Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2018. / A necessidade da utilização de métodos mais sustentáveis que visassem reduzir os potenciais efeitos deletérios sobre a saúde dos organismos vivos e meio ambiente fez com que a busca por rotas alternativas para produção de nanopartículas de prata (AgNPs) se tornasse uma crescente nos últimos anos. Além disso, os estudos envolvendo avaliações de suas atividades biológicas vêm representando uma forte linha de pesquisa em nanotecnologia, em virtude das suas aplicações representarem estratégias úteis na prevenção, no tratamento e no controle de diversas patologias de importância biomédica e agrícola. Assim sendo, o objetivo desta Tese é investigar o potencial de extratos aquosos das folhas de Pterodon emarginatus (sucupira branca) na formação de nanopartículas de prata (NpSB) e nos seus potenciais efeitos citotóxicos, antioxidantes, hemolíticos, antibacterianos e nematotóxicos; além de também verificar o potencial de um metabolito secundário presente nas folhas de P. emarginatus (quercetina) na síntese de AgNPs (NpQ) para fins nematotóxicos e analisar os efeitos desses nanossistemas no desenvolvimento de plantas modelo Arabidopsis thaliana. Para isso, os extratos aquosos das folhas de sucupira branca nas concentrações finais equivalentes de 10, 20 e 40 mg de folhas congeladas/mL foram adicionados às soluções aquosas de nitrato de prata para concentração final de 1 mM para produção de NpSB. As reações foram incubadas à 75ºC por 150 min e monitoradas a cada 30 min por espectroscopia de absorção em 425 nm. Enquanto que para produção de NpQ, as soluções aquosas de quercetina nas concentrações finais de 5, 10 e 20 μM foram adicionadas às soluções aquosas de nitrato de prata na concentração final de 1 mM. As reações foram submetidas à 75ºC por 15 min e monitoradas por espectroscopia de absorção em 425 nm. Assim, foi verificado que os extratos das folhas coletadas nas duas estações (verão e inverno) exibiram ações redutoras dos íons de prata satisfatórias, tendo a concentração de 20 mg/mL melhor capacidade de induzir o processo de formação de AgNPs com considerável estabilidade coloidal. As estações de coleta das folhas de P. emarginatus interferiram na síntese e no rendimento das NpSBs e também nos seus diâmetros hidrodinâmicos e potenciais Zeta. Entretanto, essas partículas apresentaram dimensões secas, perfis de massa molecular e padrões de cristalinidade dos átomos similares. Além disso, foi averiguado que as NpSBs apresentaram atividades citotóxicas expressivas sobre linhagens de melanoma murino (B16F10), atividade antioxidante marcante na remoção de radicais hidroxilas, efeito hemolítico insignificante, efeito antibacteriano frente às cepas Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Escherichia coli, e efeito nematotóxico em Meloidogyne incognita. No que se referem às NpQs foi verificado que as soluções aquosas de quercetina apresentaram potencial para rápida formação de AgNPs, sendo o rendimento mais alto utilizando a concentração de quercetina de 20 μM (NpQ 20). De acordo com DLS, as NpQ 20 apresentaram diâmetros hidrodinâmicos de 29,06 nm (Z-Average), índice de polidispersividade de 0,561 e potencial Zeta de -23,7 mV. Além disso, as NpQ 20 demonstraram ainda atividades nematotóxicas in vitro e em solo contendo A. thaliana infestadas por M. incognita, não comprometendo as etapas do ciclo celular, a germinação de sementes e o desenvolvimento desse modelo vegetal. Em suma, a partir desses resultados é possível inferir que os extratos aquosos das folhas de P. emarginatus e as soluções aquosas de quercetina apresentaram capacidades formadoras de AgNPs satisfatórias, que por sua vez demostraram potenciais biomédicos e agrícolas. Além disso, foi possível revelar que alguns parâmetros das NpSBs são moduláveis por aspectos sazonais da P. emarginatus e apresentando assim novos potencias biológicos para esta espécie de planta da biodiversidade brasileira. / The need to use more sustainable methods to reduce the potential deleterious effects on the health of living organisms and the environment has made the search for alternative routes for the production of silver nanoparticles (AgNPs) a growing trend in recent years. In addition, studies involving evaluations of its biological activities have represented a strong line of research in nanotechnology, since its applications represent useful strategies in prevention, treatment, and control of several pathologies of biomedical and agricultural importance. Therefore, the aim of this thesis is to investigate the potential of aqueous extracts of leaves from Pterodon emarginatus (sucupira branca) in formation of silver nanoparticles (NpSB) and its potential cytotoxic, antioxidant, hemolytic, antibacterial, and nematotoxic effects; as well as to verify the potential of a secondary metabolite present in leaves of P. emarginatus (quercetin) in the synthesis of AgNPs (NpQ) for nematotoxic purposes and to analyze the effects of these nanosystems on development of Arabidopsis thaliana plants. For this, aqueous extracts of sucupira branca leaves at equivalent final concentrations of 10, 20, and 40 mg of frozen leaves/mL were added to aqueous solutions of silver nitrate to a final concentration of 1 mM for NpSB production. Reactions were incubated at 75°C for 150 min and monitored every 30 min by absorption spectroscopy at 425 nm. While for NpQ production, aqueous solutions of quercetin at final concentrations of 5, 10, and 20 μM were added to the aqueous solutions of silver nitrate at the final concentration of 1 mM. The reactions were submitted to 75ºC for 15 min and monitored by absorption spectroscopy at 425 nm. Thus, it was verified that extracts of leaves collected in the two seasons (summer and winter) exhibited satisfactory silver ion reducing actions, and the concentration of 20 mg/mL was better able to induce the formation process of AgNPs with considerable colloidal stability. P. emarginatus leaf collection stations interfered in synthesis and yield of NpSBs and also in their hydrodynamic and potential Zeta diameters. However, these particles had similar dry dimensions, molecular mass profiles, and crystallinity atom patterns. In addition, it was found that the NpSBs showed significant cytotoxic activities on murine melanoma (B16F10) lines, marked antioxidant activity in removal of hydroxyl radicals, insignificant hemolytic effect, antibacterial effect against strains Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Escherichia coli, and effect nematotoxic in Meloidogyne incognita. Regarding NpQs, it was verified that aqueous quercetin solutions showed potential for rapid formation of AgNPs, with the highest yield using quercetin concentration of 20 μM (NpQ 20). According to DLS, NpQ 20 presented hydrodynamic diameters of 29.06 nm (Z-Average), polydispersity index of 0.561 and Zeta potential of -23.7 mV. In addition, NpQ 20 also demonstrated nematotoxic activities in vitro and in soil containing A. thaliana infested by M. incognita, without compromising the stages of cell cycle, seed germination, and development of this plant model. In summary, from these results it is possible to infer that the aqueous extracts of leaves from P. emarginatus and aqueous solutions of quercetin showed satisfactory AgNPs forming capacities, which in turn demonstrated biomedical and agricultural potentials. In addition, it was possible to reveal that some parameters of NpSBs are tunable by seasonal aspects of P. emarginatus and thus presenting new biological capabilities for this species of Brazilian biodiversity plant.

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-08-30T17:15:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) THOBIASPEZZONI.pdf: 1476702 bytes, checksum: 0c526ebf8180da903e810dad2d2f276b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T17:15:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) THOBIASPEZZONI.pdf: 1476702 bytes, checksum: 0c526ebf8180da903e810dad2d2f276b (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The search for alternatives for the main problems faced in the livestock that lead to the fall in the productivity of the forage, has become increasing in recent years, aiming at the balance between production and natural resources conservation. In this direction it was objectified to evaluate the White Sucupira trees’ area of influence in physical and chemical attributes of the ground and the quality of the forage in silvipastoril system. The study was carried through in the Gogó da Ema Farm, 4 km distant from the city of Nioaque - MS. The area studied, leased on a distrophic Red Latosol, is currently occupied with pasture of Brachiaria decumbens shaded by arboreal species where the White Sucupira predominates. Five trees represented by adult and healthy individuals had been chosen, in which transect lines had been traced leased the angles of 60° between one and another. Throughout these transects, to each five meters, had been centered the sampling parcels, until the distance of 30 meters. Over these parcels the sample collections of serrapilheira had been carried through, from the grassy and the ground. The chemical analyses of the fodder plant had consisted of: rude protein (PB), fiber in neutral detergent (FDN) and digestibility in vitro of the dry substance (DIVMS). The physical attributes of the ground had been studied: density, macroporosity, microporosity, total porosity and resistance to the penetration. The chemical attributes of the ground evaluated had been the exchangeable texts of magnesium, calcium, potassium and aluminum. The gotten data had been submitted to analyses of simple regressions and correlation of Pearson. It was concluded that: the organic substance of the sacking intervenes in a positive form on the physical attributes of the ground, promoting improvement in the structural quality of the ground; the shading caused by the White Sucupiras intervenes with the nutritional value of the signalgrass, therefore it makes possible the increase of rude protein and fiber in neutral detergent content, and reduces the digestibility in vitro of the dry substance. / A busca por alternativas para os principais problemas enfrentados na pecuária que levam à queda na produtividade da forrageira, tem se tornado crescente nos últimos anos, visando o equilíbrio entre produção e conservação dos recursos naturais. Nesse sentido objetivou-se avaliar a área de influência de árvores de Sucupira - Branca em atributos físicos e químicos do solo e sobre a qualidade da forrageira em sistema silvipastoril. O estudo foi realizado na Fazenda Gogó da Ema, distante 4 km da cidade de Nioaque – MS. A área estudada, locada sobre um Latossolo Vermelho Distrófico, atualmente é ocupada com pastagem de Brachiaria decumbens sombreada por espécies arbóreas onde predomina a Sucupira - Branca. Foram escolhidas cinco árvores representadas por indivíduos adultos e sadios, no entorno das quais foram traçadas seis linhas transectas locadas a ângulos de 60° entre uma e outra. Ao longo destas transectas, a cada cinco metros, foram centradas as parcelas de amostragem, até a distância de 30 metros. Sobre estas parcelas foram realizadas as coletas de amostras de serrapilheira, da gramínea e do solo. As análises químicas da forragem constituíram-se de: proteína bruta (PB), fibra em detergente neutro (FDN) e digestibilidade in vitro da matéria seca (DIVMS). Os atributos físicos do solo estudados foram: densidade, macroporosidade, microporosidade, porosidade total e resistência à penetração. Os atributos químicos do solo avaliados foram os teores trocáveis de magnésio, cálcio, potássio e alumínio. Os dados obtidos foram submetidos a análises de regressões simples e de correlação de Pearson. Concluiu-se que: a matéria orgânica da serrapilheira interfere de forma positiva quanto aos atributos físicos do solo, promovendo melhoria na qualidade estrutural do solo; o sombreamento ocasionado pelas árvores de Sucupira – Branca interfere no valor nutritivo do capim-braquiária, pois possibilita aumento dos teores de proteína bruta e fibra em detergente neutro, e reduz a digestibilidade in vitro da matéria seca.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-23T12:52:23Z No. of bitstreams: 1 Fenanda Lucia Passos Fukahori.pdf: 1391699 bytes, checksum: f829980f477d48fffc2d9c919805108e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-23T12:52:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fenanda Lucia Passos Fukahori.pdf: 1391699 bytes, checksum: f829980f477d48fffc2d9c919805108e (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / The objective of this study was to standardize a method for the diagnosis of inflammatory foci using infrared thermometry in healthy dogs and dogs that exhibit clinical signs of inflammation in the coxofemoral joint and to investigate the anti-inflammatory effect of Sucupira seed in dogs with inflammatory diseases of the coxofemoral joint. For the standardization of the use of the thermograph, 31 dogs, adults, of different races from the outpatient clinic of the UFRPE. All animals were referred to an air-conditioned room at 25 ° C, relative air humidity above 70%, where after a period of 20min the rectal temperature was recorded using a conventional clinical thermometer and the temperature on the axis of the Articulation in anteroposterior and lateral plugs by a digital thermograph for capturing electromagnetic waves in the infrared spectral band model TG165 from Flir Systems. In this work, in order to minimize the external interferences on the reading of the equipment, a PVC cannula coated with frosted black paint, with a length of 30cm was coupled to the equipment outlet. At the time of recording the temperature readings, the cannula and the equipment were juxtaposed over the desired region, after adequate positioning of the animal in each record. The focus, under these conditions, was equivalent to an area of 1.23cm2. The emissivity of the equipment was adjusted to e = 0.95 in all measurements. From a total of 31 animals evaluated, all previously submitted to a clinical evaluation, there was a significant difference between the normalized joint temperature values found for the groups of animals with inflammation in relation to the animals without articular disease, showing sensitivity of 80, 0%, specificity of 87.5% and method accuracy of 83.87%. In order to obtain the sucupira seed extract, it was prepared in preparations with Biotônico Fontoura in the proportion of 15% (m / v), generating an extract that was applied in the dose and 300 mg / kg (vo) in animals clinically positive for inflammation in the joint Hip. At times of t = 0, t = 10 days and t = 21 days, the body temperature and the temperature on the joint were measured in the lateral dimension (thermography), defining the FT factor as a parameter to measure the thermal transformations on the inflammation. As a result, it was verified that in sucupira-treated animals, significant changes occurred in the FT factor, denoting the positive effect of the extract on the containment of the inflammatory process associated with the inflammation on the joint. Animals treated with meloxican (0.1mg / kg) did not present significant variations of the FT factor, showing little effect on the inflammatory process. The rate of infinitesimal FT variation in animals treated with sucupira extract was 61% more effective than FT obtained for animals treated with meloxican. No significant changes in biochemical parameters, blood count and leukogram were observed in blood samples obtained after 21 days of treatment with sucupira extract. / Este trabalho teve como objetivo de propor a padronização de um método para o diagnóstico de focos inflamatórios, mediante o emprego da termometria por infravermelho, em cães sadios e cães que exibem sinais clínicos de inflamação na articulação coxofemoral e de investigar a o efeito anti-inflamatório da semente de sucupira em cães portadores de doenças de ordem inflamatória da articulação coxofemoral. Para a padronização da utilização do termógrafo foram avaliados 31 cães, adultos, de diferentes raças provenientes do ambulatório do HV da UFRPE. Todos os animais foram encaminhados para uma sala climatizada a 25°C, umidade relativa do ar acima de 70%, onde após um período de 20min era efetuado o registro da temperatura retal, mediante uso de termômetro clínico convencional e da temperatura sobre o eixo da articulação coxofemoral em tomadas anteroposterior e lateral por um termógrafo digital de captura de ondas eletromagnéticas na faixa espectral do infravermelho modelo TG165 da Flir Systems. Neste trabalho, afim de que fossem minimizadas as interferências externas sobre a leitura do equipamento, foi acoplado à saída do equipamento uma cânula de PVC revestida com película tinta preto fosco, com 30cm de comprimento. No momento do registro das leituras de temperatura, a cânula e o equipamento eram justapostos sobre a região desejada, após posicionamento adequado do animal em cada registro. O foco, nestas condições foi equivalente à uma área de 1,23cm2. A emissividade do equipamento foi ajustada para e = 0,95 , em todas aferições. De um total de 31 animais avaliados, todos submetidos previamente à uma avaliação clínica, verificou-se diferença significativa entre os valores normalizados da temperatura da articulação encontrados para os grupos de animais com inflamação em relação aos animais sem doença articular, apresentando sensibilidade de 80,0%, especificidade de 87,5% e precisão do método de 83,87%. Para a obtenção do extrato de semente de sucupira foi confeccionado em preparações com Biotônico Fontoura na proporção de 15% (m/v), gerando um extrato que foi aplicado na dose e 300mg/Kg (v.o.) em animais clinicamente positivo para inflamação na articulação coxofemoral. Nos tempos de t=0, t=10dias e t=21dias, tomadas de temperatura corpórea (termômetro clínico) e temperatura sobre a articulação na dimensão lateral (termografia), definindo-se o fator FT, como parâmetro para dimensionar as transformações térmicas sobre a inflamação. Como resultado verificou-se que em animais tratados com sucupira, ocorreram transformações significativas no fator FT denunciando efeito positivo do extrato na contenção de processo inflamatório associado à inflamação sobre a articulação. Animais tratados com meloxican (0,1mg/Kg), não apresentaram variações significativas do fator FT, apresentando pouco efeito sobre o processo inflamatório. A taxa de variação infinitesimal de FT em animais tratados com extrato de sucupira foi 61% mais eficaz do que FT obtido para animais tratados com meloxican. Não foram observadas alterações significativas nos parâmetros bioquímicos, no hemograma e leucograma em amostras de sangue obtidas após 21 dias de tratamento com extrato de sucupira.