Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-08T13:25:55Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2508821 bytes, checksum: 881e48cd3cb91d680602af2fa3e62a64 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T13:25:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2508821 bytes, checksum: 881e48cd3cb91d680602af2fa3e62a64 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Cancer is characterized by uncontrolled proliferation of abnormal cells. The high mortality rate associated with the disease, coupled to severe side effects caused by conventional treatments and the increasing development of resistance, has conducted to the demand for effective therapies with less toxicity. In this context, it is of great relevance the synthesis of synthetic products with structures based on natural products, which continue to be the main source of new medicines. In order to increase the effect and minimize the toxicity of piperine, an amide alkaloid with antitumor activity, it was obtained novel synthetic analogues, among them the 2-oxo-2-(4-ethylamine)-piperinoato acetate (HE-03). This study aimed to investigate the antitumor activity and toxicity of HE-03. The data demonstrate that HE-03 induced a small percentage of hemolysis to the highest concentration tested (1250 mg/mL), which suggests low toxicity to erythrocytes. In the preclinical acute toxicity study, the treatment with doses of 300 mg/kg and 2000 mg/kg of HE-03 in mice caused no deaths, and the changes observed in the CNS and ASN level were transient (30 min.). The LD50 value was estimated to be about 5000 mg/kg. HE-03 (6.25, 12.5 and 25 mg/kg) showed significant antitumor activity in vivo in ascites Ehrlich carcinoma model, especially considering the viability parameters and total cell. Its effect in doses of 12.5 and 25 mg/kg was similar to the one observed for the anticancer drug 5-fluorouracil (25 mg/kg). Cell cycle profile analysis showed that treatment with HE-03 (12.5 mg/kg) induced the appearance of sub-G1 peak, which was accompanied by a reduction in the number of cells in G0/G1 and S phases, suggesting induction of cell death by apoptosis. The treatment with HE-03 (12.5 mg/kg) significantly reduced peritumoral microvessels, which suggests anti-angiogenic activity. The toxicological analyzes indicate that the nine days of treatment with HE-03 at all doses, induced a significant increase in serum aspartate aminotransferase (AST) and urea. However, histopathology of the liver and kidneys showed that HE-03 does not induce changes of clinical importance. Leukopenia, accompanied by neutropenia, observed in animals treated with 25 mg/kg of HE-03 is one of the major side effects associated with cancer therapy. Futhermore, HE-03 did not induce an increase in the number of micronucleated erythrocytes in the micronucleus assay in peripheral blood, which indicates lack of genotoxicity in the evaluated conditions. Therefore, it is possible to infer that the synthetic analogue of studied piperine has potent antitumor activity in vivo, with mechanism that possibly involves the induction of apoptosis and antiangiogenic effects, as well as low toxicity. / O câncer caracteriza-se pela proliferação descontrolada de células. A elevada taxa de mortalidade associada à doença, aliada aos graves efeitos indesejáveis causados pelos tratamentos convencionais e ao crescente desenvolvimento de resistência, tem impulsionado a procura por terapias mais eficazes com menor toxicidade. Nesse contexto, é de grande relevância a síntese de produtos sintéticos com estruturas baseadas em produtos naturais, que continuam a ser a principal fonte de novos medicamentos. Com o intuito de potencializar o efeito e minimizar a toxicidade da piperina, um alcaloide amida com atividade antitumoral, foram obtidos análogos sintéticos inéditos, dentre estes o 2-oxo-2-(4-etilamina)-piperinoato de etila (HE-03). Esse trabalho objetivou investigar a atividade antitumoral, bem como a toxicidade do HE-03. Os dados demonstram que HE-03 induziu pequeno percentual de hemólise até a maior concentração testada (1250 μg/mL), o que sugere baixa toxicidade nos eritrócitos. No ensaio de toxicidade pré-clínica aguda, o tratamento com as doses de 300 mg/kg e 2000 mg/kg do HE-03 não provocou mortes nos camundongos, e as alterações observadas em nível de SNC e SNA foram e de curta duração (30 min.) e sem significância no tempo observado. O valor da DL50 foi estimado em torno de 5000 mg/kg. HE-03 (6,25; 12,5 e 25 mg/kg) mostrou significante atividade antitumoral in vivo em modelo de carcinoma ascítico de Ehrlich, considerando especialmente os parâmetros viabilidade e total celular. Seu efeito nas doses de 12,5 e 25 mg/kg foi semelhante ao observado para o antineoplásico 5-fluorouracil (25 mg/kg). Na análise do perfil do ciclo celular, foi observado que o tratamento com HE-03 (12,5 mg/kg) induziu o aparecimento do pico sub-G1, que foi acompanhado por uma redução na quantidade de células nas fases G0/G1 e S, o que sugere indução de morte celular por apoptose. O tratamento com HE-03 (12,5 mg/kg) reduziu significativamente a microdensidade vascular peritumoral, o que sugere atividade antiangiogênica. As análises toxicológicas indicam que o tratamento de nove dias com HE-03, em todas as doses, induziu aumento significativo de aspartato aminotransferase (AST) e de ureia. Todavia, a histopatologia do fígado e dos rins mostrou que HE-03 não induz alterações de importância clínica. A leucopenia, acompanhada de neutropenia, observadas nos animais tratados com 25 mg/kg de HE-03 é um dos principais efeitos indesejáveis associados a terapia do câncer. Ainda, HE-03 não induziu aumento no número de eritrócitos micronucleados, no ensaio do micronúcleo em sangue periférico, o que indica ausência de genotoxicidade, nas condições avaliadas. Portanto, é possível inferir que o análogo sintético da piperina estudado apresenta potente atividade antitumoral in vivo, com mecanismo que envolve possivelmente a indução de apoptose e efeitos antiangiogênicos, bem como, baixa toxicidade.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-09-11T11:28:08Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1135288 bytes, checksum: d807f92b4e8e4ae03efbf3563f40f411 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-11T11:28:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1135288 bytes, checksum: d807f92b4e8e4ae03efbf3563f40f411 (MD5) Previous issue date: 2015-02-28 / Medicinal plants are used in the treatment of various diseases, often indiscriminately, without prior knowledge of possible toxic effects due to their use. In this context, it is essential to carry out toxicological studies of medicinal plants. Zornia brasiliensis (Fabaceae), popularly known as "urinária", "urinana" and "carrapicho", is used by the population as a diuretic. Previous studies reported antioxidant activity and cytotoxicity in brine shrimp larvae. As there are no reports in the literature of its possible in vivo toxicity, the assessment of the toxicological profile is essential for safe use by the population as well as to support the conduct of clinical trials and subsequently the production of an herbal formulation. Thus, this study aimed to evaluate the preclinical toxicity of alcoholic extract of aerial parts of Zornia brasiliensis (EHZB). The value of HC50 obtained in hemolysis assay was 1.954 (1840-2074) / mL, demonstrating that the extract has low toxicity in mouse erythrocytes. During the preclinical acute toxicity test, there were no deaths nor behavioral changes in mice treated with 2000 mg / kg EHZB. There was a significant decrease in feed intake in male animals compared to the control group, however, there was no significant change in weight gain of animals, which showed weight regain after the treatment. No significant difference was observed in the organs indexes (heart, liver, kidneys, spleen and thymus) after acute treatment with EHZB. As regards the evaluation of preclinical repeated dose toxicity (28 days), death was no evidenced in animals treated with the EHZB (250, 500 and 1000 mg / kg) as well, there were no significant changes in weight gain and body temperature of the animals. The EHZB administration resulted in a significant increase in AST and ALT activities in male animals (1000 mg / kg) and in female animals treated with all doses there was increased ALT activity, suggesting the induction of hepatic toxicity by the extract. However, no significant clinical finding was observed in liver histopathology, suggesting that these changes were minor and not damaged the tissue structure. Changes in hematological parameters and exploratory activity were demonstrated, especially with the higher dose of the extract. The results did not show any change in the index of the organs, nor significant changes were revealed in the histopathological study in liver and kidneys. Moreover, EHZB showed no genotoxic activity in vivo, evaluated by micronucleus test in peripheral blood (2000 mg / kg). The data shows that EHZB has low pre-clinical toxicity. / As plantas medicinais são utilizadas no tratamento de diversas doenças, muitas vezes, de forma indiscriminada, sem o conhecimento prévio de possíveis efeitos tóxicos decorrentes de seu uso. Nesse contexto, torna-se imprescindível a realização de estudos toxicológicos de plantas medicinais. Zornia brasiliensis (Fabaceae), popularmente conhecida como "urinária", "urinana" e "carrapicho", é usada pela população como diurético. Estudos com a espécie relataram atividade antioxidante e citotóxica em larvas de Artemia salina. Como não há relatos na literatura de sua possível toxicidade in vivo, a avaliação do perfil toxicológico é essencial para o uso seguro pela população, bem como para subsidiar a realização de ensaios clínicos e posteriormente a produção de um medicamento fitoterápico. Desse modo, o presente estudo objetivou avaliar a toxicidade pré-clínica do extrato hidroalcoólico das partes aéreas de Zornia brasiliensis (EHZB). O valor de CH50 obtido no ensaio de hemólise foi 1.954 (1.840 - 2.074) μg/mL, demostrando que o extrato apresenta baixa toxicidade em eritrócitos de camundongos. Durante o ensaio de toxicidade pré-clínica aguda, não ocorreram mortes nem alterações comportamentais nos camundongos tratados com 2.000 mg/kg do EHZB. Houve diminuição significativa no consumo de ração nos animais machos em comparação ao grupo controle, entretanto, não houve alteração significativa na evolução ponderal dos animais, os quais apresentaram a recuperação do peso ao final do tratamento. Nenhuma diferença significativa foi observada nos índices dos órgãos (coração, fígado, rins, baço e timo) após tratamento agudo com EHZB. No tocante à avaliação da toxicidade pré-clínica de doses repetidas (28 dias), não foram evidenciadas mortes nos animais tratados com o EHZB (250, 500 e 1000 mg/kg) como também, não foram observadas alterações significativas na evolução ponderal e temperatura corporal desses animais. A administração de EHZB resultou em um aumento significativo da atividade de AST e ALT nos animais machos (1000 mg/kg), e nos animais fêmeas tratados com todas as doses houve aumento da ALT, sugerindo a indução de toxicidade hepática pelo extrato. No entanto, nenhum achado clínico importante foi observado na histopatologia do fígado, sugerindo que essas alterações são leves e não danificaram a estrutura do tecido. Alterações nos parâmetros hematológicos e na atividade exploratória foram demonstradas, especialmente, com a maior dose do extrato. Os resultados não evidenciaram qualquer alteração no índice dos órgãos, nem tampouco, foram reveladas alterações significativas no estudo histopatológico realizado em fígado e rins. Ainda, EHZB não apresentou atividade genotóxica in vivo no ensaio de micronúcleo em sangue periférico (2000 mg/kg). Os dados permitem concluir que EHZB apresenta baixa toxicidade pré-clínica.

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