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Tecido adiposo e enxerto com tubo de polietileno poroso usados na técnica de tubulização influenciaria na reinervação de músculos de contração lenta e rápida de ratos?

Daniel Ventura Dias 15 December 2011 (has links)
Problemas relacionados a lesões de nervos periféricos com consequentes perdas sensitivas e motoras tornaram-se frequentes no dia a dia da prática clínica e hospitalar, em consequência do aumento da violência urbana, dos acidentes de trânsito, acidentes profissionais e domésticos. Por esta razão, a busca por estratégias e técnicas que possam reparar a lesão nervosa e restabelecer a função do tecido lesado é importante e de grande valia no âmbito da saúde. Para reparar lesões nervosas com perda de tecido nervoso, várias técnicas cirúrgicas têm sido utilizadas, uma das técnicas mais comum é o uso do enxerto autógeno, mas técnicas alternativas têm sido propostas a fim de evitar as complicações ao local doador e acelerar o processo de regeneração nervosa como, por exemplo, a da tubulização. O uso desta técnica tem sido mais utilizado para o preenchimento dos tubos com substâncias que acelerem ou induzam o crescimento axonal. Baseado no exposto anteriormente pensou-se na realização desta pesquisa com o objetivo de verificar se uso de tubo de polietileno poroso preenchido ou não com tecido adiposo na técnica de tubulização alteraria a recuperação dos músculos sóleo (de contração lenta) e Extensor longo dos dedos (de contração rápida). Para isso foram utilizados 45 ratos (Rattus norvegicus),Wistar, machos, que foram divididos em cinco grupos, sendo, três controles, e dois experimentais. Nos grupos experimentais foram realizados a tubulização de polietilieno poroso preenchido ou não com tecido adiposo (GECP e GESP, respectivamente). Os tubos foram testados para avaliar a eficácia em reduzir a lacuna crítica de 10 mm do nervo isquiático. Os animais dos grupos experimentais foram sacrificados 150 dias após a cirurgia. Dos três grupos controles, dois não sofreram intervenção cirúrgica, e receberam o nome de inicial (GCI) e final (GCF) e foram sacrificados com 80 e 230 dias de vida respectivamente. E no outro grupo controle, denominado desnervado (GCD) os animais foram submetidos à secção do nervo isquiático. Antes do sacrifício os animais foram submetidos à análise funcional da marcha. Durante o sacrifício foram retiradas amostras dos músculos sóleo e Extensor longo dos dedos, que foram submetidas à coloração de Hematoxilina e Eosina, Tricrômico de Masson, e também a reações de m-ATPase e NADH-Tr. Imunomarcações foi utilizada para a expressão de Myod e miogenina. Os dados foram submetidos ao tratamento estatístico. Os resultados mostraram que nos animais dos grupos experimentais tiveram melhor recuperação muscular do que os dos animais desnervados e foi inferior quando comparado com o grupo controle final (GCF). Baseado nestes dados pode-se concluir que o uso do tubo de polietileno poroso com preenchimento de tecido adiposo interferiu positivamente na recuperação tanto do músculo sóleo quanto o extensor longo dos dedos. / Problems related to injuries of peripheral nerves with consequent sensory and motor losses are seen more frequently in daily clinical and hospital practice due to an increase in urban violence, traffic accidents, domestic and labour accidents. For this reason, the search for strategies and techniques that can repair nerve damage and restore function of damaged tissue is important and of great value in health care. To repair nerve damage with loss of nerve tissue, several surgical techniques have been used, one of the common techniques is the use of the autograft, but alternative techniques have been proposed to avoid complications to the donor site and accelerate the process of nerve regeneration, such as tubulization. The use of this technique has been further utilized by filling the tubes with substances that speed up or induce axonal growth. Based on the previous work, in this research we wanted to see whether tubilization with the help of porous polyethylene tube filled with and without adipose tissue alter the recovery of the soleus (slow twitch) and extensor digitorum longus (fast twitch) muscles. For this we used 45 male Wistar rats (Rattus norvegicus), who were divided into five groups, three control and two experimental. In the experimental groups, tubulization was performed using porous polyethylene filled with (GECP) and without adipose tissue (GESP). The conduits were tested for efficacy in bridging the critical gap length of 10 mm in sciatic nerves.The animals of experimental groups were sacrificed 150 days after surgery. Of the three control groups, two did not undergo surgery, and were named as (GCI) for Initial and (GCF) for final group in which the animals were sacrificed at 80 and 230 days old respectively. And another control group, called denervated (GCD), the animals were subjected to sciatic nerve section. Prior to sacrifice the animals were subjected to functional analysis of gait. During the sacrifice, samples were taken from soleus and extensor digitorum longus muscles, which were stained with Hematoxylin and Eosin, Masson\'s trichrome and were also subjected to reactions of m-ATPase and NADH Tr. Immunostaining was also utilised for the expression of MyoD and myogenin. The data were analyzed statistically. The results showed that animals of experimental groups have better muscle recovery than those of denervated animals however the recovery was inferior when compared with the final control group (GCF).Based on these data we can conclude that the use of porous polyethylene tube filled with adipose tissue had a positive influence on the recovery of both the soleus and extensor digitorum longus.
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Ação do N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutamina (MDP) na regeneração nervosa periférica. Estudo experimental em camundongos / N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine on peripheral nerve regeneration. Experimental study in mice

Ana Paula Inoe Tomazini 14 November 2003 (has links)
Avaliou-se o efeito do N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutamina (MDP) na regeneração de neurônios periféricos em animais adultos. O nervo ciático esquerdo de oito camundongos machos adultos da linhagem C57BL/6J foi seccionado e o coto proximal e distal foram ancorados no interior de um tubo de polietileno (TP) com diâmetro interno de 0,76 mm, mantendo-se uma distância de quatro mm entre os mesmos. Os animais foram divididos aleatória e eqüitativamente em dois grupos e receberam 2&micro;l de solução purificada de colágeno (Vitrogen&reg;2,4 mg/ml) (COL) ou colágeno e MDP na proporção de 1:1 obtendo-se uma concentração de 1 mM (COL/MDP). Outros quatro animais não operados serviram como controle de normalidade (NOR). Após quatro semanas, os TP com os cabos de regeneração (CR) no seu interior, foram coletados para determinação do número de axônios mielínicos e da média do diâmetro das fibras mielínicas regeneradas. Os resultados revelaram diferença significativa no número de axônios entre os grupos NOR (4355 ± 32), COL (1869 ± 289) e COL/MDP (2430 ± 223). Houve redução significativa no diâmetro das fibras mielínicas nos grupos que receberam as próteses tubulares (COL= 3,38 &micro;m ± 1,16 e COL/MDP= 3,54 &micro;m ± 1,16) quando comparados ao grupo NOR (6,19 &micro;m± 2,45). O gânglio da raiz dorsal L5 também foi removido e seccionado em série para a contagem e mensuração dos neurônios sensitivos. O número de neurônios não diferiu entre os grupos experimentais (COL = 564 ± 51 e COL/MDP = 514 ± 56), os quais apresentaram menor número de neurônios sensitivos em relação ao grupo não operado (NOR = 1097 ± 142). Os resultados indicam que a aplicação local do MDP estimula a regeneração de nervos em camundongos. / N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine (MDP) was evaluated for its effect on the regenerating peripheral neurons in adult animals. The left sciatic nerve of nine male adult mice C57BL/6J was cut, the proximal and distal nerve stumps were inserted into a polyethylene tube (PT) with 0,76 mm inner diameter, leaving a four mm distance gap. Animals were randomly distributed into two groups and received 2&micro;l of purified preparation of collagen (Vitrogen&reg; 2,4 mg/ml) (COL) or collagen and MDP made up in 1:1 volume ratio, obtaining a 1 mM (COL/MDP) concentration. Other four non-operated animals served as controls (NOR). After four weeks, PT with the regenerated nerve cables (RC), were processed for total myelinated axon counts and myelinated fiber diameter. The results revealed significant difference (p<0.05) in the axons count among the groups NOR (4355 ± 32), COL (1869 ± 289) and COL/MDP (2430 ± 223). There was a significant reduction in the diameter of myelinated fibers in the operated groups (COL = 3,38 &micro;m ± 1,16 and COL/MDP = 3,54 &micro;m ± 1,16) when compared to non-operated animals (6,19 &micro;m ± 2,45). The L5 dorsal root ganglion (DRG) was also removed form the same mice and serially sectioned for sensory neurons count and measurement. No difference was found in the number of DRG neurons among the experimental groups (COL = 564 ± 51 and COL/MDP = 514 ± 56), which presented fewer sensory neurons compared to non-operated group (NOR = 1097 ± 142). The results indicate that the locally applied MDP stimulates peripheral nerve regeneration in mice.
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A reinervação do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de ratos (rattus norvegicus) seria influenciada pelo uso do laser de baixa potência e do tecido adiposo na técnica de tubulização? / The reinnervation of extensor digitorius longus (EDL) of rats (Rattus norvegicus), would be influenciate by the association of adipose tissue and low power laser in tubulization technique by vein?

Moraes, Luis Henrique Rapucci 27 November 2009 (has links)
Lesões nervosas periféricas com alterações morfofuncionais são de grande importância clínica, porque pode prejudicar a função, comprometendo a sensibilidade e/ou a motricidade do órgão alvo. Quando o nervo é lesado, o indivíduo torna-se impossibilitado de realizar suas atividades, seja profissional ou pessoal, e a partir do acidente esta situação se agrava ainda mais, pois tem início uma trajetória de sofrimento e humilhações decorrentes do tipo de assistência que passa a receber, tendo em vista, ainda, a fragilidade emocional e o abatimento moral de que passa a ser vítima. Na tentativa de reparo de lesões graves de nervos periféricos, várias técnicas têm sido utilizada, mas algumas com prejuízos funcionais para outras área do corpo, como por exemplo, quando se usa outro nervo no enxerto. Considerando que enxertos venosos tem tido bons resultados na capacidade regenerativa das fibras nervosas, e como elas são encontradas em abundância e em locais de fácil acesso cirúrgico, pensou-se em verificar se o tecido adiposo e o laser de baixa potência alterariam os resultados da reinervação, por tubulização, em músculos de contração rápida (EDL). Para isso foi utilizado 84 ratos (Rattus norvegicus) da linhagem wistar, machos, que foram divididos em 12 grupos (oito experimentais e quatro controles). Nos grupos experimentais (GE) foi utilizada tubulização de veia preenchida, ou não de tecido adiposo (GEVV e GEVG, respectivamente), com e sem tratamento de laser (GEVVL e GEVGL, respectivamente). Os grupos controles (GC) receberam os nomes de positivos (GCP) quando os animais não sofreram intervenção cirúrgica, e negativos (GCN) quando os animais foram submetidos à desnervação do nervo ciático. Todos os grupos tiveram os seus animais sacrificados em dois períodos, 45 e 150 dias, após o início do experimento. A certificação da recuperação foi feita por meio da análise dos músculos inervados por ele (EDL), comparando-os com os respectivos grupos controles. Técnicas de microscopia, Imunofluorescência (MyoD e miogenina), apoptose (Tunel), morfométricas e análise funcional do ciático, foram empregadas nesta investigação. Os resultados mostraram que aos 45 dias pós desnervação os dados dos grupos experimentais estavam mais próximos do grupo controle negativo, mas aos 150 dias eles estavam mais próximos aos do grupo controle positivo. Baseado nos dados obtidos pode-se concluir que o uso de tecido adiposo e do laser de baixa potência na técnica de tubulização do nervo ciático interferem na recuperação do músculo EDL desnervado. / The peripheral nerves injuries with morphofunctional alterations, have great clinical importance because could prejudice the function, committing the sensibility and/or the motricity of target organ. When nerve is damage, the individual becomes disabled to realize yours activities, either professional or personal, in the post accident periods, this situation aggravates each more, therefore initiate a trajectory of suffering and distressing despite of the kind of assistance that this person receives, in view of your emotional fragility and your moral discouragement that pass to be victim. In attempt to repair severe peripheral nerves lesions, many techniques had been used, but some present functional prejudices to other area of bodies, for example when other autologous nerve graft it is used. Considering that, vein graft had demonstrated good results in regenerative nerve fibers capacity, and the vein are found in abundance in many locals of chirurgic access, it thought in verify if the adipose tissue and low power laser could alter the reinnervation results, by tubulization technique, in fast twitch muscle (EDL). For this, was used 84 rats (Rattus norvegicus) wistar, male, divided in 12 groups (eight experimental and four controls). In the experimental groups (EG) was used tubulization by vein combined / or not with adipose tissue (EGV and EGVA, receptively), with or without laser treatment (EGVL and EGVAL, respectively). The controls groups (CG) was called of positives (CGP) when the animals did not subject to transaction nerve, and negatives (CGN) when the sciatic nerve was transaction in this animals. All groups had the animals scarified in two periods, 45 and 150 days post experiments beginning. The recuperation was notified by means of muscle innervated analysis (EDL), comparing with the respective controls groups. Microscope techniques, Immunofluorescence for (MyoD and Miogenin), apoptosis by (Tunel assay), morphometrics and sciatic functional analysis, were employed in this investigation. The results showed that in the 45 days post-dennervation, the data of experimental groups was nearest of negative control group (transaction sciatic nerve), but in the 150 days they was nearest to the positive control group. Based on this, could be conclude that the use of adipose tissue and low power laser used in the tubulization technique by vein in the sciatic nerve interfere in the recuperation of EDL muscle dennervated.
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A reinervação do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de ratos (rattus norvegicus) seria influenciada pelo uso do laser de baixa potência e do tecido adiposo na técnica de tubulização? / The reinnervation of extensor digitorius longus (EDL) of rats (Rattus norvegicus), would be influenciate by the association of adipose tissue and low power laser in tubulization technique by vein?

Luis Henrique Rapucci Moraes 27 November 2009 (has links)
Lesões nervosas periféricas com alterações morfofuncionais são de grande importância clínica, porque pode prejudicar a função, comprometendo a sensibilidade e/ou a motricidade do órgão alvo. Quando o nervo é lesado, o indivíduo torna-se impossibilitado de realizar suas atividades, seja profissional ou pessoal, e a partir do acidente esta situação se agrava ainda mais, pois tem início uma trajetória de sofrimento e humilhações decorrentes do tipo de assistência que passa a receber, tendo em vista, ainda, a fragilidade emocional e o abatimento moral de que passa a ser vítima. Na tentativa de reparo de lesões graves de nervos periféricos, várias técnicas têm sido utilizada, mas algumas com prejuízos funcionais para outras área do corpo, como por exemplo, quando se usa outro nervo no enxerto. Considerando que enxertos venosos tem tido bons resultados na capacidade regenerativa das fibras nervosas, e como elas são encontradas em abundância e em locais de fácil acesso cirúrgico, pensou-se em verificar se o tecido adiposo e o laser de baixa potência alterariam os resultados da reinervação, por tubulização, em músculos de contração rápida (EDL). Para isso foi utilizado 84 ratos (Rattus norvegicus) da linhagem wistar, machos, que foram divididos em 12 grupos (oito experimentais e quatro controles). Nos grupos experimentais (GE) foi utilizada tubulização de veia preenchida, ou não de tecido adiposo (GEVV e GEVG, respectivamente), com e sem tratamento de laser (GEVVL e GEVGL, respectivamente). Os grupos controles (GC) receberam os nomes de positivos (GCP) quando os animais não sofreram intervenção cirúrgica, e negativos (GCN) quando os animais foram submetidos à desnervação do nervo ciático. Todos os grupos tiveram os seus animais sacrificados em dois períodos, 45 e 150 dias, após o início do experimento. A certificação da recuperação foi feita por meio da análise dos músculos inervados por ele (EDL), comparando-os com os respectivos grupos controles. Técnicas de microscopia, Imunofluorescência (MyoD e miogenina), apoptose (Tunel), morfométricas e análise funcional do ciático, foram empregadas nesta investigação. Os resultados mostraram que aos 45 dias pós desnervação os dados dos grupos experimentais estavam mais próximos do grupo controle negativo, mas aos 150 dias eles estavam mais próximos aos do grupo controle positivo. Baseado nos dados obtidos pode-se concluir que o uso de tecido adiposo e do laser de baixa potência na técnica de tubulização do nervo ciático interferem na recuperação do músculo EDL desnervado. / The peripheral nerves injuries with morphofunctional alterations, have great clinical importance because could prejudice the function, committing the sensibility and/or the motricity of target organ. When nerve is damage, the individual becomes disabled to realize yours activities, either professional or personal, in the post accident periods, this situation aggravates each more, therefore initiate a trajectory of suffering and distressing despite of the kind of assistance that this person receives, in view of your emotional fragility and your moral discouragement that pass to be victim. In attempt to repair severe peripheral nerves lesions, many techniques had been used, but some present functional prejudices to other area of bodies, for example when other autologous nerve graft it is used. Considering that, vein graft had demonstrated good results in regenerative nerve fibers capacity, and the vein are found in abundance in many locals of chirurgic access, it thought in verify if the adipose tissue and low power laser could alter the reinnervation results, by tubulization technique, in fast twitch muscle (EDL). For this, was used 84 rats (Rattus norvegicus) wistar, male, divided in 12 groups (eight experimental and four controls). In the experimental groups (EG) was used tubulization by vein combined / or not with adipose tissue (EGV and EGVA, receptively), with or without laser treatment (EGVL and EGVAL, respectively). The controls groups (CG) was called of positives (CGP) when the animals did not subject to transaction nerve, and negatives (CGN) when the sciatic nerve was transaction in this animals. All groups had the animals scarified in two periods, 45 and 150 days post experiments beginning. The recuperation was notified by means of muscle innervated analysis (EDL), comparing with the respective controls groups. Microscope techniques, Immunofluorescence for (MyoD and Miogenin), apoptosis by (Tunel assay), morphometrics and sciatic functional analysis, were employed in this investigation. The results showed that in the 45 days post-dennervation, the data of experimental groups was nearest of negative control group (transaction sciatic nerve), but in the 150 days they was nearest to the positive control group. Based on this, could be conclude that the use of adipose tissue and low power laser used in the tubulization technique by vein in the sciatic nerve interfere in the recuperation of EDL muscle dennervated.

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