Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Rogério Martins Amorim / Banca: Cláudia Barbosa Fernandes / Banca: Márcio Teoro do Carmo / Banca: José Antonio Dell'Aqua Junior / Resumo: O trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência da terapia celular no tratamento do endométrio de éguas com processo degenerativo crônico caracterizado pela presença de fibrose uterina. Foram utilizadas 10 éguas, de raça Quarto de Milha com idade entre 14 e 23 anos, com massa corpórea entre 400 a 600 Kg, e bom escore corporal com históricos reprodutivos de subfertilidade e grau severo de fibrose uterina detectada previamente pelo exame histológico realizado por meio da biópsia endometrial. O material foi coletada no dia zero (D0) antes do tratamento com células tronco mesenquimais (CTMs) e 15 dias (D15), 30 dias (D30) e 60 dias (D60) após o tratamento. As amostras foram classificadas segundo o modelo proposto por Kenney & Doig (1986) em grau de fibrose: Grau I - normal, Grau IIA - inflamação crônica leve, Grau IIB - inflamação crônica com infiltrado moderado, Grau III - inflamação crônica degenerativa grave. Estas amostras foram submetidas à confecção de lâminas para coloração de Tricrômio de Masson, Coloração de Hematoxilina e Eosina (HE) e Imunohistoquímica. A punção da medula óssea foi realizada em 10 éguas com idade entre 14 e 23 anos e o material coletado foi submetido ao Laboratório. O cultivo celular in vitro foi realizado em meio DMEM alta glicose em estufa com 37,5°C, em atmosfera úmida contendo 95% de ar e 5% de CO2. Após atingir a confluência de 80% na placa de cultivo, estas células foram removidas e injetadas intra-endometrial com uma concentração de 2x107 células\mL em um volume de 0,5 ml em 20 (vinte) diferentes pontos (sitio de administração) espaçados entre um centímetro, com o auxílio de endoscópio flexível, totalizando um volume de 10 mL aplicado. Nas avaliações realizadas, verificou-se diminuição significativa dos ninhos glandulares, mudança siginificativa de células... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The study aimed to evaluate the efficiency of cell therapy in the treatment of endometrial mares with chronic degenerative process characterized by the presence of uterine fibroids. We used 10 mares bred Quarter Horses aged between 14 and 23 years, with body mass between 400 and 600 kg, with good body and reproductive history of subfertility and severe degree of uterine fibrosis detected previously by histological examination performed by endometrial biopsy. The material was collected on day zero (D0) before treatment with mesenchymal stem cells (MSCs) and 15 days (D15), 30 days (D30) and day 60 (D60) post-treatment. The samples were classified according to the model proposed by Kenney & Doig (1986) in fibrosis: Grade I - normal, Grade IIA - mild chronic inflammation, IIB Grade - moderate chronic inflammatory infiltrate, Grade III - severe degenerative chronic inflammation. These samples were submitted for preparation of slides for staining Masson's trichrome, hematoxylin and eosin staining (HE) and immunohistochemistry. A bone marrow puncture was performed in 10 mares aged between 14 and 23 years and the collected material was submitted to the Laboratory. The in vitro cell cultivation was performed in DMEM with high glucose kiln 37.5 ° C in humidified atmosphere containing 95% air and 5% CO2. After reaching 80% confluence on plate culture, these cells were removed and injected intra-endometrial at a concentration of 2x107 cells \ ml in a volume of 0.5 ml for 20 (twenty) different point (site of administration) spaced of an inch, with the aid of flexible endoscope, for a total volume of 10 ml applied. In the assessments, there was a significant reduction in glandular nests, change polymorphonuclear cell siginificativa absent at baseline (D0) to moderate 60 days (D60); amendment of mononuclear cells in going from... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-04Bitstream added on 2014-06-13T19:45:11Z : No. of bitstreams: 1 pavao_gd_dr_botfmvz.pdf: 1151593 bytes, checksum: 3a898d8249ca2c2ca7389cd5d9ee4adc (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência da terapia celular no tratamento do endométrio de éguas com processo degenerativo crônico caracterizado pela presença de fibrose uterina. Foram utilizadas 10 éguas, de raça Quarto de Milha com idade entre 14 e 23 anos, com massa corpórea entre 400 a 600 Kg, e bom escore corporal com históricos reprodutivos de subfertilidade e grau severo de fibrose uterina detectada previamente pelo exame histológico realizado por meio da biópsia endometrial. O material foi coletada no dia zero (D0) antes do tratamento com células tronco mesenquimais (CTMs) e 15 dias (D15), 30 dias (D30) e 60 dias (D60) após o tratamento. As amostras foram classificadas segundo o modelo proposto por Kenney & Doig (1986) em grau de fibrose: Grau I - normal, Grau IIA – inflamação crônica leve, Grau IIB – inflamação crônica com infiltrado moderado, Grau III – inflamação crônica degenerativa grave. Estas amostras foram submetidas à confecção de lâminas para coloração de Tricrômio de Masson, Coloração de Hematoxilina e Eosina (HE) e Imunohistoquímica. A punção da medula óssea foi realizada em 10 éguas com idade entre 14 e 23 anos e o material coletado foi submetido ao Laboratório. O cultivo celular in vitro foi realizado em meio DMEM alta glicose em estufa com 37,5°C, em atmosfera úmida contendo 95% de ar e 5% de CO2. Após atingir a confluência de 80% na placa de cultivo, estas células foram removidas e injetadas intra-endometrial com uma concentração de 2x107 células\mL em um volume de 0,5 ml em 20 (vinte) diferentes pontos (sitio de administração) espaçados entre um centímetro, com o auxílio de endoscópio flexível, totalizando um volume de 10 mL aplicado. Nas avaliações realizadas, verificou-se diminuição significativa dos ninhos glandulares, mudança siginificativa de células... / The study aimed to evaluate the efficiency of cell therapy in the treatment of endometrial mares with chronic degenerative process characterized by the presence of uterine fibroids. We used 10 mares bred Quarter Horses aged between 14 and 23 years, with body mass between 400 and 600 kg, with good body and reproductive history of subfertility and severe degree of uterine fibrosis detected previously by histological examination performed by endometrial biopsy. The material was collected on day zero (D0) before treatment with mesenchymal stem cells (MSCs) and 15 days (D15), 30 days (D30) and day 60 (D60) post-treatment. The samples were classified according to the model proposed by Kenney & Doig (1986) in fibrosis: Grade I - normal, Grade IIA - mild chronic inflammation, IIB Grade - moderate chronic inflammatory infiltrate, Grade III - severe degenerative chronic inflammation. These samples were submitted for preparation of slides for staining Masson's trichrome, hematoxylin and eosin staining (HE) and immunohistochemistry. A bone marrow puncture was performed in 10 mares aged between 14 and 23 years and the collected material was submitted to the Laboratory. The in vitro cell cultivation was performed in DMEM with high glucose kiln 37.5 ° C in humidified atmosphere containing 95% air and 5% CO2. After reaching 80% confluence on plate culture, these cells were removed and injected intra-endometrial at a concentration of 2x107 cells \ ml in a volume of 0.5 ml for 20 (twenty) different point (site of administration) spaced of an inch, with the aid of flexible endoscope, for a total volume of 10 ml applied. In the assessments, there was a significant reduction in glandular nests, change polymorphonuclear cell siginificativa absent at baseline (D0) to moderate 60 days (D60); amendment of mononuclear cells in going from... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-17Bitstream added on 2014-06-13T19:59:06Z : No. of bitstreams: 1 mattos_fcsz_me_botfmvz.pdf: 1330041 bytes, checksum: a4614ab130e82352508761147957b9f7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste experimento foi avaliar a influência da ingestão alimentar nas concentrações plasmáticas de insulina e progesterona (P4) e na expressão das enzimas hepáticas Citocromo P450 2C e 3A (CYP2C e CYP3A) e Aldo keto redutase (AKR1C e AKR1D) responsáveis pelo metabolismo de P4, em ovelhas pré-púberes. Borregas (n=24) F1 Dorper X Santa Inês, com idade média de 5 m e peso corporal (PC) médio de 29,4 kg foram confinadas em baias individuais. As ovelhas foram distribuídas em blocos de acordo com o PC inicial e divididas em dois grupos: Grupo Ad libitum (Ad), com ingestão média de 3,8% de matéria seca (MS) por kg de PC e Grupo Restrição (R), com 2,0% de MS por kg de PC. O estudo teve duração de 10 semanas, sendo 2 semanas de adaptação em mantença e 8 semanas nas dietas experimentais. Ao final da quarta (S4) e da oitava semanas experimentais (S8), os animais receberam um dispositivo intravaginal de liberação de P4 (0,33 g de P4, CIDR, Pfizer), caracterizando o D0. Dinoprost (PGF2α, 10 mg, i.m., Lutalyse, Pfizer) foi aplicado no D0 e D6. No D8, sangue foi colhido às -0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6 e 7 h em relação ao fornecimento da dieta (0 h). Dosagens de insulina e P4 plasmáticas foram feitas por meio de radioimunoensaio. No D9, 4 h após a oferta da dieta, foi realizada biópsia hepática e o material foi preservado em RNA later (Invitrogen, EUA) para análise de expressão gênica (mRNA) por PCR quantitativo em tempo real. Os dados foram analisados pelo PROC GLIMMIX do programa SAS e apresentados como média dos quadrados mínimos ± EP. O consumo diário alimentar foi de 1,8±0,04 e 0,6±0,01 kg/animal/d para o Grupo Ad e R, respectivamente (P<0,001). O grupo Ad teve um ganho médio semanal de 1,3±0,09 kg e o grupo R não teve alteração de PC (P<0001). As concentrações de insulina foram maiores no Grupo... / The objective of this was to evaluate the influence of feed intake on plasma insulin and progesterone (P4) concentrations and the expression of the hepatic enzymes Cytochrome P450 2C and 3A (CYP2C e CYP3A), and Aldo keto resdutase (AKR1C and AKR1D) responsible for metabolism of P4, in prepubertal sheep. Lambs (n=24) F1 Dorper x Santa Inês, 5 m old and with an average body weight (BW) of 29.4 kg were confined in individual stalls. The sheep were blocked according to the initial BW and divided into two groups: Ad libitum group (Ad), with average intake of 3.8% dry matter (DM) per kg of BW and Restriction group (R) with 2.0% DM per kg BW. The study lasted 10 weeks, with 2 weeks of a maintenance diet and 8 weeks on the experimental diets. At the end of the fourth (W4) and the eighth experimental weeks (W8), the ewes received an intravaginal P4 release device (0.33 g P4, CIDR, Pfizer), designated as D0. Dinoprost (PGF2α, 10 mg, im, Lutalyse, Pfizer) was used on D0 and D6. On D8, blood was collected at -0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7 h in relation to the time the diet was offered (0 h). Measurements of plasma insulin and P4 were done by radioimmunoassay. At D9, 4 h after diet introduction, a liver biopsy was performed and the sample stored in RNA later (Invitrogen, USA) for analysis of gene expression (mRNA) by quantitative real time PCR. Data were analyzed using PROC GLIMMIX of SAS and were presented as least squares means ± SE. The average daily feed intake was 1.8±0.04 and 0.6±0.01 kg/animal/d for the Ad and R Group, respectively (P<0.001). The Ad Group had an average weekly BW gain of 1.3±0.09 kg and the R group had no change in BW (P<0.001). Plasma insulin concentrations were higher (P<0.0001) in the Ad Group compared to the R Group at the end of W4 (8.2±0.94 vs. 1.5±0.16 μIU/mL) and... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: José Buratini Junior / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: O objetivo deste experimento foi avaliar a influência da ingestão alimentar nas concentrações plasmáticas de insulina e progesterona (P4) e na expressão das enzimas hepáticas Citocromo P450 2C e 3A (CYP2C e CYP3A) e Aldo keto redutase (AKR1C e AKR1D) responsáveis pelo metabolismo de P4, em ovelhas pré-púberes. Borregas (n=24) F1 Dorper X Santa Inês, com idade média de 5 m e peso corporal (PC) médio de 29,4 kg foram confinadas em baias individuais. As ovelhas foram distribuídas em blocos de acordo com o PC inicial e divididas em dois grupos: Grupo Ad libitum (Ad), com ingestão média de 3,8% de matéria seca (MS) por kg de PC e Grupo Restrição (R), com 2,0% de MS por kg de PC. O estudo teve duração de 10 semanas, sendo 2 semanas de adaptação em mantença e 8 semanas nas dietas experimentais. Ao final da quarta (S4) e da oitava semanas experimentais (S8), os animais receberam um dispositivo intravaginal de liberação de P4 (0,33 g de P4, CIDR, Pfizer), caracterizando o D0. Dinoprost (PGF2α, 10 mg, i.m., Lutalyse, Pfizer) foi aplicado no D0 e D6. No D8, sangue foi colhido às -0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6 e 7 h em relação ao fornecimento da dieta (0 h). Dosagens de insulina e P4 plasmáticas foram feitas por meio de radioimunoensaio. No D9, 4 h após a oferta da dieta, foi realizada biópsia hepática e o material foi preservado em RNA later (Invitrogen, EUA) para análise de expressão gênica (mRNA) por PCR quantitativo em tempo real. Os dados foram analisados pelo PROC GLIMMIX do programa SAS e apresentados como média dos quadrados mínimos ± EP. O consumo diário alimentar foi de 1,8±0,04 e 0,6±0,01 kg/animal/d para o Grupo Ad e R, respectivamente (P<0,001). O grupo Ad teve um ganho médio semanal de 1,3±0,09 kg e o grupo R não teve alteração de PC (P<0001). As concentrações de insulina foram maiores no Grupo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this was to evaluate the influence of feed intake on plasma insulin and progesterone (P4) concentrations and the expression of the hepatic enzymes Cytochrome P450 2C and 3A (CYP2C e CYP3A), and Aldo keto resdutase (AKR1C and AKR1D) responsible for metabolism of P4, in prepubertal sheep. Lambs (n=24) F1 Dorper x Santa Inês, 5 m old and with an average body weight (BW) of 29.4 kg were confined in individual stalls. The sheep were blocked according to the initial BW and divided into two groups: Ad libitum group (Ad), with average intake of 3.8% dry matter (DM) per kg of BW and Restriction group (R) with 2.0% DM per kg BW. The study lasted 10 weeks, with 2 weeks of a maintenance diet and 8 weeks on the experimental diets. At the end of the fourth (W4) and the eighth experimental weeks (W8), the ewes received an intravaginal P4 release device (0.33 g P4, CIDR, Pfizer), designated as D0. Dinoprost (PGF2α, 10 mg, im, Lutalyse, Pfizer) was used on D0 and D6. On D8, blood was collected at -0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7 h in relation to the time the diet was offered (0 h). Measurements of plasma insulin and P4 were done by radioimmunoassay. At D9, 4 h after diet introduction, a liver biopsy was performed and the sample stored in RNA later (Invitrogen, USA) for analysis of gene expression (mRNA) by quantitative real time PCR. Data were analyzed using PROC GLIMMIX of SAS and were presented as least squares means ± SE. The average daily feed intake was 1.8±0.04 and 0.6±0.01 kg/animal/d for the Ad and R Group, respectively (P<0.001). The Ad Group had an average weekly BW gain of 1.3±0.09 kg and the R group had no change in BW (P<0.001). Plasma insulin concentrations were higher (P<0.0001) in the Ad Group compared to the R Group at the end of W4 (8.2±0.94 vs. 1.5±0.16 μIU/mL) and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Tatiana Champion / Banca: Fabio Nelson Gava / Banca: Marlos Gonçalves Souza / Resumo: A insuficiência cardíaca congestiva (ICC) é uma síndrome que leva ao inadequado suprimento sanguíneo tecidual por disfunção do coração, e é tratada com a administração de furosemida em bolus intermitentes (BI). Entretanto, estudos em seres humanos com ICC demonstraram que a furosemida em taxa infusão contínua (TIC) apresenta maior eficácia e segurança em relação à administração em BI. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar a eficácia do diurético furosemida em TIC e BI em cães com degeneração mixomatosa valvar mitral. Para este fim, o estudo incluiu 20 cães, entre 8 e 12 anos, com peso entre 8 e 15 kg, e ICC classes Ia, Ib e II - ISACHC, e o grupo controle. Para o tratamento TIC, os cães receberam 0.66mg/kg IV furosemida como uma dose de carga seguida de 0.66mg/kg/h durante 8 horas. No tratamento BI os cães receberam 3 mg/kg IV furosemida na 0 e 4 horas. Os cães foram submetidos a tratamento por TIC e 15 dias mais tarde, os mesmos cães foram submetidos a tratamento por BI. Para ambos os tratamentos, foi administrado o mesmo volume de fluido e a produção de urina foi quantificada a cada hora. A ingestão hídrica, densidade urinária, pH urinário foram avaliados por hora. As variáveis sanguíneas, hematócrito (Ht), hemoglobina (Hb), creatinina (creat), ureia, proteína total (PT), albumina (alb) e os eletrólitos sódio (Na), potássio (K), magnésio (Mg), cálcio (Ca) e fosforo (P) foram avaliados a cada 2 horas. O peso e as variáveis ecocardiográficas foram avaliados antes e depois do tratamento. A produção urinaria por hora (mL/kg/h) e total (mL/kg/8h) foi superior no tratamento TIC em todos os animais (p<0,05). Os parâmetros ingestão hídrica, densidade urinária, diferença de pH urinário, diferença de peso, Ht, Hb, ureia, creat e fósforo junto com as diferenças das variáveis ecocardiográficas não apresentaram diferenças significativas entre os tratamentos (p>0,05). A furosemida... / Abstract: Congestive heart failure (CHF) is a syndrome that leads to inadequate blood supply to the tissue due to heart dysfunction and is treated with furosemide in intermittent bolus (BI). However, studies in humans with CHF showed that furosemide continuous rate infusion (CRI) showed better efficacy and safety for the administration in BI. Therefore, the aim of this study was to compare the effectiveness of the diuretic furosemide in CRI and BI in dogs with mitral valve myxomatous degeneration. To this end, the study included 20 dogs between 8 and 12 years old, weighing between 8 and 15 kg, and ICC classes Ia, Ib and II - ISACHC, and the control group. CRI for the treatment, the dogs received 0.66mg/kg IV furosemide as a loading dose followed by 0.66mg/kg/h for 8 hours. BI treatment the dogs received 3 mg / kg IV furosemide at 0 and 4 hours. The dogs were treated by CRI and 15 days later, the same dogs were treated by BI. For both treatments, the same volume of fluid and urine production was quantitated was administered hourly. The water intake, urine specific gravity, urine pH were evaluated per hour. The variable blood, hematocrit (Hct), hemoglobin (Hb), creatinine (creat), urea, total protein (TP), albumin (ALB) and electrolytes sodium (Na), potassium (K), magnesium (Mg), calcium (Ca) and phosphorus (P) were evaluated every two hours. The weight and Doppler echocardiographic variables were evaluated before and after treatment. The urinary output per hour (mL/kg/h) and total (mL/kg/8h) was higher in the treatment CRI in the control group and CHF class II (p <0.05). The water intake, urine specific gravity, urinary pH difference, weight loss, Ht, Hb, urea, creat and phosphorus parameters along with the differences in Doppler echocardiographic variables were not significantly different between treatments (p> 0.05). The furosemide continuous infusion rate has increased urine output in dogs with MMVD functional classes Ia, Ib, II and ... / Doutor

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-12. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:58Z : No. of bitstreams: 1 000848488.pdf: 370380 bytes, checksum: 756f85f63eff42e05e06180956448b65 (MD5) / A insuficiência cardíaca congestiva (ICC) é uma síndrome que leva ao inadequado suprimento sanguíneo tecidual por disfunção do coração, e é tratada com a administração de furosemida em bolus intermitentes (BI). Entretanto, estudos em seres humanos com ICC demonstraram que a furosemida em taxa infusão contínua (TIC) apresenta maior eficácia e segurança em relação à administração em BI. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar a eficácia do diurético furosemida em TIC e BI em cães com degeneração mixomatosa valvar mitral. Para este fim, o estudo incluiu 20 cães, entre 8 e 12 anos, com peso entre 8 e 15 kg, e ICC classes Ia, Ib e II - ISACHC, e o grupo controle. Para o tratamento TIC, os cães receberam 0.66mg/kg IV furosemida como uma dose de carga seguida de 0.66mg/kg/h durante 8 horas. No tratamento BI os cães receberam 3 mg/kg IV furosemida na 0 e 4 horas. Os cães foram submetidos a tratamento por TIC e 15 dias mais tarde, os mesmos cães foram submetidos a tratamento por BI. Para ambos os tratamentos, foi administrado o mesmo volume de fluido e a produção de urina foi quantificada a cada hora. A ingestão hídrica, densidade urinária, pH urinário foram avaliados por hora. As variáveis sanguíneas, hematócrito (Ht), hemoglobina (Hb), creatinina (creat), ureia, proteína total (PT), albumina (alb) e os eletrólitos sódio (Na), potássio (K), magnésio (Mg), cálcio (Ca) e fosforo (P) foram avaliados a cada 2 horas. O peso e as variáveis ecocardiográficas foram avaliados antes e depois do tratamento. A produção urinaria por hora (mL/kg/h) e total (mL/kg/8h) foi superior no tratamento TIC em todos os animais (p<0,05). Os parâmetros ingestão hídrica, densidade urinária, diferença de pH urinário, diferença de peso, Ht, Hb, ureia, creat e fósforo junto com as diferenças das variáveis ecocardiográficas não apresentaram diferenças significativas entre os tratamentos (p>0,05). A furosemida... / Congestive heart failure (CHF) is a syndrome that leads to inadequate blood supply to the tissue due to heart dysfunction and is treated with furosemide in intermittent bolus (BI). However, studies in humans with CHF showed that furosemide continuous rate infusion (CRI) showed better efficacy and safety for the administration in BI. Therefore, the aim of this study was to compare the effectiveness of the diuretic furosemide in CRI and BI in dogs with mitral valve myxomatous degeneration. To this end, the study included 20 dogs between 8 and 12 years old, weighing between 8 and 15 kg, and ICC classes Ia, Ib and II - ISACHC, and the control group. CRI for the treatment, the dogs received 0.66mg/kg IV furosemide as a loading dose followed by 0.66mg/kg/h for 8 hours. BI treatment the dogs received 3 mg / kg IV furosemide at 0 and 4 hours. The dogs were treated by CRI and 15 days later, the same dogs were treated by BI. For both treatments, the same volume of fluid and urine production was quantitated was administered hourly. The water intake, urine specific gravity, urine pH were evaluated per hour. The variable blood, hematocrit (Hct), hemoglobin (Hb), creatinine (creat), urea, total protein (TP), albumin (ALB) and electrolytes sodium (Na), potassium (K), magnesium (Mg), calcium (Ca) and phosphorus (P) were evaluated every two hours. The weight and Doppler echocardiographic variables were evaluated before and after treatment. The urinary output per hour (mL/kg/h) and total (mL/kg/8h) was higher in the treatment CRI in the control group and CHF class II (p <0.05). The water intake, urine specific gravity, urinary pH difference, weight loss, Ht, Hb, urea, creat and phosphorus parameters along with the differences in Doppler echocardiographic variables were not significantly different between treatments (p> 0.05). The furosemide continuous infusion rate has increased urine output in dogs with MMVD functional classes Ia, Ib, II and ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-13Bitstream added on 2014-06-13T20:01:45Z : No. of bitstreams: 1 maia_l_dr_botfmvz.pdf: 18060170 bytes, checksum: 35902efcd3573630e0675fd37df370df (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... / Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Coorientador: Reneé Laufer-Amorim / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Maria Verônica de Souza / Banca: Brunna Patrícia A. da Fonseca / Banca: Márjorie de Assis Golim / Resumo: O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor