Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-13T14:01:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Thiago Ubiratan Lins e Lins - Tese de Doutorado.pdf: 3503659 bytes, checksum: 9ffe7a8c957730db868f05707e01fef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T14:01:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Thiago Ubiratan Lins e Lins - Tese de Doutorado.pdf: 3503659 bytes, checksum: 9ffe7a8c957730db868f05707e01fef4 (MD5) Previous issue date: 2014-01-23 / FACEPE / Os derivados tiazacridínicos (Z/E)-5-(acridin-9-il) metileno-3-(3-cloro-benzil)-tiazolidin-2,4-diona (LPSF/AC-34) e (Z)-5-(acridin-9-il) metileno-3-(3-cloro-benzil)-4-tioxo-tiazolidin-2-ona (LPSF/AC-129) foram sintetizados. O produto da reação continha 72% do derivado (Z) LPSF/AC-129 e 22% do derivado (Z/E) LPSF/AC-34, com rendimento de 94%. As estruturas químicas dos derivados foram determinadas por espectroscopia no infravermelho, espectroscopia de ressonância magnética nuclear de hidrogênio e espectrometria de massas e a pureza por HPLC-MS. A citotoxicidade da mistura LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 foi avaliada frente a linhagens de células tumorais aderentes e não-aderentes pelo método de MTT. Os valores obtidos para o IC50 foi de 3,98 μM (linfoma de Burkitt - RAJI); 35,6 μM (leucemia de células T - Jurkat); 8,05 μM (leucemia promielocítica aguda - HL-60); 14,27 μM (leucemia linfoblástica aguda - CCRF-CEM); 55,77 μM (glioblastoma - NG97); >100 μM (mama - T47D). A seletividade dos compostos foi avaliada em células mononucleadas do sangue periférico (PBMC) de voluntários sadios e apresentou uma IC50>100μM. Em seguida, avaliou-se por citometria de fluxo o efeito dos derivados no ciclo celular e indução de morte. Observou-se que a mistura LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 na dose de 3,98 μM não causou alterações significativas no ciclo celular e induziu a morte por apoptose na linhagem de linfoma RAJI. Em paralelo, avaliou-se por RT-PCR o efeito dos derivados na expressão dos genes GADD153, PPARγ, Bcl-2, SOD1, Beclin, Bid, p21 e RIP3 nas linhagens HL-60 e CCRF-CEM em comparação às células não tratadas. Após 10 horas de exposição da linhagem HL-60 aos derivados, na dose de 8,05 μM (n=3), observou-se a modulação dos genes GADD153 (12,47 vezes, p=0,0808) e PPARγ (4,82 vezes, p=0,2277). Na linhagem CCRF-CEM (dose de 14,27 μM; n=3) observou-se a modulação dos genes Bcl-2 (0,97 vezes, p=0,4409), Bid (1,62 vezes, p=0,3911), RIP3 (0,97 vezes, p=0,3722) e SOD1 (1,29 vezes, p=0,0172) indicando interferência no estresse oxidativo. Avaliou-se também o efeito dos derivados na expressão protéica de NFkB, Bax, pPTEN e GADD153 por Western Blotting. Observou-se na linhagem HL-60 a modulação de NFkB (p=0,3012; n=3) e de Bax (p=0,9221; n=3). Na linhagem CCRF-CEM observou-se o aumento de NFkB (p=0,0053; n=3) e Bax (p=0,6956; n=3). Os resultados mostraram que os derivados LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 apresentam atividade frente às linhagens de tumores hematopoiéticos e sólidos, modulando expressão gênica e proteica. / The (Z / E) -5- (acridin-9-yl) methylene-3- (3-chloro-benzyl) thiazolidin-2,4-dione (LPSF / AC-34) and (Z) -5 - (acridin-9-yl) methylene-3- (3-chloro-benzyl) -4-thioxo-thiazolidin-2-one (LPSF / AC-129) thiazacridinic derivatives were synthesized. The reaction product contained (Z) LPSF / AC-129 (72%) and (Z / E) LPSF / AC-34 (22%), with 94% of yield. The derivatives chemical structures were determined by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance spectroscopy and mass spectrometry hydrogen and the purity was determined by HPLC-MS. The mixture LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 cytotoxicity was evaluated against adherent and non-adherent tumor cell lines throught MTT method. The IC50 values obtained was 3,98 μM (Burkitt lymphoma - RAJI); 35,6 μM (T-cell leukemia - Jurkat); 8,05 μM (acute promyelocytic leukemia - HL-60); 14,27 μM (acute lymphoblastic leukemia - CCRF-CEM); 55,77 μM (glioblastoma - NG97); > 100 μM (breast - T47D). The compounds selectivity was assessed in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy volunteers and showed an IC50> 100μM. Then, the derivative effect on cell cycle and induction of death was assayed by flow cytometry. It was observed that the 3,98 μM dose of mixture LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 caused no significant changes in cell cycle and induce death by apoptosis in lymphoma cell line RAJI. In parallel through RT-PCR, it was evaluated the derivatives effect on GADD153, PPAR gamma, Bcl-2, SOD1, Beclin, Bid, RIP3, p21 genes expression in HL-60 and CCRF-CEM tumor cell lines compared to untreated cells . After submitting HL-60 line to 10 hours exposure of 8.05 μM derivatives dose (n = 3), we observed the modulation of GADD153 (12,47 fold, p=0.0808) and PPAR gamma (4,82 fold, p=0.2277) genes. On CCRF-CEM cell line (14,27 μM dose; n=3) it was observed modulation of Bcl-2 (0,97 fold, p = 0,4409), Bid (1,62 fold, p = 0,3911), RIP3 (0,97 fold, p=0,3722) and SOD1 (1,29 fold, p=0,0172) genes indicating interference on oxidative stress. It is also evaluated the derivatives effect on protein expression of NFkB, Bax, GADD153 and pPTEN by Western blotting. It was observed, in HL-60 cell line, the NFkB (p=0,3012; n=3) and Bax (p=0,9221; n=3) modulation. In CCRF-CEM cell line was observed NFkB (p=0,0053; n=3) and Bax (p=0.6956; n=3) increase. The results showed that the derivatives LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 had activity against hematopoietic and solid tumor cell lines by modulating gene and protein expression.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-15T14:22:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertaçao final-Colaço.pdf: 884713 bytes, checksum: fca04fb02a3890a222aaff75e2759910 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T14:22:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertaçao final-Colaço.pdf: 884713 bytes, checksum: fca04fb02a3890a222aaff75e2759910 (MD5) Previous issue date: 2012-10-29 / CNPq / O câncer é uma das principais causas de morte no mundo e alberga intensos e crescentes investimentos em pesquisa oriundos dos setores público e privado. Considerando os alarmantes indicadores epidemiológicos registrados e a visível carência de medicamentos mais eficazes e menos tóxicos para esta patologia, o Laboratório de Planejamento e Síntese de Fármacos vem, desde o final da década de 1980, desenvolvendo moléculas com potenciais propriedades anticâncer. A meta é minimizar o impacto dessa doença no Brasil e no mundo. Para tanto, conhecendo-se as propriedades anticâncer de derivados da acridina, este trabalho teve como objetivo preparar, determinar as características físico-químicas, caracterizar estruturalmente e avaliar a atividade anticâncer de oito moléculas originais derivadas da acridina. Nos ensaios in vitro foram utilizadas linhagens celulares T47D, NG97, HEPG2, Jurkat e Raji. Para a realização das sínteses, foram realizadas reações de N-alquilação, condensação, ciclização e adição de Michael. As moléculas obtidas foram comprovadas através de métodos espectroscópicos no infravermelho, ressonância magnética nuclear de hidrogênio e espectrometria de massas. Os resultados revelam que o composto 3-(acridin-9-ilmetil)-5-(5-bromo-1H-indol-3-ilmetileno)-tiazolidana-2,4-diona (LPSF/AA-29) se destacou por apresentar menores valores de viabilidade celular para as linhagens T47D, HEPG2 e NG97 de células testadas, chamando atenção para a dose de 50 μM que foi a melhor. Também foi possível observar que o substituinte triazol presente no composto LPSF/AA-48 possibilitou uma maior toxicidade frente as linhagens Raji e Jurkat, principalmente na dose de 100 μM. / Cancer is a leading cause of death in the world and is home to intense and increasing investments in research coming from the public and private sectors. Whereas the alarming epidemiological indicators recorded and visible lack of more effective and less toxic drugs for this condition, the Laboratory Planning and Synthesis of Pharmaceuticals has, since the late 1980s, developing molecules with potential anticancer properties. The goal is to minimize the impact of this disease in Brazil and worldwide. To do so, knowing the anticancer properties of acridines derivatives, this study aimed to prepare, determine the physico-chemical characteristics, structurally characterize and evaluate the anticancer activity of eight original molecules derived from acridines. In vitro cell lines T47D, NG97, HEPG2, Jurkat and Raji were used. To perform the synthesis, reactions of N-alkylation, condensation, Michael addition and cyclization were performed. The molecules obtained were confirmed by spectroscopic methods in the infrared, nuclear magnetic resonance and mass spectrometry. The results show that compound 3 - (acridin-9-ylmethyl)-5-(5-bromo-1H-indol-3-ylmethylene)-tiazolidana-2,4-dione (LPSF/AA-29) stood out with lower values for T47D cell viability, and HEPG2 NG97 tested cell lines, calling attention to the dose of 50 mM which was the best. Was also observed that the triazole substituent present in the compound LPSF/AA-48 allowed greater toxicity across the Raji and Jurkat cell lines, especially at a dose of 100 mM.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-05T12:40:14Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Elizabeth definitiva 2013.pdf: 2088443 bytes, checksum: e5072e4e506e5dbf48fdac9e6edd81fc (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Elizabeth definitiva 2013.pdf: 2088443 bytes, checksum: e5072e4e506e5dbf48fdac9e6edd81fc (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / FACEPE (Fundação de Amparo a Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco) / Muitos agentes terapêuticos essenciais no tratamento de diversas doenças atuam através da sua capacidade de interagir com o DNA. Esta interação pode muitas vezes levar à uma alteração nas propriedades estruturais e funcionais do DNA, o que influencia sobre suas funções fisiológicas e causa apoptose celular. Compostos com uma estrutura aromática policíclica, tais como acridina e seus derivados são conhecidos por interagir com o DNA e apresentar aplicações clínicas importantes, especialmente como antitumoral. Além de, atuarem através da inibição da atividade da enzima topoisomerase, bloqueando processos de replicação e transcrição do DNA, o que causa destruição das células. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo a síntese e caracterização de derivados tiazacridínicos e imidazacridínicos para estudo da ligação ao DNA e da inibição da topoisomerase I. Todos os compostos tiveram suas estruturas elucidadas e comprovadas por RMN1H, RMN13C, IV e LC-MS. A análise da ligação ao DNA foi realiza através da espectroscopia de absorção, fluorescência e dicroísmo circular e o estudo da topoisomerase por eletroforese em gel de agarose. Os espectros de Uv-vis, fluorescência e de dicroísmo circular mostraram que os derivados interagem com o DNA tanto por ligação externa quanto por intercalação, apresentando constantes de ligação entre 1.46 – 6.01 x 104 M-1. O ensaio com a topoisomerase I evidenciou que em concentrações a partir de 200 μM, estes compostos apresentam a capacidade de inibir a enzima topoisomerase I humana. Tais resultados permitiram evidenciar um mecanismo de ligação ao DNA com as tiazacridinas e imidazacridinas, refletindo o que é visto na literatura e revelando que, estes derivados, são promissores no desenvolvimento de novos agentes análogos de acridina com potenciais sítios de ligação ao DNA.