Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-02-09T17:43:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_IntensificacaoComportamentoAnsiedade.pdf: 965220 bytes, checksum: a80564a45b42482d8611ce52d7e7f125 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-02-10T12:19:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_IntensificacaoComportamentoAnsiedade.pdf: 965220 bytes, checksum: a80564a45b42482d8611ce52d7e7f125 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T12:19:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_IntensificacaoComportamentoAnsiedade.pdf: 965220 bytes, checksum: a80564a45b42482d8611ce52d7e7f125 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O crescente consumo de bebidas com elevado teor de cafeína pode resultar no aparecimento de sintomas provenientes do transtorno de ansiedade induzida por essa droga. Atualmente, tem-se utilizado a cafeína como um indutor farmacológico do comportamento tipo ansiedade e essa indução pode facilitar a melhor compreensão da relação entre alterações comportamentais e os mecanismos de ação envolvidos nesse efeito, portanto o presente trabalho propôs que a via nitrérgica poderia ser um mecanismo chave para explicar os efeitos comportamentais produzidos pela cafeína e que esses efeitos poderiam ser revertidos por um antioxidante, logo, no presente trabalho nós tivemos como objetivo avaliar o possível efeito do L-NAME e do α-tocoferol no comportamento tipo ansiedade ampliado pela cafeína nos testes de preferência claro/escuro (PCE) e distribuição vertical eliciada pela novidade (DVN) em Daniorerio. Foram utilizados peixes da espécie Daniorerio(n=178) subdivididos nos seguintes grupos experimentais: SAL – salina 0,9%; CAF – cafeína 100 mg/kg; DMSO – dimetilsulfóxido 0,1%; L-NAME - (N -Nitro-L-arginina-metil éster hidrocloreto) 10 mg/kg; TF – α-tocoferol 1 mg/kg (receberam apenas uma injeção por i.p); SAL + SAL; DMSO + SAL; SAL + CAF; L-NAME + SAL; L-NAME +CAF; TF + CAF (receberam duas injeções seguidas, uma injeção de cada substância na forma de cotratamento, por i.p). Os animais foram submetidos ao teste de preferência claro/escuro e de distribuição vertical eliciada pela novidade. Todos os testes foram filmados e os vídeos foram avaliados utilizando o X-PLO-RAT. Os dados foram expressos em média ± erro padrão. Foi aplicado o teste de normalidade utilizando o teste Shapiro-Wilk e o teste paramétrico ANOVA de uma via com pós-teste Tukey, considerando significativos valores com p<0,05. Nós demonstramos que o α-tocoferol na dose de 1 mg/kg reverteu todos os parâmetros do comportamento tipo ansiedade ampliado pela cafeína nos testes de PCE e do DVN e esse efeito foi semelhante ao observado quando administrado um inibidor da enzima óxido nítrico sintase (NOS), L-NAME. Portanto, o presente trabalho demonstrou pela primeira vez que o efeito comportamental ampliado pela cafeína no teste escotáxico e no DVN pode ser modulado pelo sistema nitrérgico e que o α-tocoferol reverte esse efeito comportamental induzido pela cafeína de forma total. / The growing consumption of beverages with high caffeine content can result in the appearance of symptoms from anxiety disorder induced by this drug. Currently, it has been used as a pharmacological caffeine inductor anxiety-like behavior and this induction may help facilitate better understanding of the relationship between behavioral changes and the mechanisms involved in this effect. Therefore, this study proposed that the nitrergic pathway could be a key mechanism to explain the behavioral effects produced by caffeine and that these effects could be reversed by an antioxidant, hence, the present work we had to evaluate the possible effect of L –NAME and - tocopherol expanded in anxiety-like behavior by caffeine in light/dark preference (LDP) test and novel tank dividing (NTD) test in Daniorerio. Zebrafish fish species (N=178) used were divided into the following experimental groups: SAL - 0.9% saline; CAF - Caffeine 100 mg/kg; DMSO - dimethylsulfoxide 0.1% ; L-NAME - (N -nitro -L - arginine methyl ester hydrochloride) 10 mg/kg; TF - -tocopherol 1 mg/kg (received only one injection by i.p.); SAL + SAL; DMSO + SAL; SAL + CAF , L-NAME + SALT , L-NAME + CAF ; TF + CAF, received two followed injections, one injection of each substance in the form of co-treatment, by i.p. The animals were submitted to the light/dark preference test and novel tank dividing test. All tests were filmed and the videos were evaluated using X-PLO-RAT. Data were expressed as mean ± SEM. The normality test was applied using the Shapiro-Wilk test and the ANOVA parametric test one-way with Tukey post-hoc, with the significance level set at p<0.05. The - tocopherol at a dose of 1 mg/kg, reversed all anxiety-like behavior parameters expanded by caffeine in LDP and NTD tests and this effect was similar to that observed when given one inhibitor of the enzyme nitric oxide synthase (NOS), L- NAME. Therefore, this study first demonstrated that the behavioral effect magnified by caffeine in scotaxis test and DVN test can be modulated by the nitrergic pathway and that the -tocopherol reverses completely this anxiety-like behavioral effect induced by caffeine.

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2012-06-15T12:44:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PriscilaInfluenciaSistemaNitrergico.pdf: 1559186 bytes, checksum: e83c813e0d8f2466e4e12223998f38c3 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho(irvana@ufpa.br) on 2012-06-15T12:44:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PriscilaInfluenciaSistemaNitrergico.pdf: 1559186 bytes, checksum: e83c813e0d8f2466e4e12223998f38c3 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-15T12:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PriscilaInfluenciaSistemaNitrergico.pdf: 1559186 bytes, checksum: e83c813e0d8f2466e4e12223998f38c3 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O Óxido Nítrico (NO-) é uma molécula de sinalização celular que regula o desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Nós investigamos o papel do NO- no cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro, através do uso de N-Nitro-L-Arginina Metil Ester (L-NAME), um inibidor da produção de NO-, e L-arginina (ARG), um precursor de NO-, em diferentes períodos de cultivo (ativação do genoma embrionário e compactação). Foram avaliados seus efeitos sobre as taxas de desenvolvimento, cinética do desenvolvimento, qualidade embrionária, e expressão gênica. Os embriões foram produzidos por maturação e fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários provenientes de abatedouro frigorífico. No experimento 1, as taxas de desenvolvimento foram avaliadas em SOFaa na presença de L-NAME em diferentes períodos: do 1º ao 4º dia de cultivo (LN1-4), do 4º ao 8º (LN4-8) e do 1º ao 8º dia de cultivo (LN1-8). A inibição foi prejudicial a partir do 4º dia de cultivo (grupos LN4-8 e LN1-8), ao reduzir as taxas de eclosão (17,3%±13,44 e 13,7%± 14,51, respectivamente, p<0,05). Entretanto, o efeito mais negativo ocorreu do 1º ao 8º dia (LN1-8) em que a taxa de blastocisto foi significativamente menor comparada ao controle (29,4%±3,72 vs 47,8%±11,34, respectivamente, p<0,05). Por isso no experimento 2, a ARG (1, 10 e 50mM) foi adicionada desde o 1º dia de cultivo. As taxas de blastocisto usando 1 e 10mM de ARG foram similares ao controle (48%±13,03 e 34,2%±3,92 vs 49,4%±4,82, respectivamente, p>0,05), mas 50mM prejudicou a taxa de desenvolvimento embrionário (10,7%±7,24, p<0,001). No experimento 3, ARG a 1mM foi adicionada do 5º ao 8º dia de cultivo. Foram observadas taxas de desenvolvimento similares ao grupo GLN (somente com glutamina). Mas comparada ao controle (sem ambos os aminoácidos), rendeu melhores taxa de eclosão (54,8%±6,9 vs 41,4%±11,47, respectivamente, p<0,05) e qualidade embrionária (84,8%±2,63 vs 52%±8,62, respectivamente, p<0,05), mas não de taxa de blastocisto (49,4%±6,5 vs 49,4%±4,8, respectivamente, p>0,05). Neste período a produção de NO- foi positivamente correlacionada com a taxa de eclosão (R²=96,4%, p<0,001) e a qualidade embrionária (R²=75,5%, p<0,05). Adicionalmente, embriões foram cultivados na presença de L-NAME e ARG simultaneamente (grupo ARG/LN), do 5º ao 8º dia de cultivo, e os transcritos de OCT-4 e INT-t foram quantificados por PCR tempo real. Foi encontrada expressão similar de OCT-4 (p>0,05), mas redução de 1,8x e 1,5x de INT-t em relação aos grupos controles ARG e GLUT (p<0,05), respectivamente. Esses dados fornecem evidências da contribuição do NO-, principalmente no período entre os estágios de mórula e blastocisto, para a melhoria da eclosão e qualidade embrionária. A produção de NO- é requerida para o desenvolvimento pré-implantacional de embriões bovinos produzidos in vitro, e pode ser mediada pela suplementação do meio de cultivo com ARG. / Nitric Oxide (NO-) is a cell signaling molecule regulating preimplantation embryo development. We have now investigated the role of NO- in culture of bovine embryos in vitro produced, using N-Nitro-L-Arginine Methyl-Ester (L-NAME), an inhibitor of NO- production, and L-arginine (ARG), a precursor for NO-, in different periods of culture (embryo genome activation and compaction). NO- effects were assessed by developmental rates, kinetics of development, embryo quality, and gene expression. Embryos were generated by in vitro maturation and fertilization of oocytes aspirated from abattoir-derived ovaries. In experiment 1, the rates of development were measured in SOFaa in the presence of L-NAME (10mM) in different periods: from day 1st to 4th (LN1-4), from 4th to 8th (LN4-8) and from day 1st to 8th (LN1-8). The NO- inhibition was detrimental from the day 4th of culture (LN4-8 and LN1-8 groups), decreasing the blastocyst hatching (17.3%±13.44 and 13.7%±14.51, respectively, p<0.05). However the most negative effect occurred from the 1st to 8th day of culture which the blastocyst rate was significantly decreased compared to control (29.4%±3.72 vs 47.8%±11.34, respectively, p<0.05). Due to, in experiment 2, ARG (1, 10 and 50mM) was additioned since the 1st day of culture. The blastocyst rates using ARG at 1 and 10mM were similar to control (48%±13.03 e 34.2%±3.92 vs 49.4%±4.82, respectively, p>0.05), but 50mM was found to impair embryo development (10.7%±7.24, p<0.001). In experiment 3, ARG at 1mM was additioned from the 5th to 8th day of culture. The development rates were similar to GLN group (with glutamine only). However, compared to control group (without both aminoacids) ARG addition yielded improved blastocyst hatching (54.8%±6.9 vs 41.4%±11.47, respectively, p<0.05) and embryo quality (84.8%±2.63 vs 52%±8.62, respectively, p<0.05), but not blastocyst rate (49.4%±6.5 vs 49.4%±4.8, respectively, p>0.05). NO- production was positively correlated with blastocyst hatching (R²=96.4%, p<0.001) and embryo quality (R²=75.5%, p<0.05). Additionally, embryos were cultured in the presence of L-NAME and ARG simultaneously (ARG/LN group), from the 5th to 8th day of culture, and OCT-4 and INT-t transcripts were measured by real time PCR. Was found a similar expression of OCT-4 (p>0.05), but a significant decrease of 1.8 and 1.5 fold of INT-t expression related to control groups ARG and Glutamine (p<0.05), respectively. These data provide evidence that NO- contributes to hatching and embryo quality improvement, especially at the period between morula and blastocyst stages. NO- production is required to preimplantational development of bovine embryos in vitro produced and can be mediated by supplementation of medium culture with ARG.