Orientador: Alcides Guimaraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-23T08:43:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pina_MarcosRogerioRosa_M.pdf: 1813517 bytes, checksum: 04daec5a8c87d0faff9dbaa009d9b46d (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Essa pesquisa foi desenvolvida com um grupo de 20 escolares, com 10 anos de idade, do município de Limeira. O estudo compreendeu duas fases. A primeira fase constou de 20 dias de escovação supervisionada da língua e a segunda, iniciada imediatamente após o término da primeira, constou de 20 dias de paralisação da escovação. Nenhuma modificação nas medidas de higiene oral pessoal foi executada a não ser a inclusão da escovação da língua, dividindo-se a mesma em 3 partes (lateral direita, porção central e lateral esquerda). Cada parte foi escovada com 20 movimentos, partindo da região posterior para a anterior, sem retroceder o movimento. Seguidamente à escovação, foi realizado um bochecho, por 5 segundos, com água de abastecimento público. As escovações não continham dentifrício. Para efeitos de padronização, uma escova dental (Oral B, n.o P-30) foi dada a cada um dos componentes do grupo no início da pesquisa. As amostras de saliva foram colhidas nos tempos 0, 20 e 40 dias de pesquisa para avaliações das quantidades de Unidades Formadoras de Colônias (U.F.C.) bacterianas por ml. Para tanto, utilizou-se de um teste simplificado, comercialmente conhecido pelo nome de "CARITEST SM" (para Estreptococos mutans) e "CARITEST LB" (para Lactobacilos). Os resultados obtidos para Estreptococos mutans ressaltam que, dos 20 pacientes estudados, 40% (08) apresentaram diminuição do número de colônias após 20 dias de escovação da língua, 40% (08) mantiveram seus valores iniciais e 20% (04) apresentaram valores maiores que os iniciais. Aos 40 dias do experimento, ou seja, 20 dias após a cessação da escovação da língua, pôde-se verificar que para 50% (10) dos pacientes houve um aumento de seus valores e os restantes 50% (10) mantiveram seus valores iniciais. Dessa mesma forma, verificou-se que, para Lactobacilos, dos 20 pacientes estudados, 30% (06) apresentaram diminuição do número de colônias após 20 dias de escovação da língua, 55% (11) permaneceram nos seus valores iniciais e 15% (03) apresentaram valores maiores que os iniciais. Aos 40 dias do experimento, ou seja, 20 dias após a cessação da escovação da língua, chegou-se a conclusão que para 60% (12) dos pacientes houve um alimento de seus valores, 30% (06) mantiveram seus valores iniciais e 10% (02) apresentaram valores menores que os iniciais / Abstract: This research has been developed with a school group of 20, in the 10 year-old age group, within Limeira City. The study has had two phases. The first consisted of 20 days of supervised brushing of the tongue and the second, of 20 days of nonbrushing, and, the second phase has begun immediately after end of the first one. No modification at the personal oral hygiene measurement has been executed unless the inclusion of the tongue brushing, wich was accomplished in such a way that it has been divided in 3 parts (lateral right, central portion and lateral left). Each part has been brushed with 20, movements from the posterior area to the previous one, without going back the movement. Afterwards, a rinsing was accomplished, for 5 seconds, with the public provisioning water. The brushing didn't contain toothpaste. For standardization effects, a toothbrush (Oral B, n° P-30) was given to each one of the components of the group in the beginning of the research. The saliva samples were picked in the times 0, 20 and 40 days of research for evaluations of the amounts of Colonies Formated Unit (C.F.U.) bacteria for ml. For so much, it was used of na easy test, wellknown commercially for "CARITEST SM' (for Streptococcus mutans) and "CARITEST LB" (for Lactobacilli). The results obtained for Streptococcus mutans, have stood out that, of the 20 studied patients, 40% (08) have presented the number of colonies decrease after 20 days of tongue brushing, 40% (08) have stayed within of their own values and 20% (04) have presented larger values than the previous ones. To the 40 days of the experiment, that is to say, 20 days after the ceasing of tongue brushing, it ean be verified that for 50% (10) of the patients there has been an increase o(their values and the remaining ones 50% (10) have been within of their own values. Thus, it ean be verified that, for Lactobacilli, of the 20 studied patients, 30% (06) have presented the number of colonies decrease after 20 days of tongue brushing, 55% (11) have stayed within of their own values and 15% (03) have presented larger values than the previous ones. To the 40 days of the experiment, that is to say, 20 days after the ceasing of the tongue brushing, it can be verified that for 60% (12) of the patients there has been an increase of their values, 30% (06) have been within of their own values and 10% (02) have presented smaller values than the previous ones / Mestrado / Fisiologia e Biofisica do Sistema Estomatognatico / Mestre em Odontologia

Orientador: Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Murata_RamiroMendonca_M.pdf: 96971 bytes, checksum: 19d79345a58a9558f4c5e6a61bc610fb (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Son más de 700 especies bacterianas identificables en la cavidad oral humana. Entre ellas, Streptococcus mutans se cree que desempeña un papel importante como un factor microbiológico para la iniciación de la caries dental. El manejo clínico de la caries dental se ha dirigido principalmente al tratamiento de las consecuencias del proceso de la enfermedad mediante restauraciones y no en su prevención. Con el uso de tecnología emergente, se podrá evaluar el riesgo de la enfermedad de caries en una fase anterior a la de la lesión incipiente de mancha blanca clínicamente visible. Recientemente se ha demostrado que PCR en tiempo real es un método sensible y rápido para la identificación y cuantificación de las especies microbianas individuales. Para este estudio se seleccionaron 27 niños al azar, de 8 años de edad, provenientes del área norte de la RM. Se recolectó 3ml. de saliva no estimulada, en las primeras horas de la mañana sin cepillado previo, solicitando su depósito en un tubo de plástico estéril, el cual se mantuvo a 4ºC hasta su traslado al laboratorio. La placa supragingival se recogió de todas las superficies dentarias lisas de dientes anteriores y posteriores con curetas periodontales estériles. Las muestras de saliva y placa bacteriana previamente rotuladas, se almacenaron a -80°C para su posterior procesamiento. Los partidores utilizados para cuantificar mediante qPCR el gen gtfB de S. mutans fueron Smut 3368-F y Smut 3481-R. Los resultados obtenidos de la amplificación mediante qPCR tuvo un porcentaje de eficiencia del 98% y el delta entre cada ciclo fue de 3,36. En la curva de melting se obtuvo un solo pick de amplificación a una misma temperatura para todas las muestras. La metodología presentada permite la identificación y cuantificación específica para el gen gtfB de S. mutans en muestras de saliva y biopelícula dental, de manera rápida y exacta. Lo que permite establecer el riesgo cariogénico individual de cada paciente y con ello realizar medidas preventivas, evitando así la aparición de lesiones y su posible transmisión.

Streptococcus mutans ha sido implicado como el principal agente etiológico de la caries dental, la cual es considerada una de las enfermedades infecciosas más comunes en los seres humanos. Por esto, muchas investigaciones están destinadas al estudio de sustancias, tanto químicas como de origen natural, que impidan que el agente patógeno prolifere en el medio bucal. Dentro de las sustancias de origen natural tenemos papaína y Sanitrend. Papaína es una enzima proveniente de la papaya, la cual además de facilitar la digestión, presenta propiedades antinflamatorias, antimicrobianas y antifúngicas. Sanitrend es un biocida orgánico natural basado en extractos de semillas de cítricos, presenta acción antimicrobiana y fungicida de amplio espectro. En el estudio de sustancias con propiedades antibacterianas se puede utilizar la técnica de dilución en agar, en la cual se prepara una serie de placas con agar a las que se les agrega el antimicrobiano a diferentes concentraciones, luego se inoculan con una suspensión estandarizada del microorganismo en estudio. Las pruebas se examinan luego de incubar 48 hrs a 35ºC y se determina la concentración inhibitoria mínima (CIM) del antimicrobiano frente al microorganismo.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La utilización de distintos modelos para generar desmineralización incipiente, ya sea en tejidos humanos o animales, es una práctica corriente para investigar los métodos por los que se forma la lesión de caries y también para probar distintos compuestos farmacéuticos que la previenen y limitan. Unos de los métodos más conocidos y efectivos son los modelos que involucran especies bacterianas, ya que son representativos de lo que ocurre en la cavidad bucal. Objetivos: Demostrar que un agente a base de flúor y grafeno tiene acción remineralizante sobre zonas desmineralizadas de discos de hidroxiapatita, generadas por una biopelícula de Streptococcus mutans, a través de la medición de microdureza superficial. Metodología: Se utilizó un modelo desmineralizador de biopelícula monoespecie de dos cepas de S. mutans, ATCC 25175 y ATCC 35668, sobre discos de hidroxiapatita (HA) de manufactura propia. Éstos se expusieron a sacarosa al 10%, 4 veces al día por 5 minutos durante 7 días. Se determinó microdureza superficial de Vickers inicial en cada uno de los discos de HA previo a la exposición de la biopelícula monoespecie de S. mutans, después de exposición a biopelícula, y después de la aplicación del nuevo agente remineralizante. Resultados: Ambas cepas de S. mutans se adhirieron a los discos de HA de manufactura propia. Los valores de microdurezas de Vickers después de la exposición de los discos al modelo de biopelícula monoespecie de S. mutans fueron menores a los valores de microdureza superficial inicial. Los valores de dureza de Vickers después de la aplicación del nuevo agente remineralizador sobre la superficie desmineralizada de los discos de HA fue mayor que los valores de microdureza superficial desmineralizada, pero menor a los valores iniciales de dureza de los discos de HA. Conclusiones: el modelo in vitro de biopelícula monoespecie de S. mutans fue efectivo en la disminución de la microdureza superficial inicial de los discos de HA. El nuevo agente remineralizante aumentó los valores de microdureza superficial de los discos expuestos al modelo monoespecie de S. mutans.

Orientador : Reginaldo Bruno Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-09-11T21:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kamiya_RegianneUmeko_M.pdf: 3554509 bytes, checksum: 78b3d20deebb1352f618aadcca18f637 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os objetivos deste estudo foram: comparar a atividade de produção de mutacinas, a diversidade fenotípica/genotípica de Streptacoccus mutans de voluntários cárie-ativos e livres de cárie, e determinar/comparar o grau de associação e a capacidade discriminatória da Mutacinotipageme a AP-PCR. Um total de 319 cepas de Smutans isoladas a partir da saliva, placa dental e dorso de língua de 8 voluntários cárie-ativos e 8 livres de cárie foram submetidas à Mutacinotipageme à técnica de AP-PCR. O perfil mutacinogênico foi traçado pela Bacteriocinotipagem, utilizando-se 13 cepas indicadoras, entre elas: S. mutans, S. sabrinus, S mitis, S salivarius, S. sanguinis, S. aralis e S cricetus, e o polimorfismo genético foi detectado através da técnica de AP-PCR com os primers OPA-02 e OPA-13. Cerca de 79,62% das cepas de S mutans (254/319) analisadas produziram mutacinas contra pelo menos uma das 13 indicadoras. Através dos métodos de tipagem empregados, detectou-se que não houve relação entre a diversidade fenotípica e/ou genética de Smutans e atividade de cárie. A utacinotipagem permitiu detectar 55 perfis fenotípicos contra 101 perfis genéticos polimórficos detectados pela AP-PCR, e foi limitada para a análise da heterogeneidade da espécie intra-indivíduo. O grau de associação entre as duas técnicas de agrupamento foi em média de 77,38%, sendo o poder discriminatório da AP-PCR (0,975) superior ao da Mutacinotipagem(0,925). Embora a Mutacinotipagemdemonstre limitações para o estudo da diversidade fenotípica, através dela foi possível demonstrar que o potencial mutacinogênico, de S mutans isolados de indivíduos com cárie, possuíram amplos espectros inibitórios contra as diferentes cepas indicadoras, já os isolados de voluntários livres de cárie apresentaram um perfil mais específico contra S. sanguinis, S. aralis e S mitis, que são colonizadores predominantes nesta população. Teoricamente, inibindo seus competidores potenciais, os S mutans teriam uma colonização bem sucedida, seja pela aquisição da hegemonia nutricional ou de receptores de superficie para sua adesão / Abstract: The objectives of this study were: to compare the activity of mutacin production, the fenotypic/genotypic diversity of S. mutans isolated from caries active and caries free individuals, and to evaluate the association index and the power discriminatory of Mutacin Typing and AP-PCR. In the present study, 319 strains of S. mutans isolated from saliva, dental plaque and tongue dorsum of 8 caries active and 8 caries free voluntareers were submitted to Mutacin Typing and AP-PCR. The mutacinogeny profile was traced, using 13 indicator strains between them: S. mutans, S. sobrinus, S. mitis, S. salivarius, S. sanguinis, S. oralis e S. cricetus and the genetic polymorphism was detected with primers OPA-02 and OPA-13. Mutacin was produced by 79,62% out of 319 isolates (245/319) inhibiting one or more of the 13 indicator strains. No corellation was found between the S. mutans fenotypic/genotypic diversity and caries activity, by the typing methods employed. The Mutacin typing allowed to evidence 55 distinct fenotypic patterns whereas AP-PCR detected 101 distinct patterns genotypic. The Mutacin Typing was limited to analyze S. mutans heterogeneity intra individually. The association index mean between Mutacin Typing and AP-PCR was 77,38%, and the discriminatory power of AP-PCR (0,975) was greater than the one Mutacin Typing (0,925). Bacteriocin Typing was limited to study for fenotypic diversity, however it was possible to demonstrate that S. mutans isolated from caries active group showed higher inhibitory activity than S. mutans isolated from caries free group, and the last presented highest antagonic effect against S. sanguinis, S. oralis and S. mitis (the predominant colonizers of this population). Theorically, inhibiting potencial competitors, S. mutans would have succesful colonization, either by nutricional or adhesion receptor aquisitions / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

No / Streptococcus mutans is frequently identified on the basis of phenotypic characteristics such as the ability to ferment carbohydrates. The usefulness of some of these identification tests may be limited in the case of isolates which are atypical with regard to their fermentation properties. We previously identified isolates of S. mutans which were unable to ferment melibiose, a characteristic which is included in some typing schemes. In all of these isolates there was a large chromosomal deletion which included the multiple sugar metabolism (msm) operon which encodes several genes involved in the uptake and metabolism of a number of sugars including melibiose. In the present study, sugar fermentation tests, ribotyping, colony hybridisation with DNA probes and polymerase chain reaction (PCR) were used to investigate the relatedness of these atypical isolates. The PCR and colony hybridisation procedures were based on amplification and detection of two genes: the wapA gene which encodes a surface protein found in all S. mutans strains and the gtfA gene which lies within the msm operon. The colony hybridisation and PCR results confirmed loss of the gtfA gene in the melibiose-negative isolates. Three new melibiose-negative isolates were also identified, but in only 2 of these was the gtfA gene absent, the third did not appear to have lost this region of the chromosome. Biotyping, as well as ribotyping based on an EcoRl digest of chromosomal DNA, revealed that the melibiose-negative isolates fell into a number of distinct groups. The identification of an isolate which is unable to ferment melibiose but does not appear to have lost the msm operon indicates that the melibiose-negative phenotype can arise from more than one type of genetic event.

Face au développement incessant de la résistance aux antibiotiques, la découverte de nouvelles substances antibactériennes devient urgente. Les bactériocines, peptides bactériens à activité antibiotique synthétisés par les ribosomes, représentent une alternative. Les mutacines sont des bactériocines produites par Streptococcus mutans, une espèce bactérienne indigène de la cavité buccale. Quatre types de mutacines ont été caractérisés à ce jour: les lantibiotiques et non-lantibiotiques, monopeptidiques ou dipeptidiques. Des analyses bio-informatiques des génomes de S. mutans UA159 et NN2025 ont révélé la diversité des gènes codant potentiellement pour des bactériocines. L'étude des mutacines s'est toujours confrontée à la difficulté de les produire en milieu liquide. Deux mutacines (F-59.1 et I-T9) ont été produites et isolées d'un surnageant de culture d'un milieu élaboré à partir de perméat de lactosérum. La mutacine D-123.1 a été isolée à partir d'un milieu de culture de nature semi-solide. Les analyses biochimiques et moléculaires des mutacines révèlent que la mutacine F-59.1 est apparentée aux bactériocines de la famille des pédiocines alors que la mutacine D-123.1 appartient aux lantibiotiques. Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) et bactéricides (CMB) des mutacines D-123.1 et F-59.1 ont été déterminées contre plusieurs pathogènes humains. La mutacine D-123.1 a montré son efficacité contre les pathogènes du domaine médical et alimentaire avec des CMI comprises entre 0.25 et 4 ug/mL. La mutacine F-59.1 inhibe les pathogènes alimentaires avec des CMI comprises entre 3.2 et 12.8 ug/mL. De façon à détecter simplement et rapidement des mutacines apparentées aux pédiocines, les 24 souches type productrices de mutacines ont été testées par un test d'antagonisme différé, pour leur capacité à produire une mutacine capable de cibler le complexe IIC des transporteurs membranaires du mannose pour exercer leur activité inihibitrice. Streptococcus salivarius et des mutants défectueux dans leur transporteur du mannose ont été utilisés comme souches indicatrices. Deux souches de S. mutans (T9 et 3B) ont démontré une activité différente contre la souche mère et ces mutants, indiquant potentiellement la production de mutacine ciblant le transporteur du mannose par ces deux souches.

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Le phénomène croissant d'acquisition de résistances aux antibiotiques par les bactéries demeure une des préoccupations majeures de santé publique. Notre laboratoire s'investit dans le développement de nouveaux moyens envisagés pour freiner cette résistance, par l'étude des mutacines. Ces mutacines sont des peptides antimicrobiens de la famille des bactériocines démontrant une activité inhibitrice sur un certain nombre de bactéries pathogènes résistantes aux antibiotiques conventionnels. Les objectifs de ma maîtrise étaient de produire en milieu liquide, purifier et caractériser les mutacines D-123.1, P-136.1 et U-F respectivement produites par trois souches différentes de Streptococcus mutans : 123.1, 136.1 et F. Ainsi, après plusieurs tentatives de production, seule la mutacine D-123.1 issue d'un milieu de perméat de lactosérum enrichi à l'extrait de levure a montré une légère activité. Ce surnageant actif s'est montré sensible à 70°C/ 15min, mais résistant à 50°C/ 15 min. Elle est active à pH 4,5. Les essais de purification par chromatographies hydrophobes et d'échanges d'ions n'ont pas permis la purification de la mutacine D-123.1. / The increasing bacterial antibiotic resistance is of major concern in public health. In our laboratory we search for new natural antimicrobial substances to replace antibiotics to which bacteria are becoming more and more resistant. Mutacins are antimicrobial substances of the bacteriocin family showing inhibitory activity against antibiotic-resistant pathogenic bacteria. The objectives of my research were to produce in liquid medium, to purify and characterize mutacins D-123.1, P-136.1, and U-F. These mutacins are respectively produced by strains of Streptococcus mutans 123.1, 136.1, and F. After several attempts of production, only mutacin D-123.1 was detected in liquid medium made of cheese whey permeate enriched with yeast extract. The activity was thermosensitive (70°C/15 min) but resisted a treatment at 5O°C/15 min. It is active at pH 4.5. Attempts at purification of mutacin D123.1 using hydrophobic and ion exchange chromatographies did not succeed.