Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T15:15:05Z No. of bitstreams: 2 Tese Michele France da Cruz.pdf: 1121927 bytes, checksum: 696b33f26da7188597ec86f1c9d0e0ff (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T15:15:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Michele France da Cruz.pdf: 1121927 bytes, checksum: 696b33f26da7188597ec86f1c9d0e0ff (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / FACEPE / Passados mais de 100 anos da descoberta da doença de Chagas pelo médico sanitarista Carlos Chagas, cujo agente etiológico é Trypanosoma cruzi (T. cruzi), essa doença ainda vêm afetando milhões de pessoas em todo o Mundo, principalmente no continente americano. Apesar da disponibilidade de dois fármacos no mercado para o tratamento da doença de Chagas, o nifurtimox e o benzonidazol, eles apresentam uma limitada eficácia na fase crônica e efeitos tóxicos indesejáveis ao ser humano. Com isso, outras substâncias vêm sendo estudadas, dentre elas temos os derivados imidazolidínicos por possuírem diferentes atividades farmacológicas dentre elas esquistossomicida, antimicrobiana, anticonvulsivante, antitumoral e tripanocida. Por isto, o presente trabalho tem como objetivo sintetizar novos derivados imidazolidínicos a partir de novas moléculas 3-benzil-5-benzilideno-imidazolidina-2,4-diona (LPSF/PT) visando contribuir na introdução de novos agentes com potencial tripanocida. Os novos derivados foram obtidos em duas etapas. Primeiramente, a imidazolidina-2,4-diona reagiu com os haletos de benzila e hidróxido de sódio como catalisador, formando o 3-benzil-imidazolidina-2,4-diona (LPSF/PT), por meio de uma reação de N-alquilação. Em seguida, os derivados imidazolidínicos 3,5-dissubstituídos (LPSF/PT) foram obtidos através de uma reação de condensação da 3-benzil-imidazolidina-2,4-diona com benzaldeídos substituídos em presença de morfolina. As estruturas químicas dos compostos sintetizados foram caracterizadas através de técnicas espectroscópicas: ressonância magnética de hidrogênio e carbono (RMN 1H e 13C) e espectroscopias na região do infravermelho (IV). A atividade tripanocida dos novos derivados imidazolidínicos (LPSF/PT-139, LPSF/PT-145, LPSF/PT-151, LPSF/PT-152, LPSF/PT-167, LPSF/PT-214) foram avaliadas sobre as formas tripomastigotas e epimastigotas de T. cruzi (cepa Y) em diferentes concentrações e assim foi calculado o valor da IC50. Dentre os compostos testados, o composto LPSF/PT-152 apresentou melhor resultado para a forma tripomastigota, por apresentar IC50 de 1,26 μg/mL. Enquanto os compostos LPSF/PT-145 e LPSF/PT-214 para a forma epimastigota, por apresentarem, respectivamente, IC50 de 2,11 μg/mL e 2,89 μg/mL. De acordo com os resultados obtidos, podemos sugerir a eficácia destes novos compostos imidazolidínicos e o potencial fármaco tripanocida.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T05:42:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 195293.pdf: 376023 bytes, checksum: 385be035780c7915c2f93813bb9d872c (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T05:49:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282748.pdf: 2126494 bytes, checksum: bab8f4f79e0eef0fde549df05362db87 (MD5) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial tripanocida in vitro e in vivo do ácido gálico e derivados (galatos de octila, decila, undecila, dodecila e tetradecila). O efeito tripanocida in vitro foi avaliado contra formas tripomastigotas sanguíneas e amastigotas intracelulares de T. cruzi. Os galatos de octila, dodecila e tetradecila reduziram em 50 a 60% a viabilidade de tripomastigotas sanguíneos (cepaY) na concentração de 50 µM. Entretanto, nenhum deles foi mais ativo do que o quimioprofilático violeta de genciana. Contrariamente, todos os ésteres de galato foram mais ativos in vitro do que o benzonidazol contra formas amastigotas intracelulares das cepas Y e Colombiana, com percentuais de inibição (PI) variando entre 46 a 95% na concentração de 3 µM. Entretanto, os galatos foram mais citotóxicos do que o benzonidazol, sendo que somente o galato de dodecila apresentou índice de seletividade (IS) acima de 50. O uso combinado desse composto com o benzonidazol mostrou um efeito aditivo in vitro contra amastigotas intracelulares. A análise ultraestrutural por MET mostrou que o galato de dodecila induziu alterações morfológicas em epimastigotas e em amastigotas intracelulares, com expressiva perda de conteúdo citoplasmático e número de reservossomos, intumescimento da mitocôndria, mas sem alteração do cinetoplasto. Ensaios de inibição in vitro com a tripanotiona redutase recombinante de T. cruzi (TcTR) mostraram que o ácido gálico inibiu esta enzima (CI50 = 45,6 µM) sem interferir na atividade da glutationa redutase (GR). Contrastando com a potente atividade tripanocida in vitro, nenhum dos compostos suprimiu a parasitemia e preveniu a mortalidade de camundongos em fase aguda e crônica da tripanosomíase. Entretanto, a análise histopatológica mostrou que a maioria dos animais tratados com o ácido gálico ou com o galato de dodecila apresentou tecido cardíaco íntegro sem focos inflamatórios. A análise por RT-qPCR do perfil de citocinas transcritas no coração de camundongos infectados com a cepa Colombiana mostrou menor taxa de IFN-. no grupo tratado com o galato de dodecila, sugerindo uma participação na imunomodulação do processo inflamatório. Conclui-se que os galatos testados apresentaram um potente efeito tripanocida in vitro e, embora não tenham modificado os cursos da infecção experimental aguda e crônica, podem ter uma participação no controle da inflamação tecidual via imunomodulação negativa do IFN. / The aim of this study was to evaluate the potential trypanocidal activity in vitro and in vivo of gallic acid and five esters (octyl, decyl, undecyl, dodecyl and tetradecyl gallate). The in vitro trypanocidal activity of the compounds was evaluated against blood trypomastigotes and intracellular amastigotes of T. cruzi. Incubation of mice infected blood (Y strain) for 48 hours with octyl, dodecyl and tetradecyl gallates at 50 µM revealed a trypanocidal effect higher than 50%, which was, however, lower than the trypanocidal effects exhibited by gentian violet. In contrast, all gallate esters showed a higher in vitro activity than benzonidazole against intracellular amastigotes of both the Y and Colombiana strains, with percentages of inhibition (PI) ranging from 46 to 95% at 3 µM. However, most of the gallic acid derivatives showed significant cytotoxic effects, with the exception of dodecyl gallate which presented a selectivity index (SI) higher than 50. Moreover, the use of dodecyl gallate + benzonidazole showed also an additional in vitro effect against intracellular amastigotes. The ultrastructural analysis by transmission electron microscopy (TEM) showed that the treatment with dodecyl gallate induces drastic morphological changes in both the epimastigotes and intracellular amastigotes. This effect is characterized by a significant loss of cytoplasmic content, reduction of the reservosome numbers, mitochondria swelling and no kinetoplastic change. In vitro assays revealed that gallic acid specifically inhibited the T. cruzi recombinant trypanothione reductase (TcTR) (IC50 = 45.6 µM). In contrast to the powerful trypanocidal activity in vitro, none of the compounds were able to suppress parasitemia or prevent the mice mortality at the acute and chronic phases of trypanosomiasis. However, histopathological analysis showed that the most of the mice treated with gallic acid and dodecyl gallate showed no inflammatory foci in the heart. The RT-qPCR analysis for cytokine profile in the heart tissue of infected mice with the Colombiana strain revealed a lower rate of IFN-. in the group treated with dodecyl gallate, suggesting a possible role of this compound in the immune modulation of the inflammation. We conclude that the gallates tested showed a potent trypanocidal effect in vitro and, although they have not changed the course of acute and chronic experimental infection may be involved in the control of tissue inflammation through negative immune modulation of IFN-

Partindo-se de piperonal e succinato de metila, obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butenóico (3), com rendimento de 60% e partindo-se deste, por redução catalítica obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butanóico (4), com rendimento de 80%. A partir do (4), reagindo-se com Ca(BH4)2 e H+, obteve-se a 4-(3,4- metilenodioxifenil)-4,5-di-hidro-2(3H)-furanona (5), com rendimento de 70 %. Pela adição de piperonal, sintetizou-se a 7-hidroxi-hinoquinina (6), com rendimento de 89% da mistura dos diasteroisômeros (6a e 6b), os quais foram separados por cristalização. A reação de ambos os compostos (6a e 6b) com CF3CO forneceu o derivado ariltetralínico (7), com 98% de rendimento. A poligamaina (7) foi reduzida com DIBAL-H em THF, fornecendo o composto (9). O derivado (9), constituído de uma mistura enanciomérica foi separado em CLAE quiral. Os derivados foram analisados por RMN 1H, BB e DEPT. Com relação aos ensaios biológicos, os compostos 6, 7 e 9 foram avaliados patógenos bucais para determinação dos valores de CIM. Os melhores resultados obtidos para o composto (+) 9 foram contra S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) e S. mitis (280 µM). O isômero (-) 9 foi ativo contra S. sanguinis (280 µM) enquanto (9) mostrou melhor atividade contra L. casei (370 µM) e E. faecalis (710 µM). No ensaio tripanocida, pode-se observar que o melhor resultado foi obtido para a mistura de enanciômeros (9), a qual apresentou IC50 = 1,4 µM e lise de 61,9% ± 0,9 na concentração de 32 µM. Por outro lado, ambos os enanciômeros isolados foram menos ativos apresentando IC50 de 351,8 µM e 135 µM para (-) 9 e (+) 9, respectivamente e lise de 47,3% ± 5,9 na concentração de 128 µM, para o enanciômero (+). / The (3,4-methylenodioxiphenyl)-3-methoxycarbonyl-3-butenoic acid (3) was obtained in 60 % yield by reacting pyperonal and methyl succinate. Acid 3 was submitted to catalytic reduction furnishing the 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-3- methoxicarbonyl-3-butanoic acid (4), yielding 80 %. Then, compound 4 was reacted with Ca(BH4)2 and H+, furnishing 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-4,5-dihydro-2(3H)-furanone (5), yielding 70 %. Piperonal was added to compound 5 to produce 7-hidroxyhinoquinin (6), yielding 89% of a mixture of diasteroisomers (6a and 6b), which was separate by crystallization. The reaction of both compounds 6a e 6b with CF3CO furnished an aryltetralin lignan derivative poligamain (7), yielding 98 %. Poligamain was reduced by using DIBAL-H in THF, to furnish compound 9. Compound 9, constituted of an enantiomeric mixture was separated by chiral HPLC. All the obtained compounds were analyzed by 1H NMR, BB and DEPT techniques. Regarding the biological assays, the compounds 6, 7 and 9 were assayed against oral pathogens by determining its MIC values. The best results obtained for the (+) 9 isomer was against S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) and S. mitis (280 µM). For the (-) 9 isomer it was active against S. sanguinis (280 µM) while (9) displayed higher activity against L. Casei (370 µM) and E. faecalis (710 µM). Regarding the in vitro trypanocidal assay, on one hand the best result was observed for the mixture of enantiomers (9), which displayed IC50 = 1.4 µM and lysis of 61.9% ± 0.9 at 32 µM. On the other hand, both isolated enantiomers were less active by displaying IC50 of 351.8 µM and 135 µM for (-) 9 and (+) 9, respectively and lysis of 47.3% ± 5.9 at 128 µM, for (+) enantiomer.

Submitted by Luciane Willcox (luwillcox@gmail.com) on 2016-09-01T17:38:04Z No. of bitstreams: 1 diserrtacao Dec 2015 com ficha catalog.pdf: 1787907 bytes, checksum: 7c2f9f3193dc6d7ee34d8018c1bb33ee (MD5) / Approved for entry into archive by Luciane Willcox (luwillcox@gmail.com) on 2016-09-01T17:43:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diserrtacao Dec 2015 com ficha catalog.pdf: 1787907 bytes, checksum: 7c2f9f3193dc6d7ee34d8018c1bb33ee (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T17:43:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diserrtacao Dec 2015 com ficha catalog.pdf: 1787907 bytes, checksum: 7c2f9f3193dc6d7ee34d8018c1bb33ee (MD5) / A presente dissertação teve por objetivo avaliar o potencial tripanocida in vitro dos óleos essenciais (OEs) de Piper hispidinervum (pimenta longa) e Piper aduncum (pimenta de macaco) sobre diferentes formas evolutivas de Trypanosoma cruzi clone Dm28c (epimastigotas; amastigotas intracelulares; tripomastigotas metacíclicas e de cultivo). O OE de pimenta longa é rico em safrol e demonstrou baixa atividade contra T. cruzi (IC50/24h>100 μg/ml para formas epimastigotas e tripomastigotas) e leve citotoxicidade contra células Vero. O OE de pimenta de macaco foi efetivo contra formas epimastigotas (IC50/24h=84,74 μg/ml), sendo porém mais eficaz contra formas tripomastigotas metacíclicas (12,1 μg/ml) e de cultura a 28°C (2,8 μg/ml). Os valores obtidos com formas tripomastigotas foram melhores do que os obtidos com a droga de referência benzonidazol a 28°C (IC50/24h=16,1 μg/ml). Entretanto, contra formas amastigotas o benzonidazol foi mais ativo que o OE de pimenta de macaco (IC50/24h=0,8 μg/ml e 9 μg/ml respectivamente). Testes realizados com tripomastigotas de cultura a 4°C (mesma condição térmica de armazenamento de bolsas de sangue) demonstraram alta atividade do OE de pimenta de macaco (IC50/24h = 3,8 μg/ml), em comparação com os resultados obtidos com a droga de referência violeta de genciana (IC50/24h=60,7 μg/ml). Avaliação da citotoxicidade do OE de pimenta de macaco contra células Vero a 37°C (CC50/24h=42,8 μg/ml) e hemácias a 4°C (CC50/24h=351,6 μg/ml) demonstrou um alto índice de seletividade (IS) contra tripomastigotas (11,26 e 92,52, respectivamente). Estes índices sugerem que o OE de pimenta de macaco não é um candidato favorável para pacientes chagásicos, mas sim um composto promissor para tratamento de bolsas de sangue. Ensaios por citometria de fluxo evidenciaram que o OE de pimenta de macaco não afeta o ciclo celular de formas epimastigotas, mas inibe consideravelmente o potencial da membrana mitocondrial destas formas. Análise por microscopia eletrônica de transmissão demonstrou que tratamento de tripomastigotas com 3,8 μg/ml (correspondente ao IC50/24h) produz danos ultra-estruturais como lise de membranas e perda de citoplasma. Análise por Cromatografia de Gases e Espectroscopia de Massas (CG-EM) demonstrou que os constituintes majoritários do OE de pimenta de macaco são nerolidol e linalol (25% e 13,42% respectivamente). Testes com tripomastigotas de cultura a 4°C demonstraram que nem sempre o constituinte majoritário de um OE é o mais eficiente como tripanocida, pois linalol apresentou melhor efeito tripanocida (IC50/24h=306 ng/ml) que nerolidol, o qual não induziu alterações visíveis por microscopia óptica. Nossos dados indicam que linalol é um composto promissor contra tripomastigotas, pois foi 168,6 vezes mais eficiente que benzonidazol em testes com formas tripomastigotas de cultura. Em conclusão, as propriedades tripanocidas do OE da pimenta de macaco e seu constituinte linalol devem ser estudadas mais aprofundadamente, especialmente devido à sua seletividade contra tripomastigotas de cultura. Linalol surge como um potencial candidato a uma droga para aplicação em tratamento de bolsas de sangue.

Partindo-se de piperonal e succinato de metila, obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butenóico (3), com rendimento de 60% e partindo-se deste, por redução catalítica obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butanóico (4), com rendimento de 80%. A partir do (4), reagindo-se com Ca(BH4)2 e H+, obteve-se a 4-(3,4- metilenodioxifenil)-4,5-di-hidro-2(3H)-furanona (5), com rendimento de 70 %. Pela adição de piperonal, sintetizou-se a 7-hidroxi-hinoquinina (6), com rendimento de 89% da mistura dos diasteroisômeros (6a e 6b), os quais foram separados por cristalização. A reação de ambos os compostos (6a e 6b) com CF3CO forneceu o derivado ariltetralínico (7), com 98% de rendimento. A poligamaina (7) foi reduzida com DIBAL-H em THF, fornecendo o composto (9). O derivado (9), constituído de uma mistura enanciomérica foi separado em CLAE quiral. Os derivados foram analisados por RMN 1H, BB e DEPT. Com relação aos ensaios biológicos, os compostos 6, 7 e 9 foram avaliados patógenos bucais para determinação dos valores de CIM. Os melhores resultados obtidos para o composto (+) 9 foram contra S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) e S. mitis (280 µM). O isômero (-) 9 foi ativo contra S. sanguinis (280 µM) enquanto (9) mostrou melhor atividade contra L. casei (370 µM) e E. faecalis (710 µM). No ensaio tripanocida, pode-se observar que o melhor resultado foi obtido para a mistura de enanciômeros (9), a qual apresentou IC50 = 1,4 µM e lise de 61,9% ± 0,9 na concentração de 32 µM. Por outro lado, ambos os enanciômeros isolados foram menos ativos apresentando IC50 de 351,8 µM e 135 µM para (-) 9 e (+) 9, respectivamente e lise de 47,3% ± 5,9 na concentração de 128 µM, para o enanciômero (+). / The (3,4-methylenodioxiphenyl)-3-methoxycarbonyl-3-butenoic acid (3) was obtained in 60 % yield by reacting pyperonal and methyl succinate. Acid 3 was submitted to catalytic reduction furnishing the 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-3- methoxicarbonyl-3-butanoic acid (4), yielding 80 %. Then, compound 4 was reacted with Ca(BH4)2 and H+, furnishing 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-4,5-dihydro-2(3H)-furanone (5), yielding 70 %. Piperonal was added to compound 5 to produce 7-hidroxyhinoquinin (6), yielding 89% of a mixture of diasteroisomers (6a and 6b), which was separate by crystallization. The reaction of both compounds 6a e 6b with CF3CO furnished an aryltetralin lignan derivative poligamain (7), yielding 98 %. Poligamain was reduced by using DIBAL-H in THF, to furnish compound 9. Compound 9, constituted of an enantiomeric mixture was separated by chiral HPLC. All the obtained compounds were analyzed by 1H NMR, BB and DEPT techniques. Regarding the biological assays, the compounds 6, 7 and 9 were assayed against oral pathogens by determining its MIC values. The best results obtained for the (+) 9 isomer was against S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) and S. mitis (280 µM). For the (-) 9 isomer it was active against S. sanguinis (280 µM) while (9) displayed higher activity against L. Casei (370 µM) and E. faecalis (710 µM). Regarding the in vitro trypanocidal assay, on one hand the best result was observed for the mixture of enantiomers (9), which displayed IC50 = 1.4 µM and lysis of 61.9% ± 0.9 at 32 µM. On the other hand, both isolated enantiomers were less active by displaying IC50 of 351.8 µM and 135 µM for (-) 9 and (+) 9, respectively and lysis of 47.3% ± 5.9 at 128 µM, for (+) enantiomer.

A doença de Chagas, também chamada de tripanossomíase americana é a terceira doença parasítica mais presente no mundo, perdendo apenas para malária e esquistossomose. As terapias existentes atualmente para essa tripanossomíase são insatisfatórias e pouca atenção tem sido dada para o desenvolvimento de novos fármacos. Os medicamentos utilizados atualmente apresentam boa atividade apenas na fase inicial da doença e geram efeitos colaterais severos nos pacientes. <br /> As hidrazonas representam uma classe de compostos imínicos de grande versatilidade estrutural e importante atividade biológica em diversos níveis, sendo observados resultados de atividade tripanocida interessantes de hidrazonas coordenadas a rutênio. Por outro lado, complexos com oxovanádio coordenado a derivados de quinoxalinas apresentam melhores atividades do que os ligantes na forma livre e que complexos formados por essas quinoxalinas com outros metais. <br /> Esse trabalho buscou unir as propriedades biológicas das hidrazonas e vanádio de forma a obter complexos com boa atividade tripanocida. Foram sintetizados dois ligantes hidrazonas derivados da 2-tiofenofenohidrazida, e através dos mesmos foram desenvolvidos dez novos complexos de oxovanádio (V). Os produtos foram caracterizados por ponto de fusão, análise elementar, espectroscopia na região do infravermelho e do UV-Vis., ressonância magnética nuclear (RMN 1H) e difração de raios X em monocristal, sendo obtidos três classes de complexos. Duas classe são formadas por complexos com ligantes mistos, na forma [VO(L)(OR)] com R=metil, etil, n-propil e L=hidrazona, e na forma [VO(L)(mal)] com L=hidrazona e mal= pirona maltol. Outra classe obtida é formada por binucleares de oxovanádio na forma [(VOL)2(&mu;-O)] com L=hidrazona e os centros de vanádio ligados por uma ponte &mu;-oxo. As estruturas obtidas para os complexos mistos com os alcóxidos e para os dímeros apresentam geometria piramidal quadrática distorcida, enquanto que os complexos mistos com maltol apresentam geométrica octaédrica distorcida. <br /> Ensaios in vitro contra cepas de T. cruzi mostraram resultados interessantes (SI iguais ou maiores que 10) para que continue a exploração dos tipos de complexos formados e novos ensaios biológicos devem ser realizados para verificar o mecanismo de ação e a atividade in vivo desses compostos, com intuito de obter um novo fármaco antichagásico baseado em vanádio no futuro. / Chagas disease, also called American trypanosomiasis is the third most present parasitic disease in the world. The existing therapies for this trypanosomiasis are unsatisfactory and a little attention has been given to the development of new drugs. The drugs currently used exhibit good activity only in the early phase of the disease and generate severe side effects in patients. <br /> Hydrazones represent a class of iminic compounds with good structural variability and important biological activity at various levels, and interesting results of trypanocidal activity are observed for hydrazones coordinated to ruthenium. On the other hand, complexes with oxovanadium coordinated to quinoxaline derivatives have better activities than the free ligands and complexes with other metals coordinated to that quinoxalines. <br /> This study aimed to unite the biological properties of hydrazones and vanadium to obtain complexes with good trypanocidal activity. Two hydrazones ligands derived from 2- tiofenofenohidrazida were synthesized, and through that ligands, ten new complexes of oxovanadium (V) were developed. The products were characterized by melting point, elemental analysis, infrared and UV - Vis. spectroscopies, nuclear magnetic resonance (1H NMR) and single crystals x-ray diffraction. Three classes of complexes were obtained. Two of them are formed by complexes with mixed ligands, one at [VO(L)(OR) ] form, with R = methyl , ethyl , n- propyl and L = hydrazone , and the other one with the [VO(L)(mal)] empirical form, with L = hydrazone and mal = pyrone maltol. Another class consists of binuclear oxovanadium complexes obtained at [(VOL)2(&mu;-O)] form, with L = hydrazone and the vanadium centers connected by a &mu;-oxo bridge. The structures obtained for the mixed complexes with the alkoxides and dimers have quadratic distorted pyramidal geometry, while the mixed maltol complexes have distorted octahedral geometry. <br /> In vitro assays against T. cruzi strains showed interesting results (SI equal to or greater than 10) to continue the exploration of the types of complexes formed and new biological tests must be conducted to verify the mechanism of action and in vivo activity of these compounds, in order to obtain a new vanadium-based antichagasic drug in the future.

A ausência de tratamento eficaz contra a doença de Chagas e Leishmaniose justifica a pesquisa de novas substâncias efetivas no controle destas doenças. As enzimas GAPDH de T. cruzi e a APRT de L. tarentolae são fundamentais para o ciclo de vida dos parasitas, representando alvos terapêuticos específicos que permitem a busca racional de agentes antiparasitários. As fontes naturais produzem grande diversidade estrutural em substâncias químicas com amplo potencial biológico. Espécies de Penicillium são conhecidas por produzir diversas classes de metabólitos secundários bioativos, incluindo atividade antiparasitária. A triagem com os 115 extratos brutos obtidos das culturas de P. verrucosum, indicou os extratos MeOH da massa micelial e AcOEt do fluido da cultura como os mais ativos no ensaio sobre T. cruzi. Estes extratos são oriundos do meio pré-fermentativo 24 horas e meio fermentativo Takeuchi 72 horas. Nos ensaios enzimáticos nenhum extrato apresentou inibição acima de 35%. As diferentes atividades biológicas e análises dos perfis químicos de extratos, via CLAE, demonstraram que a produção de metabólitos secundários varia em função das condições de cultivo do fungo. Dos extratos selecionados foram isolados ácidos graxos, triglicerídeos, manitol, a,a-trealose, glicerilfosfocolina e um alcalóide dicetopiperazínico, que até o momento parece não ter sido isolado de Penicillium ou outra fonte natural. / The absence of an effective treatment for Chagas’ disease and Leishmaniasis stimulates the search for new active compounds. The enzymes GAPDH from T. cruzi and APRT from L. tarentolae are attractive targets for rational search of antiprotozoal agents, taking part in essential pathways of the pathogens. Natural products are rich in structural diversity and biological activities. Penicillium is known to produce different groups of bioactive secondary metabolites, including antiprotozoal activity. In the trypanocidal screening of the 115 crude extracts from different cultures of P. verrucosum, the MeOH extracts from the mycelium and EtOAc extratcs from the culture broth were the most activity. These extracts were obtained from 24h in a preculture and for an additional 72h in Takeuchi medium. In the enzymatic assays, the highest inhibitory activity was 35%. Besides the differences observed in the biological activities, the extracts showed different chemical profiles in HPLC analysis. So, the production of secondary metabolites by P. verrucosum is dependent on the culture conditions. The chemical study of the selected extracts led to the isolation of fatty acids, triacylglycerols, mannitol, a,a-threalose, glycerylphosphocholine and one diketopyperazine alkaloid. This alkaloid has not previously been reported from Penicillium or other natural source.

O partenolídeo é uma lactona sesquiterpênica do tipo germacrolídeo, considerado como marcador da espécie Tanacetum parthenium e responsável pela atividade biológica do extrato das folhas desta planta. O extrato padronizado é comercializado como medicamento fitoterápico de registro simplificado pela ANVISA para profilaxia de enxaqueca. Além disso, existem vários estudos recentes demonstrando diversas atividades biológicas desta substância, como atividade antineoplásica e antiparasitária. Desta maneira, surge a necessidade de conhecimento da toxicologia deste composto, como os dados farmacocinéticos, farmacodinâmicos e de toxicidade. Neste trabalho foi avaliado o estudo introdutório de metabolismo in vitro do partenolídeo, ou seja, a avaliação dos possíveis metabólitos formados através das reações que mimetizam a oxidação pelo sistema citocromo P-450, utilizando catalisadores biomiméticos e pela biotransformação utilizando microssomas de rato. Através do modelo biomimético foi verificada a formação de um metabólito putativo majoritário, o qual foi isolado da reação do partenolídeo com MCPBA catalisada pela metaloporfirina FeTFPPCl e caracterizado como 1(R),10(R)-epóxi-partenolídeo. A avaliação da reatividade do partenolídeo, neste modelo oxidativo, foi realizada através da variação do agente oxidante e do catalisador. Na catálise em meio biológico utilizando microssoma de rato foi detectado um único metabólito, o qual apresentou espectro de massas e tempo de retenção similar ao produto isolado da reação biomimética com FeTFPPCl e MCPBA, sugerindo desta maneira, tratar-se da mesma substância. Ainda, neste estudo, foram realizados ensaios preliminares de citotoxicidade do partenolídeo e de seu metabólito putativo, sendo ambos os compostos ativos. / Parthenolide is a sesquiterpene lactone (germacrolide moiety) considered as a chemical marker ofTanacetum parthenium species and described as responsible for the biological activity of the leaves extract. The standardized extract is presented in Brazilian market as an herbal medicine for headache preventing (simplified registration at ANVISA). Moreover, several investigations in the literature have demonstrated its antiparasitic and antineoplastic activity. However, there is a need for knowledge on its toxicology, such as pharmacokinetic, pharmacodynamic and toxicity evaluations. Thus, the aim of this work is the in vitro analysis of parthenolide biomimetic metabolism (like cytochrome P-450 system) applying organometallic catalysts and biotransformation by rat microsomes. A major putative metabolite was isolated from parthenolide biomimetic oxidative reaction with MCPBA catalyzed by metalloporphyrin FeTFPPCl and it was characterized as 1(R),10(R)-epoxyparthenolide. The reactivity of parthenolide (at this oxidative model) was performed by varying the oxidizing agent and catalyst amounts. At rat microsome model, only a single metabolite was detected, which showed identical mass spectrum and retention time of the previously isolated putative metabolite (from the biomimetic reaction with MCPBA and FeTFPPCl). In addition, parthenolide and its putative metabolite were preliminary evaluated for the trypanocidal and leishmanicidal activity and both compounds showed significant biological activity.

A doença de Chagas é um problema de saúde pública, com dados preocupantes referentes ao número de pessoas contaminadas e daquelas que ainda permanecem expostas ao risco de infecção. As doenças tropicais desafiam as pesquisas científicas, pois os medicamentos existentes apresentam sérios efeitos colaterais. As tripanossomíases são doenças de grande importância no Brasil, como é o caso da doença de Chagas. Estudos realizados em diversos países têm relatado que muitas espécies vegetais possuem atividade contra o agente etiológico da doença de Chagas, Trypanosoma cruzi. Ácido ursólico e seu isômero, ácido oleanólico, pertencem à classe de compostos triterpenóides e são amplamente distribuídos no reino vegetal e têm sido frequentemente isolados como mistura isomérica. Nesse sentido, a proposta para o presente estudo foi avaliar a atividade tripanocida, sobre a cepa Y e Bolívia de T. cruzi, dos triterpenos ácido ursólico e ácido oleanólico, sintetizar e avaliar a atividade tripanocida do sal derivado de ácido ursólico. As substâncias foram administradas nas concentrações de 20 e 50 mg/kg por via intraperitoneal e oral, após a avaliação da dose letal média (DL50). As três substâncias empregadas nas concentrações de 20 e 50 mg/kg, administradas por via intraperitoneal não foram capazes de reduzir a parasitemia dos animais experimentalmente infectados com as cepas Y e Bolívia de T. cruzi. Entretanto, as três substâncias exibiram atividade tripanocida significativa, na concentração de 50 mg/kg, administradas por via oral, em animais infectados com a cepa Y de T. cruzi. Para a cepa Bolívia de T. cruzi, as substâncias administradas por via oral exibiram atividade biológica na concentração de 20 mg/kg, sendo significativa apenas para o triterpeno ácido ursólico. A análise histológica realizada não demonstrou uma correlação significativa entre os níveis parasitêmicos e o parasitismo tecidual, para todos os grupos avaliados. A avaliação do perfil hepatobiliar e renal das substâncias foi realizada a fim de se verificar possíveis efeitos tóxicos das mesmas. Entretanto, não foi observada nenhuma diferença estatisticamente significativa entre os grupos tratados e o grupo controle, indicando que o aumento dos níveis parasitêmicos não está associado ao efeito das substâncias no tecido. Através da avaliação do efeito dos triterpenos sobre a resposta imune, verificamos uma diminuição dos níveis plasmáticos de IFN- e um aumento das concentrações de IL-10. Dessa maneira, nós sugerimos que o tratamento com essas substâncias pode direcionar a resposta imune para o padrão Th2 e, em conseqüência desse efeito imunossupressor, uma maior quantidade de formas tripomastigotas poderia ser observada na circulação do hospedeiro. / Chagas disease is a public health problem with worrisome data on the number of infected people, not to mention the population that still remains at risk of infection. Tropical diseases defy scientific research since the existing drugs have serious side effects. Trypanosomiases, such as Chagas disease, are of great importance in Brazil. Studies in several countries have reported that many plant species display activity against Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. Ursolic acid and its isomer, oleanolic acid, belong to a class of triterpenoid compounds that is widely distributed in the plant kingdom and has frequently been isolated as an isomeric mixture. In the present study, the trypanocidal activity of the triterpenoids ursolic acid and oleanolic acid was evaluated against the Y and Bolivia strains of T. cruzi. In addition, the potassium salt derivative of ursolic acid was synthesized and also tested. The triterpenoids were administered intraperitoneally and orally at concentrations of 20 and 50 mg / kg, after evaluation of the median lethal dose (LD50). At the concentrations of 20 and 50 mg / kg, the intraperitoneal administration of each of the substances was not able to reduce parasitemia of the animals infected with the Y and Bolivia strains of T. cruzi. However, ursolic and oleanolic acid, as well as the potassium salt derivative of ursolic acid exhibited significant trypanocidal activity at a concentration of 50 mg / kg when they were orally administered to animals infected with the Y strain of T. cruzi. On the other hand, oral administration of the tested compounds at a concentration of 20 mg / kg evidenced biological activity, which was significant for ursolic acid only. For the most of studied groups, histological analysis did not demonstrate a significant correlation between the levels of parasitemia and tissue parasitism. Determination and evaluation of biochemical parameters in the serum of experimental animals was performed, to assess the hepatic, biliary, and renal toxic effects of the substances. There were no statistically significant differences between the treated groups and the control group, indicating that the increase in parasitemia is not associated with the effects of the substances in the tissue. We suggest the hypothesis of an immunosuppressive effect, since there was a decreased plasma levels of IFN- after treatment with the triterpenes. Moreover, the treated groups also exhibited increased levels of IL-10. Therefore, we suggest that treatment with the substances could be directing the immune response toward the Th2 type and, as a consequence of this immunosuppressive effect, a greater amount of trypomastigotes could be observed in the circulation of the host.