Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-03-27T12:22:55Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-03-27T13:44:47Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2018-03-27T13:44:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-01-09 / O hipoclorito de sódio (NaOCl) é a solução irrigadora mais comumente utilizada durante a terapia endodôntica. A atividade antimicrobiana e a capacidade de dissolver a matéria orgânica são características bem conhecidas desta solução. No entanto, pouco se conhece sobre os efeitos do NaOCl nas células-tronco mesenquimais humanas. As células-tronco de dentes decíduos humanos esfoliados (SHED) foram cultivadas e expostas a 0,04% de NaOCl durante 30, 60 e 300 segundos. A proliferação e viabilidade celular foram investigadas pelos ensaios de brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazólio (MTT) e Trypan blue, respectivamente. O potencial de diferenciação foi investigado através da diferenciação osteogênica. A expressão dos marcadores de células-tronco foi avaliada por reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR). Todos os ensaios foram realizados no 1º dia após o tratamento. Todos os testes mostraram uma redução no número de células viáveis com aumento do tempo de exposição ao NaOCl. Entretanto, não houve diferença entre os grupos em relação a mineralização. Quanto à RT-PCR, a expressão dos genes testados, β-actina, Nestin e CD105 foi significativamente menor. Os resultados mostraram que o longo período de exposição ao NaOCl tem efeitos prejudiciais na sobrevivência de SHEDs. / Sodium Hypochlorite (NaOCl) is the most common irrigation solution and widely used during root canal procedures. The antimicrobial activity and capacity to dissolve organic matter are well known features of this solution. However, there is little knowledge about the effects of NaOCl on human mesenchymal stem cells. Briefly, stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) were cultured and exposed to 0.04% NaOCl for 30, 60 and 300 seconds. We investigated cell proliferation and viability by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and trypan blue dye, respectively. Differentiation potential was investigated through osteogenic differentiation. Stem cells markers expression was evaluated by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). All the assays were performed at 1 day following treatment. All tests showed a reduction in the number of viable cells with increased exposure time to NaOCl. Interestingly, there was no difference between the groups in relation to mineralization. As for RT-PCR, the expression of the genes tested, β-actin, Nestin and CD105 was significantly lower. The data showed that long exposure period to NaOCl has detrimental effects on the survival of SHEDs.

Iodoform (PI) and calcium hydroxide- based pastes (PH) are used in pulpectomy of primary teeth, complementing the antimicrobial action of mechanical chemical preparation and promoting tissue repair. These pastes take up and stay for a period of time along the root canal by contacting the periapical region and surrounding tissue, making it the aim of this study to quantify the relative expression of toxicity genes expressed by pastes, evaluating the biocompatibility these materials. By RT-PCR assay, were analyzed cellular mechanisms induced or generated by extracts of endodontic pastes: PI with Nebacetin (PNEB); with Maxitrol (PMAX); chlorhexidine (PCHX); and Guedes Pinto (GP); and PH: Calen® thickened with zinc oxide ( Calen®/ZO); and calcium hydroxide paste with Chlorhexidine (PHCHX); Ultracal®XS, using mononuclear cells from human peripheral blood (PBMC) , for to quantify the gene expression on the cytotoxic mediators: Granzyme A, Granzyme B, Granulysin and Perforin. Prior to gene expression, to analyze aspects of cell viability assays were performed - MTT, LDH and Capases Activity. The results were analyzed by Kolmogorov-Smirnov, one-way ANOVA and Tukey test, with p<0.05. The PNEB was the only one among all evaluated pastes that expressed all cytotoxic mediators above mentioned (p<0.05). Reviewed in cell viability, increased by PNEB Caspases 1 and 8 (p<0.05); The PGP increased Caspases 1, 3 and 8 (p<0.05); The PCHX decreased cell viability MTT and LDH, and exhibit increased activity of all Caspases (p<0.05). In PH, Ultracal®XS only presented significant concentration values for Caspase 1 , 3 and 8 (p<0.05). Despite the PNEB have presented high relative gene expression of all cytotoxic mediators analyzed, not caused decrease in cell viability, not causing increased activity of Caspase 3 (effector of apoptosis), demonstrating biocompatibility. Among the PI that showed better biocompatibility under the aspect of cytotoxicity were the PGP and PMAX. The material with cytotoxic potential observed in this experiment was the PCHX as dramatically decreased cell viability, confirmed the two tests and supported by high activity of all the analyzed Caspases, and also due to cell death, the inability of gene expression. All pH played citocompatível behavior, according to tests performed in the light of molecular biology. / Pastas iodoformadas (PI) e a base de hidróxido de cálcio (PH) são empregadas na pulpectomia de dentes decíduos, complementando a ação antimicrobiana do preparo químico mecânico e favorecendo o reparo tecidual. Essas pastas ocupam e permanecem por um período de tempo ao longo do canal radicular, entrando em contato com a região periapical e tecidos adjacentes, tornando-se o objetivo deste estudo quantificar a expressão relativa de genes de toxicidade manifestados pelas pastas, de forma a avaliar a biocompatibilidade das mesmas. Pelo ensaio RT-PCR, foram analisados mecanismos celulares induzidos ou gerados por extratos das pastas endodônticas: PI com Nebacetin (PNEB); com Maxitrol (PMAX); com Clorexidina (PCHX); e Guedes-Pinto (PGP); e PH: Calen® espessada com Oxido de Zinco (Calen®/ZOE); e pasta de Hidróxido de Cálcio com Clorexidina (PHCHX); Ultracal®XS, frente às células mononucleares do sangue periférico humano (CMSP), de forma a quantificar a expressão gênica relativa dos mediadores citotóxicos: Granzima A, Granzima B, Granulisina e Perforina. Previamente à expressão gênica, para analisar aspectos da viabilidade celular, foram realizados ensaios MTT, LDH e atividade de Caspases. Após teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov, os resultados foram tratados por ANOVA de uma via e Tukey, com p<0,05. A PNEB foi a única pasta que expressou todos os mediadores citotóxicos avaliados (p<0.05). Com relação à viabilidade celular, a PNEB apresentou aumento de Caspases 1 e 8 (p<0.05); A PGP levou ao aumento das Caspases 1, 3 e 8 (p<0.05); A PCHX diminuiu a viabilidade celular no MTT e LDH, além de apresentar aumento da atividade de todas as Caspases (p<0.05). Nas PH, somente a Ultracal®XS apresentou valores de concentração significativos para Caspase 1, 3 e 8 (p<0.05). Apesar da PNEB ter apresentado elevada expressão gênica relativa de todos os mediadores citotóxicos analisados, não causou diminuição da viabilidade celular, não ocasionando aumento da atividade da Caspase 3 (efetora da apoptose), demonstrando biocompatibilidade. Dentre as PI que apresentaram melhor biocompatibilidade sob o aspecto de citotoxicidade foram a PGP e PMAX. O material com potencial citotóxico verificado neste experimento foi a PCHX, pois diminuiu drasticamente a viabilidade celular, confirmada em dois ensaios e corroborada pela alta atividade de todas as Caspases analisadas, e ainda, devido à morte celular, a incapacidade de expressão gênica. Todas as PH desempenharam comportamento citocompatível, de acordo com os ensaios realizados e à luz da biologia molecular.