Os ensaios microbiológicos são utilizados para avaliar a atividade antimicrobiana desde a descoberta do uso dos antibióticos. Apesar dos ensaios microbiológicos serem amplamente empregados para determinação da potência de antibióticos em formas farmacêuticas, uma vez que fornecem a medida da atividade biológica, apresentam limitações quanto a baixa reprodutibilidade e tempo de análise. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, otimizar e validar ensaio colorimétrico rápido em microplaca para determinar a potência da neomicina e bacitracina em produtos farmacêuticos. Metodologias de análise fatorial e análise de superfície de resposta foram utilizadas no desenvolvimento e otimização da escolha do microrganismo, da composição do meio de cultura, da proporção de inóculo, e das concentrações de cloreto de trifeniltetrazólio e dos antibióticos. Os métodos otimizados foram validados pela avaliação da linearidade, precisão, exatidão e robustez. Análise estatística mostrou equivalência entre o método de difusão em ágar e o método colorimétrico rápido em microplaca para ambos antibióticos. Além disso, o ensaio em microplaca apresentou vantagens em relação à reprodutibilidade, sensibilidade, tempo de incubação e quantidades necessárias de meio de cultura e soluções para ambos os antibióticos. / Microbiological assays have been used to evaluate antimicrobial activity since the discovery of the first antibiotics. Despite of microbiological assays have been widely employed to determine antibiotic potency of pharmaceutical dosage forms, once they provide a measure of biological activity, they have limitations regarding the low reproducibility and increased time of analysis. The aim of this work is to develop, optimize and validate a rapid colorimetric microplate bioassay for the potency of neomycin and bacitracin in pharmaceutical drug products. Factorial and response surface methodologies were used in the development and optimization of the choice of microorganism, culture medium composition, amount of inoculum, triphenyltetrazolium chloride (TTC) concentration and antibiotic concentration. The optimized bioassays methods were validated by the assessment of linearity, precision, accuracy, and robustness. Statistical analysis showed equivalency between agar diffusion microbiological assays and rapid colorimetric microplate bioassays. In addition, microplate bioassay had advantages concerning the reproducibility, sensitivity of response, time of incubation, and amount of culture medium and solutions required.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-11T17:09:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Bruno Souza Lemos - Versãodefinitiva.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-12T12:09:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Bruno Souza Lemos - Versãodefinitiva.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-12T12:12:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Bruno Souza Lemos - Versãodefinitiva.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T12:12:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Bruno Souza Lemos - Versãodefinitiva.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) Previous issue date: 2015-05-02 / O incremento da área semeada em safrinha com feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.), no centro-oeste brasileiro, causou um aumento na demanda de sementes de boa qualidade e alto vigor. O teste de tetrazólio é uma das opções disponíveis para avaliar a qualidade e vigor das sementes e, embora exista metodologia padronizada pelas Regras para Análise de Sementes (Brasil, 2009), a metodologia mostra-se ineficiente sendo necessário adequá-la para obtenção de resultados confiáveis. Dessa maneira, foi conduzido trabalho com o objetivo de estudar diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempo de coloração na avaliação do potencial fisiológico de sementes de feijão-caupi. Utilizaram-se sementes das cultivares BRS Guariba (Classe Branco Liso), BRS Novaera (Classe Branco Rugoso) e BRS Pajeú (Classe Mulato Liso), cada uma representada por um lote, produzido na safrinha de 2014. As sementes foram submetidas ao teste de germinação e classificação do vigor de plântulas. O teste de tetrazólio foi conduzido utilizando três concentrações diferentes de sal de tetrazólio (0,500%, 0,075% e 0,050%) com tempo de exposição de 90 minutos, 150 minutos e 960 minutos. Os dados foram submetidos à análise de variância e, quando apresentaram diferença significativa, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey à 5% e submetidas à análise de correlação de Pearson, correlacionando o teste em areia e diferentes tempos e concentrações testados no teste de tetrazólio. Os resultados revelaram que a leitura do teste de tetrazólio é possível nos três tempos de embebição para as três concentrações de solução, exceto na concentração de 0,500% de sal de tetrazólio no tempo de 960 minutos. / The increase in area sown in off-season with cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp.), In the Brazilian Midwest, caused an increase in good quality seed demand and high force. The tetrazolium test is one of the options available to assess the quality and vigor and, although there is standardized methodology by the Rules for Seed Analysis (Brazil, 2009), the methodology proves to be inefficient and it is necessary to adapt it to obtain results reliable. Thus, work was conducted in order to study different tetrazolium salt concentrations and staining time in evaluating the physiological potential of cowpea seeds. They used seeds of BRS Guariba (Class White Smooth), BRS Novaera (White Class Rough) and BRS Pajeú (Class Mulato Straight), each represented by a lot, produced in 2014. The second-crop seeds were submitted to the test germination and seedling vigor classification. The tetrazolium test has been conducted using three different concentrations of tetrazolium salt (0.500%, 0.075% and 0.050%) with exposure time of 90 minutes, 150 minutes and 960 minutes. The data were submitted to variance analysis and when presented significant difference, the means were compared by Tukey test at 5% and subjected to Pearson correlation analysis, correlating the test in sand and different times and concentrations tested in the test tetrazolium . The results showed that the reading of the tetrazolium test is possible in the three soaking times for the three solution concentrations, except in the concentration of 0.500% tetrazolium salt in time of 960 minutes. Keywords:

Os ensaios microbiológicos são utilizados para avaliar a atividade antimicrobiana desde a descoberta do uso dos antibióticos. Apesar dos ensaios microbiológicos serem amplamente empregados para determinação da potência de antibióticos em formas farmacêuticas, uma vez que fornecem a medida da atividade biológica, apresentam limitações quanto a baixa reprodutibilidade e tempo de análise. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, otimizar e validar ensaio colorimétrico rápido em microplaca para determinar a potência da neomicina e bacitracina em produtos farmacêuticos. Metodologias de análise fatorial e análise de superfície de resposta foram utilizadas no desenvolvimento e otimização da escolha do microrganismo, da composição do meio de cultura, da proporção de inóculo, e das concentrações de cloreto de trifeniltetrazólio e dos antibióticos. Os métodos otimizados foram validados pela avaliação da linearidade, precisão, exatidão e robustez. Análise estatística mostrou equivalência entre o método de difusão em ágar e o método colorimétrico rápido em microplaca para ambos antibióticos. Além disso, o ensaio em microplaca apresentou vantagens em relação à reprodutibilidade, sensibilidade, tempo de incubação e quantidades necessárias de meio de cultura e soluções para ambos os antibióticos. / Microbiological assays have been used to evaluate antimicrobial activity since the discovery of the first antibiotics. Despite of microbiological assays have been widely employed to determine antibiotic potency of pharmaceutical dosage forms, once they provide a measure of biological activity, they have limitations regarding the low reproducibility and increased time of analysis. The aim of this work is to develop, optimize and validate a rapid colorimetric microplate bioassay for the potency of neomycin and bacitracin in pharmaceutical drug products. Factorial and response surface methodologies were used in the development and optimization of the choice of microorganism, culture medium composition, amount of inoculum, triphenyltetrazolium chloride (TTC) concentration and antibiotic concentration. The optimized bioassays methods were validated by the assessment of linearity, precision, accuracy, and robustness. Statistical analysis showed equivalency between agar diffusion microbiological assays and rapid colorimetric microplate bioassays. In addition, microplate bioassay had advantages concerning the reproducibility, sensitivity of response, time of incubation, and amount of culture medium and solutions required.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-03-16T13:52:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_bruno_souza_lemos.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-03-17T22:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_bruno_souza_lemos.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-03-17T22:18:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_bruno_souza_lemos.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T22:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_bruno_souza_lemos.pdf: 782400 bytes, checksum: ad69337eab827e4daebef0eb78a32a58 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-06-02 / Sem bolsa / O incremento da área semeada em safrinha com feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.), no centro-oeste brasileiro, causou um aumento na demanda de sementes de boa qualidade e alto vigor. O teste de tetrazólio é uma das opções disponíveis para avaliar a qualidade e vigor das sementes e, embora exista metodologia padronizada pelas Regras para Análise de Sementes (Brasil, 2009), a metodologia mostra-se ineficiente sendo necessário adequá-la para obtenção de resultados confiáveis. Dessa maneira, foi conduzido trabalho com o objetivo de estudar diferentes concentrações de sal de tetrazólio e tempo de coloração na avaliação do potencial fisiológico de sementes de feijão-caupi. Utilizaram-se sementes das cultivares BRS Guariba (Classe Branco Liso), BRS Novaera (Classe Branco Rugoso) e BRS Pajeú (Classe Mulato Liso), cada uma representada por um lote, produzido na safrinha de 2014. As sementes foram submetidas ao teste de germinação e classificação do vigor de plântulas. O teste de tetrazólio foi conduzido utilizando três concentrações diferentes de sal de tetrazólio (0,500%, 0,075% e 0,050%) com tempo de exposição de 90 minutos, 150 minutos e 960 minutos. Os dados foram submetidos à análise de variância e, quando apresentaram diferença significativa, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey à 5% e submetidas à análise de correlação de Pearson, correlacionando o teste em areia e diferentes tempos e concentrações testados no teste de tetrazólio. Os resultados revelaram que a leitura do teste de tetrazólio é possível nos três tempos de embebição para as três concentrações de solução, exceto na concentração de 0,500% de sal de tetrazólio no tempo de 960 minutos. / The increase in area sown in off-season with cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp.), In the Brazilian Midwest, caused an increase in good quality seed demand and highforce. The tetrazolium test is one of the options available to assess the quality and vigor and, although there is standardized methodology by the Rules for Seed Analysis (Brazil, 2009), the methodology proves to be inefficient and it is necessary to adapt it to obtain results reliable. Thus, work was conducted in order to study different tetrazolium salt concentrations and staining time in evaluating the physiological potential of cowpea seeds. They used seeds of BRS Guariba (Class White Smooth), BRS Novaera (White Class Rough) and BRS Pajeú (Class Mulato Straight), each represented by a lot, produced in 2014. The second-crop seeds were submitted to the test germination and seedling vigor classification. The tetrazolium test has been conducted using three different concentrations of tetrazolium salt (0.500%, 0.075% and 0.050%) with exposure time of 90 minutes, 150 minutes and 960 minutes. The data were submitted to variance analysis and when presented significant difference, the means were compared by Tukey test at 5% and subjected to Pearson correlation analysis, correlating the test in sand and different times and concentrations tested in the test tetrazolium . The results showed that the reading of the tetrazolium test is possible in the three soaking times for the three solution concentrations, except in the concentration of 0.500% tetrazolium salt in time of 960 minutes.

>Magister Scientiae - MSc / In this study PbSe quantum dots (QDs) were successfully synthesized via the organometallic and aqueous routes. Optical characterization was carried out using photoluminescence (PL) spectroscopy, structural and morphological characterization were carried out using X-ray diffraction (XRD) and transmission electron microscopy (TEM). Energy-dispersive X-ray spectroscopy (EDS) was used to determine the composition of the QDs. All the synthesized QDs were found to have emissions within the near-infrared region of the spectrum (≥1000 nm) with most of them being less than 5 nm in size. The aqueous synthesized QDs had a perfect Gaussian emission spectrum with a FWHM of ~23 nm indicating pure band gap emission and narrow size distribution respectively. The QDs were determined to have a cubic rock-salt crystal structure consistent with bulk PbSe. The aqueous synthesized QDs were however not stable in solution with the QDs precipitating after approximately 48 h. The organometallic synthesized QDs were transferred into the aqueous phase by exchanging the surface oleic acid ligands with 11-mercaptoundecanoic acid ligands. The ligand exchanged QDs were however stable in solution for over two weeks. The effects of reaction parameters on the optical and structural properties of the organometallic synthesized QDs were investigated by varying the reaction time, temperature, ligand purity, lead and selenium sources. It was observed that larger QDs were formed with longer reaction times, with reactions proceeding faster at higher reaction temperatures than at lower temperatures. Varying the ligand purity was found to have minimal effects on the properties of the synthesized QDs. The lead and selenium sources contributed largely to the properties of the QDs with lead oxide producing spherical QDs which were smaller compared to the cubic QDs produced from lead acetate. TBPSe was seen to produce smaller QDs as compared to TOPSe. The cytotoxity of the synthesized QDs was determined following the WST-1 cell viability assay with the QDs being found to be non-toxic at all the tested concentrations