Made available in DSpace on 2015-05-08T15:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1953357 bytes, checksum: 23121995cc00993662a60006ebf50ffe (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / From the stem bark of Xylopia langsdorfiana A. St.-Hil. & Tul. (Annonaceae), popularly known as pimenteria da terra , was isolated the diterpene ent-7-α-acetoxytrachyloban-18-oic acid (trachylobane-360) from which it was made a structural modification in which the acetoxy group was substituted by hydroxy generating the ent-7a-hidroxitrachyloban-18-oic acid (trachylobane-318). How there are some reports that show spasmolytic activity of some diterpenes, we aimed to investigate this activity on male rat aorta, rat uterus, guinea-pig trachea and ileum. On rat aorta and rat uterus nor trachylobane-360 or its derivative trachylobane-318 promoted significant spasmolytic effect until the concentration of 10-4 M. However on guinea-pig trachea, only the derivative relaxed this organ pre-contracted with carbachol (CCh) in the presence (EC50 = 3.3 0.9 ± 0.4 x 10-5 M) and absence (EC50 = 3.5 ± x 10-5 M) of functional epithelium, in a equipotent manner, suggesting a possible direct effect on tracheal smooth muscle and that the structural modification was essential for the relaxant effect in this organ. On the other hand, on guinea pig ileum, both diterpenes inhibited the phasic contractions induced by CCh or histamine. When the ileum was pre-contracted with KCl, CCh or histamine, the diterpenes induced relaxation and this effect is not by competitive antagonism of histamine, which was confirmed by the shifted of the cumulative curves to histamine to the right, in a non-parallel manner with reduction of the maximal effect (Emax). How the tonic component of contraction induced by KCl, CCh or histamine is maintained mainly by the opening of CaV, we hypothesized that the trachylobanes could be acting on these channels. The hypothesis was confirmed with the observation that both diterpenes antagonized the CaCl2-induced contractions in depolarizing Ca2+-free solution also relaxed the ileum pre-contracted by S-(-) Bay K 8644, an Cav1 agonist (EC50 = 3.5 ± 0.7 x 10-5 e 5.5 ± 0.3 x 10-5 M, respectively) confirming that the Cav subtype involved is the L-type (Cav1.2). To investigate the involvement of K+ channels to the effect of diterpenes as observed that the relaxation curves of trachylobane-360 (EC50 = 0.5 ± 0.04 x 10-4 M) and trachylobane-318 (EC50 = 2.0 ± 0.5 x 10-5 M) were significantly shifted to the right in the presence of 5 mM TEA+, a non-selective channel blocker for K+, suggesting involvement of these channels in the effects of diterpenes. The effect of trachylobane-360 appears to involve the subtypes of K+ channels (KATP, SKCa, Kv and BKCa,) since the CE50 have not changed in the presence of blockers of these channels. Interestingly the effect of trachylobane-318 appears to involve the activation of the channel type KATP, Kv and SKCa but not BKCa, evidenced by shifts from the relaxation curves to the right in the presence of K+ channels blockers as glibenclamide, apamin and 4-AP, respectively. These results all together suggest that the structural change was essential for these differentiated effects, but not for the involvement of the cyclic nucleotides pathway, since that in the presence of aminophylline the relaxation curves of trachylobanes were not modified. Both diterpenes reduce the intensity of fluorescence on intestinal myocytes of guinea-pig ileum stimulated by histamine which reflect reduction of [Ca2+]c, what would explain the spasmolytic effects of these diterpenes in functional level. / Das cascas do caule da Xylopia langsdorfiana A. St.-Hil. & Tul. (Annonaceae), conhecida popularmente como pimenteira da terra foi isolado o diterpeno ácido ent-7a-acetoxitraquiloban-18-óico (traquilobano-360) que sofreu uma modificação estrutural do grupo acetoxi pelo hidroxi gerando o ácido ent-7a-hidroxitraquiloban-18-óico (traquilobano-318). O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo comparativo de uma possível atividade espasmolítica dos diterpenos em aorta de rato, útero de rata, traquéia e íleo de cobaia. Foram realizadas medidas de contrações isotônicas e isométricas e do cálcio citosólico. Em aorta de rato e útero de rata nenhum dos diterpenos promoveu efeito espasmolítico significante até a concentração de 10-4 M. Já em traquéia de cobaia, apenas o traquilobano-318 relaxou este órgão pré-contraído com carbacol (CCh) na presença e na ausência de epitélio funcional, de maneira equipotente, sugerindo um possível efeito direto no músculo liso traqueal e que a modificação estrutural foi essencial para o efeito relaxante neste órgão. Por outro lado, em íleo de cobaia, ambos os diterpenos inibiram as contrações fásicas induzidas por CCh ou por histamina. No íleo pré-contraído com KCl, CCh ou histamina os diterpenos induziram relaxamento e este efeito não se dá por antagonismo competitivo dos receptores histaminérgicos, o que foi confirmado pelo desvio das curvas cumulativas induzidas pela histamina para a direita com redução dos Emax. Como o componente tônico da contração induzida por KCl, CCh ou histamina é mantido principalmente pela abertura dos CaV, hipotetizou-se que os traquilobanos poderiam estar agindo sobre estes canais. Hipótese confirmada com a observação de que ambos diterpenos antagonizaram as contrações induzidas por CaCl2 em meio despolarizante sem Ca2+ além de relaxarem o íleo pré-contraído por S-(-) Bay K 8644, agonista dos Cav1 (CE50 = 3,5 ± 0,7 x 10-5 e 5,5 ± 0,3 x 10-5 M, respectivamente) confirmando assim que o subtipo de Cav envolvido é o Cav1.2. Para investigar a participação dos canais para K+ no efeito dos diterpenos, observou-se que as curvas de relaxamento do traquilobano-360 (CE50 = 0,5 ± 0,04 x 10 -4 M) e do traquilobano-318 (CE50 = 2,0 ± 0,5 x 10-5 M) foram significantemente desviadas para a direita na presença de 5 mM de TEA+, bloqueador não seletivo dos canais para K+, sugerindo a participação destes canais no efeito dos diterpenos. O efeito do traquilobano-360 parece não envolver os subtipos de canais para K+ (KATP, SKCa, Kv e BKCa,) uma vez que o relaxamento não foi alterado na presença dos bloqueadores destes canais. Entretanto, o efeito do traquilobano-318 parece envolver a ativação dos canais do tipo KATP, SKCa e Kv mas não dos BKCa, fato este evidenciado pelos desvios da curva de relaxamento para direita na presença dos bloqueadores de canais para K+ como glibenclamida, apamina e 4-AP, respectivamente. Estes resultados sugerem que a modificação estrutural foi essencial para esses efeitos diferenciados, mas não para o envolvimento da via dos nucleotídios cíclicos, uma vez que na presença da aminofilina as curvas de relaxamento dos traquilobanos não foram alteradas. Os dois diterpenos reduziram a intensidade de fluorescência em miócitos intestinais de íleo de cobaia estimulados por histamina em conseqüência da redução da [Ca2+]c, o que explica os efeitos espasmolíticos destes diterpenos em nível funcional.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1953353 bytes, checksum: 1474e81c59d80eee12bba062027ce9d3 (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / From the stem bark of Xylopia langsdorfiana A. St.-Hil. & Tul. (Annonaceae), popularly known as pimenteria da terra , was isolated the diterpene ent-7-α-acetoxytrachyloban-18-oic acid (trachylobane-360) from which it was made a structural modification in which the acetoxy group was substituted by hydroxy generating the ent-7a-hidroxitrachyloban-18-oic acid (trachylobane-318). How there are some reports that show spasmolytic activity of some diterpenes, we aimed to investigate this activity on male rat aorta, rat uterus, guinea-pig trachea and ileum. On rat aorta and rat uterus nor trachylobane-360 or its derivative trachylobane-318 promoted significant spasmolytic effect until the concentration of 10-4 M. However on guinea-pig trachea, only the derivative relaxed this organ pre-contracted with carbachol (CCh) in the presence (EC50 = 3.3 0.9 ± 0.4 x 10-5 M) and absence (EC50 = 3.5 x 10-5 M) of functional epithelium, in a equipotent manner, suggesting a possible direct effect on tracheal smooth muscle and that the structural modification was essential for the relaxant effect in this organ. On the other hand, on guinea pig ileum, both diterpenes inhibited the phasic contractions induced by CCh or histamine. When the ileum was pre-contracted with KCl, CCh or histamine, the diterpenes induced relaxation and this effect is not by competitive antagonism of histamine, which was confirmed by the shifted of the cumulative curves to histamine to the right, in a non-parallel manner with reduction of the maximal effect (Emax). How the tonic component of contraction induced by KCl, CCh or histamine is maintained mainly by the opening of CaV, we hypothesized that the trachylobanes could be acting on these channels. The hypothesis was confirmed with the observation that both diterpenes antagonized the CaCl2-induced contractions in depolarizing Ca2+-free solution also relaxed the ileum pre-contracted by S-(-) Bay K 8644, an Cav1 agonist (EC50 = 3.5 ± 0.7 x 10-5 e 5.5 ± 0.3 x 10-5 M, respectively) confirming that the Cav subtype involved is the L-type (Cav1.2). To investigate the involvement of K+ channels to the effect of diterpenes as observed that the relaxation curves of trachylobane-360 (EC50 = 0.5 ± 0.04 x 10-4 M) and trachylobane-318 (EC50 = 2.0 ± 0.5 x 10-5 M) were significantly shifted to the right in the presence of 5 mM TEA+, a non-selective channel blocker for K+, suggesting involvement of these channels in the effects of diterpenes. The effect of trachylobane-360 appears to involve the subtypes of K+ channels (KATP, SKCa, Kv and BKCa,) since the CE50 have not changed in the presence of blockers of these channels. Interestingly the effect of trachylobane-318 appears to involve the activation of the channel type KATP, Kv and SKCa but not BKCa, evidenced by shifts from the relaxation curves to the right in the presence of K+ channels blockers as glibenclamide, apamin and 4-AP, respectively. These results all together suggest that the structural change was essential for these differentiated effects, but not for the involvement of the cyclic nucleotides pathway, since that in the presence of aminophylline the relaxation curves of trachylobanes were not modified. Both diterpenes reduce the intensity of fluorescence on intestinal myocytes of guinea-pig ileum stimulated by histamine which reflect reduction of [Ca2+]c, what would explain the spasmolytic effects of these diterpenes in functional level. / Das cascas do caule da Xylopia langsdorfiana A. St.-Hil. & Tul. (Annonaceae), conhecida popularmente como pimenteira da terra foi isolado o diterpeno ácido ent-7-acetoxitraquiloban-18-óico (traquilobano-360) que sofreu uma modificação estrutural do grupo acetoxi pelo hidroxi gerando o ácido ent-7a-hidroxitraquiloban-18-óico (traquilobano-318). O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo comparativo de uma possível atividade espasmolítica dos diterpenos em aorta de rato, útero de rata, traquéia e íleo de cobaia. Foram realizadas medidas de contrações isotônicas e isométricas e do cálcio citosólico. Em aorta de rato e útero de rata nenhum dos diterpenos promoveu efeito espasmolítico significante até a concentração de 10-4 M. Já em traquéia de cobaia, apenas o traquilobano-318 relaxou este órgão pré-contraído com carbacol (CCh) na presença e na ausência de epitélio funcional, de maneira equipotente, sugerindo um possível efeito direto no músculo liso traqueal e que a modificação estrutural foi essencial para o efeito relaxante neste órgão. Por outro lado, em íleo de cobaia, ambos os diterpenos inibiram as contrações fásicas induzidas por CCh ou por histamina. No íleo pré-contraído com KCl, CCh ou histamina os diterpenos induziram relaxamento e este efeito não se dá por antagonismo competitivo dos receptores histaminérgicos, o que foi confirmado pelo desvio das curvas cumulativas induzidas pela histamina para a direita com redução dos Emax. Como o componente tônico da contração induzida por KCl, CCh ou histamina é mantido principalmente pela abertura dos CaV, hipotetizou-se que os traquilobanos poderiam estar agindo sobre estes canais. Hipótese confirmada com a observação de que ambos diterpenos antagonizaram as contrações induzidas por CaCl2 em meio despolarizante sem Ca2+ além de relaxarem o íleo pré-contraído por S-(-) Bay K 8644, agonista dos Cav1 (CE50 = 3,5 ± 0,7 x 10-5 e 5,5 ± 0,3 x 10-5 M, respectivamente) confirmando assim que o subtipo de Cav envolvido é o Cav1.2. Para investigar a participação dos canais para K+ no efeito dos diterpenos, observou-se que as curvas de relaxamento do traquilobano-360 (CE50 = 0,5 ± 0,04 x 10 -4 M) e do traquilobano-318 (CE50 = 2,0 ± 0,5 x 10-5 M) foram significantemente desviadas para a direita na presença de 5 mM de TEA+, bloqueador não seletivo dos canais para K+, sugerindo a participação destes canais no efeito dos diterpenos. O efeito do traquilobano-360 parece não envolver os subtipos de canais para K+ (KATP, SKCa, Kv e BKCa,) uma vez que o relaxamento não foi alterado na presença dos bloqueadores destes canais. Entretanto, o efeito do traquilobano-318 parece envolver a ativação dos canais do tipo KATP, SKCa e Kv mas não dos BKCa, fato este evidenciado pelos desvios da curva de relaxamento para direita na presença dos bloqueadores de canais para K+ como glibenclamida, apamina e 4-AP, respectivamente. Estes resultados sugerem que a modificação estrutural foi essencial para esses efeitos diferenciados, mas não para o envolvimento da via dos nucleotídios cíclicos, uma vez que na presença da aminofilina as curvas de relaxamento dos traquilobanos não foram alteradas. Os dois diterpenos reduziram a intensidade de fluorescência em miócitos intestinais de íleo de cobaia estimulados por histamina em conseqüência da redução da [Ca2+]c, o que explica os efeitos espasmolíticos destes diterpenos em nível funcional.