Resumo: Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA) emergiram logo após a introdução desse fármaco para tratamento de infecções hospitalares. A emergência da resistência a meticilina em cepas de Staphylococcus aureus na comunidade (CAMRSA) instiga a pesquisa de novos tratamentos e dos mecanismos de virulência relacionados a essas cepas. Indivíduos que não apresentavam fatores de risco tradicionais para aquisição de MRSA eram gravemente afetados por cepas de CAMRSA que geralmente apresentam-se mais virulentas. O objetivo desse trabalho foi determinar a ocorrência de Staphylococcus spp. e os fatores de risco para aquisição de MRSA como causa de infecções de pele e/ou de tecidos moles. Durante o período de estudo foram atendidos 127 pacientes com diagnóstico de infecções agudas de pele, sendo que 19 (14,9%) pacientes apresentaram cultura bacteriológica negativa e 108 (85,1%) apresentaram cultura positiva para Staphylococcus spp., isolando-se 116 amostras. Dessas 116 amostras, 66 (56,9%) foram identificadas como S. aureus e 50 (43,1%) como Estafilococos coagulase-negativa (ECN). O gene de resistência a meticilina foi detectado em 26 (21%) amostras, sendo sete (26,9%) em S. aureus e 19 (73,1%) em ECN. A resistência fenotípica para os discos de cefoxitina e oxacilina foi detectada em seis (85,7%) das amostras de S. aureus positivas para o gene mecA e, com relação aos ECN, 10 (52,6%) mostraram-se resistentes à oxacilina e somente cinco (26,3%) amostras mostraram-se resistentes para o disco de cefoxitina. Das 7 amostras de S. aureus positivas para o gene mecA 1 (14,2%) foi do tipo Ia, 3 (42,9%) do tipo II e 3 (42,9%) do tipo IV. Para os ECN foram encontrados 2 (10,5%) do tipo I e II cada, 3 (15,8%) do tipo III, 5 (26,4%) do tipo IV e 7 (36,8%) não foram tipáveis. O gene da PVL foi detectado em 15,1% das amostras de S. aureus. Os fatores de risco encontrados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The emergency of methicillin resistant Staphylococcus aureus strains in the community (CA-MRSA), lead to the search of new options of treatment and the virulence factors regarded to them. Individuals without the traditional risk factors for acquisition of MRSA were severely affected CA-MRSA strains, usually more virulent than health-care associated strains (HA-MRSA). The aim of this work was determinate the Staphylococcus spp. occurrence and the risk factors for MRSA acquisition as the main cause of skin and soft tissue infections. During the study period 127 patients were attended and diagnosed as acute skin infections, and 19 (14.9%) of the patients had negative bacterial culture and 108 (85.1%) had positive culture for Staphylococcus spp. and from that 116 samples were recovered. From these 116 samples, 66 (56.9%) were S. aureus and 50 (43.1%) were CoNS (coagulase-negative Staphylococcus). The methicillin resistance gene mecA was detected in 26 (21%) from the strains where 7 (26.9%) were S. aureus and 19 (73.1%) were CoNS. The phenotypic resistance for the cefoxitin and oxacillin discs was detected in 6 (85.7%) of S. aureus samples and, regarded to the CoNS samples 10 (52.6%) were resistant to the oxacillin disc and just 5 (26.3%) samples were resistant for the cefoxitin disk. From 7 S. aureus samples mecA positive 1 (14.2%) was type Ia, 3 (42.9%) type II and 3 (42.9%) type IV. For the CoNS isolated, 2 (10.5%) were tipe I and II for each one, 3 (15.8%) type III, 5 (26.4%) type IV and 7 (36.8%) were not able to type. The PVL gene was detected in 10 (15.1%) on S. aureus samples. The risk factors attributed to the MRSA acquisition on this study were the previous ciprofloxacin intake [OR: 8.75 (1.59 - 48.29) p= 0.01] and work in the health care settings [OR: 17.5 (1.22 - 250.36) p= 0.04] / Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Coorientador: Silvio Alencar Marques / Banca: Carlos Magno Branco Fortaleza / Banca: Antonio Carlos Campos Pignatari / Mestre

Orientador: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Patrícia Amoroso / Banca: Branca Maria de Oliveira Santos / Banca: Ruben Pablo Schocken-Iturrino / Banca: José Moacir Marin / Resumo: Foram coletadas 143 amostras de mãos de humanos e camas hospitalares, através de suabes em caldo BHI (Brain Heart Infusion), em um Hospital Escola de Ribeirão Preto, SP. Este trabalho teve como objetivo caracterizar as cepas de Staphylococcus sp e verificar o grau de similaridade genética entre as cepas pelo RAPD-PCR e analisar o perfil de resistência a diversos antimicrobianos. As amostras coletadas foram incubadas a 37º C por 24 horas e após este período as culturas foram semeadas em placas de Petri contendo agar "Staphylococcus Médium 110". As colônias típicas do gênero Staphylococcus foram coletadas e estocadas a 4º C até o momento de elaboração das provas de produção de catalase e coagulase, fermentação do manitol, DNAse e hemólise. As cepas isoladas foram analisadas através da técnica de RAPD-PCR para verificar o grau de similaridade. A sensibilidade das cepas isoladas foi testada frente a 11 diferentes antibióticos. Foram isoladas 92 cepas de Staphylococcus sp sendo 67 (72,8%) cepas de Staphylococcus coagulase negativas e 25 (27,2%) cepas de Staphylococcus coagulase positivas. A análise de similaridade mostrou heterogeneidade genética entre as cepas. Foram encontradas oito (8.7%) cepas de Staphylococcus sp resistentes à vancomicina, sendo uma multirresistente a todos os antibióticos. Introduzir medidas de assepsia nas mãos de pessoal e leitos hospitalares e a racionalização do uso indiscriminado de antibióticos muito contribuirá para diminuição das infecções nosocomiais. / Abstract: A total of 143 samples were analyzed in this study. These included samples from human hands and hospital beds at a Medical Teaching Hospital of Ribeirão Preto, SP. This study aimed to characterize the strains of Staphylococcus sp and verify the degree of genetic similarity between the strains by RAPD-PCR and analyse the profile of the various antimicrobial resistance. Swabs samples were collected and cultured in brain heart infusion medium at 37o C for 24 h. Further cultivation was performed on Staphylococcus medium 110 agar plates. Typical colonies representing Staphylococcus genus were collected and stored at 4º C until it was used for identification tests, which included catalase, coagulase and mannitol production, hemolysis and Dnase. Isolates were analyzed by RAPD-PCR to verify similarity level. Antibiotic susceptibility was determined using 11 different antibiotics. A total of 92 Staphylococcus sp strains were isolated, whereas 67 (72.8%) were coagulase-negative Staphylococcus strains and 25 (27,2%) were coagulase-positive Staphylococcus strains. Similarity analysis revealed a great dissimilarity among isolates. High percentage of beta-lactams resistant Staphylococcus sp was found. Eight strains (8.7%) were vancomycin-resistant. A high percentage of multiresistant strains were found. Introduce of good hygiene practices for hands and hospital beds and adequate antibiotic use, may contribute to reduction of nosocomial infection and consequently improved antibiotic treatment response. / Doutor

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Carlos Augusto Fernandes de Oliveira / Banca: Nilson Roberti Benites / Banca: Helio Langoni / Resumo: o presente estudo teve como objetivo verificar a prevalência da mastite caprina causada por Staphylococcus spp. em três rebanhos do Estado de São Paulo, bem como conhecer as características fenotípicas e genotípicas das cepas isoladas. Por outro lado, através dos testes de susceptibilidade a antimicrobianos e da PCR-ribotipagem, pretendeu-se, também, verificar a relação epidemiológica existente entre as cepas de Staphylococcus spp. isoladas em amostras de leite, óstio do teto, lesão em pele do teto e ordenhadeira, assim como de mãos, tonsilas e fossas nasais de ordenhadores. A prevalência da mastite subclínica foi de 12,0%, 10,7% e 26,6% nos rebanhos pertencentes às três propriedades estudadas, nos quais Staphylococcus coagulase negativa foi o principal agente envolvido na etiologia dos casos. O teste de susceptibilidade a antimicrobianos revelou que 100% das cepas foram sensíveis à gentamicina, a neomicina e ao cefoperazone e, ainda, que a resistência frente a ampicilina e penicilina foi observada em 25,2% das cepas. A análise molecular revelou estreita relação entre as cepas isoladas de amostras de leite e óstio de teto. Cepas isoladas dos insufladores da ordenhadeira, assim como as de fossas nasais dos ordenhadores, têm participação na epidemiologia das mastites em cabras. A PCR-ribotipagem permitiu avaliar a relação epidemiológica existente entre as cepas isoladas de forma mais eficiente que o teste de susceptibilidade a antimicrobianos. A compreensão dessas relações epidemiológicas é necessária para a implementação de medidas eficazes no controle e prevenção das mastites em cabras. / Abstract: The present study aimed to investigate the prevalence of goat mastitis due to Staphylococcus spp. in three flocks from São Paulo State, as well as understand the phenotypic and genotypic characteristics of the strains isolated. Otherwise, epidemiological relationship between the strains isolated from milk, teat ends, skin lesions, milking units and milking personnel was investigated by the antimicrobial susceptibility and PCR-ribotyping. The prevalence of subclinical mastitis was 12,0%, 10,7% and 26,6% for the three flocks studied and coagulase negative Staphylococcus was the most prevalent agent isolated. Antimicrobial susceptibility test revealed 100% of sensibility to gentamicin, neomycin and cephoperazon and, in addition, the resistance to ampicillin and penicillin in 25,2% of the strains isolated. Molecular analysis showed close relationship between strains isolated from milk and teat ends. Strains isolated from milking units, as well as strains isolated from nasal swabs of the milking personnel, play an important role on goat mastitis epidemiology. PCR-ribotyping was more efficient than antimicrobial susceptibility test to evaluate the epidemiological relationship between the strains isolated. An understanding of these epidemiological relationships is necessary for the design of more effective mastitis control programs. / Doutor

Orientador: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Naiá Carla Marchi de Rezende Lago / Banca: Oswaldo Durival Rossi Junior / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar os riscos para a saúde pública apresentado por tilápias, produzidas em cativeiro, comercializadas em supermercados na região nordeste de São Paulo. Para tal, análises microbiológicas foram realizadas, em 40 amostras de tilápias in natura e em 50 filés de tilápias. No peixe in natura foi analisado a água de enxaguadura da pele e o trato gastrintestinal. Os números mais prováveis de coliformes totais e termotolerantes foram determinados assim como a contagem Staphylococcus coagulase positivo e a presença de Salmonella spp. de acordo com a American Public Health Association (APHA). Os resultados obtidos foram analisados utilizando valores logarítmicos e as médias comparadas pelo teste de Tukey, com nível de 5% de probabilidade. A pele foi o tecido com maior nível de contaminação em relação ao trato gastrintestinal e músculo de tilápia in natura. O número de amostras com presença de coliformes totais e termotolerantes na água de enxaguadura da pele foi, respectivamente, 72,5% e 60%, no trato gastrintestinal 25% e 12,5% e no músculo 17,5% e 5%. A carga bacteriana foi significativamente maior no filé em relação ao músculo. Em duas amostras de filé foram verificados Staphylococcus coagulase positivo, uma acima dos parâmetros microbiológicos estabelecidos pela Resolução RDC nº 12/2001 da ANVISA. Salmonella spp. não foi detectada em nenhuma amostra analisada. As amostras de peixes estavam em boas condições para consumo, com exceção de duas amostras de filé. Os filés apresentaram maior contaminação que o músculo da tilápia in natura. Indicadores de poluição fecal demonstraram que a pele foi o órgão com maior contaminação / Abstract: The objective of this work was to evaluate the risks to public health of consumption of tilápia fish growed in captivity and commercialised in supermarkets in the Northwest region of São Paulo state. In order to accomplish with the objective the researcher undertook analysis in 40 samples of fresh tilápias and in 50 fillets of the fish. In the fresh fish it was also analysed the washing water of the skin and of the gastrointestinal tract. It were determined, in accordance to the American Public Health Association (APHA), the number of total and thermotolerant fecal coliforms as well as the number of coagulase-positive Staphylococcus and presence of the bacteria Salmonella spp. The results were analyzed using logarithmic values and means compared by Tukey test with 5% of probability. The skin was the tissue with higher levels of contamination comparing with the gastrointestinal tract and muscle of the fresh tilapia. The percentage of samples with total and thermotolerant fecal coliforms in the skin washing water was 72.5% and 60% respectively; 25% and 12.5% in the gastrointestinal tract and 17.5% and 5% in the muscles. Bacterial presence was significantly higher in fillets comparing to muscles. Moreover, it was noticed presence of coagulase-positive Staphylococcus in two samples of fillet; one of them showed levels above of the microbiological parameters established by the RDC resolution no. 12/2001 ANVISA. Additionally, it was not identified presence of Salmonella spp in any of the samples analyzed. Generally, the studied samples were in good condition for human consumption, except for two samples of fillets. Fillets presented higher levels of contamination comparing with muscles of the fresh tilapia. Fecal pollution indicators have proved that the skin was the organ with higher levels of contamination / Mestre