Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao de mestrado completa Amanda A Souza.pdf: 994299 bytes, checksum: 8cf098dd70299abaf08a216436f38888 (MD5) Previous issue date: 2011-06-29 / Trichoderma harzianum is a saprophytic fungus, known for its potential as a biological control agent of different phytopathogens that causes losses in crops. Its action is based on different mechanisms like volatile and non-volatile antibiotics production, competition for nutrient and space, production of hydrolytic enzymes and mycoparasitism. This fungus also plays an important role in the release of carbon, nitrogen and phosphorus from insoluble macromolecules to the medium, favoring the growth of plants. Phosphorus is a limiting nutrient for plant growth, however, over 80% of the phosphorus applied to the soil, it becomes unavailable, due to its adsorption, precipitation or conversion to organic form. One way to obtain phosphate compounds in soil is through the action of enzymes called phosphatases, which catalyze the hydrolysis of phosphate esters producing soluble phosphorus. High levels of acid phosphatase (ACP) were produced by Trichoderma harzianum ALL42. This study evaluated the ability of T. harzianumALL42produce acid phosphatases(ACPs) in minimal medium modified by varying the concentration of glucose and phosphate (KH2PO4). The results showed that the concentration of glucose and phosphate in the culture medium regulated the production of ACPs T. harzianum ALL42. Thisfungusproducedanacid phosphatase(ACPII) inculture mediumcontainingglucose0.5% and0.04% phosphate. Theenzymewaspartiallypurifiedby hydrophobic interaction chromatography on Phenyl Sepharose. A typical procedure provided 2,0 fold purification with 32.65 % yield. It was optimally active in the pH range 5,2 and at 50°C. The enzyme was heat-stable, retaining approximately 60% of its activity after heating for 60 min at 60°C. Kinetic parameters calculated for the hydrolysis of p-nitrophenyl phosphate by acid phosphatase were Km= 0,054 M and Vmax= 2,058 units.min-1. The enzyme was strongly inhibited by KH2PO4, FeCl3 and sodium tungstate. The enzyme is inhibited by KH2PO4 and sodium tungstate through mixed inhibition. The acid phosphatase hydrolyzed a number of phosphate esters ATP, ADP, AMP, D-glucose-1-phosphate, D-fructose-6-phosphate, includingphytic acid, showinganactivityofphytase. / Trichoderma harzianum é um fungo saprofítico, conhecido pelo seu grande potencial como agente de controle biológico de diferentes fitopatógenos. Sua ação é baseada em diferentes mecanismos como a produção de antibióticos voláteis e não-voláteis, competição por espaço e nutrientes, produção de enzimas hidrolíticas e o micoparasitismo. Esse fungo também desempenha um importante papel na liberação de carbono, nitrogênio e fósforo, a partir de macromoléculas insolúveis, para o meio, favorecendo o crescimento de plantas. O fósforo é um nutriente limitante para o crescimento da planta, entretanto, mais de 80% do fósforo aplicado diretamente no solo, torna-se indisponível, devido a sua adsorção, precipitação ou conversão para forma orgânica. Uma forma de se obter compostos fosfatados no solo é através da ação de enzimas denominadas fosfatases, que catalisam a hidrólise de ésteres fosfatados produzindo fósforo solúvel. Altos níveis de fosfatase ácida foram produzidos por Trichoderma harzianum ALL42. Neste trabalho avaliou-se a capacidade de T. harzianum ALL42 produzir fosfatases ácidas (ACPs) em meio mínimo modificado, variando a concentração de glicose e fosfato (KH2PO4). Os resultados obtidos demonstraram que, a concentração de glicose e fosfato no meio de cultura regulou a produção de ACPs por T. harzianum ALL42. Esse fungoproduziu uma fosfatase ácida (ACPII) em meio de cultura contendo glicose 0,5% e fosfato 0,04%. A enzima foi parcialmente purificada através da cromatografia de interação hidrofóbica Phenyl-Sepharose. O processo de purificação obteve um fator de purificação de 2,0 e rendimento de 32,65%. A atividade ótima encontrada foi na faixa de pH 5,2 e a 50 ºC. A enzima foi termoestável, mantendo aproximadamente 60% de sua atividade após incubação por 60 min a 60 ºC. Os parâmetros cinéticos calculados pela hidrólise de ƿ-nitrofenilfosfato pela fosfatase ácida foram de Km = 0,054 µmol e Vmáx = 2,028U.min-1. A enzima foi fortemente inibida por KH2PO4,FeCl3 e tungstato de sódio. A enzima foi inibida por KH2PO4 e tungstato de sódio por inibição mista. A fosfatase ácida hidrolisou todos os ésteres fosfatados testados (ATP, ADP, AMP, D-glicose-1-fosfato, D-frutose-6-fosfato, fenil fosfato de sódio), inclusive ácido fítico, demonstrando uma atividade de fitase.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-01Bitstream added on 2014-06-13T19:55:59Z : No. of bitstreams: 1 lemos_mto_me_jabo.pdf: 967680 bytes, checksum: a6c9fc3231a065465ff531a2097edf51 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A conservação da biodiversidade, implica em cultivar espécies arbóreas nativas que possam ser utilizadas em projetos de reflorestamento, recuperação de áreas degradadas e com o objetivo de obter produtos secundários importantes como madeira e produtos medicinais. O uso de rizobactérias promotoras de crescimento em plantas, vem sendo muito estudado em culturas de importância econômica, devido a sua aplicabilidade em beneficiar o desenvolvimento destas. Neste trabalho foram escolhidas quatro espécies arbóreas nativas, leguminosas não nodulantes: Pterogyne nitens (Amendoim-bravo), Albizia hasslerii (Farinha-seca), Copaifera langsdorffii (Copaíba), e Stryphnodendron adstringens (Barbatimão). O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro as diferentes bactérias isoladas destas espécies florestais que possam ter efeito benéfico no crescimento e desenvolvimento inicial das plantas e caracterizálas pelo sequenciamento do gene 16S rRNa e perfil eletroforético do gene BOX-A 1R. As bactérias foram isoladas da rizosfera e da raiz de mudas de cada espécie, em meio de cultura NFb. No total, 29 isolados foram cultivados em meio de cultura DYGS enriquecido com triptofano. A estimativa colorimétrica do Ácido Indolacético (AIA) foi feita no espectrofotômetro, utilizando o sobrenadante da cultura de células e solução de Salkowski, com resultado positivo para o isolado Pn 6 Sphingobium chlorophenolicum com 61,69 μg.mL-1. Os isolados também foram testados para a eficiência de solubilização de fosfato de cálcio que foi realizado e contabilizado até o 15° dia após a inoculação em placas de Petri com meio de cultura NBRIP sólido, onde 27 isolados apresentaram resultados positivos. A caracterização genética permitiu a diferenciação em gêneros e também em espécies de um mesmo gênero. Os isolados que deram resultados positivos para AIA e solubilização de fosfato... / The biodiversity conservation implies cultivating native forest species that can be used in reforestation projects, recovery of degraded areas as well as getting others like wood and medicinal products. The plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) use is being studied in cultures of economic importance. In this work four native forest species, no nodulating leguminous had been chosen: Pterogyne nitens, Albizia hasslerii, Copaifera langsdorffii, and Stryphnodendron adstringens. The aim of this work was the in vitro evaluation of the different isolates from those forest species with beneficial effects in growth and initial development of the plants and characterizes them by 16S rRNA gene sequencing and BOX-A 1R. The bacteria had been isolated from the rhizosphere and from the roots (endophytic) of each species seedlings on NFb growth media. A total of 29 isolates had been cultivated in growth media DYGS enriched with tryptophan. The indolacetic acid (IAA) production was estimated by colorimetric test in the spectrophotometer, using the supernatant of the cells culture and Salkowski´s reagent, with positive result for the isolated Pn 6 Sphingobium chlorophenolicum with 61,69 μg.mL-1. Isolates had been also tested for the efficiency of P- solubilizing that was carried through and measured until the 15 º day after the inoculation in Petri plates with solid growth media NBRIP, where 27 isolates had presented positive results. The genetic characterization allows us to differentiate by the genus and species from the same genus. The isolates that had positive results for IAA and P-solubilizing had not matched between itself, what suggests nursery tests with combinations between them to evaluate the isolate efficiency as a possible PGPRs.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 568781 bytes, checksum: e6beb96802418d9a09f3cb5c6661297e (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use P solubilizing microorganisms are an alternative for a sustainable use of P against a backdrop of depletion of high-grade ores. Nevertheless, the chemical characteristics of rock phosphates (RP), particularly the level of toxic elements, can affect the efficiency of microbial solubilization. Fluoride (F-) released from fluorapatites has been shown to significantly inhibit P solubilization by Aspergillus niger, stimulating the search for alternatives to overcome F- toxicity. Thus, the aim of this study was to select A. niger mutants efficient at P solubilization in the presence of F-. Three selected mutants were also characterized as to their P solubilization mechanisms and the solubilization potential of different P sources. Twenty-nine mutants were obtained that presented changes in their phosphate solubilization activity in comparison to the wild type (WT). The mutant FS1-331 showed higher solubilization of Araxá RP, while FS1-555 promoted higher soluble P when grown in media with calcium phosphate supplemented with F- and in those with pure P sources. These mutants also showed higher tolerance to F- than the WT and displayed changes in the production of organic acids. The higher production of oxalic acid by FS1-331 and FS1-555 correlated with their improved capacity of Araxá RP solubilization. A mutant with decreased P solubilization capacity showed lower production of organic acids, corroborating the importance of these compounds for RP solubilization. FS1-331 was more efficient at solubilizing Araxá, Catalão, and Patos de Minas RPs than the WT and FS1-555. The variation in P solubilization capacity of the mutants obtained in this work may help clarify the RP solubilization mechanisms by A. niger. Moreover, the mutants with better performance selected in this work show potential for use in microbial RP solubilization systems with P sources rich in fluoride. / O uso dos micro-organismos solubilizadores de fosfato (P) é uma alternativa para o uso sustentável do P tendo em vista a diminuição das reservas fosfáticas de alta qualidade. As características químicas dos fosfatos de rocha (FR), em especial o nível de elementos tóxicos, podem influenciar a eficiência de solubilização microbiana. O fluoreto (F-) liberado de fluorapatitas inibi significativamente o processo de solubilização por Aspergillus niger FS1. Assim, o objetivo deste estudo foi selecionar mutantes de A. niger eficientes na solubilização de fosfato na presença de F-. Três mutantes selecionados foram também caracterizados quanto aos mecanismos de solubilização de fosfato e ao potencial de solubilização de diferentes fontes de P. Vinte e nove mutantes com alterações na solubilização de fosfato foram obtidos. O mutante FS1-331 demonstrou maior potencial de solubilização de fosfato de Araxá, enquanto que o mutante FS1-555 aumentou o P solubilizado em meio de cultura com fosfato de cálcio suplementado com F- e naqueles com fontes sintéticas de P. Os mutantes avaliados mostraram maior tolerância ao F- do que o tipo selavagem e tiveram a produção de ácidos orgânicos alterada. A maior produção de ácido oxálico pelos mutantes FS1-331 e FS1-555 relacionou-se com o melhor desempenho dessas estiprpes na solubilização de fosfato de Araxá. Um mutante com solubilização de P diminuída (FS1-375) apresentou menor produção de ácidos orgânicos quando comparado ao tipo selvagem, corroborando a importância desses compostos para o processo de solubilização de FRs. O mutante FS1-331 foi o mais eficiente na solubilização dos FRs de Araxá, Catalão e Patos de Minas. A variação na solubilização de P das estirpes fúngicas estudadas pode contribuir para a melhor compreensão do processo de solubilização de fosfatos por A. niger. Além disso, os mutantes mais eficientes obtidos apresentam alto potencial de aplicação em sistemas microbianos de solubilização de fosfatos com fontes de P ricas em fluoreto.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-08-11T12:22:48Z No. of bitstreams: 1 Michelangelo de Oliveira Silva.pdf: 667109 bytes, checksum: d1d78400e5eb31539cdab86c7d14b716 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T12:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Michelangelo de Oliveira Silva.pdf: 667109 bytes, checksum: d1d78400e5eb31539cdab86c7d14b716 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The exploration and understanding of the mechanisms of bacteria-plant interaction may be used in management systems that seek a sustainable production of several crops in agriculture, mainly sugar cane, which has great importance in today's economy. Therefore, the objective was to evaluate the diversity of bacteria (endophytic and rhizoplane) associated with different varieties of cane sugar grown in the Northeast and select bacteria with potential to promote plant growth (nitrogen fixing and phosphate solubilizing) for a possible reduction of fertilizer. Endophytic bacteria, leaf and root, and rhizoplane were isolated from three commercial varieties (RB 92579, RB 867515 and RB 863129) of cane sugar grown in the Northeast, in areas with and without the application of Termiticide and in two seasons (4 and 10 months) of plant development. The bacteria were isolated in 10% TSA media and selective media NFB and selected based on their ability to solubilize inorganic phosphate and nitrogen fixation. At the end of the process were isolated about 410 strains in rich media (TSA) and about 245 isolated media NFB(diazotrophic), that for both harvests. In the interaction bacteria-cane sugar, the total population of yellow and white bacteria was influenced by the varieties of cane and evaluated by plant tissues, and its management, and, moreover, it was concluded that the varieties of sugarcane sugarcane grown in the Northeast have a bacterial community associated with potential application to plant growth promotion, since they have the ability to fix nitrogen, solubilize inorganic phosphate and produce AIA. Plant cane sugar grown in Pernambuco has a distinct community of endophytic bacteria in relation to other producing states, some being identified as the genus Burkholderia, Pantoea, Klebsiella, Pseudomonas and Enterobacter. / A exploração e o conhecimento dos mecanismos de interação bactéria-planta poderão ser utilizados em sistemas de manejo que busquem uma produção sustentável de diversas culturas de interesse agrícola, principalmente a cana-de-açúcar, que exerce grande importância na economia atual. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade de bactérias (endofíticas e do rizoplano) associadas a diferentes variedades de cana-de-açúcar, cultivadas no Nordeste e selecionar bactérias com potencial em promover o crescimento vegetal (fixadoras de nitrogênio e solubilizadoras de fosfato), para uma possível redução de fertilizantes. Bactérias endofíticas, de folha e raiz, e do rizoplano foram isoladas de três variedades comerciais (RB 92579, RB 867515 e RB 863129) de cana-de-açúcar, cultivadas no Nordeste, em áreas com e sem aplicação de cupinicida e em duas épocas (4 e 10 meses) de desenvolvimento da planta . As bactérias foram isoladas em meio TSA 10% e no meio seletivo NFb e selecionadas quanto a sua capacidade de solubilizar fosfato inorgânico e fixar nitrogênio. No final do processo foram isoladas cerca de 410 isolados em meio rico (TSA) e cerca de 245 isolados em meio NFb (diazotroficas), isso para ambas épocas de coleta. Na interação bactéria-cana-de-açúcar, a densidade populacional total, de bactérias amarelas e brancas foi influenciada pelas variedades de cana avaliadas e pelos tecidos vegetais, e pelo manejo e, além disso, foi possível concluir que as variedades de cana-de-açúcar cultivadas no Nordeste apresentam uma comunidade bacteriana associada com potencial aplicação para a promoção de crescimento vegetal, pois possuem a capacidade de fixar nitrogênio, solubilizar fosfato inorgânico e produzir AIA. Planta de cana-de-açúcar cultivada em Pernambuco possui uma comunidade de bactérias endofíticas distinta em relação aos outros estados produtores, sendo algumas identificadas como dos gêneros: Burkholderia, Pantoea, Klebsiella, Pseudomonas e Enterobacter.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Espécies de arroz silvestre são colonizadas por bactérias diazotróficas, contudo, pouco se conhece sobre a colonização em Oryza glumaepatula (Steud). Este estudo teve como objetivo isolar e caracterizar bactérias diazotróficas de arroz silvestre em áreas de mata e cerrado no bioma amazônico. Amostras de plantas selvagens foram coletadas e utilizadas para o isolamento bacteriano, sendo as bactérias obtidas avaliadas quanto à formação de película em meio de cultura semi-sólido. Posteriormente, as que apresentaram a formação de película foram analisadas quanto a presença do gene nifH utilizando os iniciadores PolF/PolR e, as que foram positivas, caracterizadas através de Box-PCR, solubilização de fosfato de Ca e produção de ácido indol acético (AIA). Trinta e oito bactérias, cerca de 4% do total, formaram película e apresentaram produto de amplificação do gene nifH. A incidência de bactérias diazotróficas foi semelhante entre as áreas, porém maior número foi isolado na parte aérea das plantas. Além disso, mais de 30% das bactérias diazotróficas apresentaram produção de AIA e/ou solubilização de fosfato, sendo a maior concentração na parte aérea das plantas do cerrado. Nessa área ocorre maior diversidade genotípica de bactérias diazotrófica associadas ao arroz silvestre e maior número destas bactérias capazes de solubilizar fosfato de Ca e produzir AIA. / Species of wild rice are colonized by diazotrophic bacterias, however, little is known about the colonization in Oryza glumaepatula (Steud). This study aimed isolate and characterize diazotrophic bacterias of the wild rice from forest and cerrado areas in the Amazon biome. Samples of wild plants were collected for bacterial isolation, and semi-solid medium was used to assay the pellicles formation by the bacterias. Later, the nifH gene was also amplified by PCR using the primer set PolF/PolR and the bacterias, each ones were positive, characterized through Box-PCR, solubilization of calcium phosphate and production of indol acetic acid (AIA). Thirty eight bacterias, around 4% of the total, formed pellicles and also presented nifH gene amplification. A incidência de bactérias diazotróficas foi semelhante entre as áreas, porém maior número foi isolado na parte aérea das plantas. Além disso, mais de 30% das bactérias diazotróficas apresentaram produção de AIA e/ou solubilização de fosfato, sendo a maior concentração na parte aérea das plantas do cerrado. Nessa área ocorre maior diversidade genotípica de bactérias diazotrófica associadas ao arroz silvestre e maior número destas bactérias capazes de solubilizar fosfato de Ca e produzir AIA. The incidence of diazotrophic bacterias was similar between the areas, however, higher number was isolated from the aerial part of the plants. Furthermore, more than 30% of the diazotrophic bacterias produced AIA and/or solubilized phosphate, and the largest concentration of these bacteria was isolate in the aerial part of the plants from cerrado. In this area happens higher genotypic diversity of diazotrophic bacterias associated to the wild rice and also the larger number of these bacterias is capable producing AIA and solubilizing phosphate.