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Avaliação da exposição aguda e sub-letal ao glifosato (N-fosfometil-glicina) e ao AMPA (ácido amino-metil-fosfônico) em brânquias e fígado de Poecilia reticulata com o emprego de biomarcadores moleculares e morfológicos / Evaluation of acute and sub-lethal exposure to glyphosate (N-phosphomethyl-glycine) and to AMPA (amino-methyl-phosphonic acid) in gills and liver of Poecilia reticulata using molecular and morphological biomarkers

Antunes, Adriana Maria 15 February 2013 (has links)
Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-05-29T19:20:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Adriana Maria Antunes - 2013.pdf: 2326786 bytes, checksum: ede25936adeb0e29963d21c5697c4b18 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-30T10:32:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Adriana Maria Antunes - 2013.pdf: 2326786 bytes, checksum: ede25936adeb0e29963d21c5697c4b18 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-30T10:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Adriana Maria Antunes - 2013.pdf: 2326786 bytes, checksum: ede25936adeb0e29963d21c5697c4b18 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-02-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The present research aimed to investigate the acute toxicity of glyphosate (Nphosphomethyl-glycine), the active ingredient of Roundup®, as well as of aminomethylphosphonic acid (AMPA), its main degradation product, in the teleost fish Poecilia reticulata, commonly known as guppies. Thus, were performed tests Lethal Concentration mean (LC50) and behavioral, histopathology and proteomics analysis. Male and female P. reticulata presented median lethal concentration (LC50) at 96h the values of 68.78 and 70.87 mg/L for glyphosate and 180.00 and 164.32 mg/L for AMPA, respectively, characterizing them as practically non toxic compounds to guppies. However, the results of behavioral analyses showed that both products generate stressing situations to the fish, causing behavioral changes such shock against the tank walls, hypoactivity, irregular swimming, swimming on the surface of water, darkening of the body, aggressiveness, and lethargy. Histopathological and morphometric analyses of liver and gill of guppies exposed to sublethal concentrations of glyphosate (35mg/L) and AMPA (82 mg/L) indicated that both organs were affected . The gills of fish exposed to the tested products presented higher reaction rates to progressive changes, such as proliferation of the interlamellar epithelium and partial and total fusion of secondary lamellae. Liver presented higher reaction rates to regressive changes, such as steatosis, pyknotic nuclei, and necrosis. The proteomic analysis showed that Glyphosate induces differential liver proteins in P. reticulata. The image analysis allowed measuring 225 spots in the control group and 180 spots in the group exposed to Glyphosate. Of this total, 88 spots were exclusive to the control group and 43 spots were exclusive of the treated group. Of the 137 spots matched between control and treated groups 13 were down regulated and 8 were up regulated due to sublethal exposure to Glyphosate. The behavioral, histopathological and proteomic changes observed indicated that, although considered to have low toxicity to animals in the guides that evaluate toxicity of chemicals, both glyphosate and AMPA promote that are deleterious to animal health, indicating the need to establish new parameters or modify concepts indicating the need to use several biomarkers, beyond assessing the mortality rate, to establish a more reliable criteria for toxicity parameters. / A presente pesquisa teve como objetivo investigar a toxicidade aguda do Glifosato (Nfosfometil-glicina), princípio ativo dos herbicidas Roundup, e do AMPA (ácido aminometil-fosfônico), seu principal produto de degradação. O sistema-modelo eleito para a investigação foi o teleósteo Poecilia reticulata. Realizaram-se testes de Concentração Letal média (CL50), análises comportamentais, histopatológicas e proteômicas. Os dados de mortalidade coletados durante o teste de Concentração Letal média (CL50) permitiram determinar os valores de 68,78 e 70,87 mg/L como CL50 do Glifosato e os valores de 180 e 164,32 mg/L como a CL50 do AMPA para machos e fêmeas de P. reticulata respectivamente. Tais valores caracterizam o Glifosato e o AMPA como praticamente não tóxico aos guarus em testes de toxicidade aguda. No entanto, os resultados das análises comportamentais também realizadas durante a CL50 mostraram que ambos os produtos testes são capazes de gerar situações de estresse aos peixes, causando alterações de comportamento como choques contra as paredes do aquário, hipoatividade, natação irregular, nado na superfície da água, escurecimento corporal, agressividade e letargia. As análises histopatológicas e morfométricas das brânquias e do fígado de guarus expostos a concentrações subletais de Glifosato (35µg/L) e de AMPA (82µg/L) indicaram que ambos os órgãos são alterados morfologicamente. As brânquias de peixes expostos aos produtos testes apresentaram maiores índices de reação para as alterações progressivas tais como aumento do epitélio interlamelar e fusão parcial e total das lamelas secundárias. O fígado por sua vez apresentou maiores índices de reação para as alterações regressivas como esteatose, núcleos picnóticos e necrose. As análises proteômicas mostraram que o Glifosato induz a expressão diferencial de proteínas hepáticas em P. reticulata. As análises das imagens dos géis permitiram mensurar 225 spots no grupo controle e 180 spots no grupo exposto a Glifosato. Desse total, 88 spots foram exclusivos do grupo controle e 43 spots foram exclusivos do grupo tratado. Dos 137 spots pareados entre os grupos controle e tratado 13 foram regulados negativamente e 8 foram regulados positivamente devido a exposição subletal ao Glifosato. As alterações encontradas indicam que o Glifosato e o AMPA, apesar de serem considerados poucos tóxicos por guias que avaliam a toxicidade de produtos químicos, são promotores de alterações deletérias para a saúde animal, indicando que há necessidade de estabelecimento de novos parâmetros ou mudança de conceitos, indicando a necessidade de utilizar vários biomarcadores, além da avaliação da taxa de mortalidade, para estabelecer um critério mais confiável para parâmetros de toxicidade.

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