Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2011-06-28T16:24:18Z No. of bitstreams: 1 2011_VivianJesusMiranda.pdf: 2223657 bytes, checksum: 8ae576873fa3b7447df05b15485f671b (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-06-30T15:01:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_VivianJesusMiranda.pdf: 2223657 bytes, checksum: 8ae576873fa3b7447df05b15485f671b (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-30T15:01:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_VivianJesusMiranda.pdf: 2223657 bytes, checksum: 8ae576873fa3b7447df05b15485f671b (MD5) / A soja é uma cultura de grande importância econômica no Brasil. No entanto, vários fatores bióticos afetam sua produtividade. Entre esse fatores destacam-se os danos causados por insetos-praga, como lagartas desfolhadoras e por fitonematoides. Várias estratégias envolvendo transgenia têm sido desenvolvidas para o controle de pragas e doenças, sendo importante o uso de promotores gênicos capazes de direcionar a expressão de transgenes nos tecidos atacados, atingindo níveis adequados para desencadear a proteção vegetal. Vários trabalhos sugerem um importante papel da via ubiquitina-proteassoma ao longo do desenvolvimento das plantas, assim como em resposta a estresses bióticos. Particularmente, genes codificadores de enzima de conjugação a ubiquitina (E2) mostraram ser ativados em sítio de alimentação de Meloidogyne incognita e em resposta ao ataque de insetos. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo determinar o perfil de expressão transcricional do gene E2 em diferentes tecidos de soja, em diferentes fases do desenvolvimento, em raízes inoculadas com M. incognita e folhas infestadas por Anticarsia gemmatalis, pela técnica de qRT-PCR, como caracterização de promotor cognato UceS8.3, previamente isolado e patenteado. Para a normalização do gene E2 nos experimentos de qPCR, oito genes de referência clássicos foram selecionados e validados quanto a sua estabilidade de expressão nas diferentes condições experimentais analisadas. Os melhores genes de referência foram utilizados na quantificação dos níveis do transcrito do gene E2. O acúmulo de transcritos de E2 foi determinado espacial e temporalmente, nos orgãos de raiz, caule, folha, flor e vagem, nos fases de desenvolvimento (V4, R2 e R4). Foi observado que ocorre acúmulo de transcritos de E2 em R4, provavelmente relacionado a senescência da planta. Em seguida, bioensaios foram conduzidos em raízes de soja inoculadas com juvenis de segundo estádio (J2) de M. incognita, e em folhas infestadas com lagartas de quarto ínstar de A. gemmatalis. Nas interações com nematóide e com insetos, foi detectado acúmulo de transcritos de E2 de 2 a 6 vezes. Paralelamente, o banco de bibliotecas subtrativas GENOSOJA foi utilizado para verificar acúmulo de transcritos de E2 em resposta a estresses (bióticos e abióticos). As análises in silico mostraram que o gene E2 é mais abundante em resposta a bactéria Bradirhyzobium japonicum, ao fungo Phakopsora pachyrhyzi e ao estresse hídrico. Os resultados obtidos de quantificação de transcritos de E2 e da análise in silico foram relacionados a cis-elementos presentes na região regulatória, e indicam que o promotor UceS8.3 representa uma importante ferramenta biotecnológica para obtenção de plantas geneticamente modificadas resistentes a fitonematóides, doenças fúngicas, insetos desfolhadores e/ou deficiência hídrica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Soybean is a crop of great economic importance in Brazil. However, several biotic factors have been affecting soya productivity. Among them, the damage caused by insect pests such as defoliating caterpillars and plant nematodes. Several strategies involving transgenic plants have been developed to control pests and diseases, being important the utilization of gene promoters capable of driving transgene expression in tissues attacked, at appropriate levels to trigger plant protection. Several studies suggest an important role of ubiquitin-proteasome pathway during plant development and in plant responses to biotic stresses. Particularly, genes encoding ubiquitin conjugation factors (E2) have been shown to be activated in feeding sites of Meloidogyne incognita and in response to insect attack. In this context, this study aims to determine the accumulation of the E2 transcripts considering different tissues of soybean, different stages of development, roots inoculated with M. incognita and leaves infested with Anticarsia gemmatalis, by qRT-PCR technique in order to further characterize its cognate promoter (UceS8.3). Aiming E2 gene normalization in qPCR experiments, eight classical reference genes were selected and validated for their expression stability. The best reference genes were used in the normalization of the E2 gene. To characterize the spatial and temporal accumulation of E2 transcripts, samples of root, stem, leaf, flower and pod were collected at three different developmental stages (V4, R2 and R4). It was found that E2 transcripts accumulated in R4, probably related to senescence process. Thus, bioassays were conducted in soybean roots inoculated with second stage juveniles (J2) of M. incognita, and leaves infested with fourth instar larvae of A. gemmatalis. Considering the nematode and caterpillars interactions, it was detected an E2 transcripts accumulation of 2 to 6 times. Parallely, the subtractive libraries bank GENOSOJA was used to verify the accumulation of E2 transcripts in response to other stresses (biotic and abiotic). In silico analysis showed that the E2 gene is more abundant in response to Bradirhyzobium japonicum bacteria, Phakopsora pachyrhyzi fungal, and to drought stress. The results were related to cis-elements present in the regulatory region, and suggested that the UceS8.3 promoter represents an important biotechnological tool to genetic modified plant generation resistant to plant nematodes, fungal diseases, defoliating insects and/or hydric deficit.

Orientador: Jaime Maia dos Santos / Banca: Arlindo Leal Boiça Júnior / Banca: Jadir Borges Pinheiro / Banca: Maria Amelia dos Santos / Banca: Pedro Luiz Martins Soares / Resumo: Nos últimos anos, as perdas causadas por Pratylenchus brachyurus em soja, no Brasil, são alarmantes, e reduções de produtividades de até 21% já foram assinaladas. A utilização de variedades resistentes de alto potencial produtivo seria a alternativa mais eficaz e mais vantajosa de manejo dessa praga. Nas avaliações usuais de resistência de genótipos, o sistema radicular das plantas é processado individualmente em laboratório para a determinação do fator de reprodução, tornando-se uma prática inviável para os programas de melhoramento das grandes empresas em função do elevado número de genótipos avaliados anualmente. Uma escala de notas para avaliação da resistência de genótipos a campo foi desenvolvida no presente estudo e adapta-se a esses casos. A escala contém seis graus de infecção variando de 0 (zero) a 5 com base na percentagem da área do sistema radicular lesionada. Também foram conduzidos ensaios com o objetivo de se estudar a influência da textura do substrato, densidade inicial do inóculo, duração do ensaio e fases do ano na reprodução de P. brachyurus em soja, tendo em vista a escolha das condições adequadas para a avaliação da resistência de genótipos a este nematoide. Este estudo foi conduzido em casa de vegetação da Estação Experimental da Monsanto do Brasil, em Morrinhos-GO, durante a safra de 2010/2011. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, seguindo o esquema fatorial 4 x 4 x 3 x 3 x 2 (4 texturas do substrato x 4 densidades iniciais do inóculo x 3 períodos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In recent years the losses caused by Pratylenchus brachyurus on soybean in Brazil are alarming and yield reductions of up to 21% have been reported. The appropriate management of this pest using resistant materials is a relevant tool. For the evaluation of resistance root system genotypes of individual plants, samples are processed individually in laboratory for determining the reproduction factor, making it a very laborious and unviable practice improvement for large companies programs due to the high number of genotypes evaluated annually. A rating scale for assessing the strength of the field was developed for genotypes in this study and to suit these cases. The scale has six degrees of infection, ranging from 0 (zero) to 5 based on the percentage of the area of damaged root system. Also, tests were conducted with the objective of studying the influence of the texture of the substrate, the initial inoculum density, and duration of the test phase of the year in the reproduction of P. brachyurus in soybean in order to choose the conditions suitable for assessing the genotype resistance to this nematode. This study was conducted in a greenhouse at the Experimental Station of Monsanto Brazil in Morrinhos-GO, during the 2010/2011 season. The experimental design was completely randomized factorial following the 4 x 4 x 3 x 3 x 2 (4 x 4 textures substrate initial inoculum densities x 3 periods of the trial x 3 x 2 hosts stages of the year) with five replicates...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-11T18:28:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 602028 bytes, checksum: efe6a1e35c1ed71ce3c3f711672053d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-11T18:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 602028 bytes, checksum: efe6a1e35c1ed71ce3c3f711672053d2 (MD5) Previous issue date: 2002-08-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve como objetivo o aumento do número de marcas no mapa de ligação da soja construído pelo programa de melhoramento da qualidade da soja do Bioagro/UFV e também a identificação de QTLs (Quantitative Trait Loci) associados à determinação do conteúdo de proteínas em sementes de soja. Para isso, foram acrescentados ao mapa original, marcadores do tipo RAPD e marcadores microssatélites não mapeados anteriormente. Foram utilizadas 118 linhagens recombinantes endogâmicas (RILs) obtidas do cruzamento entre a variedade norte- americana BARC 8 (genótipo com alto teor protéico) e a variedade brasileira Garimpo (genótipo com teor normal de proteínas). Foram testados inicialmente 1200 “primers” RAPD, dos quais 127 evidenciaram polimorfismo entre os progenitores, dos quais somente 65 mostraram polimorfismos na população de RILs segregando na proporção mendeliana esperada de 1:1, pelo teste do qui-quadrado. Foram obtidos 24 grupos de ligação pouco saturados, contendo 75 marcadores, além de 70 marcas não ligadas. Nas análises de regressão e mapeamento por intervalo composto para associação entre marcadores e a característica “teor de proteína”, foram identificados 11 marcadores e mapeados três QTLs, nos grupos de ligação MGL D2, MGL L e MGL C22 os quais explicam 7,8% e 8,1% e 7,4%, respectivamente, para as famílias cultivadas em Cascavel. Para as famílias cultivadas em Viçosa foram identificados nove marcadores e mapeado um QTL, no grupo de ligação MGL 3, que explica aproximadamente 16,7% da característica. Estudos posteriores deverão ser conduzidos, visando aumentar o grau de saturação do mapa. Isto poderá permitir a identificação de novos QTLs que determinem um maior porcentagem da expressão da característica. / The present work aimed at increasing the number of markers in the soybean linkage map built by the Bioagro/UFV breeding program for soybean quality. It also aimed at identifying QTLs (Quantitative Trait Loci) governing protein accumulation in the seed. RAPD molecular markers and microsatellites which had not been mapped before were added to the original map. One hundred and eighteen recombinant inbred lines (RILs) derived from a cross between the north american variety BARC-8 (with high protein content) and the Brazilian variety Garimpo (with normal protein content) were used. Initially 1,200 RAPD primers were tested. One hundred and twenty seven of them showed polymorphism between the progenitors and 65 of these showed polymorphism among the RILs. All 65 markers segregated according to the expected 1:1 ratio as indicated by the chi-square test. Twenty four linkage groups with a low saturation level (75 markers) were obtained. Seventy other markers were not mapped in the linkage groups. Regression analyses and composed interval mapping identified 11 markers and three QTLs associated with “protein content” were mapped. These QTLs were located in the linkage groups MGL D2, MGL L and MGL C22 and explained 7.8, 8.1 and 7.4% of variation of this trait, respectively in the lines grown in Cascavel (state of Paraná). For the lines grown in Viçosa (state of Minas Gerais) nine markers were idenfied and one QTL was mapped to linkage MGL 3, and it explained 16.7% of the trait variation. Further studies should be conducted to increase the saturation level of the map. This should allow the identification of new QTLs which might explain a higher percentage of the variation of the protein content in soybean seeds. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-10-17T13:21:08Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 21298436 bytes, checksum: 4ee7ed211c1b7c90f06d2fa940556795 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-17T13:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 21298436 bytes, checksum: 4ee7ed211c1b7c90f06d2fa940556795 (MD5) Previous issue date: 1999-12-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Utilizando-se populações de soja (Glycine max (L.) Merrill) originadas de três cruzamentos (‘CEPS 77-16’ x ‘Doko RC’, ‘CEPS 89-26’ x ‘IAC - 8’ e ‘CEPS 89-26’ x ‘FT-Cristalina’), foram estimados os ganhos esperados nas gerações F4, e F5 e obtidos os ganhos realizados nas gerações F5 e F, respectivamente. As populações foram conduzidas em Viçosa, MG, nos anos agrícolas 1995/96, 1996/97 e 1997/98. Na estimativa dos parâmetros envolvidos na predição para a geração F4 que foi conduzida em “bulk”, utilizou-se a regressão do valor do indivíduo F4 com a média de sua progênie na geração F5 com a devida ponderação pelo coeficiente de parentesco dessas gerações. A estimativa dos parâmetros envolvidos na predição para geração F5, que foi conduzida no campo com cultivares-padrão intercalares às linhas segregantes, foi feita, utilizando-se os cultivares-padrão para estimação da variação devido às causas não-genéticas, e a seleção foi feita nos valores fenotípicos corrigidos pela variação do cultivar-padrão em relação à média de suas repetições, sendo feita a predição de ganhos com base no valor fenotípico original e corrigido. As estratégias de seleção, aplicadas à geração F4, foram com base em plantas individuais, enquanto na geração F5 foram utilizadas estratégias com base em produção de grãos, nas quais se consideravam apenas o indivíduo, a familia e posteriormente, o indivíduo, a família e o indivíduo num índice combinado; utilizando-se simultaneamente produção de grãos, número de dias para maturação e altura de planta na maturação, o indivíduo foi usado como unidade de seleção. Nas populações conduzidas em “bulk” (geração F4), a seleção direta na característica foi a que promoveu maior expectativa de ganho, o que também correspondeu em nível de campo, ao passo que no experimento com cultivares- padrão intercalares (geração F5) a predição de ganhos se mostrou pouco variante quando se consideraram dados corrigidos e não-corrigidos, sendo a seleção individual a mais promissora; já em nível de campo, para ganho realizado, a estratégia de melhor “performance” foi a seleção simultânea. / Soybean (Glycine max (L.) Merril) populations originated from three crosses (‘CEPS 77-16’ x ‘Doko RC’, ‘CPES 89-26' x ‘IAC-8’ and ‘CEPS 89-26’ ‘FT-Cristalina’) were used to estimate predicted gains in F4 and F5 gcncrations and to obtain realized gains in F5 and F6 generations, respectively. The populations were conducted in Viçosa, MG, in the agricultural years of 1995/96, 1996/97 and 1997/98. For estimation of parameters involved in prediction for the F4 generation, which was conducted in bulk, it was utilized the regression of the F4 individual value on the mean of its progeny in the F5 generation, that was appropriately weighted by the kinship coefficient of those generations. The estimation of parameters involved in prediction for the F5 generation, which was conducted in the field with the standard cultivars inserted between the segregating lines, was carried out using the standard cultivars to estimate the variation due to non-genetic causes. Selection was performed using phenotypic values that have been corrected by the standard cultivar variation in relation to the mean of its replications, and gain prediction was estimated based on the corrected and original phenotypic value. The selection strategies applied to F4 generation were based on individual plants, whereas the strategies applied to F5 generation, based on grain yield, took into consideration only the individual, the family and, later, the individual, the family and the individual in a combined index; using at the same time grain yield, number of days for maturation and plant height at maturation, taking the individual as selection unit. For the populations conducted in bulk (generation F4), the selection performed directly for a trait gave greater expected gain, correspondent with results in the field, whereas prediction of gains for the experiments with the inserted standard cultivars (generation F5 ,) has been shown little variation when corrected and non- corrected data were considered, being individual selection more promising; however, for results in the field and the realized gain, the strategy with the best performance was concurrent selection.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-07T17:22:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 563823 bytes, checksum: 2c66f83b8501ad88309e6fc9cd513ad6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T17:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 563823 bytes, checksum: 2c66f83b8501ad88309e6fc9cd513ad6 (MD5) Previous issue date: 2005-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Devido à grande importância que a soja representa para a agricultura mundial, avanços vêm ocorrendo nas técnicas voltadas para o desenvolvimento genético, molecular e genômico desta leguminosa a fim de assegurar produção suficiente para a comercialização dos grãos e de seus derivados. As principais perdas no cultivo da soja são decorrentes de doenças. Entender as interações entre hospedeiro-patógeno e os mecanismos de resistência envolvidos nessa relação são importantes para possibilitar o controle de grandes epidemias em culturas agrícolas, bem como elucidar mecanismos de sinalização ativados em resposta ao patógeno. Dentro deste cenário, este trabalho objetivou a identificação de genes envolvidos na resposta de resistência a doenças da soja. Por meio do screening de uma biblioteca de cDNA do cultivar FT-Cristalina, clones positivos foram isolados utilizando o fragmento de RFLP A53-09 como sonda. Este fragmento possui 1019 pb e apresenta homologia a genes de resistência. Três clones foram obtidos a partir da análise de 5 x10 5 placas de lise de fagos recombinantes hibridizados à sonda, os quais foram denominados: A5309-47, A5309-71 e A5309-72. O tamanho estimado de cada um foi de 2,0; 1,3 e 1,12 kb, respectivamente. Estes clones foram seqüenciados e suas seqüências nucleotídicas foram submetidas à análise de similaridade com outras seqüências existentes no banco de dados GenBank, com o auxílio do programa BLASTX. O alinhamento entre as seqüências nucleotídicas dos clones isolados com a sonda A53-09 mostrou uma identidade de nucleotídeos variando entre 41 e 45%. O clone A5309-47 foi parcialmente seqüenciado, obtendo-se uma sequência de 963 pb com uma ORF putativa correspondente a 78 resíduos de aminoácidos, homóloga à enzima lipoxigenase (LOX) de Glycine max, com 85% de identidade. O clone A5309-71 foi totalmente seqüenciado; contém 1587 pb com uma ORF correspondente a 306 resíduos de aminoácidos. A análise de similaridade revelou que há 75% de identidade deste clone com a proteína estearoil-acil dessaturase de Arabidopsis thaliana. O clone A5309-72 também foi totalmente seqüenciado, apresentando 1263 pb, com uma ORF correspondente a 124 resíduos de aminoácidos com identidade de 43% a uma peroxidase de Glycine max. Todos os clones isolados apresentaram similaridades com enzimas chaves para a ativação de várias vias de respostas de defesa, por meio de mecanismos que alteram todo o metabolismo da planta. Sendo assim, todas as seqüências de DNA obtidas correspondem a proteínas que estão potencialmente envolvidas na defesa da planta. / The great importance of soybean to world agriculture has brought advancements in techniques for the genetic, molecular and genomic development of this legume in order to assure enough production for the commercialization of grains and byproducts. The main losses in soybean crop are due to diseases. Understanding host-pathogen interactions and the resistance mechanisms involved in this relationship is important in making it possible to control major epidemics in crops, as well as to elucidate signaling mechanisms activated in response to pathogens. In this context, the objective of this work was to identify genes involved in the resistance response to soybean diseases. By screening a cDNA library of cultivar FT-Cristalina, positive clones were isolated using the A53-09 fragment as an RFLP probe. This 1019-pb fragment shows resistance gene homology. Three clones were obtained from the analysis of 5x10 5 lysis plates of recombinant phages hybridized to the probe, which were named: A5309-47, A5309-71 and A5309-72. The estimated size of each one was of 2,0, 1.3, and 112 kb respectively. These clones were sequenced and their nucleotide sequences were analyzed for similarity to sequences in GenBank database, using the BLASTX software. The alignment between the nucleotide sequences of the clones isolated with the A53-09 probe showed a nucleotide identity varying between 41 and 45%. The clone A5309-47 was partially sequenced, resulting in a 963-pb sequence with a putative ORF corresponding to 78 amino acid residues, homologous to Glycine max lipoxigenase enzyme (LOX), with 85% identity. The clone A5309-71 was totally sequenced; it contains 1587 pb with ORF corresponding to 306 amino acid residues. The similarity analysis revealed 75% identity of this clone with the protein estearoil-acyl desaturase of Arabidopsis thaliana. The clone A5309-72 was also totally sequenced, giving 1263 pb, with ORF corresponding to 124 amino acid residues with 43% identity to a Glycine max peroxidase. All isolated clones showed high similarities with key enzymes for the activation of several defense-response pathways, through mechanisms which modify the whole plant metabolism. Therefore, all DNA obtained sequences correspond to proteins potentially involved in plant defense. / Dissertação importada do Alexandria.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-08Bitstream added on 2014-06-13T19:02:19Z : No. of bitstreams: 1 figueiredo_a_dr_jabo.pdf: 654296 bytes, checksum: 4ff0f4b32c18feebe1060e5d862ef25f (MD5) / Nos últimos anos, as perdas causadas por Pratylenchus brachyurus em soja, no Brasil, são alarmantes, e reduções de produtividades de até 21% já foram assinaladas. A utilização de variedades resistentes de alto potencial produtivo seria a alternativa mais eficaz e mais vantajosa de manejo dessa praga. Nas avaliações usuais de resistência de genótipos, o sistema radicular das plantas é processado individualmente em laboratório para a determinação do fator de reprodução, tornando-se uma prática inviável para os programas de melhoramento das grandes empresas em função do elevado número de genótipos avaliados anualmente. Uma escala de notas para avaliação da resistência de genótipos a campo foi desenvolvida no presente estudo e adapta-se a esses casos. A escala contém seis graus de infecção variando de 0 (zero) a 5 com base na percentagem da área do sistema radicular lesionada. Também foram conduzidos ensaios com o objetivo de se estudar a influência da textura do substrato, densidade inicial do inóculo, duração do ensaio e fases do ano na reprodução de P. brachyurus em soja, tendo em vista a escolha das condições adequadas para a avaliação da resistência de genótipos a este nematoide. Este estudo foi conduzido em casa de vegetação da Estação Experimental da Monsanto do Brasil, em Morrinhos-GO, durante a safra de 2010/2011. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, seguindo o esquema fatorial 4 x 4 x 3 x 3 x 2 (4 texturas do substrato x 4 densidades iniciais do inóculo x 3 períodos... / In recent years the losses caused by Pratylenchus brachyurus on soybean in Brazil are alarming and yield reductions of up to 21% have been reported. The appropriate management of this pest using resistant materials is a relevant tool. For the evaluation of resistance root system genotypes of individual plants, samples are processed individually in laboratory for determining the reproduction factor, making it a very laborious and unviable practice improvement for large companies programs due to the high number of genotypes evaluated annually. A rating scale for assessing the strength of the field was developed for genotypes in this study and to suit these cases. The scale has six degrees of infection, ranging from 0 (zero) to 5 based on the percentage of the area of damaged root system. Also, tests were conducted with the objective of studying the influence of the texture of the substrate, the initial inoculum density, and duration of the test phase of the year in the reproduction of P. brachyurus in soybean in order to choose the conditions suitable for assessing the genotype resistance to this nematode. This study was conducted in a greenhouse at the Experimental Station of Monsanto Brazil in Morrinhos-GO, during the 2010/2011 season. The experimental design was completely randomized factorial following the 4 x 4 x 3 x 3 x 2 (4 x 4 textures substrate initial inoculum densities x 3 periods of the trial x 3 x 2 hosts stages of the year) with five replicates...(Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Pós Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-06-22T23:14:38Z No. of bitstreams: 1 2012_NicolauBritodaCunha.pdf: 2706379 bytes, checksum: 1687039afa393cb383e4bbc8641a75af (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-25T12:15:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_NicolauBritodaCunha.pdf: 2706379 bytes, checksum: 1687039afa393cb383e4bbc8641a75af (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T12:15:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_NicolauBritodaCunha.pdf: 2706379 bytes, checksum: 1687039afa393cb383e4bbc8641a75af (MD5) / As plantas superiores apresentam diversas vantagens para a produção de biomoléculas recombinantes quando comparadas com os demais sistemas de expressão heteróloga, incluindo baixo risco de contaminação com oncogenes, príons, vírus e outros patógenos humanos, além de alta capacidade de escalonamento, baixos custos de produção e sistemas de cultivo e produção agronômica em larga escala. Plantas transgênicas também permitem a exploração de diversos órgãos vegetais com alto conteúdo protéico, tais como sementes e tubérculos, para a expressão de diferentes proteínas recombinantes. Dentre os vegetais comumente cultivados, as plantas de soja são excelentes acumuladoras naturais de proteínas e se constituem em uma fonte de biomassa abundante e barata. Sob condições controladas de cultivo em casa de vegetação, o ciclo agronômico de plantas de soja pode ser manipulado para maximizar a produção de sementes em larga escala em áreas relativamente pequenas. No presente trabalho foram obtidas diferentes linhagens transgênicas de soja contendo os genes da pró-insulina humana, do hormônio do crescimento humano e do fator IX de coagulação sangüínea, sob o controle de seqüências regulatórias específicas para o direcionamento do acúmulo para os vacúolos das sementes. As linhagens obtidas foram caracterizadas do ponto de vista molecular e a expressão recombinante foi caracterizada nos níveis transcricional e traducional. Sementes contendo o hGH e o FIX apresentaram níveis de acúmulo da ordem de 2,9 e 0,23% PST respectivamente, o que reflete um potencial de produção de até 9 e 0,8 g de proteína recombinante por Kg de sementes. O seqüenciamento N-terminal de frações das duas proteínas por nanoLC-MSE demonstrou que os peptídeos trípticos de ambas apresentaram as seqüências de aminoácidos e as massas moleculares esperadas. Ensaios de função biológica com o hGH e o FIX demonstraram diferentes níveis de atividade detectável e que o acúmulo dessas proteínas nos PSVs, mesmo por um período de tempo prolongado (até sete anos), é uma alternativa interessante para garantir a estabilidade protéica pós-traducional. Essa estratégia molecular de expressão pode constituir uma alternativa interessante para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos mais baratos e eficientes para sua utilização como reagentes terapêuticos e diagnósticos. _________________________________________________________________________________ ABSTARCT / Plants present various advantages for the production of biomolecules, including low risk of contamination with prions, viruses and other pathogens, scalability, low production costs, and available agronomical systems. Plants are also versatile vehicles for the production of recombinant molecules because they allow protein expression in various organs, such as tubers and seeds, which naturally accumulate large amounts of protein. Among crop plants, soybean is an excellent protein producer. Soybean plants are also a good source of abundant and cheap biomass and can be cultivated under controlled greenhouse conditions. Under containment, the plant cycle can be manipulated and the final seed yield can be maximized for large-scale protein production within a small and controlled area. In this study we obtained different transgenic soybean lines containing the genes that codify the human proinsulin, the human growth hormone (hGH) and the human coagulation factor IX (FIX), under control of tissue-specific regulatory sequences that target the expression to the PSVs. The transgenic lines were characterized on the transcriptional and translational levels, and the recombinant expression of the hGH and the FIX reached 2.9 and 0.23% TSP respectively, which indicate a potential to produce up to 9 and 0.8 g of recombinant protein/Kg seeds. The N-terminal sequencing with nanoLC-MSE demonstrated that all the tryptic fragments analyzed showed the expected sequences and the molecular masses. The biological activities of the recombinant hGH and the FIX were also determined, and demonstrated that targeting to the PSVs was an interesting expression tool to elevate the post-translational stability. This strategy for the improved molecular expression can constitute an important alternative for the development of cheaper and safer biotechnological products that can be used as therapeutic tools and diagnose reagents in the future.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Centro de Desenvolvimento Sustentável, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-06-09T19:44:28Z No. of bitstreams: 1 Tese_PedroIvanChristoffoli.pdf: 7054586 bytes, checksum: 079168eb194600afd75d21a6eafaf3fc (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-06-10T19:31:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_PedroIvanChristoffoli.pdf: 7054586 bytes, checksum: 079168eb194600afd75d21a6eafaf3fc (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-10T19:31:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_PedroIvanChristoffoli.pdf: 7054586 bytes, checksum: 079168eb194600afd75d21a6eafaf3fc (MD5) Previous issue date: 2009-05 / O estudo trouxe luz à questão da introdução dos Organismos Geneticamente Modificados na Agricultura Brasileira, em particular na cultura da Soja. Discute-se como as alterações promovidas nas normativas estadunidense e mundial sobre a legislação de propriedade intelectual possibilitaram a apropriação privada de parcela da mais-valia social gerada na agricultura, e também da natureza, pelo grande capital, afetando a vida e o modo de produção de milhões de agricultores por todo o planeta. Analisou-se também o processo de concentração e centralização de capitais ocorrido na indústria de sementes mundial, onde, em cerca de dez anos, possibilitado pelas transformações radicais no campo da engenharia genética e no arcabouço legal da propriedade intelectual, tal processo, coerente com o proposto pela teoria de Marx, resultou em um grau de concentração jamais visto no setor sementeiro mundial, com menos de dez empresas controlando quase 70% do volume de negócios global no setor. A introdução massiva de organismos geneticamente modificados no Brasil se dá com a soja RR, desenvolvida pela empresa Monsanto e lançada inicialmente nos EUA e Argentina. Nesses dois países a soja se expande rapidamente dominando o cenário produtivo daquela cultura, ao passo que no Brasil, aliado ao impedimento legal de seu plantio, somam-se outros fatores que obstaculizam a adoção massiva da soja RR. A introdução desse organismo no país se dá inicialmente de forma ilegal. O estudo demonstrou que no caso brasileiro, a existência de uma desvantagem estrutural na produção de soja no estado do Rio Grande do Sul propiciou a rápida e massiva adoção de soja geneticamente modificada por todos os segmentos de produtores, ao passo que nos outros dois principais estados produtores (Paraná e Mato Grosso) esse processo se deu de forma lenta e difícil. Outro aspecto identificado diz respeito a vantagens estruturais derivadas das condições de clima e solos no Estado do Mato Grosso, que propicia até o presente momento, maior rendimento físico e maior rentabilidade econômica às cultivares convencionais. A explicação para tal fenômeno reside fundamentalmente na existência de alternativas produtivas representadas por variedades de soja convencional de alto rendimento, superiores às cultivares transgênicas então disponibilizadas pela Monsanto. Também foi identificado no Brasil a existência de uma defasagem produtiva da soja transgênica, em relação às cultivares convencionais, derivadas do que na literatura se denomina de yield lag, ou seja, uma defasagem derivada do fato da cultivar de soja utilizada para a engenheiração não ser a cultivar de ponta em termos de produtividade. Essa defasagem tende a ser temporária, uma vez que a indústria e a pesquisa buscam lançar novas variedades transgênicas a cada ano. No entanto, ela ainda se manifesta especialmente no segmento de produtores médios e grandes, que se utilizam de pacotes tecnológicos e cultivares convencionais de elevada produtividade. No entanto, em geral se pode afirmar haver um estado de equilíbrio dinâmico entre as cultivares transgênicas e convencionais, em vista de que em alguns aspectos, como o custo de produção mais reduzido para o uso de transgênicos, ser contrabalançado pelo maior rendimento físico por hectare e em alguns casos pela obtenção de preço-prêmio para a soja convencional. Tal equilíbrio faz com que a balança penda a favor da manutenção da soja convencional por um segmento importante de produtores, justamente os que têm maior volume e menores custos de produção, mas ao mesmo tempo leva um crescente número de produtores, especialmente os pequenos e médios, e os que não se utilizam de todo o pacote tecnológico, a adotar a soja GM. Quanto aos aspectos ambientais o estudo debruçou-se sobre o consumo de herbicidas, principal fator considerado nas propagandas favoráveis aos transgênicos. Identificou-se que de fato há a redução do uso de herbicidas nos primeiros anos de uso da soja RR, ocorrendo no entanto uma retomada da curva de uso com o passar do tempo. Tal fato é coerente com estudos realizados nos EUA e decorre principalmente do surgimento de ervas espontâneas resistentes ao glifosato, exigindo de parte dos agricultores a utilização de um maior volume de herbicidas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study brings to light the question of the introduction of genetically modified organisms (GMOs) in Brazilian agriculture, particularly soybean production. The text discusses how changes in intellectual property rights could permit the capitalistic appropriation of large amounts of socially generated plus-value in agricultural sector, and of nature too, by large corporations, affecting life and mode of production of millions of small farmers all over the world. The anallisys shows the process of capitalistic concentration and centralization occurred on the seed industry, where, in near a decade, resulted in a massive concentration of capitals never seen before in this sector. Today, less than ten corporations control over 70% of the global seed market. This situation became possible, because radical changes in the field of genetic engineering and legal architecture of intellectual property rights occured during the nineties. This entire process fulfills the elements proposed by Karl Marx theory on market concentration. The GMOs introduction in Brazilian agriculture occurs after RR soybean variety, developed by Monsanto Corporation, early introduced in USA and Argentina. In these countries, the predominance of RR soybean arises rapidly, championing the field of soybean seeds. Despite these facts, in Brazil RR Soybean face extreme difficulties to gain market, in the same period. Added to legal constraints (the first introduction was considered not legal), RR Soybean must face economic obstacles to its expansion. In the Brazilian case the study demonstrates that, the existence of structural disadvantages in conventional soybean production in Rio Grande do Sul state, propitiates a quick and massive adoption of GMO Soybean by all segments of producers, from small to large farmers, from low productive, to high yielding landowners. Otherwise, in other two large Brazilian soybean producer states (Paraná and Mato Grosso) the GMO adoption rate faced a slow and difficult way, derived from diverse conditions. Another aspect identified says about to structural advantages from climate and soil conditions in Mato Grosso State, which provides until present, the highest yield and most relevant profits to conventional soybean. The reason to this phenomenon lies essentially in the existence of high yielding soybean varieties, superiors to transgenic crops, until now disposable to Brazilian farmers by Monsanto or other firms. It was identified too, in Brazil, the existence of a productive disadvantage of transgenic soybean, related to conventional cultivars, derived from yield lag, i. e. one problem derived from the fact that the soybean variety used to made genetic engineering was not in the group of elite varieties, or highest yielding varieties, resulting in delays in transgenic crops adoption rate. This delay must be temporary, because industry and public research teams are focused to launch new high yielding transgenic soybean varieties every year. Despite these efforts, that delay actually appears to be specially sensitive to medium and large Brazilian soybean producers, who make use of high yielding technological “packages”, that perform very well with conventional soybean varieties. The study found a dynamic state of equilibrium between transgenic and conventional soybean varieties, because despite production costs are lower in GM production, hectare yielding is higher to conventional soybean, and sometimes obtains premium prices for non-transgenic crops. In present, that situation tends to favour conventional crops in many situations, specially to producers that obtain highest yields and net returns. This dynamic situation made that balance droop in favour of maintainance of conventional soybean for large and important segment of producers, specifically those that yield high volumes and obtain low costs of production. But, at the same time, leads to a growth number of small and medium producers that don’t use the top level techonological packet, or that confront with high rates of weed infection, to adopt GM soybean. Regarding environmental aspects, the study analyses the herbicide consumption in Brazil, one of the major aspects argued in ads or speeches to promote transgenic crops. The study identified reduction in use of herbicides in the first years of adoption of GM soybean. Otherwise, there is an increase on herbicide use after initial years of reduction. These facts are coherent with studies taken in US and Europe, and suggests that the emergence of resistance of weeds to glifosate put in question the affirmation of reduction in use of herbicides and obligates farmers to use an increasing amount of pesticides. ___________________________________________________________________________________ RÉSUMÉ / L'étude met en lumière la question de l'introduction des organismes génétiquement modifiés dans l'agriculture brésilienne, en particulier dans la culture du soja. Elle discute comment les changements opérés dans les normes sur la législation de la propriété intellectuelle aux États-Unis et dans le monde ont rendu possible l'appropriation privée des parts de plus values sociales générées par l'agriculture, ainsi que de la nature, par le grand capital, affectant la vie et le mode de production de millions d'agriculteurs sur toute la planète. L'étude analyse aussi le processus mondial de concentration et de centralisation des capitaux qui ont lieu dans l'industrie mondiale des semences, dans laquelle, en environ 10 ans, rendu possibles par les transformations radicales dans le le champ de l'ingénierie génétique et la législation en matière de propriété intellectuelle, un tel processus, cohérent avec le point de vue de Marx, a généré un niveau de concentration jamais atteint dans le secteur mondial des semences, avec moins de dix entreprises contrôlant quasiment 70% du volume des affaires globales dans le secteur. L'introduction massive des organismes génétiquement modifiés au Brésil a lieu avec le soja RR, développé para l'entreprise Monsanto et lancé initialement au États-Unis et en Argentine. Dans ces deux pays, le soja se répand rapidement et domine le scénario de production de cette culture, alors qu'au Brésil, en plus de l'interdiction légale de plantation, d'autres facteurs viennent faire obstacle à l'adoption massive du soja RR. L'introduction de cet organisme dans le pays a lieu initialement de manière illégale. L'étude a démontré que dans le cas brésilien, l'existence d'un désavantage structurel dans la production de soja dans l'État du Rio Grande do Sul a favorisé l'adoption rapide et massive du soja génétiquement modifié par tous les segments des producteurs, alors que dans les deux autres principaux états producteurs ((Paraná et Mato Grosso), ce processus a eu lieu de manière lente et difficile. Un autre aspect identifié est celui des avantages structuraux qui viennent des conditions de climat et de sols dans l'État du Mato Grosso, qui génèrent jusqu'à présent, un meilleur rendement physique et une meilleure rentabilité économique pour les cultures traditionnelles. L'explication à un tel phénomène réside fondamentalement dans l'existence d'alternatives productives représentées par des variétés de soja conventionnelles à hauts rendements, supérieurs aux cultures transgéniques actuellement vendues par Monsanto. L'étude a aussi identifié, dans le cas du Brésil, l'existence d'un déphasage productif du soja transgénique en relation aux cultures conventionnelles, provenant de ce que la littérature dénomme le Yiel Lag, c'est-à-dire un déphasage provenant du fait que la culture de soja para ingénierie n'est pas la culture de pointe en terme de productivité. Ce déphasage tend à être temporaire, une fois que l'industrie et la recherche lancent de nouvelles variétés transgéniques chaque année . Cependant, il se manifeste spécialement dans le segment des producteurs moyens et grands, qui utilisent des solutions technologiques et de cultures conventionnelles de haute productivité. Néanmoins, il est possible d'affirmer qu'il existe en général une situation d'équilibre dynamique entre les cultures transgéniques et conventionnelles, étant donné que, dans certains cas, le coût de production moindre avec l'utilisation de transgéniques est contrebalancé par le rendement physique par hectare plus grand du soja conventionnel et par l'obtention d'un subside pour sa plantation. Un tel équilibre fait que la balance penche en faveur de la maintenance du soja conventionnel pour un segment important de producteurs, justement ceux qui ont un volume plus grand de production et des coûts plus faible de production, mais en même temps, cet équilibre amène un nombre croissant de producteurs, spécialement les petits et les moyens et ceux qui n'utilisent pas de solutions technologiques à adopter le soja génétiquement modifié. Quant aux aspects environnementaux, l'étude s'est penché sur la consommation d'herbicides comme argument principal dans la propagande favorable aux transgéniques. En fait, il a été démontré qu'il y a une réduction de l'utilisation d'herbicides dans les premières années d'utilisation du soja RR, donnant lieu néanmoins à une reprise dans la courbe d'utilisation au cours du temps. Un tel fait est cohérent avec des études réalisées au États-Unis et découle principalement du surgissement spontané d'herbes résistantes au Glyphosate, exigeant de la part des producteurs l'utilisation d'un volume plus grand d'herbicide.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-16T12:06:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878278 bytes, checksum: a5bc538eab025dbd1c8aa2ee43aee778 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T12:06:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878278 bytes, checksum: a5bc538eab025dbd1c8aa2ee43aee778 (MD5) Previous issue date: 2014-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na interação planta/patógeno, a modulação da transcrição gênica é fundamental para montar uma resposta de defesa eficaz nas células do hospedeiro.Os fatores de transcrição estão entre os principais alvos em plantas para o aumento da tolerância a estresses, uma vez que estas proteínas controlam a expressão de vários genes ao mesmo tempo. Membros da família de fatores de transcrição bZIP podem atuar na defesa contra patógenos. Apesar da função de bZIPs na defesa contra patógenos ser conhecida, poucos trabalhos caracterizaram bioquimicamente membros dessa família que participam de vias de defesa. O GmbZIPE2 (Glyma05g30170.1) é um membro do grupo E da família bZIP de soja, que é responsivo à infecção por Phakopsora pachyrhizi. Esse trabalho teve como objetivo principal caracterizar funcionalmente o transfator GmbZIPE2, mapeando cis-elementos que ele se liga, bem como genes responsivos a GmbZIPE2. A proteína GmbZIPE2 foi capaz de se ligar ao H-box, cis-elemento que é relacionado a patógenos. GmbZIPE2 induz genes de vias importantes para a defesa da planta, como CHS15-6 e PR-1. GmbZIPE2 reprime ANK1, um regulador negativo de morte celular. Os resultados desse trabalho indicam uma relação do fator de transcrição GmbZIPE2 na defesa da planta contra o ataque de patógenos. Maiores conhecimentos sobre o GmbZIPE2 pode contribuir com o conhecimento acerca da resposta da planta a estresse biótico e poderá ser útil para a obtenção de novos alvos para a modificação genética de cultivares. / In a plant/pathogen interaction, modulation of gene transcription is essential to mount an effective defense response in host cells. Transcription factors are among the major targets in plants for increasing stress tolerance, since these proteins control the expression of several genes simultaneously. Members of the bZIP family of transcription factors can act in defense against pathogens. Despite the role in defense against pathogens bZIPs be known, few studies biochemically characterized members of this family that participate in the process of defense. The GmbZIPE2 (Glyma05g30170.1) is a member of the bZIP E group of soybean, which is responsive to infection by Phakopsora pachyrhizi. The objective of this study was functionally characterize the transfator GmbZIPE2, mapping the cis-elements that it binds as well as the responsive genes of GmbZIPE2. The GmbZIPE2 protein was able to bind to the H- box cis-element is related to pathogens. GmbZIPE2 induces genes important for plant defense pathways, as CHS15-6 and PR-1. GmbZIPE2 represses ANK1, a negative regulator of cell death. The results of this study indicate a relationship of GmbZIPE2 transcription factor in plant defense against pathogen attack. Improved knowledge of the GmbZIPE2 can contribute to the knowledge of plant response to biotic stress and may be useful for obtaining new targets for genetic modification of crops.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-10-23T18:01:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 15820854 bytes, checksum: 05a1d316d60a8fce289637e8e8a312b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-23T18:01:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 15820854 bytes, checksum: 05a1d316d60a8fce289637e8e8a312b2 (MD5) Previous issue date: 1987-07-22 / Foram conduzidos 18 ensaios em diferentes localidades e épocas, no ano agrícola I984/85, no Mato Grosso do Sul, com o objetivo de avaliar a representatividade de locais e/ou épocas de semeadura, a inclusão de épocas de semeadura para melhorar a eficiência da seleção de cultivares e linhagens para diferentes regiões e estimar a adaptabilidade e estabilidade fenotípica de II genótipos de soja. Os ensaios conduzidos em diferentes localidades e/ou épocas de semeadura apresentaram uma tendência a alterar significativamente a ordem de classificação dos cultivares e linhagens, sendo maior para o carater produção de grãos do que para outros caracteres. Verificou-se maior possibilidade de substituir um ensaio por outro com relação aos caracteres altura de planta e número de dias para maturação do que para produção de grãos. A seleção de genótipos pode ser feita de maneira mais eficiente por meio da escolha de ambientes a serem agrupados, envolvendo localidades e épocas de semeadura. A combinação de IO localidades na época em que tradicionalmente são conduzidos os ensaios finais, não se mostrou eficiente para a seleção de cultivares e linhagens para todo o Estado do Mato Grosso do Sul. O agrupamento das cinco localidades da regiao Centro-Norte do Estado e o plantio na época tradicional não representaram bem esta região. Apenas o agrupamento região Sul (Grande Dourados) parece estar sendo eficiente com respeito à seleção de cultivares mais bem adaptados as condições desta região. / Lattes e CPF não encontrado. Dissertação antiga.