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Transferibilidade e validação de marcadores microssatélites derivados de EST para duas espécies de Campomanesia (Myrtaceae) do Cerrado / Transferability and validation of EST - derived microsatellite markers for two species of Campomanesia (Myrtaceae) from the Savanna

Miranda, Elen Amoreli Gonçalves Cintra 02 June 2014 (has links)
Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-05-19T21:05:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elen Amoreli Gonçalves Cintra Miranda - 2014.pdf: 2511663 bytes, checksum: 82dcd84be188d0a4232f300033b12581 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-20T14:05:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Elen Amoreli Gonçalves Cintra Miranda - 2014.pdf: 2511663 bytes, checksum: 82dcd84be188d0a4232f300033b12581 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T14:05:11Z (GMT). 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His exploration is by extractivism and can also be grown in small family orchards, being a source of extra income for some families. Thus, the study of genetic diversity and genetic structure of populations’ allies with other areas of knowledge can provide important information for planning and execution of native species conservation programs information. Currently, molecular markers have wide application for studies on the genetics of populations, among the types of markers used; microsatellites have been widely used in recent years by high power to detect genetic variability. Population - genetic studies of the genus Campomanesia sp. are scarce and so not found microsatellite markers available in the literature for any species of the Savanna o. In this context, the aim of this study was to test the potential for transferability of microsatellite markers derived gene regions (EST) developed for Eucalyptus sp., Campomanesia in two species (C. adamantium and C. pubescens), providing a panel of polymorphic markers for the species. To do so, we sampled two populations of each species and DNA was extracted from leaf tissue. The potential for transferability of 120 primers pairs were evaluated. The PCR products derived from the microsatellite markers were assessed in automatic transferred DNA analyzer. The array of genotypes was used to estimate the parameters of genetic variability for the panel of marker. Of the 120 primers tested, 87 were discarded for not having amplification products, many nonspecific fragments amplified 22 and 12 were considered successfully transferred the two species. The 12 markers transferred showed good discrimination power of the individual , with high probability of paternity exclusion (0,99939 to C. adamantium and 0,99982 for C. pubescens) and low probability of identity (5,718 x 10-10 for C. adamantium and 1,182 x 10-11 to C. pubescens). The average number of alleles at polymorphic loci was equal to 6,8 to C. adamantium, ranging from 2 (EMBRA1335 and EMBRA 1811) 16 (EMBRA 1364) and C. pubescens was 7,8 ranging from 2 (EMBRA1811 and EMBRA 1076) to 16 (EMBRA 2011) alleles per locus. Mean genetic diversity of Nei (1973) in populations was equal to 0,517 (C. adamantium) and 0,579 (C. pubescens). Mean observed heterozygosity (Ho) for the populations was equal to 0,505 (C. adamantium) and 0,503 (C. pubescens). For some markers for deviations expected for the Hardy-Weinberg equilibrium was observed due proportion’s estimates of intrapopulation inbreeding (f) were not significant for any population. Inbreeding full level (F) was significantly different from zero, suggesting some genetic variability structure populations. The structure of genetic variability in component among populations (θp) was equal to 0,105 (C. adamantium) and 0,249 (C. pubescens). / O Cerrado apresenta uma grande diversidade e possui a mais rica e endêmica flora do mundo, abrigando cerca de 12.000 espécies de plantas nativas. A família Myrtaceae está entre as 10 famílias representativas deste bioma, composta por 14 gêneros. Dentre estes, o gênero Campomanesia apresenta várias espécies frutíferas, conhecidas popularmente como gabiroba. As espécies Campomanesia adamantium e Campomanesia pubescens apresentam ampla ocorrência no Bioma Cerrado. Os seus frutos podem ser consumidos “in natura”, na forma de doces, sorvetes, refrescos e como flavorizantes em destilados alcoólicos, além de possuírem propriedades antidiarréicas, suas cascas e suas folhas são usadas sob a forma de chás. Sua exploração ocorre por extrativismo e, também, pode ser cultivada em pequenos pomares familiares, sendo uma fonte de renda extra para algumas famílias. Desta forma o estudo da diversidade genética e estrutura genética de populações aliados com outras áreas do conhecimento, pode fornecer informações importantes para o planejamento e execução de programas de conservação de espécies nativas. Atualmente, os marcadores moleculares têm ampla aplicação para estudos referentes à genética de populações. Dentre os tipos de marcadores utilizados, os microssatélites têm sido amplamente utilizados nos últimos anos, pelo alto poder de detecção da variabilidade genética. Estudos genéticos-populacionais com espécies do gênero Campomanesia sp. são escassos e não foram encontrados marcadores microssatélites disponíveis na literatura para nenhuma espécie do Cerrado. Nesse contexto, a proposta deste trabalho foi testar o potencial de tranferibilidade de marcadores microssatélites provinientes de regiões gênicas (EST) desenvolvidos para Eucalyptus sp., em duas espécies de Campomanesia (C. adamantium e C. pubescens), disponibilizando um painel de marcadores polimórficos para as espécies. Para tanto, foram amostradas duas populações de cada espécie e o DNA foi extraído a partir de tecido foliar. Foi avaliado o potencial de transferibilidade de 120 pares primers. Os produtos de PCR derivados dos marcadores microssatélites transferidos foram avaliados em analisador automático de DNA. A matriz de genótipos foi utilizada para estimar os parâmetros de variabilidade genética para o painel de marcadores. Dos 120 primers testados, 87 foram descartados por não apresentarem produtos de amplificação, 22 amplificaram muitos fragmentos inespecíficos e 12 foram considerados transferidos com sucesso para as duas espécies. Os 12 marcadores transferidos apresentaram bom poder de discriminação individual, com alta probabilidade de exclusão de paternidade (0,99939 para C. adamantium e 0,99982 para C. pubescens) e baixa probabilidade de identidade (5,718 x 10-10 para C. adamantium e 1,182 x 10-11 para C. pubescens). O número médio de alelos nos locos polimórficos foi igual a 6,8 para C. adamantium, variando entre 2 (EMBRA 1335 e EMBRA 1811) a 16 (EMBRA 1364) e em C. pubescens foi de 7,8 variando entre 2 (EMBRA 1811 e EMBRA 1076) a 16 (EMBRA 2011) alelos por loco. A média da diversidade genética de Nei (1973) nas populações foi igual a 0,517 (C. adamantium) e 0,579 (C. pubescens). A heterozigosidade média observada (Ho) para as populações foi igual a 0,505 (C. adamantium) e 0,503 (C. pubescens). Para alguns marcadores foi observado desvios para as proporções esperados para o equilíbrio Hardy-Weinberg. As estimativas de endogamia intrapopulacional (f) não foram significativas para nenhuma das populações. A endogamia total (F) foi significativamente diferentes de zero, sugerindo certa estruturação da variabilidade genética das populações. A estruturação da variabilidade genética no componente entre populações (θp) foi igual a 0,105 (C. adamantium) e 0,249 (C. pubescens).

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