Resumo:A neoplasia mamária canina (NMC) é o tipo de neoplasia que mais comumente afeta cadelas não castradas. A terapia para a NMC é um desafio já que não são descritos tratamentos efetivos para neoplasias de alto grau histológico. Uma possibilidade terapêutica que age diminuindo a angiogênese tumoral é a quimioterapia metronômica (QM). Tem sido proposta a quantificação da angiogênese tumoral através da mensuração do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e da densidade microvascular (DMV). Desta forma, neste estudo, foi avaliada a resposta de carcinomas mamários caninos à QM por mensuração da DMV e detecção do VEGF tecidual, índice apoptótico (IA) e índice de proliferação celular (IP). Foram utilizadas 28 cadelas com carcinomas mamários, distribuídas igualmente em um grupo controle (GC) tratadas com mastectomia e um grupo tratado (GT) com QM (ciclofosfamida 15mg/m2 e piroxicam 0,3mg/kg) ambos por via oral e diariamente durante 28 dias seguido de mastectomia. As neoplasias mamárias foram classificadas e graduadas histologicamente. DMV, grau do VEGF tecidual, IA e IP de todas as neoplasias foram obtidas por imunomarcação. A análise estatística mostrou diferença entre os grupos na DMV e IA (p<0.05), evidenciando redução quantitativa na microvasculatura tumoral e aumento na apoptose de células neoplásicas. Com base neste resultado, é possível afirmar que a QM possui efeitos antiangiogênicos e pró-apoptóticos em carcinomas mamários de cadelas e pode ser utilizada como uma nova opção terapêutica / Abstract:The canine mammary tumor (CMT) is the neoplasia that most commonly affects not spayed bitches. Therapy for CMT is a challenge since there are not described effective treatments for high-grade tumors. A therapeutic option that slows down tumor angiogenesis is metronomic chemotherapy (MC). Quantification of tumor angiogenesis has been proposed by measuring the vascular endothelial growth factor (VEGF) and microvessel density (MVD). Thus, in this study, the response of canine mammary carcinomas by the MC was evaluated by the measurement of MVD and tissue VEGF detection, apoptotic index (AI) and cell proliferation index (PI). Twenty-eight dogs with malignant CMT, equally distributed into a control group (CG) treated with mastectomy and a treated group (TG) treated with MC (cyclophosphamide 15mg/m2 and piroxicam 0.3 mg/kg) both orally and daily for 28 days followed by mastectomy. Mammary tumors were classified and graded histologically. MVD, tissue VEGF, AI and PI of all malignancies were obtained by immunostaining. The analysis showed statistical difference between groups in MVD and AI (p <0.05), showing quantitative reduction in tumor microvasculature and increase in tumor cells apoptosis. Based on this result, we can affirm that MC has antiangiogenic and proapoptotic effects in mammary carcinomas of bitches and can be used as a new therapeutic option / Orientador:Alexandre Lima de Andrade / Banca:Sabryna Gouveia Calazans / Banca:Maria Cecilia Rui Luvizotto / Mestre

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O estudo objetivou identificar a presença de fungos no leite mastítico; avaliar a ação in vitro do óleo essencial de O. vulgare frente a microrganismos isolados de leite; estudar a toxicidade deste óleo e realizar ensaio clínico de preparado fitoterápico a base de óleo essencial de orégano à 3% em vacas com mastite. O levantamento fúngico foi realizado em 1499 amostras de leite de quartos mamários reagentes ao California Mastitis Test (CMT). A extração do orégano foi realizada por hidrodestilação e o óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa. Os testes in vitro seguiram as normas do documento CLSI M7-A6 (2005) e CLSI- M27A3 (2008) adaptadas a fitofármaco. A avaliação da Concentração Bactericida Mínima (CBM) foi realizada frente a 71 bactérias isoladas de leite, dos gêneros Staphylococcus sp., Streptococcus sp. e Corynebacterium sp. e três cepas padrões. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram realizados testes frente a 35 leveduras, sendo um Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii e Kodamaea ohmeri e 32 do gênero Candida spp. Foi realizada análise histológica de úberes de duas vacas tratadas com produto fitoterápico e como controle gentamicina a 1,35% para avaliação da toxicidade e testes de irritação dérmica e de mucosa ocular em coelhos de acordo com OECD 404 e OECD 405, respectivamente. Seis coelhos foram testados com veículo utilizado na formulação fitoterápica e seis com veículo acrescido de 3% de óleo de orégano. Essa formulação fitoterápica foi testada em 15 quartos mamários que apresentaram reação ao CMT. O grupo controle foi tratado com gentamicina a 1,35%, constituído de 14 quartos mamários com avaliação de CMT, Contagem de Células Somáticas (CCS) e cura microbiológica através de isolamento bacteriano. Foram isolados fungos em 116 (7,74%) amostras de leite com total de 121 fungos isolados. Destes, 94 eram leveduras e 27 fungos filamentosos. Dentre as leveduras, a maioria foi do gênero Candida spp. (64). O óleo essencial de orégano apresentou como principais constituintes α-terpineno, 4-terpineol e timol. A CBM média variou de 0,23% a 2% frente a cepas isoladas de leite e de 3,17% e 0,35% frente aos padrões S. aureus e Escherichia coli e não apresentou efeito para Pseudomonas aeruginosas. Todas as amostras de leveduras foram sensíveis ao óleo de orégano nas concentrações testadas, onde a CIM e a CFM variaram de 0,0625% a 1%. As alterações encontradas na histologia dos úberes foram compatíveis com mastite. Nos testes de irritação dérmica e ocular em coelhos, houve reversão das lesões em no máximo 72h. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos de tratamento com relação ao CMT e CCS nos dias 7, 14 e 21 após tratamento. Entretanto, houve diferença estatística para a cura microbiológica em todos os dias analisados (p<0,05), em favor do grupo controle. Pode-se concluir que os fungos estão presentes no leite mastítico, que o óleo essencial de orégano testado apresentou atividade antibacteriana e antifúngica em testes in vitro e não produziu efeito toxicológico persistente, porém não foi eficiente no tratamento da mastite subclínica. / The study aimed to identify the presence of fungi in mastitic milk and to evaluate the in vitro action of essential oil of O. vulgare against microorganisms isolated from milk and to study the toxicity of the oil and perform clinical trial of prepared herbal of essential oil of oregano to 3% in cows with mastitis. The survey was conducted in 1499 samples from milk reacting to the California Mastitis Test (CMT). The extraction of oregano was performed by hydrodistillation and the essential oil was analyzed by gas chromatography. In vitro tests followed the CLSI document M7-A6 (2005) and CLSI-M27A3 (2008) adapted for fitoterapic. The evaluation of the minimum bactericidal concentration (MBC) was carried out against 71 bacteria isolated from milk of the genera Staphylococcus sp., Streptococcus sp. and Corynebacterium sp. and three strains standards. To determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) tests were performed against 35 yeasts, and one Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii and Kodamaea ohmeri and 32 of Candida spp. We performed histological analysis of two udders of cows treated with herbal medicine and control to gentamicin 1,35%, toxicity evaluation and tests of dermal irritation and ocular mucosa in rabbits according to OECD 404 and OECD 405, respectively. Six rabbits were tested with vehicle used in herbal formulation and six with vehicle plus 3% oil of oregano. This herbal formulation was tested in 15 mammary quarters that had reactions to CMT. The control group was treated with gentamicin at 1.35%, consisting of 14 quarters with breast assessment of CMT, Somatic Cell Count (SCC) and microbiological cure by bacterial isolation. Fungi were isolated in 116 (7.74%) milk samples with total of 121 fungal isolates. Of these, 94 were yeasts and 27 filamentous fungi. Among the yeasts, the majority was of the genus Candida spp.(64). The essential oil of oregano presented as main constituent α-terpinene, 4-terpineol and thymol. CBM average ranged from 0.23% to 2% to strains isolated from milk and 3.17% and 0.35% to the standards S. aureus and Escherichia coli and showed no effect for Pseudomonas aeruginosa. All yeast strains were sensitive to oil of oregano in concentrations, where the MIC and MFC ranged from 0.0625% to 1%. The changes found in the histology were compatible udders with mastitis. In tests of skin and eye irritation in rabbits, there was reversal of the lesions in up to 72 hours. There was no significant difference (p> 0.05) between treatment groups with respect to the CMT and SCC on days 7, 14 and 21 after treatment. However, there was statistical difference for the microbiological cure in all days analyzed (p <0.05) better for the control group. It can be concluded that the fungi are present in mastitic milk, the essential oil of oregano tested showed antibacterial and antifungal activity in vitro tests and produced no persistent toxic effects, but was not effective in the treatment of subclinical mastitis.

Nos últimos anos, o número de pacientes com infecções fúngicas sistêmicas e que necessitam de terapia com antifúngicos tem aumentado. Consequentemente, tornam-se frequentes os relatos de resistência aos tratamentos tradicionais. Desta maneira, novas alternativas terapêuticas surgem, incluindo a associação de β(1-3) glucana à terapia com itraconazol. Contudo, não são conhecidos os efeitos desta associação sobre o sistema reprodutivo e a fertilidade. O objetivo deste estudo foi identificar os efeitos da associação de itraconazol e β(1-3) glucana, extraída do Saccharomyces cerevisiae, sobre a fertilidade de ratos, machos e fêmeas, e as possíveis interferências no desenvolvimento da progênie, incluindo potencial teratogênico. Foram estudados 240 ratos Wistar, separados em seis diferentes grupos (10 machos e 30 fêmeas por grupo): IT- tratados com 10 mg.kg-1 de itraconazol por via oro-gástrica (VO) diariamente; Beta – tratados com 0,5mg de beta-glucana por via subcutânea (SC) semanalmente; DT, DT5x e DT10x – tratados com associação de beta-glucana (0,5 mg, SC) e três diferentes doses de itraconazol, sendo 10, 50 e 100 mg.kg-1 (VO), respectivamente; e Controle – tratados com água destilada (VO) e solução de NaCl 0,9% (SC). Os machos foram tratados durante 70 dias pré-acasalamento e 21 dias de acasalamento; e as fêmeas durante o período de pré-acasalamento (14 dias), acasalamento (até 21 dias), gestação (21 dias) e lactação (21 dias). Foram avaliados: índices reprodutivos, incluindo parâmetros espermáticos, concentração sérica de testosterona e comportamento maternal; alterações esqueléticas fetais; e indicadores de desenvolvimento físico e neurolocomotor na progênie, incluindo comportamento em campo aberto e comportamento sexual. Com base nos resultados, conclui-se que as doses terapêuticas da ß-glucana e do itraconazol, isoladas ou em associação, não interferem nas variáveis reprodutivas estudadas em machos ou fêmeas, exceto taxa de perdas pós-implantação. As doses elevadas de itraconazol na associação com β-glucana demonstram alterar significativamente as variáveis reprodutivas de machos e fêmeas. Os resultados sugerem que os efeitos sobre a fertilidade do macho sejam funcionais. Salienta-se o potencial teratogênico e embriotóxico das doses mais elevadas de itraconazol associadas à β-glucana, como também atraso, apesar de discreto, em alguns parâmetros do desenvolvimento físico dos filhotes. Recomenda-se cautela na utilização de altas doses de itraconazol associado ou não a ß-glucana, principalmente em terapias prolongadas. / In recent years, the number of patients with systemic fungal infections requiring antifungal therapy has increased. As a consequence, antimicrobial resistance to conventional treatment is frequently reported. Because of that, new therapies emerge, including the combination of beta (1-3) glucan and itraconazole. However, the reproductive and fertility effects of this association were not known. So, the aim of this study was to identify the effects of the combination of itraconazole and beta (1-3) glucan, extracted from Saccharomyces cerevisiae, on male and female rats fertility, and the possible interference in the progeny development including teratogenic potential. Two hundred forty Wistar rats were separated into six groups (10 male and 30 female per group) IT- treated daily with 10 mg.kg -1 itraconazole via orogastric; Beta - treated weekly with 0.5mg of β - glucan subcutaneously; DT, DT5x and DT10x - treated with a combination of β-glucan ( 0.5 mg ) and three different doses of itraconazole, 10 , 50 and 100 mg.kg - 1, respectively; and Control -treated with distilled water orally and sterile NaCl 0.9 % subcutaneously. The male rats were treated before (70 days) and during the mating period (21 days); and the female rats were treated before (14 days) and during the mating period (up to 21 days), pregnancy (21 days) and lactation (21 days). The reproductive index, sperm parameters, serum testosterone concentration, maternal behavior, fetal skeletal changes, and indicators of physical and neuromotor development in the offspring, including open field behavior and sexual behavior, were evaluated. Based on the results, it is concluded that therapeutic doses of β -glucan and itraconazole, alone or in combination, do not interfere in the reproductive variables studied in males or females rats, excepted by the post-implantation losses rate. High doses of itraconazole in combination with β -glucan significantly alter the reproductive variables of males and females. The results suggest that the effects on male fertility are functional. It is emphasized the teratogenic and embryotoxic potential of higher doses of itraconazole associated with β-glucan, as well as a delay, although slight, in some parameters of the physical development of the offspring. Caution in the use of high doses of itraconazole associated or not with ß-glucan is recommended, especially in prolonged therapy.

O estudo objetivou identificar a presença de fungos no leite mastítico; avaliar a ação in vitro do óleo essencial de O. vulgare frente a microrganismos isolados de leite; estudar a toxicidade deste óleo e realizar ensaio clínico de preparado fitoterápico a base de óleo essencial de orégano à 3% em vacas com mastite. O levantamento fúngico foi realizado em 1499 amostras de leite de quartos mamários reagentes ao California Mastitis Test (CMT). A extração do orégano foi realizada por hidrodestilação e o óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa. Os testes in vitro seguiram as normas do documento CLSI M7-A6 (2005) e CLSI- M27A3 (2008) adaptadas a fitofármaco. A avaliação da Concentração Bactericida Mínima (CBM) foi realizada frente a 71 bactérias isoladas de leite, dos gêneros Staphylococcus sp., Streptococcus sp. e Corynebacterium sp. e três cepas padrões. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram realizados testes frente a 35 leveduras, sendo um Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii e Kodamaea ohmeri e 32 do gênero Candida spp. Foi realizada análise histológica de úberes de duas vacas tratadas com produto fitoterápico e como controle gentamicina a 1,35% para avaliação da toxicidade e testes de irritação dérmica e de mucosa ocular em coelhos de acordo com OECD 404 e OECD 405, respectivamente. Seis coelhos foram testados com veículo utilizado na formulação fitoterápica e seis com veículo acrescido de 3% de óleo de orégano. Essa formulação fitoterápica foi testada em 15 quartos mamários que apresentaram reação ao CMT. O grupo controle foi tratado com gentamicina a 1,35%, constituído de 14 quartos mamários com avaliação de CMT, Contagem de Células Somáticas (CCS) e cura microbiológica através de isolamento bacteriano. Foram isolados fungos em 116 (7,74%) amostras de leite com total de 121 fungos isolados. Destes, 94 eram leveduras e 27 fungos filamentosos. Dentre as leveduras, a maioria foi do gênero Candida spp. (64). O óleo essencial de orégano apresentou como principais constituintes α-terpineno, 4-terpineol e timol. A CBM média variou de 0,23% a 2% frente a cepas isoladas de leite e de 3,17% e 0,35% frente aos padrões S. aureus e Escherichia coli e não apresentou efeito para Pseudomonas aeruginosas. Todas as amostras de leveduras foram sensíveis ao óleo de orégano nas concentrações testadas, onde a CIM e a CFM variaram de 0,0625% a 1%. As alterações encontradas na histologia dos úberes foram compatíveis com mastite. Nos testes de irritação dérmica e ocular em coelhos, houve reversão das lesões em no máximo 72h. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos de tratamento com relação ao CMT e CCS nos dias 7, 14 e 21 após tratamento. Entretanto, houve diferença estatística para a cura microbiológica em todos os dias analisados (p<0,05), em favor do grupo controle. Pode-se concluir que os fungos estão presentes no leite mastítico, que o óleo essencial de orégano testado apresentou atividade antibacteriana e antifúngica em testes in vitro e não produziu efeito toxicológico persistente, porém não foi eficiente no tratamento da mastite subclínica. / The study aimed to identify the presence of fungi in mastitic milk and to evaluate the in vitro action of essential oil of O. vulgare against microorganisms isolated from milk and to study the toxicity of the oil and perform clinical trial of prepared herbal of essential oil of oregano to 3% in cows with mastitis. The survey was conducted in 1499 samples from milk reacting to the California Mastitis Test (CMT). The extraction of oregano was performed by hydrodistillation and the essential oil was analyzed by gas chromatography. In vitro tests followed the CLSI document M7-A6 (2005) and CLSI-M27A3 (2008) adapted for fitoterapic. The evaluation of the minimum bactericidal concentration (MBC) was carried out against 71 bacteria isolated from milk of the genera Staphylococcus sp., Streptococcus sp. and Corynebacterium sp. and three strains standards. To determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) tests were performed against 35 yeasts, and one Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii and Kodamaea ohmeri and 32 of Candida spp. We performed histological analysis of two udders of cows treated with herbal medicine and control to gentamicin 1,35%, toxicity evaluation and tests of dermal irritation and ocular mucosa in rabbits according to OECD 404 and OECD 405, respectively. Six rabbits were tested with vehicle used in herbal formulation and six with vehicle plus 3% oil of oregano. This herbal formulation was tested in 15 mammary quarters that had reactions to CMT. The control group was treated with gentamicin at 1.35%, consisting of 14 quarters with breast assessment of CMT, Somatic Cell Count (SCC) and microbiological cure by bacterial isolation. Fungi were isolated in 116 (7.74%) milk samples with total of 121 fungal isolates. Of these, 94 were yeasts and 27 filamentous fungi. Among the yeasts, the majority was of the genus Candida spp.(64). The essential oil of oregano presented as main constituent α-terpinene, 4-terpineol and thymol. CBM average ranged from 0.23% to 2% to strains isolated from milk and 3.17% and 0.35% to the standards S. aureus and Escherichia coli and showed no effect for Pseudomonas aeruginosa. All yeast strains were sensitive to oil of oregano in concentrations, where the MIC and MFC ranged from 0.0625% to 1%. The changes found in the histology were compatible udders with mastitis. In tests of skin and eye irritation in rabbits, there was reversal of the lesions in up to 72 hours. There was no significant difference (p> 0.05) between treatment groups with respect to the CMT and SCC on days 7, 14 and 21 after treatment. However, there was statistical difference for the microbiological cure in all days analyzed (p <0.05) better for the control group. It can be concluded that the fungi are present in mastitic milk, the essential oil of oregano tested showed antibacterial and antifungal activity in vitro tests and produced no persistent toxic effects, but was not effective in the treatment of subclinical mastitis.

Nos últimos anos, o número de pacientes com infecções fúngicas sistêmicas e que necessitam de terapia com antifúngicos tem aumentado. Consequentemente, tornam-se frequentes os relatos de resistência aos tratamentos tradicionais. Desta maneira, novas alternativas terapêuticas surgem, incluindo a associação de β(1-3) glucana à terapia com itraconazol. Contudo, não são conhecidos os efeitos desta associação sobre o sistema reprodutivo e a fertilidade. O objetivo deste estudo foi identificar os efeitos da associação de itraconazol e β(1-3) glucana, extraída do Saccharomyces cerevisiae, sobre a fertilidade de ratos, machos e fêmeas, e as possíveis interferências no desenvolvimento da progênie, incluindo potencial teratogênico. Foram estudados 240 ratos Wistar, separados em seis diferentes grupos (10 machos e 30 fêmeas por grupo): IT- tratados com 10 mg.kg-1 de itraconazol por via oro-gástrica (VO) diariamente; Beta – tratados com 0,5mg de beta-glucana por via subcutânea (SC) semanalmente; DT, DT5x e DT10x – tratados com associação de beta-glucana (0,5 mg, SC) e três diferentes doses de itraconazol, sendo 10, 50 e 100 mg.kg-1 (VO), respectivamente; e Controle – tratados com água destilada (VO) e solução de NaCl 0,9% (SC). Os machos foram tratados durante 70 dias pré-acasalamento e 21 dias de acasalamento; e as fêmeas durante o período de pré-acasalamento (14 dias), acasalamento (até 21 dias), gestação (21 dias) e lactação (21 dias). Foram avaliados: índices reprodutivos, incluindo parâmetros espermáticos, concentração sérica de testosterona e comportamento maternal; alterações esqueléticas fetais; e indicadores de desenvolvimento físico e neurolocomotor na progênie, incluindo comportamento em campo aberto e comportamento sexual. Com base nos resultados, conclui-se que as doses terapêuticas da ß-glucana e do itraconazol, isoladas ou em associação, não interferem nas variáveis reprodutivas estudadas em machos ou fêmeas, exceto taxa de perdas pós-implantação. As doses elevadas de itraconazol na associação com β-glucana demonstram alterar significativamente as variáveis reprodutivas de machos e fêmeas. Os resultados sugerem que os efeitos sobre a fertilidade do macho sejam funcionais. Salienta-se o potencial teratogênico e embriotóxico das doses mais elevadas de itraconazol associadas à β-glucana, como também atraso, apesar de discreto, em alguns parâmetros do desenvolvimento físico dos filhotes. Recomenda-se cautela na utilização de altas doses de itraconazol associado ou não a ß-glucana, principalmente em terapias prolongadas. / In recent years, the number of patients with systemic fungal infections requiring antifungal therapy has increased. As a consequence, antimicrobial resistance to conventional treatment is frequently reported. Because of that, new therapies emerge, including the combination of beta (1-3) glucan and itraconazole. However, the reproductive and fertility effects of this association were not known. So, the aim of this study was to identify the effects of the combination of itraconazole and beta (1-3) glucan, extracted from Saccharomyces cerevisiae, on male and female rats fertility, and the possible interference in the progeny development including teratogenic potential. Two hundred forty Wistar rats were separated into six groups (10 male and 30 female per group) IT- treated daily with 10 mg.kg -1 itraconazole via orogastric; Beta - treated weekly with 0.5mg of β - glucan subcutaneously; DT, DT5x and DT10x - treated with a combination of β-glucan ( 0.5 mg ) and three different doses of itraconazole, 10 , 50 and 100 mg.kg - 1, respectively; and Control -treated with distilled water orally and sterile NaCl 0.9 % subcutaneously. The male rats were treated before (70 days) and during the mating period (21 days); and the female rats were treated before (14 days) and during the mating period (up to 21 days), pregnancy (21 days) and lactation (21 days). The reproductive index, sperm parameters, serum testosterone concentration, maternal behavior, fetal skeletal changes, and indicators of physical and neuromotor development in the offspring, including open field behavior and sexual behavior, were evaluated. Based on the results, it is concluded that therapeutic doses of β -glucan and itraconazole, alone or in combination, do not interfere in the reproductive variables studied in males or females rats, excepted by the post-implantation losses rate. High doses of itraconazole in combination with β -glucan significantly alter the reproductive variables of males and females. The results suggest that the effects on male fertility are functional. It is emphasized the teratogenic and embryotoxic potential of higher doses of itraconazole associated with β-glucan, as well as a delay, although slight, in some parameters of the physical development of the offspring. Caution in the use of high doses of itraconazole associated or not with ß-glucan is recommended, especially in prolonged therapy.

O estudo objetivou identificar a presença de fungos no leite mastítico; avaliar a ação in vitro do óleo essencial de O. vulgare frente a microrganismos isolados de leite; estudar a toxicidade deste óleo e realizar ensaio clínico de preparado fitoterápico a base de óleo essencial de orégano à 3% em vacas com mastite. O levantamento fúngico foi realizado em 1499 amostras de leite de quartos mamários reagentes ao California Mastitis Test (CMT). A extração do orégano foi realizada por hidrodestilação e o óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa. Os testes in vitro seguiram as normas do documento CLSI M7-A6 (2005) e CLSI- M27A3 (2008) adaptadas a fitofármaco. A avaliação da Concentração Bactericida Mínima (CBM) foi realizada frente a 71 bactérias isoladas de leite, dos gêneros Staphylococcus sp., Streptococcus sp. e Corynebacterium sp. e três cepas padrões. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram realizados testes frente a 35 leveduras, sendo um Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii e Kodamaea ohmeri e 32 do gênero Candida spp. Foi realizada análise histológica de úberes de duas vacas tratadas com produto fitoterápico e como controle gentamicina a 1,35% para avaliação da toxicidade e testes de irritação dérmica e de mucosa ocular em coelhos de acordo com OECD 404 e OECD 405, respectivamente. Seis coelhos foram testados com veículo utilizado na formulação fitoterápica e seis com veículo acrescido de 3% de óleo de orégano. Essa formulação fitoterápica foi testada em 15 quartos mamários que apresentaram reação ao CMT. O grupo controle foi tratado com gentamicina a 1,35%, constituído de 14 quartos mamários com avaliação de CMT, Contagem de Células Somáticas (CCS) e cura microbiológica através de isolamento bacteriano. Foram isolados fungos em 116 (7,74%) amostras de leite com total de 121 fungos isolados. Destes, 94 eram leveduras e 27 fungos filamentosos. Dentre as leveduras, a maioria foi do gênero Candida spp. (64). O óleo essencial de orégano apresentou como principais constituintes α-terpineno, 4-terpineol e timol. A CBM média variou de 0,23% a 2% frente a cepas isoladas de leite e de 3,17% e 0,35% frente aos padrões S. aureus e Escherichia coli e não apresentou efeito para Pseudomonas aeruginosas. Todas as amostras de leveduras foram sensíveis ao óleo de orégano nas concentrações testadas, onde a CIM e a CFM variaram de 0,0625% a 1%. As alterações encontradas na histologia dos úberes foram compatíveis com mastite. Nos testes de irritação dérmica e ocular em coelhos, houve reversão das lesões em no máximo 72h. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos de tratamento com relação ao CMT e CCS nos dias 7, 14 e 21 após tratamento. Entretanto, houve diferença estatística para a cura microbiológica em todos os dias analisados (p<0,05), em favor do grupo controle. Pode-se concluir que os fungos estão presentes no leite mastítico, que o óleo essencial de orégano testado apresentou atividade antibacteriana e antifúngica em testes in vitro e não produziu efeito toxicológico persistente, porém não foi eficiente no tratamento da mastite subclínica. / The study aimed to identify the presence of fungi in mastitic milk and to evaluate the in vitro action of essential oil of O. vulgare against microorganisms isolated from milk and to study the toxicity of the oil and perform clinical trial of prepared herbal of essential oil of oregano to 3% in cows with mastitis. The survey was conducted in 1499 samples from milk reacting to the California Mastitis Test (CMT). The extraction of oregano was performed by hydrodistillation and the essential oil was analyzed by gas chromatography. In vitro tests followed the CLSI document M7-A6 (2005) and CLSI-M27A3 (2008) adapted for fitoterapic. The evaluation of the minimum bactericidal concentration (MBC) was carried out against 71 bacteria isolated from milk of the genera Staphylococcus sp., Streptococcus sp. and Corynebacterium sp. and three strains standards. To determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) tests were performed against 35 yeasts, and one Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii and Kodamaea ohmeri and 32 of Candida spp. We performed histological analysis of two udders of cows treated with herbal medicine and control to gentamicin 1,35%, toxicity evaluation and tests of dermal irritation and ocular mucosa in rabbits according to OECD 404 and OECD 405, respectively. Six rabbits were tested with vehicle used in herbal formulation and six with vehicle plus 3% oil of oregano. This herbal formulation was tested in 15 mammary quarters that had reactions to CMT. The control group was treated with gentamicin at 1.35%, consisting of 14 quarters with breast assessment of CMT, Somatic Cell Count (SCC) and microbiological cure by bacterial isolation. Fungi were isolated in 116 (7.74%) milk samples with total of 121 fungal isolates. Of these, 94 were yeasts and 27 filamentous fungi. Among the yeasts, the majority was of the genus Candida spp.(64). The essential oil of oregano presented as main constituent α-terpinene, 4-terpineol and thymol. CBM average ranged from 0.23% to 2% to strains isolated from milk and 3.17% and 0.35% to the standards S. aureus and Escherichia coli and showed no effect for Pseudomonas aeruginosa. All yeast strains were sensitive to oil of oregano in concentrations, where the MIC and MFC ranged from 0.0625% to 1%. The changes found in the histology were compatible udders with mastitis. In tests of skin and eye irritation in rabbits, there was reversal of the lesions in up to 72 hours. There was no significant difference (p> 0.05) between treatment groups with respect to the CMT and SCC on days 7, 14 and 21 after treatment. However, there was statistical difference for the microbiological cure in all days analyzed (p <0.05) better for the control group. It can be concluded that the fungi are present in mastitic milk, the essential oil of oregano tested showed antibacterial and antifungal activity in vitro tests and produced no persistent toxic effects, but was not effective in the treatment of subclinical mastitis.

Nos últimos anos, o número de pacientes com infecções fúngicas sistêmicas e que necessitam de terapia com antifúngicos tem aumentado. Consequentemente, tornam-se frequentes os relatos de resistência aos tratamentos tradicionais. Desta maneira, novas alternativas terapêuticas surgem, incluindo a associação de β(1-3) glucana à terapia com itraconazol. Contudo, não são conhecidos os efeitos desta associação sobre o sistema reprodutivo e a fertilidade. O objetivo deste estudo foi identificar os efeitos da associação de itraconazol e β(1-3) glucana, extraída do Saccharomyces cerevisiae, sobre a fertilidade de ratos, machos e fêmeas, e as possíveis interferências no desenvolvimento da progênie, incluindo potencial teratogênico. Foram estudados 240 ratos Wistar, separados em seis diferentes grupos (10 machos e 30 fêmeas por grupo): IT- tratados com 10 mg.kg-1 de itraconazol por via oro-gástrica (VO) diariamente; Beta – tratados com 0,5mg de beta-glucana por via subcutânea (SC) semanalmente; DT, DT5x e DT10x – tratados com associação de beta-glucana (0,5 mg, SC) e três diferentes doses de itraconazol, sendo 10, 50 e 100 mg.kg-1 (VO), respectivamente; e Controle – tratados com água destilada (VO) e solução de NaCl 0,9% (SC). Os machos foram tratados durante 70 dias pré-acasalamento e 21 dias de acasalamento; e as fêmeas durante o período de pré-acasalamento (14 dias), acasalamento (até 21 dias), gestação (21 dias) e lactação (21 dias). Foram avaliados: índices reprodutivos, incluindo parâmetros espermáticos, concentração sérica de testosterona e comportamento maternal; alterações esqueléticas fetais; e indicadores de desenvolvimento físico e neurolocomotor na progênie, incluindo comportamento em campo aberto e comportamento sexual. Com base nos resultados, conclui-se que as doses terapêuticas da ß-glucana e do itraconazol, isoladas ou em associação, não interferem nas variáveis reprodutivas estudadas em machos ou fêmeas, exceto taxa de perdas pós-implantação. As doses elevadas de itraconazol na associação com β-glucana demonstram alterar significativamente as variáveis reprodutivas de machos e fêmeas. Os resultados sugerem que os efeitos sobre a fertilidade do macho sejam funcionais. Salienta-se o potencial teratogênico e embriotóxico das doses mais elevadas de itraconazol associadas à β-glucana, como também atraso, apesar de discreto, em alguns parâmetros do desenvolvimento físico dos filhotes. Recomenda-se cautela na utilização de altas doses de itraconazol associado ou não a ß-glucana, principalmente em terapias prolongadas. / In recent years, the number of patients with systemic fungal infections requiring antifungal therapy has increased. As a consequence, antimicrobial resistance to conventional treatment is frequently reported. Because of that, new therapies emerge, including the combination of beta (1-3) glucan and itraconazole. However, the reproductive and fertility effects of this association were not known. So, the aim of this study was to identify the effects of the combination of itraconazole and beta (1-3) glucan, extracted from Saccharomyces cerevisiae, on male and female rats fertility, and the possible interference in the progeny development including teratogenic potential. Two hundred forty Wistar rats were separated into six groups (10 male and 30 female per group) IT- treated daily with 10 mg.kg -1 itraconazole via orogastric; Beta - treated weekly with 0.5mg of β - glucan subcutaneously; DT, DT5x and DT10x - treated with a combination of β-glucan ( 0.5 mg ) and three different doses of itraconazole, 10 , 50 and 100 mg.kg - 1, respectively; and Control -treated with distilled water orally and sterile NaCl 0.9 % subcutaneously. The male rats were treated before (70 days) and during the mating period (21 days); and the female rats were treated before (14 days) and during the mating period (up to 21 days), pregnancy (21 days) and lactation (21 days). The reproductive index, sperm parameters, serum testosterone concentration, maternal behavior, fetal skeletal changes, and indicators of physical and neuromotor development in the offspring, including open field behavior and sexual behavior, were evaluated. Based on the results, it is concluded that therapeutic doses of β -glucan and itraconazole, alone or in combination, do not interfere in the reproductive variables studied in males or females rats, excepted by the post-implantation losses rate. High doses of itraconazole in combination with β -glucan significantly alter the reproductive variables of males and females. The results suggest that the effects on male fertility are functional. It is emphasized the teratogenic and embryotoxic potential of higher doses of itraconazole associated with β-glucan, as well as a delay, although slight, in some parameters of the physical development of the offspring. Caution in the use of high doses of itraconazole associated or not with ß-glucan is recommended, especially in prolonged therapy.