Orientador: Maria da Consolação Fonseca de Albuquerque / Resumo: Os materiais de construção tornaram-se o foco de pesquisas na construção civil, visto que a sustentabilidade no setor tem sido amplamente solicitada. Este trabalho teve como foco resíduos com uma característica bastante peculiar: materiais que tinham em sua composição resíduos tóxicos. Portanto, foi acrescida torta de pinhão manso no concreto e na argamassa, e óleo lubrificante em argamassa, pois ambos têm em sua composição resíduos nocivos. A avaliação da torta de pinhão manso passou pelos testes tradicionais de resistência mecânica e, além disso, tanto a torta como o óleo lubrificante tiveram o comportamento das argamassas perante as toxinas estudado, isto é, se a toxina se tornava estável dentro da argamassa ou não. A conclusão é que a matriz cimentícea consegue reter grande parcela das toxinas presentes em seu interior, impedindo-as de contaminar o ambiente ao redor. / Mestre

Submitted by Marcelo Santana null (marcelo01088@aluno.feis.unesp.br) on 2017-04-07T13:11:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcelo Santana.pdf: 1950311 bytes, checksum: 7f25d998dd2a0fbc5146691ae09a472b (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T14:04:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santana_m_me_ilha.pdf: 1950311 bytes, checksum: 7f25d998dd2a0fbc5146691ae09a472b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T14:04:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santana_m_me_ilha.pdf: 1950311 bytes, checksum: 7f25d998dd2a0fbc5146691ae09a472b (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os materiais de construção tornaram-se o foco de pesquisas na construção civil, visto que a sustentabilidade no setor tem sido amplamente solicitada. Este trabalho teve como foco resíduos com uma característica bastante peculiar: materiais que tinham em sua composição resíduos tóxicos. Portanto, foi acrescida torta de pinhão manso no concreto e na argamassa, e óleo lubrificante em argamassa, pois ambos têm em sua composição resíduos nocivos. A avaliação da torta de pinhão manso passou pelos testes tradicionais de resistência mecânica e, além disso, tanto a torta como o óleo lubrificante tiveram o comportamento das argamassas perante as toxinas estudado, isto é, se a toxina se tornava estável dentro da argamassa ou não. A conclusão é que a matriz cimentícea consegue reter grande parcela das toxinas presentes em seu interior, impedindo-as de contaminar o ambiente ao redor. / Construction materials have become the focus of research in construction, since a support is not sector has been widely requested. This work focused on waste with a very peculiar characteristic: materials that have in their composition the toxic waste. Therefore, a jatropha cake was made in the concrete and a mortar, and a lubricating oil in mortar, since both have in their composition harmful residues. The evaluation of the Jatropha curcas seed underwent mechanical strength tests and furthermore, as much as a seed as the lubricating oil has the behavior of the mortars before as studied toxins, that is, is a toxin became stable within the mortar or not . The conclusion is that the cement matrix manages to retain a large portion of the toxins present in its interior, preventing it from contaminating the surrounding environment.

COSTA, Helen Paula Silva da. Caracterização estrutural e cinética e ação antimicrobiana de uma albumina 2s com atividade inibitória de tripsina purificada da torta de Jatropha curcas L. 2016. 144 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2017-04-05T20:45:54Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_hpscosta.pdf: 5240795 bytes, checksum: b867535c4f21e417838f3fe11ec55fcc (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-04-05T21:25:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_hpscosta.pdf: 5240795 bytes, checksum: b867535c4f21e417838f3fe11ec55fcc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T21:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_hpscosta.pdf: 5240795 bytes, checksum: b867535c4f21e417838f3fe11ec55fcc (MD5) Previous issue date: 2016 / The number of diseases caused by antibiotic-resistant bacteria has increased, amongst them those occasioned by Staphylococcus aureus. In addition to bacterial infections, there are parasitic diseases, such as toxoplasmosis, caused by Toxoplasma gondii. Such scenarios support the search for new agents that are active against most pathogens. Recently a glycoprotein with trypsin inhibitory activity and action against human bacterial pathogens, named JcTI-I, was previously purified to homogeneity by our research group from Jatropha curcas cake. The goals of this present study were to proceed with the structural and kinetic characterization of JcTI-I and to assess its potential activity against human pathogenic bacteria, with emphasis on the mode of antibacterial action and activity against T. gondii. Mass spectrometry analysis showed that JcTI-I is a protein of 10,252 kDa composed of two polypeptide chains of 7,133 and 3,124 kDa, linked by disulfide bonds. Primary sequence data obtained by Edman degradation and mass spectrometry allowed to classify JcTI-I as a 2S albumin. In silico analysis permitted to identify the JcTI-I precursor-coding genes (Jcr4S00619.70) in the genome of J. curcas. The precursor (pro-albumin) contains a signal peptide of 39 amino acid residues at the N-terminus, eight conserved cysteine residues, multiple sites of glycosylation and one phosphorylation site. JcTI-I is mainly composed of α-helices (70%) stabilized by four disulfide bonds and disordered structures. In silico modelling and SAXS analysis suggest an extended structure with long tail and globular region for JcTI-I. Moreover, JcTI-I has high affinity for trypsin (Ki = 2 x 10-11 M), which is inhibited by a non-competitive mechanism, and maintained, at least partially, in the presence of dithiothreitol (0.1 M, 60 minutes). JcTI-I inhibited S. aureus and S. choleraesuis growth (MIC of 5 µg protein/mL), probably due to its physical interaction with the bacteria, which might have increased the cell surface permeability to this protein that, after internalization to intracellular environment, inactivated proteases and bound to DNA. It is possible that JcTI-I has caused bacterial DNA degradation due to its desoxirribonucleasica activity detected in vitro. Furthermore, JcTI-I was also toxic to T. gondii decreasing the numbers of infected Vero cells and intracellular tachyzoites. In addition, T. gondii treated with JcTI-I presented changes in their internal pelicular and cellular membranes and increased formation of cytoplasm vesicles. Importantly, JcTI-I did not show cytotoxicity to Vero cells, lysis of human red blood cells, and acute toxicity (lethality) to mice. The data demonstrate that JcTI-I has potential to be used as a new antimicrobial agent, adding value to J. curcas cake. / O número de doenças causadas por bactérias resistentes a antibióticos tem aumentado, dentre elas aquelas ocasionadas por Staphylococcus aureus. Além das infecções bacterianas, há aquelas oriundas da ação de protozoários, como a toxoplasmose, causada pelo Toxoplasma gondii. Tais fatos justificam a busca de novos agentes ativos contra patógenos causadores de infecções. Da torta de Jatropha curcas (Pinhão-manso), uma glicoproteína com atividade inibitória de tripsina e ação contra bactérias patogênicas ao homem, denominada JcTI-I, foi previamente isolada por nosso grupo de pesquisa. Os objetivos desse trabalho foram prosseguir com a caracterização estrutural e cinética do JcTI-I e avaliar sua atividade contra patógenos causadores de infecção no homem, com ênfase no modo de ação antibacteriana e atividade contra T. gondii. Espectrometria de massas revelou que JcTI-I é uma proteína de 10,252 kDa, formada por duas cadeias polipeptídicas de 7,133 e 3,124 kDa, unidas por ligações dissulfeto. Dados da sequência primária gerados por degradação de Edman e espectrometria de massas permitiram a classificação do JcTI-I como uma albumina 2S. Análises in silico possibilitaram a identificação de genes codificadores do precursor (Jcr4S00619.70) do JcTI-I no genoma de J. curcas. O precursor (pró-albumina) contém um peptídeo sinal de 39 resíduos de aminoácidos na extremidade N-terminal, oito cisteínas conservadas, vários sítios de glicosilação e um sítio de fosforilação. JcTI-I é composto principalmente por α-hélices (70%), estabilizadas por quatro ligações dissulfeto, e estruturas não ordenadas. Modelagem in silico e análise por SAXS sugerem uma estrutura estendida, com longa cauda e região globular, para o JcTI-I. Essa proteína possui alta afinidade pela tripsina (Ki = 2 x 10-11M), inibindo sua ação proteolítica por mecanismo do tipo não competitivo, o qual é mantida, parcialmente, mesmo na presença do ditiotreitol (0,1 M, 60 minutos). Além disso, JcTI-I inibiu o crescimento das bactérias S. aureus e Salmonella enterica (MIC de 5 µg proteína/mL), provavelmente em decorrência de sua ligação à célula bacteriana, causando aumento da permeabilidade da superfície celular. Isso deve ter possibilitado o acesso do JcTI-I para o meio intracelular e a consequente inativação das proteases e ligação ao DNA bacterianos. É possível que JcTI-I tenha acarretado degradação do DNA bacteriano, dada à sua atividade desoxirribonucleásica detectada in vitro. JcTI-I também teve ação deletéria sobre T. gondii, causando redução nos números de células Vero infectadas com o parasita e de taquizoítos intracelulares. Adicionalmente, JcTI-I promoveu alterações nas membranas pelicular interna e plasmática do protozoário, além da formação de vesículas no seu citoplasma. Digno de nota nesse contexto, é que o JcTI-I não causou citotoxicidade para célula Vero, lise de hemácias humanas e toxicidade aguda (letalidade) em camundongos. Os dados demonstram o potencial de uso do JcTI-I como um novo agente antimicrobiano, agregando valor à torta de J. curcas.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O resÃduo (torta) obtido apÃs a extraÃÃo de Ãleo das sementes de pinhÃo-manso (Jatropha curcas) para a produÃÃo de biodiesel à tÃxico. Apesar dos entraves relacionados à sua utilizaÃÃo na alimentaÃÃo animal, existem evidÃncias de que esse resÃduo tem grande potencial de utilizaÃÃo biotecnolÃgica graÃas ao arsenal de molÃculas que o constitui. Assim, o presente trabalho teve como foco a purificaÃÃo e caracterizaÃÃo de um inibidor de tripsina da torta de pinhÃo-manso, vislumbrando um maior aproveitamento desse resÃduo. A anÃlise da composiÃÃo centesimal revelou ser a torta de pinhÃo-manso composta principalmente por proteÃnas (37,21%), fibras (34,26%) e lipÃdios (19,16%). O extrato bruto obtido a partir da torta sob condiÃÃo alcalina (tampÃo borato de sÃdio 100 mM, pH 10,0) mostrou a presenÃa de lectina (319,76 UH/gF), inibidor de papaÃna (1.287,38 UI/gF), protease (2,69 UA/gF) e, principalmente, de inibidor de tripsina (1.649,7 UI/gF). O inibidor de tripsina, denominado JcTI, foi purificado do extrato bruto por fracionamento com Ãcido tricloroacÃtico (2,5%) seguido de cromatografias de afinidade (tripsina-sepharose-4B) e de exclusÃo molecular (sephacryl S-200). JcTI à uma glicoproteÃna (6,4% de carboidratos) com massa molecular na faixa de 20-21 kDa, pI de 6,6, sequÃncia NH2-terminal (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) exibindo similaridade em torno de 60% com albuminas vegetais e altamente estÃvel ao calor, salinidade e pH. JcTI (500 Âg/mL) retardou o crescimento de vÃrios fungos fitopatogÃnicos de importÃncia agrÃcola, incluindo Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum e Fusarium solani. Esse inibidor tambÃm mostrou atividade antibacteriana frente a bactÃrias patogÃnicas ao homem, tais como Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis e Staphylococcus aureus, com concentraÃÃo inibitÃria mÃnima inferior a 5 Âg/mL. Os resultados obtidos demonstram o potencial do JcTI para aplicaÃÃo biotecnolÃgica como uma nova proteÃna de defesa contra fungos fitopatogÃnicos e bactÃrias patogÃnicas ao homem. / The residue (cake) obtained after the extraction of oil from jatropha (Jatropha curcas) seeds for biodiesel production is toxic. Despite of the obstacles related to its use in the animal feed, there are evidences that this residue has great potential for biotechnology applications due to its arsenal of molecules. Thus, the present study aimed to purify and characterize a trypsin inhibitor from jatropha cake, in order to make a better use of this residue. The centesimal composition analysis showed to be the jatropha cake mainly composed of proteins (37.21%), fiber (34.26%) and lipids (19.16%). The crude extract obtained from the jatropha cake under alkaline condition (100 mM sodium borate buffer, pH 10.0) showed the presence of lectin (319.76 HU/gF), papain inhibitor (1,287.38 IU/gF), protease (2.69 AU/gF) and, especially, trypsin inhibitor (1,649.7 IU/gF). The trypsin inhibitor, named JcTI, was purified by fractionation of the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity chromatography (trypsin-sepharose-4B) and molecular exclusion (sephacryl S-200). JcTI is a glycoprotein (6.4% carbohydrates) with molecular mass in the range of 20-21 kDa, pI of 6.6, NH2-terminal sequence (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) showing identity around 60% with plant albumins and highly stable to heat, pH and salinity. JcTI (500 Âg/mL) slowed the growth of important phytopthogenic fungi, including Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum and Fusarium solani. This inhibitor also presented antibacterial activity against human pathogenic bacteria such as Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis and Staphylococcus aureus, with minimum inhibitory concentration less than 5 Âg/mL. The results demonstrate the potential of JcTI for biotechnological application as a new defense protein against phytopthogenic fungi and human pathogenic bacteria.

COSTA, Helen Paula Silva da. Purificação e caracterização de um inibidor de tripsina com atividade antimicrobiana da torta de pinhão-manso (Jatropha curcas L.). 118 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-20T13:42:27Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-23T12:00:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T12:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) Previous issue date: 2012 / The residue (cake) obtained after the extraction of oil from jatropha (Jatropha curcas) seeds for biodiesel production is toxic. Despite of the obstacles related to its use in the animal feed, there are evidences that this residue has great potential for biotechnology applications due to its arsenal of molecules. Thus, the present study aimed to purify and characterize a trypsin inhibitor from jatropha cake, in order to make a better use of this residue. The centesimal composition analysis showed to be the jatropha cake mainly composed of proteins (37.21%), fiber (34.26%) and lipids (19.16%). The crude extract obtained from the jatropha cake under alkaline condition (100 mM sodium borate buffer, pH 10.0) showed the presence of lectin (319.76 HU/gF), papain inhibitor (1,287.38 IU/gF), protease (2.69 AU/gF) and, especially, trypsin inhibitor (1,649.7 IU/gF). The trypsin inhibitor, named JcTI, was purified by fractionation of the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity chromatography (trypsin-sepharose-4B) and molecular exclusion (sephacryl S-200). JcTI is a glycoprotein (6.4% carbohydrates) with molecular mass in the range of 20-21 kDa, pI of 6.6, NH2-terminal sequence (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) showing identity around 60% with plant albumins and highly stable to heat, pH and salinity. JcTI (500 µg/mL) slowed the growth of important phytopthogenic fungi, including Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum and Fusarium solani. This inhibitor also presented antibacterial activity against human pathogenic bacteria such as Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis and Staphylococcus aureus, with minimum inhibitory concentration less than 5 µg/mL. The results demonstrate the potential of JcTI for biotechnological application as a new defense protein against phytopthogenic fungi and human pathogenic bacteria. / O resíduo (torta) obtido após a extração de óleo das sementes de pinhão-manso (Jatropha curcas) para a produção de biodiesel é tóxico. Apesar dos entraves relacionados à sua utilização na alimentação animal, existem evidências de que esse resíduo tem grande potencial de utilização biotecnológica graças ao arsenal de moléculas que o constitui. Assim, o presente trabalho teve como foco a purificação e caracterização de um inibidor de tripsina da torta de pinhão-manso, vislumbrando um maior aproveitamento desse resíduo. A análise da composição centesimal revelou ser a torta de pinhão-manso composta principalmente por proteínas (37,21%), fibras (34,26%) e lipídios (19,16%). O extrato bruto obtido a partir da torta sob condição alcalina (tampão borato de sódio 100 mM, pH 10,0) mostrou a presença de lectina (319,76 UH/gF), inibidor de papaína (1.287,38 UI/gF), protease (2,69 UA/gF) e, principalmente, de inibidor de tripsina (1.649,7 UI/gF). O inibidor de tripsina, denominado JcTI, foi purificado do extrato bruto por fracionamento com ácido tricloroacético (2,5%) seguido de cromatografias de afinidade (tripsina-sepharose-4B) e de exclusão molecular (sephacryl S-200). JcTI é uma glicoproteína (6,4% de carboidratos) com massa molecular na faixa de 20-21 kDa, pI de 6,6, sequência NH2-terminal (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) exibindo similaridade em torno de 60% com albuminas vegetais e altamente estável ao calor, salinidade e pH. JcTI (500 µg/mL) retardou o crescimento de vários fungos fitopatogênicos de importância agrícola, incluindo Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum e Fusarium solani. Esse inibidor também mostrou atividade antibacteriana frente a bactérias patogênicas ao homem, tais como Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis e Staphylococcus aureus, com concentração inibitória mínima inferior a 5 µg/mL. Os resultados obtidos demonstram o potencial do JcTI para aplicação biotecnológica como uma nova proteína de defesa contra fungos fitopatogênicos e bactérias patogênicas ao homem.