Magister Chirurgiae Dentium (MChD) / The rate at which the population is ageing is much faster than in the past. An increase in age results in an increase in oral diseases. One of the most common types of oral diseases in the elderly are fungal infections caused by Candida albicans. It has been noted that drug resistance to fungal pathogens is developing into a serious threat to public health and healthcare systems worldwide. This has consequently led to the need to develop effective and innocuous treatment modalities. The purpose of this study was to explore the antimicrobial and cytotoxic potential of silver nanoparticles (AgNPs) synthesised from Berzelia lanuginose, Helichrysum cymosum, and Searsia crenata.

<p> Mouse spleen leukocytes were stimulated with phytohemagglutinin and infected with Vesicular Stomatitis Virus. The virus titre from stimulated and unstimulated cells was determined and the number of infected cells in stimulated and unstimulated cultures was examined. </p> / Thesis / Master of Science (MSc)

Gene therapy is a promising treatment option for cancer. Ideally, a therapeutic gene is delivered specifically into tumor cells sparing the neighboring normal cells. For this purpose gene delivery vectors are designed that can recognize structures, which are exclusively expressed on tumor cells (i.e. the tumor-associated antigens -TAA-). Retroviral vectors are commonly used for gene therapy by modifying the envelope protein responsible for the recognition of the target cell. The Vesicular Stomatitis Virus G protein (VSV-G) is a well-liked choice for pseudotyping the retroviral vectors since it confers on the viral particle stability to allow concentration to high titers necessary for the clinical applications. However, the main drawback of VSV-G, the ubiquitously expressed receptor and thus the broad target range, hinders the use of this protein for targeted gene therapy. In this thesis, we aimed to modify the VSV-G for targeted gene therapy against Prostate Stem Cell Antigen (PSCA) -expressing tumors. Therefore we followed two approaches. The first approach comprised of the fusion of a single-chain antibody fragment against PSCA to the N-terminus of VSV-G. In the second approach the VSV-G was modified by insertion of a small epitope. We could demonstrate that two positions in the N-terminal region of VSV-G protein permit insertion of a ten amino acid long epitope. These mutant VSV-G proteins were successfully assembled into retroviral particles. We demonstrated that the mutant retroviral particles can be used for targeting to PSCA-positive cells using nanobeads. The nanobeads were chemically coupled to antibodies against the epitope in the VSV-G protein and PSCA on the tumor cell. These bispecific nanobeads allowed the recruitment of mutant retroviral particles to the PSCApositive cells. Our results point out the potential of these mutant retroviral particles in targeted gene delivery. Further studies will be necessary to assess the efficiency of in vivo targeted gene therapy using these mutant retroviral particles.

A gengivoestomatite linfoplasmocítica felina (GELF) é uma síndrome clínica frequentemente observada na medicina de felinos. Trata-se de uma síndrome provavelmente multifatorial que envolve o sistema imune dos animais, agentes infecciosos e não infecciosos, de modo que a etiologia ainda não foi totalmente determinada. Diversos agentes infecciosos como o calicivírus felino (FCV), herpesvírus felino (FHV), vírus da leucemia felina (FeLV) e vírus da imunodeficiência felina (FIV) têm sido investigados. Este trabalho apresenta uma caracterização clínico, patológica, imuno-histoquímica e molecular de 27 felinos com GELF. Quanto à raça, 85,2% eram sem raça definida, 7,4% Siamês e 7,4% Maine Coon. Os machos corresponderam a 67% dos casos e fêmeas 33%. Quanto à idade, 10% apresentavam entre 1 e 3 anos, 20% entre 4 e 6 anos, 30% entre 7 e 9 anos, 15% entre 10 e 12 anos e 25% tinham mais do que 13 anos. A idade média dos felinos foi de 8,8 anos. Os principais sinais clínicos observados foram: disfagia (83,3%), halitose (72,2%), sialorreia (44,4%), emagrecimento (38,8%), intenso desconforto oral (33,3%), sangramento oral (22,2%), pelos opacos e quebradiços (11,1%) e intensa dispneia (5,5%). Macroscopicamente, eram lesões bilaterais no arco palatino e que se estendiam até a face lateral da base da língua. Em 77,8% elas eram difusas, de aspecto proliferativo, coloração vermelho intenso, friável e que sangravam facilmente durante a manipulação e em 22,2% as lesões eram multifocais a coalescentes, por vezes formando múltiplas vesículas, no arco palatino de aspecto avermelhado e edematoso. Microscopicamente, 14,8% apresentaram uma inflamação moderada (grau 2) e 85,2% dos animais apresentaram uma inflamação grave (grau 3). Os antígenos virais do FeLV foram identificados através da técnica de IHQ no epitélio e células do infiltrado inflamatório de 29,6% dos animais que apresentavam a GELF. Os antígenos virais do FIV foram identificados nas células do infiltrado inflamatório em 3,7% dos casos. Os antígenos virais do FCV não foram identificados nas lesões de GELF. Dezoito por cento dos animais foram positivos para FIV e 37% foram positivos para FeLV no exame de PCR. / Feline chronic gingivostomatitis (FCGS) is a clinical syndrome frequently observed in feline medicine. This is probably a multifactorial syndrome which involves the immune system of animals, infectious and noninfectious agent, though the causes have not been fully determined. Several infectious agents such as feline calicivirus (FCV), feline herpesvirus (FHV), feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) have been investigated. To determine clinical, pathological, immunohistochemical (IHC) and molecular characteristics of 27 cats with FCGS was developed. Regarding race, 85.2% were mixed breed, 7.4% Siamese and 7.4% Maine Coon. Males were 67% of cases and females 33%. Regarding age, 10% were between 1 and 3 years, 20% between 4 and 6 years, 30% between 7 and 9 years old, 15% between 10 and 12 years and 25% were older than 13 years. The average age of the cats was of 8.8 years. The main clinical signs were: dysphagia (83.3%), halitosis (72.2%), sialorrhoea (44.4%), weight loss (38.8%), intense oral discomfort (33.3%), oral bleeding (22.2%), hair opaque and brittle (11.1%) and severe dyspnea (5.5%). Grossly, the lesions were bilateral in the palatal arch and extending to the lateral side of the base of the tongue. In 77.7% they were diffuse, proliferative, intense red, crispy and bled easily during handling and in 22.3% lesions were multifocal to coalescing, sometimes forming multiple vesicles, the palatal arch reddish and edematous appearance. Microscopically, 14.8% showed moderate inflammation (grade 2) and 85.2% of the animals showed severe inflammation (grade 3). FeLV viral antigens were identified by IHC reaction in the epithelium and inflammatory cells of 29.6% of the animals showing FCGS. FIV viral antigens were identified in inflammatory cells in 3.7% of cases. FCV viral antigens were not identified in lesions of FCGS. Eighteen per cent of animals were positive for FIV and 37% were positive for FeLV in the PCR.

A gengivoestomatite linfoplasmocítica felina (GELF) é uma síndrome clínica frequentemente observada na medicina de felinos. Trata-se de uma síndrome provavelmente multifatorial que envolve o sistema imune dos animais, agentes infecciosos e não infecciosos, de modo que a etiologia ainda não foi totalmente determinada. Diversos agentes infecciosos como o calicivírus felino (FCV), herpesvírus felino (FHV), vírus da leucemia felina (FeLV) e vírus da imunodeficiência felina (FIV) têm sido investigados. Este trabalho apresenta uma caracterização clínico, patológica, imuno-histoquímica e molecular de 27 felinos com GELF. Quanto à raça, 85,2% eram sem raça definida, 7,4% Siamês e 7,4% Maine Coon. Os machos corresponderam a 67% dos casos e fêmeas 33%. Quanto à idade, 10% apresentavam entre 1 e 3 anos, 20% entre 4 e 6 anos, 30% entre 7 e 9 anos, 15% entre 10 e 12 anos e 25% tinham mais do que 13 anos. A idade média dos felinos foi de 8,8 anos. Os principais sinais clínicos observados foram: disfagia (83,3%), halitose (72,2%), sialorreia (44,4%), emagrecimento (38,8%), intenso desconforto oral (33,3%), sangramento oral (22,2%), pelos opacos e quebradiços (11,1%) e intensa dispneia (5,5%). Macroscopicamente, eram lesões bilaterais no arco palatino e que se estendiam até a face lateral da base da língua. Em 77,8% elas eram difusas, de aspecto proliferativo, coloração vermelho intenso, friável e que sangravam facilmente durante a manipulação e em 22,2% as lesões eram multifocais a coalescentes, por vezes formando múltiplas vesículas, no arco palatino de aspecto avermelhado e edematoso. Microscopicamente, 14,8% apresentaram uma inflamação moderada (grau 2) e 85,2% dos animais apresentaram uma inflamação grave (grau 3). Os antígenos virais do FeLV foram identificados através da técnica de IHQ no epitélio e células do infiltrado inflamatório de 29,6% dos animais que apresentavam a GELF. Os antígenos virais do FIV foram identificados nas células do infiltrado inflamatório em 3,7% dos casos. Os antígenos virais do FCV não foram identificados nas lesões de GELF. Dezoito por cento dos animais foram positivos para FIV e 37% foram positivos para FeLV no exame de PCR. / Feline chronic gingivostomatitis (FCGS) is a clinical syndrome frequently observed in feline medicine. This is probably a multifactorial syndrome which involves the immune system of animals, infectious and noninfectious agent, though the causes have not been fully determined. Several infectious agents such as feline calicivirus (FCV), feline herpesvirus (FHV), feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) have been investigated. To determine clinical, pathological, immunohistochemical (IHC) and molecular characteristics of 27 cats with FCGS was developed. Regarding race, 85.2% were mixed breed, 7.4% Siamese and 7.4% Maine Coon. Males were 67% of cases and females 33%. Regarding age, 10% were between 1 and 3 years, 20% between 4 and 6 years, 30% between 7 and 9 years old, 15% between 10 and 12 years and 25% were older than 13 years. The average age of the cats was of 8.8 years. The main clinical signs were: dysphagia (83.3%), halitosis (72.2%), sialorrhoea (44.4%), weight loss (38.8%), intense oral discomfort (33.3%), oral bleeding (22.2%), hair opaque and brittle (11.1%) and severe dyspnea (5.5%). Grossly, the lesions were bilateral in the palatal arch and extending to the lateral side of the base of the tongue. In 77.7% they were diffuse, proliferative, intense red, crispy and bled easily during handling and in 22.3% lesions were multifocal to coalescing, sometimes forming multiple vesicles, the palatal arch reddish and edematous appearance. Microscopically, 14.8% showed moderate inflammation (grade 2) and 85.2% of the animals showed severe inflammation (grade 3). FeLV viral antigens were identified by IHC reaction in the epithelium and inflammatory cells of 29.6% of the animals showing FCGS. FIV viral antigens were identified in inflammatory cells in 3.7% of cases. FCV viral antigens were not identified in lesions of FCGS. Eighteen per cent of animals were positive for FIV and 37% were positive for FeLV in the PCR.

A gengivoestomatite linfoplasmocítica felina (GELF) é uma síndrome clínica frequentemente observada na medicina de felinos. Trata-se de uma síndrome provavelmente multifatorial que envolve o sistema imune dos animais, agentes infecciosos e não infecciosos, de modo que a etiologia ainda não foi totalmente determinada. Diversos agentes infecciosos como o calicivírus felino (FCV), herpesvírus felino (FHV), vírus da leucemia felina (FeLV) e vírus da imunodeficiência felina (FIV) têm sido investigados. Este trabalho apresenta uma caracterização clínico, patológica, imuno-histoquímica e molecular de 27 felinos com GELF. Quanto à raça, 85,2% eram sem raça definida, 7,4% Siamês e 7,4% Maine Coon. Os machos corresponderam a 67% dos casos e fêmeas 33%. Quanto à idade, 10% apresentavam entre 1 e 3 anos, 20% entre 4 e 6 anos, 30% entre 7 e 9 anos, 15% entre 10 e 12 anos e 25% tinham mais do que 13 anos. A idade média dos felinos foi de 8,8 anos. Os principais sinais clínicos observados foram: disfagia (83,3%), halitose (72,2%), sialorreia (44,4%), emagrecimento (38,8%), intenso desconforto oral (33,3%), sangramento oral (22,2%), pelos opacos e quebradiços (11,1%) e intensa dispneia (5,5%). Macroscopicamente, eram lesões bilaterais no arco palatino e que se estendiam até a face lateral da base da língua. Em 77,8% elas eram difusas, de aspecto proliferativo, coloração vermelho intenso, friável e que sangravam facilmente durante a manipulação e em 22,2% as lesões eram multifocais a coalescentes, por vezes formando múltiplas vesículas, no arco palatino de aspecto avermelhado e edematoso. Microscopicamente, 14,8% apresentaram uma inflamação moderada (grau 2) e 85,2% dos animais apresentaram uma inflamação grave (grau 3). Os antígenos virais do FeLV foram identificados através da técnica de IHQ no epitélio e células do infiltrado inflamatório de 29,6% dos animais que apresentavam a GELF. Os antígenos virais do FIV foram identificados nas células do infiltrado inflamatório em 3,7% dos casos. Os antígenos virais do FCV não foram identificados nas lesões de GELF. Dezoito por cento dos animais foram positivos para FIV e 37% foram positivos para FeLV no exame de PCR. / Feline chronic gingivostomatitis (FCGS) is a clinical syndrome frequently observed in feline medicine. This is probably a multifactorial syndrome which involves the immune system of animals, infectious and noninfectious agent, though the causes have not been fully determined. Several infectious agents such as feline calicivirus (FCV), feline herpesvirus (FHV), feline leukemia virus (FeLV) and feline immunodeficiency virus (FIV) have been investigated. To determine clinical, pathological, immunohistochemical (IHC) and molecular characteristics of 27 cats with FCGS was developed. Regarding race, 85.2% were mixed breed, 7.4% Siamese and 7.4% Maine Coon. Males were 67% of cases and females 33%. Regarding age, 10% were between 1 and 3 years, 20% between 4 and 6 years, 30% between 7 and 9 years old, 15% between 10 and 12 years and 25% were older than 13 years. The average age of the cats was of 8.8 years. The main clinical signs were: dysphagia (83.3%), halitosis (72.2%), sialorrhoea (44.4%), weight loss (38.8%), intense oral discomfort (33.3%), oral bleeding (22.2%), hair opaque and brittle (11.1%) and severe dyspnea (5.5%). Grossly, the lesions were bilateral in the palatal arch and extending to the lateral side of the base of the tongue. In 77.7% they were diffuse, proliferative, intense red, crispy and bled easily during handling and in 22.3% lesions were multifocal to coalescing, sometimes forming multiple vesicles, the palatal arch reddish and edematous appearance. Microscopically, 14.8% showed moderate inflammation (grade 2) and 85.2% of the animals showed severe inflammation (grade 3). FeLV viral antigens were identified by IHC reaction in the epithelium and inflammatory cells of 29.6% of the animals showing FCGS. FIV viral antigens were identified in inflammatory cells in 3.7% of cases. FCV viral antigens were not identified in lesions of FCGS. Eighteen per cent of animals were positive for FIV and 37% were positive for FeLV in the PCR.

Gene therapy is a promising treatment option for cancer. Ideally, a therapeutic gene is delivered specifically into tumor cells sparing the neighboring normal cells. For this purpose gene delivery vectors are designed that can recognize structures, which are exclusively expressed on tumor cells (i.e. the tumor-associated antigens -TAA-). Retroviral vectors are commonly used for gene therapy by modifying the envelope protein responsible for the recognition of the target cell. The Vesicular Stomatitis Virus G protein (VSV-G) is a well-liked choice for pseudotyping the retroviral vectors since it confers on the viral particle stability to allow concentration to high titers necessary for the clinical applications. However, the main drawback of VSV-G, the ubiquitously expressed receptor and thus the broad target range, hinders the use of this protein for targeted gene therapy. In this thesis, we aimed to modify the VSV-G for targeted gene therapy against Prostate Stem Cell Antigen (PSCA) -expressing tumors. Therefore we followed two approaches. The first approach comprised of the fusion of a single-chain antibody fragment against PSCA to the N-terminus of VSV-G. In the second approach the VSV-G was modified by insertion of a small epitope. We could demonstrate that two positions in the N-terminal region of VSV-G protein permit insertion of a ten amino acid long epitope. These mutant VSV-G proteins were successfully assembled into retroviral particles. We demonstrated that the mutant retroviral particles can be used for targeting to PSCA-positive cells using nanobeads. The nanobeads were chemically coupled to antibodies against the epitope in the VSV-G protein and PSCA on the tumor cell. These bispecific nanobeads allowed the recruitment of mutant retroviral particles to the PSCApositive cells. Our results point out the potential of these mutant retroviral particles in targeted gene delivery. Further studies will be necessary to assess the efficiency of in vivo targeted gene therapy using these mutant retroviral particles.

Os neutrófilos são as primeiras células a migrar para sítios de infecção e desempenham importante papel na defesa contra vários patógenos, especialmente Candida albicans. A função dos neutrófilos envolve fagocitose e destruição de leveduras e formas filamentosas do fungo, além de produção de citocinas e quimiocinas, capazes de ativar outras células envolvidas na eliminação de C. albicans. Recentemente, tem sido mostrado que estas células apresentam prejuízos com o avanço da idade e estes fenômenos fazem parte de uma área da Imunologia conhecida como Imunossenescência. A estomatite protética é a lesão oral mais verificada em idosos e a sua persistência é diretamente relacionada com a presença de espécies de Candida, principalmente C. albicans, nas lesões e na superfície interna de próteses, especialmente totais superiores (PTS). Com o objetivo de avaliar possíveis alterações em neutrófilos que poderiam predispor usuários de prótese total superior à estomatite protética, foram analisados neutrófilos de sangue e de saliva de idosos e jovens com estomatite protética associada à Candida (EPC), bem como de indivíduos controles. No primeiro capítulo foi avaliada a positividade de Candida e as diferentes espécies deste patógeno em lesões de estomatite protética e superfície interna de PTS. C. albicans foi a espécie mais detectada em lesões de EP e na PTS. No segundo capítulo, os neutrófilos do sangue dos indivíduos da pesquisa foram caracterizados quanto ao fenótipo ex vivo, função fagocítica e produção de citocinas e quimiocinas após desafio com C. albicans. Neutrófilos do sangue de indivíduos com EPC, bem como de idosos sem EPC, apresentaram características relacionadas com suscetibilidade às doenças causadas por C. albicans. No terceiro capítulo, os neutrófilos salivares dos indivíduos foram caracterizados quanto ao fenótipo ex vivo e função fagocítica após desafio com C. albicans. Além disso, níveis de citocinas e quimiocinas relacionadas com resposta imune de proteção ou suscetibilidade à infecções por C. albicans foram detectadas nas amostras de saliva. Os resultados indicaram diferenças nos neutrófilos salivares e componentes solúveis da saliva de pacientes com EPC. Também, alterações observadas nos neutrófilos resultantes da imunossenescência podem tornar os idosos mais suscetíveis a infecções por Candida e doenças associadas com a presença deste fungo. / Neutrophils are the first line of immune cells to migrate into infection sites, playing an important role against pathogens, especially Candida albicans. These cells phagocytose and destroy yeasts or filamentous forms of this fungus, beyond secrete cytokines and chemokines that activate other immune cells to eliminate C. albicans. Nowadays, it has been shown that the ageing damages neutrophil function and such events are described as part of Imunosenescence. Denture stomatitis is the most oral lesion present in elderly, and its persistence is related to Candida species, especially C. albicans, in the lesions and prosthesis fitting surface, particularly maxillary prosthesis (MP). In order to evaluate possible neutrophil alterations predisposing denture wearers to Candida- related denture stomatitis (DS), blood and salivary neutrophils from elderly and younger individuals with DS, as well control ones, were analyzed. Thus, the first chapter addresses the presence of Candida species on the denture stomatitis lesions and MP fitting surface. C. albicans was the most species detected in DS lesions and MP. On the second chapter, blood neutrophils from the individuals were characterized about ex vivo phenotype, phagocytic function, and cytokines and chemokines production after challenged with C. albicans. Blood neutrophils from DS individuals, as well elderly without DS, presented characteristics of susceptibility to C. albicans diseases. On the third chapter, salivary neutrophils from the individuals were characterized about ex vivo phenotype and phagocytic function against C. albicans. In addition, salivary cytokines and chemokines involved with resistance or susceptibility to C. albicans infection were detected. Results indicated differences in salivary neutrophils and soluble components from patients with DS. In addition, alterations observed in neutrophils by immunosenescence could facilitate Candida infections and diseases related to the presence of this pathogen in elderly.

O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro os mecanismos de ação coagregação, produção de peróxido de hidrogênio e ácidos orgânicos por probióticos no combate ao crescimento de Candida spp. A Estomatite sob Prótese é uma das infecções que acomete a mucosa oral, nas áreas recobertas por próteses, como resultado de condições locais ou sistêmicas que alteram a microbiota do hospedeiro, podendo estar associada à presença de Candida. O tratamento com antifúngicos tópicos é amplamente difundido para tratar candidose, porém algumas cepas de Candida se tornaram resistentes aos fármacos mais utilizados devido ao seu uso indiscriminado. Alguns trabalhos mostraram inibição do crescimento de Candida por probióticos, mas não se sabe ao certo quais mecanismos de ação agem nesta inibição. Para esta investigação foram utilizadas 77 amostras de leveduras isoladas de usuários de próteses totais, 4 cepas Candida ATCC, e 3 cepas de Lactobacillus. Realizou-se os testes de inibição de Candida por probióticos, produção de peróxido de hidrogênio e ácidos orgânicos, coagregação, curva de crescimento e inibição por ácido láctico. Os resultados demostraram a produção de H2O2 pelos lactobacilos, porém este mecanismo não pôde ser destacado como o responsável pela inibição. Os índices de coagregação obtiveram coeficiente de correlação r =0,5 com a capacidade de inibição dos micro-organismos. Houve intensa produção de ácidos orgânicos em culturas e co-culturas, de acordo com a cepa de lactobacilo presente. A presença de Candida não alterou as contagens de UFC dos lactobacilos. Já a presença de lactobacilos provocou redução nas contagens de Candida, especialmente C. albicans e C. dubliniensis. As curvas de crescimento e de pH mostraram que o comportamento das co-culturas é semelhante ao das culturas de lactobacilos. A análise de pH mostrou que a acidificação ocorreu em todas as culturas, porém L. rhamnosus promoveram uma maior acidificação. Concluímos que o ácido láctico é o mecanismo de ação mais importante dentre os estudados, sendo capaz de reduzir a contagem de UFC e alterar as curvas de crescimento de C. albicans e C. dubliniensis e que a inibição ocorre através de múltiplos fatores que podem variar de acordo com as espécies de leveduras e lactobacilos presentes. / This work objective was to evaluate in vitro the action mechanisms of coaggregation, hydrogen peroxide production and organic acids in preventing the growth of Candida spp.. The denture stomatitis is one of the infection types that affect the oral mucosa, in the area covered by prosthesis as a result of local or systemic conditions that changes the bacterial microbiota of the hostess, usually associated with the presence of Candida. The treatment using topical antifungal agents is widely spread to treat candidosis. However, some of the Candida strains became resistant to the most used drugs because of its indiscriminate use. Some pieces of work revealed success in preventing the growth of Candida by probiotics, but it is still unknown which mechanisms act on this exhibition. For this investigation there have been used 77 yeast samples isolated from total prosthesis users, being 4 ATCC strains of Candida, and 3 strains of Lactobacillus. There have been run inhibition tests of Candida by probiotics, hydrogen peroxide and organic acids production, coaggregation, growth curve and lactic acid inhibition. The results detect the H2O2 production by lactobacilli; however this mechanism could not be highlighted as the responsible for the inhibition observed. The coaggregation indexes showed correlation coefficients of r = 0.5 with the microorganisms inhibition capacity. There has been intensive organic acid production in cultures and co-cultures, according to the present lactobacilli strain. Candida presence did not alter the lactobacilli UFC count, whereas the lactobacilli presence caused reduction in Candida count, especially C. albicans and C. dubliniensis. The growth curves and pH showed that the behavior of co-cultures is similar to the lactobacilli cultures. The pH analysis showed that acidification occurred for all cultures; nevertheless, L. rhamnosus has promoted a greater acidification. We concluded that lactic acid is the most important mechanism among the studied ones, being capable of reducing UFC count and shifting the growth curves for C. albicans and C. dubliniensis. Furthermore, we concluded that the inhibition occurs through multiple factors that may vary according to the present yeast and lactobacilli species.

A Estomatite protética associada a Candida (EPC) acomete a mucosa bucal em contato com próteses removíveis e, clinicamente, caracteriza-se por eritema com diferentes graus de inflamação. Esta doença é considerada de etiologia multifatorial, isto é, uma associação de fatores como trauma, falta de higienização, uso contínuo da prótese, hipersensibilidade ao material usado na dentadura, diabetes, terapia imunossupressora e infecção por fungo, como diferentes espécies de Candida. Os principais fatores de virulência deste fungo são a formação de hifas, dimorfismo, alterações fenotípicas, aderência, persistência, sinergismo com as bactérias, interferências com o sistema de defesa do hospedeiro e a produção de enzimas hidrolíticas. Dentre as enzimas hidrolíticas, a proteinase aspartil secretada (SAP) é uma das mais importantes para a patogenia de C. albicans, sendo nociva para o tecido epitelial e para o sistema imune do hospedeiro. Não está totalmente compreendida a real penetração do fungo nos tecidos e sua correlação com a presença da SAP, na doença estomatite protética. Essa dificuldade de avaliação pode ser justificada pelas divergências intrínsecas e extrínsecas observadas em muitos aspectos, como diferentes costumes, hábitos sociais, estado emocional e fisiológico. A utilização de um modelo experimental em animais poderá minimizar essas divergências e fornecer condições mais padronizadas para o experimento. Neste trabalho, foram avaliadas, quantitativamente, a expressão gênica das enzimas SAP-2, SAP-5 e SAP-9, presentes no biofilme formado na superfície interna das placas acrílicas superiores de ratos e, microscopicamente, a invasão do fungo no tecido epitelial do palato. Para isso, foram selecionados 49 ratos Wistar, com 90 dias de vida, pesando em média 300g, os quais foram divididos em 3 grupos: Controle, Placa/Candida e Placa, acompanhados durante 2, 4 e 6 dias. Os resultados demostraram que, em 4 dias de uso da placa acrílica contaminada, houve, em alguns ratos, sinais clínicos de inflamação no palato duro; microscopicamente, hiperplasia epitelial, hiperqueratinização, invasão fúngica nas camadas superficiais do revestimento epitelial, microabscessos de Munro e hiperplasia papilar; e maior percentual de neutrófilos no Grupo Placa/Candida em relação aos Grupos Controle e Placa. Também no quarto dia de uso da placa acrílica superior, no Grupo Placa/Candida, o biofilme formado na sua superfície interna apresentou a mais alta expressão gênica relativa das enzimas SAP-2, SAP-5 e SAP-9 que os períodos de 2 e 6 dias de uso. Assim, a invasão fúngica no revestimento epitelial do palato duro pode estar correlacionada com a alta expressão de RNAm das SAPs -2, -5 e -9. / Denture stomatitis (D.S.) affects the oral mucosa in contact with removable dentures, and clinically characterized by erythema with varying degrees of inflammation. This disease is considered a multifactorial etiology, with a combination of factors such as trauma, lack of hygiene, continuous use of stents, hypersensitivity to the material used for dentures, diabetes, immunosuppressive therapy and fungal infection, such as different species of Candida. The main virulence factors of the fungus are the formation of hyphae, dimorphism, phenotypic changes, adherence, persistence, synergism with bacteria, interference with the host defense system and the production of hydrolytic proteins. Among the hydrolytic proteins, the secreted aspartyl proteinase (SAP) is one of the most important in the pathogenesis of C. albicans. SAP is harmful to both the epithelial tissue and to the host\'s immune system. It is not fully understood the real penetration of the fungus in the epithelium tissue and its correlation with the presence of SAP, in denture stomatitis. This difficulty in evaluation can be justified by the intrinsic and extrinsic differences observed in many aspects, different customs, social`s habits, emotional and physiological state. Using an experimental animal model may minimize these differences and provide more standardized conditions for the experiment. In the present work, the aim was to evaluate quantitatively the gene expression of enzymes SAP-2, SAP-5 and SAP-9 of the biofilm formed in internal surface of rat`s upper acrylic plates, and to analysis microscopically, the fungal invasion in palatal epithelial tissue. 49 Wistar rats were selected, 90 days old, weighing on average 300g. They were divided into three groups: Control Group, Plate/Candida and Plate, follow by 2, 4 and 6 days of the use of the plates. The results demonstrated, in four days of use of the acrylic plate, clinical signs of inflammation in the hard palate; microscopically epithelial hyperplasia, hyperkeratinization, fungal invasion in the superficial layers of the epithelial lining, Munro`s microabscess and papillary hyperplasia; and higher percentage of neutrophils in the Plate/Candida Group, compared to Control and Plate Groups. In the period of 4 days, the relative gene expression of the SAPs-2, -5 and -9 in biofilm also showed to be higher in Plate/Candida Group, compared with the periods of 2 and 6 days. Thus, the fungal invasion in the epithelial lining of the hard palate may be correlated with high mRNA expressionn of SAPs -2, -5 e -9.