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Síntese, purificação, caracterização e análise da atividade antinociceptiva de peptídeos opióides

Nóbrega, Mariana Magalhães 04 February 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, 2013. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-04-18T13:55:46Z No. of bitstreams: 1 2013_MarianaMagalhãesNóbrega_Parcial.pdf: 4669193 bytes, checksum: 470b6e88d4408bfc14b01984e61c33ac (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-04-24T13:51:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarianaMagalhãesNóbrega_Parcial.pdf: 4669193 bytes, checksum: 470b6e88d4408bfc14b01984e61c33ac (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-24T13:51:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarianaMagalhãesNóbrega_Parcial.pdf: 4669193 bytes, checksum: 470b6e88d4408bfc14b01984e61c33ac (MD5) / A prospecção de peptídeos com atividade biológica é importante do ponto de vista biotecnológico assim como ponto de partida em diversos ramos da pesquisa como no desenvolvimento de novas drogas e na produção de plantas geneticamente modificadas. Este trabalho tem como objetivo a predição e a síntese de peptídeos que tenha atividade antinociceptiva e hipotensora. A predição da estrutura primária dos peptídeos foi realizada com base em trabalhos anteriores do grupo, os quais focam na prospecção e caracterização de peptídeos bioativos, assim como no conhecimento disponível na literatura acerca das propriedades biológicas apresentadas por domínios protéicos específicos. Os peptídeos foram sintetizados por meio de síntese química em fase sólida, utilizando a estratégia Fmoc, seguida da purificação em cromatografia líquida de alta eficiência. O grau de pureza e a confirmação da estrutura primária dos peptídeos sintetizados foram determinados por espectrometria de massa, Maldi e ESI. Os peptídeos foram testados em camundongos , por via intraperitoneal com intuito de avaliar sua possível atividade antinociceptiva, realizaram-se então os testes da placa quente ou Hot Plate e teste de retirada da cauda ou Tail Flick. Os testes in vivo demonstraram que os peptídeos sintéticos PSLEM 11011 e 11012 apresentaram atividade antinociceptiva via receptores opióides com perfil de atividade mais tardio e duradouro em relação a morfina. Eles apresentaram atividade nos dois modelos de testes propostos, podem ter atravessado a barreira hematoencefálica e possuem ação prolongada. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / To prospect of peptides with biological activity is important from the point of view of biotechnology as a starting point in many fields of research as the development of new drugs and the production of genetically modified plants. This study aims to predict and synthesize peptides that have antinociceptive and hypotensive activities. The prediction of the primary structure of the peptides was based on previous work of the group, which focuses on the prospection and characterization of bioactive peptidesas well as in the knowledge available in the literature about the biological properties of specific protein domains. The peptides were synthesized by solid-phase chemical synthesis using Fmoc strategy followed by purification on high performance liquid chromatography. The purity and confirmation of the primary structure of the synthesized peptides were determined by mass spectrometry, MALDI and ESI.The peptides were injected in mice intraperitoneally in order to assess its possible antinociceptive activity through Hot Plate and Tail Flick assays.The in vivo tests showed that synthetic peptides PSLEM 11011 and 11012 have antinociceptive activity via opioid receptors with delayed response and longer activity compared to morphine. The peptides showed activity in both test models proposed in this work, may have crossed the blood-brain barrier and presenting high bioavailability.
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Ensaios in vivo e avaliação clínica de bomba de sangue para circulação extracorpórea durante cirurgia cardíaca : spiral pump / In vivo tests and clinical evaluation of centrifugal blood pump for cardiopulmonary bypass during cardiac surgery : spiral pump

Silva, Cibele da 22 August 2018 (has links)
Orientadores: Cecília Amélia de Carvalho Zavaglia, Aron José Pazin de Andrade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2018-08-22T16:21:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_Cibeleda_M.pdf: 8042828 bytes, checksum: f69ba730298b110aecb701c7d8d19cf6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Neste trabalho foram elaborados os métodos e realizados estudos In Vivo e Avaliação Clínica de uma Bomba de Sangue para Circulação Extracorpórea (CEC), durante Cirurgia Cardíaca, denominada Spiral Pump® (SP). Esses estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o desempenho e segurança da bomba, finalizando assim o projeto e avaliando a SP como um produto em sua aplicação rotineira durante as cirurgias cardíacas. A SP utiliza, simultaneamente, dois princípios de bombeamento, o centrífugo e o axial, proporcionados por sua geometria cônica, visando aumentar a eficiência de bombeamento sem o aumento dos índices de destruição dos elementos figurados do sangue. O primeiro passo para avaliação In Vivo foi à elaboração de um protocolo para avaliação In Vivo animal e sua submissão a Comissão de Ética para Uso de Animais (CEUA) do Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia (IDPC). As avaliações In Vivo consistiram em instalação normal da CEC, em animais suínos, utilizando a SP conectada a um módulo de acionamento e, para fins de comparação, foi realizado o mesmo procedimento com a Bio-Pump®. Foram realizados seis experimentos com a SP, sendo o primeiro considerado piloto, e três experimentos com a Bio-Pump®, com duração de seis horas cada. As observações realizadas pela equipe médica e pela perfusionista demonstraram grande semelhança de funcionamento entre as duas bombas, inclusive em relação a vibrações, ruídos e facilidade de utilização. As bombas foram comparadas em relação à medição do trauma, analisado a partir da evolução da hemoglobina livre no plasma (PFH). Analisando os resultados laboratoriais e de hemólise obtidos com a SP e a Bio-Pump®, pode-se verificar que não existem diferenças significativas entre elas. Com resultados satisfatórios nos ensaios In Vivo, a SP foi aprovada para Avaliação Clínica, realizada de acordo com a legislação vigente. Foi elaborado um Protocolo de Pesquisa Clínica que seguiu a Resolução ANVISA número 39 de 05 de junho de 2008, que estabelece requisitos para realização de pesquisa clínica no Brasil. Esse protocolo foi submetido ao Comitê de Ética em Pesquisa (CEP) do IDPC e ao Conselho Nacional de Ética em Pesquisa (CONEP). A pesquisa clínica foi realizada no Centro Cirúrgico do IDPC em um grupo de quarenta pacientes com indicação de cirurgia cardíaca com CEC, com ou sem cardioplegia, ambos os sexos, adultos, peso corporal mínimo de 50 kg. Durante a CEC, a SP substituiu as convencionais bombas de roletes no circuito de CEC. Todos os pacientes foram entrevistados e autorizaram a realização do estudo, assinando do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Foram coletados dados comumente monitorados durante uma cirurgia cardíaca e foram realizados, nos períodos de pré e pós CEC, exames de Desidrogenase Láctica (U/L), Plaquetas (mil/mm3), Fibrinogênio (mg/dL), além de monitoração da hemólise através de fita de urianálise. Os procedimentos transcorreram de forma habitual, e os parâmetros mantiveram-se dentro do esperado para o estudo, demonstrando a eficiência e segurança da SP como bomba para circulação extracorpórea durante cirurgia cardíaca / Abstract: Were developed methods and studies In Vivo and clinical evaluation were conducted with a blood pump for cardiopulmonary bypass (CPB), during cardiac surgery, the Spiral Pump® (SP). These studies are designed to assess the performance and safety of SP, finalizing the project and evaluating the SP as a product in its routine application during heart surgeries. The SP uses simultaneously, two principles of pumping, axial and centrifugal, provided by its conical geometry, in order to increase pumping efficiency without increased levels of destruction of the figured elements from blood. First step for In Vivo evaluation was the development of a protocol for In Vivo experiments and its submission to the "Ethic Committee for Animal Use" of Institute Dante Pazzanese of Cardiology (IDPC). The In Vivo assessments consisted of normal installation of the CPB in pigs, using the SP connected to a driver console and, for comparison purposes, the same procedure was performed with Bio-Pump®. Six experiments were performed with SP and three experiments with Bio-Pump®, lasting six hours each. Observations made by medical team showed great similarity between two pumps, including characteristics of vibration and noise. Two pumps were compared concerning to measurement of trauma, through the evolution of plasma free hemoglobin (PFH) and the PFH variation (?PFH). Analyzing laboratory results and hemolysis, from In Vivo assays with SP and the Bio-Pump®, we can observe no significant differences between them. With satisfactory results from In Vivo assays, SP was approved for clinical evaluation, carried out in accordance with current legislation. A Clinical Research Protocol was elaborated following ANVISA (National Health Surveillance Agency) resolution number 39 of 2008, which establishes requirements for conducting clinical research in Brazil. This Protocol was submitted to the Ethic Committee Research of IDPC for review and subsequently to National Council of Ethics in Research. Clinical research was conducted at operating room of IDPC in a group of forty patients under cardiac surgery with CPB, both sexes, adults, minimum of 50 kg of body weight. During CPB, SP replaced conventional CPB roller pump. All patients were interviewed and had authorized this study, signing of consent form. Usually monitored data were collected during a heart surgery and additional examinations were carried out at periods of pre and post CEC such as: Lactic dehydrogenase exams (U/L), platelets (1000/mm3), Fibrinogen (mg/dL), as well as monitoring of hemolysis by urianalysis tape. All procedures were as usual way, and all parameters remained as expected for this study, demonstrating the performance and safety of SP as pump for CPB during heart surgery / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestra em Engenharia Mecânica
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Avaliação da citotoxicidade e das atividades analgésica e anti-inflamatória do ácido p-coumárico intercalado em nanopartículas de hidróxidos duplos lamelares / Citotoxicity available and analgesic anti-inflammatory activity of p-coumaric acid intercalated in hydroxide double layered nanoparticle

Guilherme Damasio, Viviane Aparecida, 1983- 21 August 2018 (has links)
Orientadoresr: Daniele Ribeiro de Araujo, Eneida de Paula / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T08:56:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guilherme_VivianeAparecida_M.pdf: 3020599 bytes, checksum: ce06e2f6da5344128ba90d18a9b569f2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Compostos anti-inflamatórios não esteroídais (AINEs) são amplamente utilizados para o combate da inflamação, mas frequentemente acarretam efeitos adversos que impedem a continuação do tratamento. Atualmente, a terapia a base de plantas tem sido bastante empregada a fim de desenvolver novos fármacos que apresentem eficácia analgésica e anti-inflamatória. Nesse contexto, a utilização de sistemas carreadores, como as nanopartículas de hidróxidos duplos lamelares (HDL), visa melhorar propriedades biofarmacêuticas e farmacológicas dos compostos nelas intercalados. Dessa forma, este estudo teve como objetivo caracterizar a interação entre o ácido coumárico (AC), um composto fenólico extraído de plantas, e hidróxido duplo lamelares (HDL), nanopartículas inorgânicas, considerando parâmetros como a cinética de liberação in vitro, a citotoxicidade e as atividades analgésica-antiinflamatória em relação ao fármaco não intercalado. Os ensaios de liberação in vitro foram realizados utilizando uma célula de difusão vertical (com membrana de acetato de celulose, MWCO 1000 Da) e a viabilidade celular avaliada em células 3T3 pelo teste de incorporação do vermelho neutro (VN). Os testes farmacológicos realizados em camundongos swiss foram: a determinação do número de contorções abdominais, teste tail-flick, ensaios de peritonite e teste de formalina para o composto livre e intercalado nas concentrações de 10, 20 ou 30 mg/kg. Os ensaios de liberação in vitro mostraram que a intercalação reduziu significativamente a constante de liberação (Klib) do AC, em relação ao fármaco livre, sendo os valores de Klib de 41,6 ± 1,5 %.h-1 e 32,4 ± 1,5 %.h-1 , para o AC e AC-HDL, respectivamente. A viabilidade celular foi reduzida apenas em concentrações mais elevadas de AC e AC-HDL (10 e 12,5 mM). Porém, mesmo nestas concentrações foi observada porcentagem de viabilidade celular maior que 50%. Por fim, a avaliação farmacológica apontou o AC-HDL como um sistema de liberação com atividades analgésica e anti-inflamatória mais pronunciadas do que as observadas para anti-inflamatórios não esteroidais como a indometacina (p< 0,001). Esses efeitos foram obtidos para teste de tail-flick, quando o AC foi intercalado em HDL aumentou a duração da analgesia (~ 1,7 vezes) quando comparado com o grupo de controle indometacina. Assim, os resultados indicam que o AC intercalado em nanopartículas inorgânicas de HDL apresentou uma taxa de liberação lenta e também induziu uma atividade analgésica - anti-inflamatória, possivelmente, por um mecanismo semelhante ao observado para um anti-inflamatório não esteroidais como a indometacina / Abstract: Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely used to avoid inflammation, but these compounds can evoke some side effects, considering these as an important limitation to the treatment. Currently, the plant-based therapy has been widely employed to develop new drugs which have analgesic and anti-inflammatory pharmacological activities. In this context, the use of inorganic nanoparticles is important to improve biopharmaceutical and pharmacological properties of the intercalated molecules. Thus, this study aimed to characterize the interaction between coumaric acid (CA), a phenolic compound extracted from plants, and layered double hydroxide (LDH), inorganic nanoparticles, considering parameters such as the in vitro release kinetics cytotoxicity and analgesic-antiinflammatory activities compared to the non-intercalated-CA. In vitro release tests were performed using a vertical diffusion cell (with cellulose acetate membrane, MWCO 1000 Da) and cell viability assessed in 3T3 cells by the neutral red (NR) uptake test. Pharmacological assays were carried in Swiss mice out in order to determine the number of writhings, tail-flick test, peritonitis test and formalin test for the free compound at three different concentrations (10, 20 or 30 mg/kg). In vitro release tests showed that the release constant (Krel) value was significantly reduced when compared to the non-intercalated CA (Krel values of 41.6 ± 1.5 %.h-1 and 32.4 ± 1.5 %.h-1 for the free CA and CA-HDL, respectively). Cell viability was reduced only at higher concentrations (10 and 12.5 mM) of CA and CA-HDL. However, even at these concentrations the percentage of cell viability was more than 50%. Finally, the pharmacological evaluation reveal the CA-HDL as a drug-release system with more pronounced analgesic-antiinflammatory effects than those observed for classic NSAIDs, such as indomethacin (p <0.001). Those effects were obtained, specially, for tail-flick test, when the treatment with CA-LDH increased the duration of analgesia (~ 1.7 times), when compared with the control group (indomethacin). Thus, the results pointed out that the system CA-LDH showed a slow release rate and also induced in vivo analgesic-anti-inflammatory activities, possibly using similar mechanisms to that observed for classic non-steroidal anti-inflammatory drugs, such as indomethacin / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular
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Desenvolvimento de um biomaterial composto de poliuretano e microfibra de biovidro 45S5 em gradiente funcional para reparo de cartilagem articular: estudos in vitro e in vivo / Development of a biomaterial composed of polyurethane and bioglass microfiber in gradient functional to repair articular cartilage: in vitro and in vivo studies

Laurenti, Karen Cristina 06 September 2011 (has links)
A cartilagem articular é um tema amplamente discutido na literatura por meio de vários estudos e pesquisas. Com o presente estudo, busca-se uma proposta inovadora e original no uso de um biomaterial composto e o desenvolvimento de uma cartilagem artificial que aja como coxim elástico, apresentando características de gel fibro-reforçado com finalidade biomimética mecânica que imite o comportamento da cartilagem articular. Foi conceituado um implante que tivesse uma superfície tribológica para contato com a cartilagem do platô tibial e gradualmente se convertesse em região osteo-integrável para fixação mecânica no osso subcondral. Foi desenvolvido um biomaterial composto por poliuretano e microfibra de biovidro 45S5 em gradiente funcional que foi obtido e validado através de ensaios in vitro, microscopia eletrônica de varredura e análise histológica. Nos testes in vitro seja na condição de citotoxicidade direta ou indireta, notou-se que a quantidade de células foi estatisticamente semelhante ao controle negativo, e estatisticamente diferente do controle positivo indicando que o biomaterial composto de poliuretano e microfibra de biovidro 45S5 apresentou não toxicidade direta ou indireta da amostra e ainda promoveram o crescimento e o espalhamento celular, resultados que o habilitaram para a continuidade nos estudos com experimentos in vivo com coelhos. O material foi manufaturado para aplicação em defeitos osteocondrais de coelhos medindo 3mm de diâmetro e 4mm de profundidade que foi realizado na região central da tróclea femoral. Após períodos experimentais de 15, 30 e 90 dias as análises de microscopia eletrônica de varredura mostrou na região distal da superfície tribológica uma neo-formação de uma estrutura semelhante as trabéculas ósseas que foi considerada biomimética confirmadas por análises histológicas, e na região proximal à superfície tribológica a presença de tecido fibrocartilaginoso com condrócitos e ricamente vascularizado, validando com sucesso o conceito proposto para o implante. / Articular cartilage has been widely discussed in the literature by means of several studies and researches. The present thesis reports on an innovative and original proposal to use a biomaterial compound and the development of an artificial cartilage that acts as a cushion rubber with characteristics of fiber-reinforced gel with biomimetic mechanical purpose mimicking the behavior of articular cartilage. An implant with a tribological surface for contact with the cartilage of the tibial plateau was designed. It should gradually turn into an osteo-integrable region for mechanical fixation in the subchondral bone. A biomaterial composed of polyurethane and bioglass microfiber in functional gradient was then developed and validated by scanning electron microscopy and histological analysis through in vitro tests. Under either direct or indirect cytotoxicity conditions, the tests showed that the amount of cells is statistically similar to negative control and statistically different from the positive control, indicating that the biomaterial composed of polyurethane and bioglass microfiber showed no direct or indirect toxicity and promoted cell growth and spreading. Such results allowed continuing the studies with in vivo experiments with rabbits. The material was manufactured for use in 3mm diameter and 4mm depth osteochondral defects in the central region of the femoral trochlea of rabbits. After experimental periods of 15, 30 and 90 days, the scanning electron microscopy analysis showed a neo-formation of a structure similar to trabecular bones on the tribological surface in the distal region. This neo-formation was considered biomimetic, confirmed by both histological analysis and the presence of richly vascularized fibrocartilaginous tissues with chondrocytes in the region proximal to the tribological surface.
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Avaliação da capacidade antioxidante in vitro e in vivo contra radicais peroxila e hidroxila em amostras de plantas medicinais / Evaluation of the in vitro and in vivo antioxidant capacity against peroxyl and hydroxyl radicals in medicinal plant samples

Hilgemann, Maurício 26 July 2010 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The present work reports the development of new methodologies to evaluate the in vitro and in vivo antioxidant capacity against peroxyl and hydroxyl radicals in five medicinal plant samples (Matricaria chamomilla L., Psidium guajava, Achyrocline satureoides, Baccharis genistelloides and Cymbopogon citratus) and seven phenolic compounds (rutin, quercetin, resveratrol, gallic acid, ferulic acid, caffeic acid and rosmarinic acid). The antioxidant capacity of the samples was analyzed by two independent methods. In the first one, a new approach was used to detect hydroxyl radicals indirectly using an electrochemical procedure, in which the radicals destroy a thiol self-assembled monolayer (SAM) on a gold electrode. This monolayer can block the electrochemical signal of a dissolved redox probe. When such an electrode with a SAM is exposed to free radicals, these radicals destroy the SAM and the electrochemical signal of a redox probe recovers to a degree proportional to the extent of dissolution of the SAM. In the second method, the evaluation of antioxidant capacity against peroxyl and hydroxyl radicals is based on the indirect detection of these reactive oxygen species (ROS) by fluorimetry (ex/em: 485/520 nm) employing 2 -7 -dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. After the deacetilation reaction of DCFH-DA, it can be oxidized by ROS to the fluorescent compound DCF. The peroxyl radicals were produced at 37ºC by thermal decomposition of 2,2 -azobis (2 methylpropianamidine) dihydrochloride (ABAP), while hydroxyl radicals were generated by the Fenton reaction. In vivo assays were evaluated using zebrafish (Danio rerio) hepatocytes exposed to P. guajava and C. citratus extracts (better and worst in vitro results, respectively). The results obtained by the electrochemical and fluorimetric methods show that it is difficult to classify the tested plants according to their antioxidant capacity, since the results depended strongly on the extract concentration and composition as well as on the principle of the analytical method. However, there was a good correlation between the in vitro and in vivo assays for P. guajava and C. citratus extracts, since these results showed a reduction in the intracellular ROS concentration in the hepatocytes exposed to P. guajava extract. Furthermore, no antioxidant effect was observed in the assay with C. citrates extract, what is in agreement with the in vitro assays for this plant species. At last, the thesis intended to proof and to highlight the discrepant results obtained by independent methods for the same antioxidant species. Additionally, it aimed to compare the different methods according to the differences among the experimental procedures by using different ROS. Furthermore, the stability, reactivity and the half-life time of the free radicals are discussed. / O presente trabalho visa ao desenvolvimento de novas metodologias para a determinação da capacidade antioxidante in vitro e in vivo contra radicais peroxila e hidroxila em amostras de 5 plantas medicinais (Matricaria chamomilla L., Psidium guajava, Achyrocline satureoides, Baccharis genistelloides e Cymbopogon citratus) e sete compostos fenólicos (rutina, quercetina, resveratrol, ácido cafeico, ácido ferúlico, ácido gálico e ácido rosmarínico). A capacidade antioxidante das amostras foi determinada por dois métodos independentes. No primeiro, testou-se uma nova forma para a detecção de radicais hidroxila, usando-se um procedimento eletroquímico no qual os radicais destroem uma monocamada auto-organizada de hexanotiol sob um eletrodo de ouro. Esta monocamada consegue inibir o sinal eletroquímico de um par redox dissolvido, e, ao ser atacada por radicais livres, estes a destroem, e a recuperação do sinal eletroquímico do par redox se dá de forma proporcional à extensão de dissolução da monocamada. No segundo método, a determinação da capacidade antioxidante contra radicais peroxila e hidroxila ocorre através da detecção indireta destes radicais por fluorimetria (ex/em: 485/520 nm), empregando diacetato de 2 ,7 -diclorofluoresceína (DCFH-DA) como substrato. O DCFH-DA, após sofrer desacetilação, pode ser oxidado por espécies reativas de oxigênio (ERO), gerando fluorescência. Os radicais peroxila foram gerados através da termodegradação do reagente cloreto de 2,2 -azobis (2-metilamidinopropano) (ABAP) a 37ºC, enquanto os radicais hidroxila foram gerados pela reação de Fenton. Ensaios in vivo foram avaliados utilizando-se hepatócitos do peixe zebra (Danio rerio), expostos aos extratos das plantas P. guajava e C. citratus (melhor e pior desempenho in vitro, respectivamente). Os resultados obtidos pelos métodos eletroquímico e fluorimétrico demonstram que é extremamente difícil classificar as plantas de acordo com sua capacidade antioxidante, uma vez que o resultado obtido depende fortemente da concentração e da composição química dos extratos, além do princípio do método analítico empregado. Entretanto, obteve-se uma boa correlação entre os ensaios in vitro e in vivo feitos para os extratos das plantas P. guajava e C. citratus, já que os resultados obtidos mostraram uma redução da concentração de ERO intracelular em forma dose-dependete nos hepatócitos expostos a P. guajava, sem se observar efeito antioxidante no ensaio com C. citratus, a exemplo dos ensaios in vitro realizados. O presente trabalho pretende chamar a atenção para esses diferentes resultados obtidos, e compara os diferentes métodos levando em consideração as diferenças existentes entre as metodologias, assim como as diferenças existentes entre os radicais testados. Além disso, discute-se a estabilidade, a reatividade e tempo de meia-vida destas espécies.
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Desenvolvimento de um biomaterial composto de poliuretano e microfibra de biovidro 45S5 em gradiente funcional para reparo de cartilagem articular: estudos in vitro e in vivo / Development of a biomaterial composed of polyurethane and bioglass microfiber in gradient functional to repair articular cartilage: in vitro and in vivo studies

Karen Cristina Laurenti 06 September 2011 (has links)
A cartilagem articular é um tema amplamente discutido na literatura por meio de vários estudos e pesquisas. Com o presente estudo, busca-se uma proposta inovadora e original no uso de um biomaterial composto e o desenvolvimento de uma cartilagem artificial que aja como coxim elástico, apresentando características de gel fibro-reforçado com finalidade biomimética mecânica que imite o comportamento da cartilagem articular. Foi conceituado um implante que tivesse uma superfície tribológica para contato com a cartilagem do platô tibial e gradualmente se convertesse em região osteo-integrável para fixação mecânica no osso subcondral. Foi desenvolvido um biomaterial composto por poliuretano e microfibra de biovidro 45S5 em gradiente funcional que foi obtido e validado através de ensaios in vitro, microscopia eletrônica de varredura e análise histológica. Nos testes in vitro seja na condição de citotoxicidade direta ou indireta, notou-se que a quantidade de células foi estatisticamente semelhante ao controle negativo, e estatisticamente diferente do controle positivo indicando que o biomaterial composto de poliuretano e microfibra de biovidro 45S5 apresentou não toxicidade direta ou indireta da amostra e ainda promoveram o crescimento e o espalhamento celular, resultados que o habilitaram para a continuidade nos estudos com experimentos in vivo com coelhos. O material foi manufaturado para aplicação em defeitos osteocondrais de coelhos medindo 3mm de diâmetro e 4mm de profundidade que foi realizado na região central da tróclea femoral. Após períodos experimentais de 15, 30 e 90 dias as análises de microscopia eletrônica de varredura mostrou na região distal da superfície tribológica uma neo-formação de uma estrutura semelhante as trabéculas ósseas que foi considerada biomimética confirmadas por análises histológicas, e na região proximal à superfície tribológica a presença de tecido fibrocartilaginoso com condrócitos e ricamente vascularizado, validando com sucesso o conceito proposto para o implante. / Articular cartilage has been widely discussed in the literature by means of several studies and researches. The present thesis reports on an innovative and original proposal to use a biomaterial compound and the development of an artificial cartilage that acts as a cushion rubber with characteristics of fiber-reinforced gel with biomimetic mechanical purpose mimicking the behavior of articular cartilage. An implant with a tribological surface for contact with the cartilage of the tibial plateau was designed. It should gradually turn into an osteo-integrable region for mechanical fixation in the subchondral bone. A biomaterial composed of polyurethane and bioglass microfiber in functional gradient was then developed and validated by scanning electron microscopy and histological analysis through in vitro tests. Under either direct or indirect cytotoxicity conditions, the tests showed that the amount of cells is statistically similar to negative control and statistically different from the positive control, indicating that the biomaterial composed of polyurethane and bioglass microfiber showed no direct or indirect toxicity and promoted cell growth and spreading. Such results allowed continuing the studies with in vivo experiments with rabbits. The material was manufactured for use in 3mm diameter and 4mm depth osteochondral defects in the central region of the femoral trochlea of rabbits. After experimental periods of 15, 30 and 90 days, the scanning electron microscopy analysis showed a neo-formation of a structure similar to trabecular bones on the tribological surface in the distal region. This neo-formation was considered biomimetic, confirmed by both histological analysis and the presence of richly vascularized fibrocartilaginous tissues with chondrocytes in the region proximal to the tribological surface.

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