Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao CrystianeAraujo.pdf: 881195 bytes, checksum: da026b75ed78f3c38d78f44f6a15271e (MD5) Previous issue date: 2007-05-31 / Dermatophytes are keratinophilic fungi that colonize and invade the stratum corneum of the skin, hair and nails causing the dermatophytosis. An increasing number of antifungal agents has become available for the treatment of dermatophytosis, however not all species have the same susceptibility pattern and may occur relative or absolute resistance of some dermatophytes. The document M38-A developed by Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) for determining the minimal inhibitory concentration (MIC) of different antifungal agents against filamentous fungi, has not included the dermatophytes. The broth microdilution method has been evaluated by various researchers, and some parameters as inoculum size, temperature and duration of incubation and endpoint determination has been investigated. In this study, the in vitro activity of fluconazole, itraconazole, ketoconazole, griseofulvin and terbinafine against 60 dermatophyte isolates, belong to three species, using the broth microdilution technique, with modifications at temperature and incubation time was used. Additionally, the MIC values obtained by broth microdilution method were compared with those obtained by the agar dilution technique. The results obtained by broth microdilution method showed that all isolates produced clearly detectable growth at 28oC and the MIC values could be determined after 4 days of incubation for the isolates of Trichophyton mentagrophytes and 5 days for T. rubrum and Microsporum canis isolates. Itraconazole, ketoconazole and terbinafine had the lowest MIC values (0.03 μg/ml) for 33.3%, 31.6% and 15% of the isolates, respectively. A good concordance was observed between the agar dilution and broth microdilution methods. The levels of agreement were 91.6% with ketoconazole and griseofulvin, 83.3% with itraconazole, 81.6% with terbinafine and 73.3% with fluconazole for all the tested isolates. In summary, the results of this study suggest that an incubation time of 5 days and temperature at 28oC used in broth microdilution and agar dilution methods can contribute to define and to better interpret the MIC values. Beside, until a reference method for testing the susceptibilities of dermatophytes is standardized, the similar results with broth microdilution method become the agar dilution useful for testing the susceptibility of these fungi. / Os dermatófitos são fungos filamentosos queratinofílicos capazes de colonizar e invadir o extrato córneo da pele, pêlo e unhas produzindo as dermatofitoses. Há vários agentes antifúngicos disponíveis para o tratamento das dermatofitoses, entretanto as espécies de dermatófitos possuem perfis de suscetibilidade diferentes, podendo ocorrer resistência relativa ou absoluta. O documento M38-A desenvolvido pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de diferentes agentes antifúngicos para fungos filamentosos, não inclui os dermatófitos. O método de microdiluição em caldo tem sido avaliado por vários pesquisadores, e alguns parâmetros como tamanho do inóculo, temperatura e tempo de incubação e determinação das leituras de CIM são investigados. Neste trabalho, foi avaliada a atividade in vitro de fluconazol, itraconazol, cetoconazol, griseofulvina e terbinafina para 60 isolados de dermatófitos, pertencentes a três espécies, através da técnica de microdiluição em caldo, com modificações na temperatura e tempo de incubação. Adicionalmente, os valores de CIM obtidos pelo método de microdiluição em caldo foram comparados com aqueles obtidos pela técnica de diluição em ágar. Os resultados encontrados através do método de microdiluição em caldo mostraram que todos os isolados produziram crescimento claramente detectável a temperatura de 28oC e os valores de CIMs foram determinados após 4 dias de incubação para os isolados de Trichophyton mentagrophytes e 5 dias para os isolados de T. rubrum e Microsporum canis. Itraconazol, cetoconazol e terbinafina mostraram os menores valores de CIM (0,03 μg/ml) para 33,3%, 31,6% e 15% dos isolados, respectivamente. Uma boa concordância foi observada entre os métodos de diluição em ágar e microdiluição em caldo. A concordância entre os dois métodos foi de 91,6% para cetoconazol e griseofulvina, 83,3% para itraconazol, 81,6% para terbinafina e 73,3% para fluconazol para todos os isolados analisados. Em conclusão, os resultados deste estudo sugerem que uma incubação de 5 dias e temperatura de 28oC, utilizados no método de microdiluição em caldo e diluição em ágar, podem contribuir para definir e melhor interpretar os valores de CIM. Além disso, até que um método de referência de teste de suscetibilidade para dermatófitos seja padronizado, os resultados similares entre os métodos de microdiluição em caldo e diluição em ágar tornam este último útil para testar a suscetibilidade in vitro destes fungos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_isabel_madrid.pdf: 2158071 bytes, checksum: 0cdf6bd60773cb623d04e6df539e8aa9 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Sporotrichosis has been receiving attention in any world in the several areas of the health as an important fungal disease. So, this work aimed: (i) to study cases of sporotrichosis diagnosed in the south region of Rio Grande do Sul in a period of ten years, (ii) to study the morphological and pathogenicity characteristics of S. schenckii isolates, (iii) to determine the sensitivity of S. schenckii isolates to the commercial disinfectants. Sporotrichosis cases were analysed as for geographical distribution, it clinical forms of the disease, presence of the fungus in different anatomical sites and tecidual inflammatory response. The 42 S. schenckii isolates originating from clinical cases, environment isolates and reference strains used in the phenotypic study were evaluated as for macromorphology in Sabouraud agar added of chloramphenicol, potato agar and ágar lactrimel, incubated 25ºC and 35ºC for 21 days. The micromorphology was analyzed in potato agar to 25ºC whereas the termotholerance was evaluated in ágar Sabouraud added of 1% yeast extract, incubated 41ºC for seven days. Ultraestructural study of nine clinical isolates and two reference strains of S. schenckii were carried by transmission electron microscopy. Susceptibility of 12 S. schenckii isolates to disinfectants was performed by the techniques of broth microdilution, agar diffusion and direct exposute test. The 103 cases of sporotrichosis in animals demonstrated that this is an endemic mycosis in the south region of Rio Grande do Sul being more frequent in young felines and adult dogs. The felines developed disseminated cutaneous form with more frequency. Therefore, in canines, the fixed cutaneous form was predominant though it has taken place in 18.2% of the dog to respiratory form with absence of cutaneous lesions. Research of the S. schenckii in nails, oral cavity, conjunctival mucosa, blood and testicles demonstrated high fungal positivity in samples of oral cavity (45.2%) and testicles (46.6%). The study of the hematological alterations related with the clinical form of the disease demonstrated that animals with the cutaneous fixed form of the mycosis do not present alterations in the blood count. However, animals with the cutaneous disseminated form develop important alterations characterized mainly for leucocytosis with neutrophilia and anaemia. Morphological analyzes of 42 clinical and environmental isolates of S. schenckii demonstrated macro and micromorphogical differences in the different culture medium utilized. In the thermotolerance evaluation 26.2% isolates were capable of growth at 41oC, specially isolates of feline sporotrichosis. The ultraestructural study showed presence of granules of melanin in all S. schenckii isolates of canine sporotrichosis and correlation among melanin and cell wall thickness. In vitro evaluation of disinfectants demonstrated chlorexidine digluconate antifungal activity in the microdilution broth and agar diffusion techniques and the sodium hypochlorite showed best performance in the direct exposure test. The presence of the organic matter interfered in the antifungal action of both disinfectants. Sodium hypochlorite showed better results with total elimination of the fungal load in the absence of organic matter and a reduction of 60 % of the fungal load in the presence of this. / A esporotricose tem se destacado mundialmente nas diversas áreas da saúde como uma importante doença fúngica. Assim, este trabalho teve como objetivos: (i) estudar casos de esporotricose diagnosticados na região sul do Rio Grande do Sul num período de dez anos, (ii) estudar as características morfológicas e de patogenicidade de isolados de Sporothrix schenckii, (iii) determinar a suscetibilidade de S. schenckii a desinfetantes comerciais. Os casos de esporotricose foram analisados quanto a distribuição geográfica, forma clíinica da doença, presença do fungo em diferentes sítios anatômicos e resposta tecidual. Os 42 isolados de S. schenckii provenientes de casos clínicos, isolados do ambiente e cepas de referência utilizados no estudo fenotípico foram avaliados quanto a macromorfologia em ágar Sabouraud acrescido de cloranfenicol, ágar batata e ágar lactrimel incubados a 25ºC e 35ºC por 21 dias. A micromorfologia foi avaliada em ágar batata a 25ºC enquanto que a termotolerância foi avaliada em ágar Sabouraud acrecido de extrato de levedura 1% incubado a 41ºC por sete dias. O estudo ultraestrural dos nove isolados clínicos e duas cepas de referência de S. schenckii foi realizado por microscopia eletrônica de transmissão. A suscetiblidade de 12 isolados de S. schenckii a desinfetantes foi realizada pelas técnicas de microdiluição em caldo, difusão em agar e teste de exposição direta. Os 103 casos de esporotricose em animais demonstraram que esta é uma micose endêmica na região sul do Rio Grande do Sul ocorrendo com mais freqüência em felinos jovens e cães adultos. Os felinos desenvolveram principalmente a forma cutânea disseminada enquanto que em caninos, a forma cutânea fixa foi a mais freqüente embora tenha ocorrido em 18,2% dos caninos, a forma respiratória com ausência de lesões cutâneas. A pesquisa do fungo S. schenckii em unhas, cavidade oral, mucosa conjuntival, sangue e testículos revelou alta positividade fúngica em amostras de testículos (46,6%) e cavidade oral (45,2%). O hemograma de animais com a forma cutânea fixa não apresentou alterações nos valores hematológicos enquanto que aqueles com a forma cutânea disseminada apresentaram alterações tanto no leucograma como no eritrograma, caracterizadas por leucocitose por neutrofilia e anemia normocítica e normocrômica. A análise morfológica de 42 isolados clínicos e do ambiente de S. schenckii demonstrou diferenças macro e micromorfológicas nos diferentes meios de cultivo utilizados. Na avaliação da termotolerância obteve-se 26,2% dos isolados termotolerantes, sendo a maioria proveniente de casos de esporotricose felina. O estudo ultraestrutural revelou presença de grânulos de melanina em todos os isolados de S. schenckii originados de esporotricose canina e correlação entre presença de melanina e espessura da parede celular. A avaliação in vitro de desinfetantes demonstrou maior ação antifúngica do digluconato de clorexidina nas técnicas de microdiluição em caldo e difusão em agar enquanto que o hipoclorido de sódio apresentou melhor eficácia na técnica de exposição direta. A presença de matéria orgânica interferiu na ação antifúngica de ambos os desinfetantes, entretanto, o hipoclorito de sódio apresentou melhores resultados com inativação total da carga fúngica na ausência de matéria orgânica e redução de 60% da carga fúngica na presença desta.