tibial nerve removed and stored during 24 and 72 hours in Wisconsin/Belzer solution or in Collins solution and subsequently transplanted in the right side. Other 5 animals had the left tibial nerve removed and immediately transplanted to the right side. After 50 days of the transplant, the animals were reoperated to remove the nerve graft. It was exposed, dissected, fixed "in situ" using a fixative solution (2% paraformaldehyde, 1 % glutaraldehyde, in PBS 0,1 M, pH 7,4) and removed. Following, the nerve graft was postfixed in OS04 and embedded in resin. Semi-thin (1,0 µm) cross sections of the middle region of the nerve graft were obtained, stained in toluidine blue and observed in light microscopy. To perform the quantitative analysis the cross section of the graft was sampled in 5 different fields and the density of mielinated nerve fibers on 1 0 / Mestrado / Neurologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Humberto Santo Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-27T00:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teodori_RosanaMacher_D.pdf: 4843039 bytes, checksum: f6d5aea86bce79d48c03523f0bf929e3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar morfometricamente a regeneração axonal em autoenxerto de lâmina basal muscular tratado com injeção intramuscular de cloridrato de lidocaína a 2% e estabelecer uma análise comparativa com a regeneração obtida através de autoenxerto de nervo. Para isto foram avaliados os diâmetros dos axônios mielínicos e das fibras nervosas regeneradas, além da espessura de suas respectivas bainhas de mielina. Ratos adultos tiveram o músculo sóleo direito exposto, recebendo injeção de 0,1 ml de cloridrato de lidocaína a 2%. Após 24 horas, o ventre muscular do sóleo foi retirado, sofrendo uma fina dissecção para confecção de um retalho de 5 mm de comprimento e espessura semelhante à do nervo isquiático. Em seguida, o nervo isquiático esquerdo foi seccionado e o retalho muscular implantado na fenda entre os cotos nervosos, com sutura epineural. Outro grupo de animais teve o nervo isquiático esquerdo exposto, seccionando-se um fragmento de 5 mm, que sofreu inversão de 1800 e foi imediatamente fixado aos cotos com sutura epineural. Um terceiro grupo teve o nervo isquiático seccionadoe mantido no leito, sem reconexão. O grupo controle consistiu de nervos isquiáticos de animais normais. Após 50 dias de sobrevida, o nervo isquiático esquerdo foi exposto, fixado "in situ" e dividido em 3 porções: coto proximal, coto distal e região do enxerto, que foram processadas para microscopia eletrônica, sendo que os axônios regenerados nos dois grupos experimentais (autotransplante de músculo e autotransplante de nervo) e grupo controle foram analisados histológica e morfometricamente. O grupo de regeneração espontânea não foi submetido a análise morfométrica em função da pobre regeneração axonal observada. Nossos resultados apontam que os axônios atingiram o coto distal em todos os animais dos dois grupos experimentais. A análise histológica mostrou não haver diferenças entre os axônios dos dois grupos no que diz respeito ao aspecto ultraestrutura!. Na região do enxerto a distribuição dos axônios era característica, formando minifascículos, sendo restabelecida a organização fascicular no coto dista!. A análise morfométrica mostrou não haver diferença significativa entre os dois grupos. Concluímos que o enxerto muscular tratado com cloridrato de lidocaína a 2% produziu um nível de maturação axonal semelhante àquele observado em autoenxerto de nervo / Abstract: The aim of the present was to perform a morphometric study to comparatively evaluate axonal regeneration after muscle and nerve autografts. Adult rats had their right soleus muscles injected intracutaneously with 0,1 ml of 2% lidocaine hydrochloride. Twenty-four hours later the injected muscle was removed and a lidocaine muscle graft was obtained by trimming the muscle to a rectangular block of approximately 5.0 mm in length. The left sciatic nerve was exposed at the mid-thigh region and a segment removed so that a final 5.0 mm long gap was produced. The muscle graft was coaxially autografted to the epineurium between the proximal and distal nerve stumps. In another group the left sciatic nerve was exposed and a 5.0 mm fragment was removed, inverted in 180 degrees and immediately autografted to the epineurium. In a third group the sciatic nerve was cut and kept in position, without surgical repair. Sciatic nerves from non-operated rats were used as controls. Axonal regeneration was studied ultrastructurally and morph metrically 50 days after the insertion of muscle and nerve autografts. No ultrastructural differences were seen in regenerated axons after muscle or nerve autografts; typically, minifascicles were present in the graft and the fascicular organization was reestablished in the distal stump. Morphometric analyses showed no significant differences between the two groups. We conclude that the use of this model produced a level of maturation similar to that described in nerve autografts / Doutorado / Doutor em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador : Heloisa Amelia de Lima Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T08:10:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_OsvaldoBenedito_M.pdf: 2600674 bytes, checksum: 8fb08d1713ca5998127db5bcf69af568 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: As vitaminas do complexo B são importantes tanto no metabolismo do sistema nervoso central como periférico. Sua deficiência pode causar degeneração do axônio ou da bainha de mielina das fibras nervosas; sendo porém revertido o quadro quando da sua administração. Varias patologias do sistema nervoso periférico causam lesão da bainha de mielina, ou do axônio ou de ambos. Assim o uso de vitaminas está indicado como medida de tratamento, porém há controvérsia a respeito. O objetivo deste trabalho foi estudar a influência da tiamina, piridoxina e cianocobalamina durante a regeneração axonal. Ratos adultos foram divididos em três grupos: I II III Nos animais dos grupos I e II foi injetado álcool etílico a 95% no nervo isquiático esquerdo, levando a degeneração da bainha de mielina e do axônio das fibras nervosas. Os animais do grupo I receberam via oral tiamina, piridoxina e cianocobalamina diariamente, os do grupo II não receberam-nas e os animais do grupo fi foram usados para análise morfoquantitativa do nervo isquiático normal. Após 60 dias da infiltração com álcool etílico a 95%, o nervo isquiático esquerdo de todos os animais foi removido, processado para microscopia de luz e eletrônica, submetido à análise quantitativa e qualitativa. Os resultados mostraramnão haver diferenças histológicas entre os grupos I e II. A análise do número médio de axônios mielínicos e da área média da secção transversa mostraram não haver diferença significativa entre os três grupos. Não foram observados sinais de intoxicação vitamínica com a dosagem utilizada / Abstract: The vitamin B complex are important in the metabolism of the central and peripheral nervous system. Its deficiency can lead to the disintegration of the myelin sheath and to the to axonal damage, and can be relieved by appropriated therapeutic measures. Several diseases of the peripheral nervous system may lead damage in the myelin sheath or in the axon or both. This fact has lead to the recommendation that vitamins B complex can be administrated as a therapeutic method, but there is controversy about this. The aim of this work was to study the influency of the thiamine, pyridoxine and cobalamine in the course of axonal regeneration. Fully-grown rats were divided in three groups: I II III. In the animals of the groups I and II were injected ethylic alcohol in concentrationof 95% in de left ciatic nerve, what promoted degeneration of the myelin sheat and the axon of the nerve fibers. The animals of the group I daily received thiamine, pyridoxine and cobalamine by oral way, that of the group II do not received the vitamins and that of the group III were used to provide histological and quantitative data of the normal catic nerve. Sixty days after the application of ethylic alcohol - 95%, the left ciatic nerve of all animals were removed, processed for light and electron-microscopy,and carried to a histological and quantitative analysis. The results showed no histological differences between the groups I and II.The analysis of the number of the myelinic axons and the value of the cross section area showed no significant difference among the three groups. It was not seen any sign of intoxication by vitamins, with the doses used in the present study / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-26Bitstream added on 2014-08-13T18:01:15Z : No. of bitstreams: 1 000733095_20141006.pdf: 458818 bytes, checksum: 5c6dc7bade9ad320ceb2ea1f2092fd78 (MD5) / As lesões de nervos periféricos representam um grande desafio para a medicina. Inúmeras técnicas visam solucionar a regeneração do nervo periférico. Os protocolos de recuperação funcional destes nervos são diversos e os resultados nem sempre apresentam soluções que promovam a regeneração da via motora e sesitiva. Com o advento da engenharia tecidual, a partir da diferenciação de células-tronco, surgiu uma nova alternativa terapêutica para a regeneração de nervos. O objetivo deste trabalho é estudar a regeneração de nervo mediante tubulização por enxerto de veia autóloga e verificar se o uso da combinação de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) e plasma rico em plaquetas (PRP) na tubulização do nervo fibular comum altera a morfologia e fisiologia deste nervo e de músculos inervados por ele. Os animais foram divididos em seis grupos, sendo três controles e três experimentais. O G1 (n=10) representou o controle inicial. Os grupos G2, G3 e G4 (n=20) representaram os Grupos Experimentais e receberam, após ressecção do segmento nervoso, enxerto de veia jugular externa de 20 mm tubulizando os dois cotos do nervo, sendo que G2 não recebeu preenchimento, G3 foi preenchido com PRP, G4 foi preenchido com PRP e células tronco, G5 (n=10) representou o controle final e o G6 (n=20) representou o controle de desnervação. Foram obtidas células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) do mesmo animal, com caracterização fenotípica, utilizando CD90 e CD44 identificando a expressão média de 86,5%. As CTM-TA foram expandidas em cultura e aplicadas na concentração de 5x106 por animal. O índice funcional foi avaliado pela marcha, testes eletrofisiológicos de latência e amplitude e ainda foi realizada a análise morfométrica das fibras nervosas, observando o diâmetro mínimo da fibra, diâmetro mínimo do axônio, área das fibras, área do axônio, área ... / As lesões de nervos periféricos representam um grande desafio para a medicina. Inúmeras técnicas visam solucionar a regeneração do nervo periférico. Os protocolos de recuperação funcional destes nervos são diversos e os resultados nem sempre apresentam soluções que promovam a regeneração da via motora e sesitiva. Com o advento da engenharia tecidual, a partir da diferenciação de células-tronco, surgiu uma nova alternativa terapêutica para a regeneração de nervos. O objetivo deste trabalho é estudar a regeneração de nervo mediante tubulização por enxerto de veia autóloga e verificar se o uso da combinação de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) e plasma rico em plaquetas (PRP) na tubulização do nervo fibular comum altera a morfologia e fisiologia deste nervo e de músculos inervados por ele. Os animais foram divididos em seis grupos, sendo três controles e três experimentais. O G1 (n=10) representou o controle inicial. Os grupos G2, G3 e G4 (n=20) representaram os Grupos Experimentais e receberam, após ressecção do segmento nervoso, enxerto de veia jugular externa de 20 mm tubulizando os dois cotos do nervo, sendo que G2 não recebeu preenchimento, G3 foi preenchido com PRP, G4 foi preenchido com PRP e células tronco, G5 (n=10) representou o controle final e o G6 (n=20) representou o controle de desnervação. Foram obtidas células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) do mesmo animal, com caracterização fenotípica, utilizando CD90 e CD44 identificando a expressão média de 86,5%. As CTM-TA foram expandidas em cultura e aplicadas na concentração de 5x106 por animal. O índice funcional foi avaliado pela marcha, testes eletrofisiológicos de latência e amplitude e ainda foi realizada a análise morfométrica das fibras nervosas, observando o diâmetro mínimo da fibra, diâmetro mínimo do axônio, área das fibras, área do ...

Orientador: Fausto Viterbo / Banca: Antonio de Castro Rodrigues / Banca: Gerson Chadi / Banca: Antonio João Tedesco-Marchese / Banca: Jesus Carlos Andreo / Resumo: Foram estudadas neste trabalho quatro maneiras de regenerar o nervo ciático do rato em "gap" de 1O milímetros mediante tubulização com v4e'ia n.o.r.m. al e ao avesso, preenchida ou não com o músculo tibial caudal direito:"Foram utilizados 70 ratos Wistar, machos, pesando entre 180 a 210 g, divididos em quatro grupos experimentais com 15 animais cada grupo (VASP - veia ao avesso sem preenchimento; VAME - veia ao avesso preenchida com músculo esquelético; VNSP - veia normal sem preenchimento e VNME - veia normal preenchida com músculo esquelético) e um grupo com 10 animais (Sham) usado como controle. A veia jugular externa esquerda foi utilizada como enxerto venoso. No grupo "Sham" o nervo ciático direito foi exposto sem realizar-se nenhum procedimento sobre o mesmo. Os animais foram sacrificados 12 semanas após a cirurgia. Retirou-se amostras nos locais dos enxertos e nos cotos distais do nervo reparado, destinadas às observações histomorfológicas e morfométricas. Para a análise estatística dos cinco grupos experimentais utilizou-se a análise de variância (ANOV A) com teste F e o método de Scheffé. Observou-se regeneração nervosa em todos os grupos. Os melhores resultados foram obtidos nos grupos VASP, VAME e VNSP. O pior resultado foi com o grupo VNME na maioria dos atributos analisados, tanto no enxerto quanto no coto distal. / Abstract: The venous tubulization procedure filled with muscle was used to study nerve regeneration of the right sciatic nerve a 10 mm gap using different procedures. Seventy male Wistar rats weighting 180 to 210 g were divided into four experimental groups: inside-out vein graft (lOVG); inside-out vein graft filled with skeletal muscle (lOVGSM); standard vein graft (SVG) and standard vein graft filled with skeletal muscle (SVGSM), with 15 animaIs each. Ten rats were used as sham control. Left external jugular vein were harvested and used to bridge a 10 mm gap. 1n sham group the right sciatic nerve was expose without achieve someone procedure on nerve. AnimaIs were sacrificed 12 weeks after tubulization and fragments obtained from the grafts and distal stumps were histomorphometric analyzed. Statistical analysis (ANOVA, F-test and Scheffe's method) indicated that the best results regarding nerve regeneration were observed in 10VG; 10VGSM and SVG groups. The worst result was obtained with SVGSM. / Doutor

Orientador: Fausto Viterbo / Banca: Antonio de Castro Rodrigues / Banca: Jesus Carlos Andreo / Banca: Valéria Paula Sassoli Fazan / Banca: Jayme Adriano Farina Junior / Resumo: As lesões de nervos periféricos representam um grande desafio para a medicina. Inúmeras técnicas visam solucionar a regeneração do nervo periférico. Os protocolos de recuperação funcional destes nervos são diversos e os resultados nem sempre apresentam soluções que promovam a regeneração da via motora e sesitiva. Com o advento da engenharia tecidual, a partir da diferenciação de células-tronco, surgiu uma nova alternativa terapêutica para a regeneração de nervos. O objetivo deste trabalho é estudar a regeneração de nervo mediante tubulização por enxerto de veia autóloga e verificar se o uso da combinação de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) e plasma rico em plaquetas (PRP) na tubulização do nervo fibular comum altera a morfologia e fisiologia deste nervo e de músculos inervados por ele. Os animais foram divididos em seis grupos, sendo três controles e três experimentais. O G1 (n=10) representou o controle inicial. Os grupos G2, G3 e G4 (n=20) representaram os Grupos Experimentais e receberam, após ressecção do segmento nervoso, enxerto de veia jugular externa de 20 mm tubulizando os dois cotos do nervo, sendo que G2 não recebeu preenchimento, G3 foi preenchido com PRP, G4 foi preenchido com PRP e células tronco, G5 (n=10) representou o controle final e o G6 (n=20) representou o controle de desnervação. Foram obtidas células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) do mesmo animal, com caracterização fenotípica, utilizando CD90 e CD44 identificando a expressão média de 86,5%. As CTM-TA foram expandidas em cultura e aplicadas na concentração de 5x106 por animal. O índice funcional foi avaliado pela marcha, testes eletrofisiológicos de latência e amplitude e ainda foi realizada a análise morfométrica das fibras nervosas, observando o diâmetro mínimo da fibra, diâmetro mínimo do axônio, área das fibras, área do axônio, área ... / Abstract: Peripheral nerves injuries represent an enormous clinical challenge in medicine. Numerous techniques aim for regeneration of peripheral nerves. Nowadays, there are different protocols concerning to its functional retrieval and the results of current researches do not always show solutions to promote a regeneration of motor and sensory via. With the advent of tissue engineering, from the stem cells differentiation, arise a new therapeutic alternative in nerve regeneration. The aim of this study was to analyze the nerve regeneration by tubulization technique using autologous graft, as well as to verify whether the combination of mesenchymal stem cells from fat tissue (CTM-TA) and platelet-rich plasma (PRP) in tubulization of Commom Peroneal Nerve modify the morphology and physiology of this nerve nor muscles that it innervates. Animals were divided into six groups, consisting in three control and three experimental groups. G1 group (n=10) represented the Inicial Control Group. G2, G3 and G4 group (n=20) corresponded to the experimental groups and also receive, after resection of the nerve, an external jugular vein graft of 20 mm, thereby performing a tubulization of the two nerve stumps, where G2 was not filled; G3 was filled with PRP; G4 was filled with PRP and stem cells; G5 (n = 10) represented the Final Control Group and G6 (n = 20) symbolized the Control Denervation Group. It was obtained mesenchymal stem cells from fat tissue (MSC-FT) from the same animal, with phenotypic characterization using CD90 and CD44, thus identifying the average expression of 86.5%. MSC-FT were expanded in culture and applied at a concentration of 5x106 per animal. The functional index was evaluated by walking tracks analysis, electrophysiological latency test and amplitude, besides the morphometric analysis of nerve fibers (observing the minimum diameter of the fiber), the minimum diameter of the axon, fiber area, axon area, myelin area and myelin sheath ... / Doutor

Orientadores: Humberto Santo Neto, Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T20:49:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teodori_RosanaMacher_M.pdf: 4221912 bytes, checksum: b1fee60f9fae41c32572f016ef9c36e8 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da regeneração axonal através de retalho de lâmina basal muscular obtido por injeção intramuscular de um anestésico local. O quadro regenerativo nessa situação foi comparado à regeneração axonal em autoenxerto de nervo. Um grupo de animais teve o músculo sóleo direito exposto, recebendo injeção de 0,1 ml de cloridrato de lidocaína a 2%. Após 24 horas, o ventre muscular do sóleo foi retirado, sofrendo uma fina dissecção para, a confecção de um retalho de 5 mm de comprimento e espessura semelhante à do nervo ciático. Em seguida, o nervo ciático esquerdo foi seccionado e o retalho muscular implantado na fenda entre os dois cotos do nervo, com sutura epineural. Outro grupo de animais teve o nervo ciático esquerdo exposto, seccionando-se um fragmento de 5 mm, que sofreu inversão de 180 'GRAUS' e foi imediatamente fixado aos cotos com sutura epineural. O grupo controle consistiu de nervos ciáticos de animais normais. Após 50 dias de sobrevida, o nervo ciático esquerdo foi exposto, fixado "in situ" e dividido em 3 porções: coto proximal, coto distal e região do enxerto, os quais foram processados para microscopia eletrônica. Em seguida, procedeu-se a análise qualitativa e quantitativa dos axônios regenerados nos dois grupos experimentais (autotransplante de músculo e autotransplante de nervo), bem como no grupo controle. Nossos resultados mostraram que em todos os animais houve recolonização do coto dista!. A análise qualitativa mostrou não haver diferenças entre os axônios dos dois grupos no que diz respeito ao aspecto ultraestrutural, incluindo distribuição de microtúbulos, neurofilamentos, bainha de mielina, células de Schwann, etc. Na região do enxerto, nos dois grupos, a distribuição dos axônios era característica, formando minifascículos. Os axônios eram aparentemente menores em diâmetro e espessura de bainha de mielina, quando comparados ao coto proximal e controle. No coto distal observou-se a reorganização em fascículos, com axônios ainda aparentemente, menores em diâmetro e espessura de bainha de mielina. A análise quantitativa mostrou que, no grupo de enxerto de músculo, o número de axônios no coto distal (13792,57 '+ ou -' 1145,10) foi maior, mas não estatisticamente significativo em relação àquele do enxerto de nervo (13592,43 '+ ou -' 1420,04). Concluiu-se que a regeneração axonal através de autoenxerto de lâmina basal de músculo esquelético obtido com injeção de anestésico local foi da mesma ordem daquela verificada em autoenxerto de nervo / Abstract: The aim of the present investigation was to study the efficacy ofaxonal regeneration after sciatic nerve cut and repair by muscle basal lamina autografts. It was done in comparison with axonal regeneration through nerve autograft. In one group of animals, muscle basal lamina autograft was obtained by injecting soleus muscle of adult ice with 2% lidocaine hydrochloride. Twenty four hours later a fragment of the injected muscle was dissected out and trimmed in order to get a graft big enough to fil! a gap of 5 mm. The left sciatic nerve was then cut and repaired with the graft held by epineural sutures at the proximal and distal nerve stumps. In another group, a fragment of 5 mm was dissected out from the left sciatic nerve and replaced at the same site by epineural sutures. Fifty days after surgery, animals from both groups (nerve autograft and muscle basal lamina autograft) were sacrificed and three fragments of the left sciatic nerve (distal and proximal to the grafted site and the grafted site itself) were processed for electron-microscopy. Ultrastructural analysis showed that there were no differences between regenerated axons in muscle autograft and nerve autograft. Also the overall arrangement of the axons at the graft site was in accordance with that described in the literature. Quantitative results show that in both cases axons crossed the graft site and reached distal stump. We noticed that there are no significant differences on the axonal regeneration between nerve autograft and muscle basal lamina autograft. On the nerve autograft we observed 13.592 '+ ou -' 1420) myelinated regenerated axons on the distal stump, and on the muscle basal lamina autograft 13.792 '+ ou -' 1145). These differences were not statistically significant. We conclude that muscle basal lamina grafts offer conditions that allow axonal regeneration in a very similar way to that observed with a regular nerve autograft / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental