Made available in DSpace on 2016-04-12T12:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 noemia_lima_ioc_dout_2015.pdf: 29567185 bytes, checksum: 3de9ba1c4aa0b0fd32cd0580439ffbde (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A vacina contra febre amarela, constituída pelo vírus febre amarela (FA) vivo atenuado da cepa 17D, é uma das mais seguras e eficazes vacinas desenvolvidas até hoje. Seu correlato de proteção é a indução de anticorpos neutralizantes, que é acompanhada de intensa resposta imune celular, com ativação de um perfil balanceado de células TH1 e TH2, devido à ampla estimulação da resposta imune inata. Estas boas características tornam atraente o uso do vírus FA 17D como vetor para o desenvolvimento de novas vacinas contra outras doenças. O nosso laboratório utiliza uma estratégia única para expressão de proteínas heterólogas ao vírus FA 17D, através da inserção de cassetes de expressão na região intergênica E/NS1. Neste trabalho, determinamos a importância de alguns motivos funcionais introduzidos nas extremidades da GFP recombinante expressa por este vetor, que causaram impacto sobre a sua expressão, através do correto enovelamento proteico e transporte para a via secretora. Além disto, apresentamos diferentes plataformas, através de modificações no vetor previamente desenvolvido, que exibiram diferenças quanto à estabilidade genética do inserto, menor interferência com a replicação viral, menor indução de morte celular e capacidade de secreção da proteína recombinante. Adicionalmente, expressamos proteínas de envelope de SIV através de alguns dos novos vetores FA 17D desenvolvidos, que foram capazes de estimular anticorpos específicos em camundongos, demonstrando o potencial do vírus FA 17D como vetor para o desenvolvimento de vacina recombinante contra AIDS baseada na indução de resposta imune humoral / The yellow fever vaccine, composed of the live attenuated Yellow fever (YF) virus strain 17D, is one of the safest and most effective vaccines ever developed. Its correlate of protection is the induction of neutralizing antibodies, which is accompanied by intense cellular immune response with activation of a balanced profile of TH1 and TH2 cells due to the broad stimulation of the innate immune response. These characteristics make this virus attractive to be used as a vector for development of new vaccines against other diseases. Our laboratory uses a unique strategy for expression of heterologous proteins in the YF 17D virus by insertion of expression cassettes in the intergenic region E/NS1. Here, we determine the importance of some functional motifs introduced at the ends of the recombinant GFP expressed by this vector, which were able to improve its expression through the proper protein folding and its transport to the secretory pathway. Moreover, we present different platforms, which show differences in genetic stability of the insert, less interference with viral replication, less induction of cell death and enhanced capacity of secretion of the recombinant protein. Additionally, we express SIV envelope proteins by some of the new vectors developed that were able to elicit specific antibodies in mice, demonstrating the potential of the YF 17D virus as a vector for the development of recombinant vaccine against AIDS based on the induction of humoral immune response / 2100-Fev-02

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-04-07T11:49:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Danielle_Almeida.pdf: 2650975 bytes, checksum: 80a18514ce2bd91e7361e6eacc16a783 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-04-07T11:49:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Danielle_Almeida.pdf: 2650975 bytes, checksum: 80a18514ce2bd91e7361e6eacc16a783 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-04-07T11:50:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Danielle_Almeida.pdf: 2650975 bytes, checksum: 80a18514ce2bd91e7361e6eacc16a783 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-07T11:50:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Danielle_Almeida.pdf: 2650975 bytes, checksum: 80a18514ce2bd91e7361e6eacc16a783 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Vacinas são os únicos meios para interromper a cadeia de transmissão de doenças imunopreviníveis. A vacina tríplice viral (contra sarampo, caxumba e rubéola), fornecida por Bio-Manguinhos, é constituída da mistura dos vírus vivos atenuados do sarampo, caxumba e rubéola. É de grande importância o efetivo controle da qualidade deste produto antes do seu ingresso no mercado, sendo necessária a realização do ensaio de potência biológica com a utilização de uma vacina de referência. O presente estudo teve como objetivo principal avaliar um lote vacinal como material de referência de trabalho (MRT) candidato (cMRTBio) para ser utilizado na rotina da determinação de potência da vacina tríplice viral em substituição a vacina disponibilizada pela GlaxoSmithKline (GSK) empregada anteriormente.Este estudo foi baseado nas normativas de compêndios que preconizam os estudos de caracterização do lote candidato quanto à homogeneidade e estabilidade, utilizando-se ferramentas estatísticas adequadas,visando à atribuição do seu valor, atendendo aos propósitos desejados e agregando maior confiabilidade aos ensaios de potência realizados pelo laboratório. O lote designado de 131VVA002Z utilizado como cMRTBio apresentou características como integridade, composição e potência em conformidade com as especificações exigidas. No estudo de homogeneidade, os resultados obtidos foram considerados homogêneos intra-frascos e inter-frascos, já que todos os coeficientes de variação obtidos foram inferiores a 10%, estando dentro do limite de aceitação. A potência estimada de cada componente viral do cMRTBio foi de: 3,73 log10 CCID50 / DH para o vírus do sarampo, 4,75 log10 CCID50 / DH para o vírus da caxumba e 3,67 (log10 CCID50 / DH) para o vírus rubéola, estando dentro das especificações previstas. No estudo de estabilidade verificamos um pequeno decaimento de potência, sendo estes valores considerados irrelevantes, uma vez que a potência encontrada ainda se encontrava dentro dos valores determinados para a especificação da vacina. De acordo com os resultados obtidos, verificamos que o cMRTBio apresentou todas as características exigidas para ser utilizado como MRT, sendo este material protocolado na Instituição como MRT(B)TVV001/13. / Vaccines are the only means to interrupt the transmission chain of transmission of immune predictable diseases. The MMR vaccine (measles, mumps and rubella), supplied by Bio-Manguinhos, is composed of a mixture of live attenuated viruses of measles, mumps and rubella. It is of great importance to the effective control of the quality of this product before its market entrance because it is necessary to perform the test of biological power with the use of a reference vaccine. The main objective of this study was to evaluate a batch vaccine as work reference material (MRT) candidate (cMRTBio) to be used in the routine determination of power of the MMR vaccine in replacing the vaccine made by GlaxoSmithKline (GSK), which was previously employed. This study was based on normative compendia that advocate the studies of characterization of candidate batch homogeneity and stability, using appropriate statistical tools, aiming the allocation of its value, taking into account the purposes intended and aggregating greater reliability to tests of power performed by the laboratory. The batch designated as 131AWV002Z used as cMRTBio presented characteristics such as integrity, composition and power in accordance with the required specifications. In the homogeneity study, the results obtained were considered homogeneous intra-bottles and inter-bottles, considering that all coefficients of variation obtained were lower than 10 %, while within the limit of acceptance. The estimated power of each viral component of cMRTBio was: 3.73 log10 CCID50 / DH for the measles virus, 4.75 log10 CCID50 / DH for the mumps virus and 3.67 (log10 CCID50 / DH) for the rubella virus, being within the specifications provided. In the study of stability we noticed a small decay of power, being these values considered irrelevant, since the power found was still within the values determined for the specification of the vaccine. According to the results obtained, we can notice that the cMRTBio presented all the required characteristics to be used as MRT, being this material filed in the Institution as MRT(B)TVV001/13.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-04T11:37:37Z No. of bitstreams: 1 fernanda-martins.pdf: 786034 bytes, checksum: e059b45f6a12387864511efbf2ecfdbe (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-04T11:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernanda-martins.pdf: 786034 bytes, checksum: e059b45f6a12387864511efbf2ecfdbe (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A combinação de vacinas é uma estratégia de grande relevância para o Programa Nacional de Imunizações. Através dela, é possível aumentar a proteção a múltiplas doenças em uma única vacina, bem como diminuir as constantes visitas ao posto de saúde. Contudo, uma das desvantagens em relação a esse tipo de estratégia é a possibilidade de ocorrer interferência antigênica entre os seus componentes,o que pode resultar na diminuição da resposta imunológica. Devido a este fato, foi realizada uma combinação com vacinas já presentes no calendário brasileiro de imunizações (DTP-Hib) a vacinas experimentais em desenvolvimento em Bio-Manguinhos (meningocócica B e meningocócica C conjugada), com a finalidade de apresentar uma nova perspectivade produto a esta unidade bem como estabelecer a correlação antigênica entre esses componentes, comparando metodologias já padronizadas para este fim à metodologia alternativa (ELISA), além de avaliar a pirogenicidade e a interferência entre os componentes vacinais utilizados na combinação. A resposta imunológica aos componentes vacinais foiavaliada em camundongos suíços, NIH e cobaias Short-Hair pelo ELISA (VME, polissacarídeo C, PRRP, Bordetella pertussis) e os testes de soroneutralização in vivo(componentes tetânico e diftérico). Todos os componentes vacinais avaliados pelo ELISA induziram soroconversão nos animais 30 dias após a última imunização. Quando comparadas à vacina combinada completa, somente a resposta imunológica ao polissacarídeo C sofreu interferência de algum componente vacinal. Após novas combinações davacina meningocócica C conjugada às outras vacinas, pode-se concluir que avacinas DTP e Hib interagem positivamente na resposta daquela vacina. Em relação à soroneutralização in vivo, houve uma diminuição da potência dos componentes tetânicoe diftérico quando cobaias Short-Hair foram imunizadas com a vacina DTP-Hib combinada às vacinas meningocócicas B e C conjugada. Em contrapartida, na quantificação de IgG total em camundongos suíços imunizados com as duas combinações (DTP-Hib e DTP-Hib/B/C), não ocorreu diferença significativa entre os dois grupos. O teste de pirogenicidade realizado em coelhos comprovou que, quando combinadas entre si, às vacinas são capazes de aumentar a temperatura destes animais, provavelmente, devido àpresença de Bordetella pertussise VME de Neisseria meningitidisgrupo B. Apesar de não ter sido possível à comparação com ostestes padronizados, o ELISA mostrou-se muito satisfatório na pesquisa da resposta imunológica em camundongos. Embora preliminares, os resultados são muito importantes, pois introduzem novas perspectivas para a realização de outras combinações que atendam as demandas requisitadas pelo Programa Nacional de Imunizações. / The combination of vaccines is a great relevance strategy to the National Immunization Program. It enables increase protection to multiple diseases in a single injection, as well as reduces constant visits to health care. However, a disadvantage of this strategy is antigenic interference among vaccine components, resulting in immune response decreased. Due to this fact, a combination between vaccines of Brazilian immunization calendar (DTP-Hib) and experimental vaccines developed in Bio-Manguinhos (meningococcal B and meningococcal C conjugate) wasperformed, in order to present a new perspective of product to this unit and establish the antigenic correlation of these components, comparing standardized methodologies with alternative methodology (ELISA), besides evaluating pyrogenicity and interference ofcombined vaccine components. The immune response to vaccine components was evaluated in Swiss and NIH mice and Short-Hair guinea pigs by ELISA (OMV, polysaccharide C, PRP, Bordetella pertussis) and in vivoneutralization test (tetanus and diphtheria components). All vaccine components assessed by ELISA induced seroconversion rates 30 days after the last immunization in animals. The complete combined vaccine, interfered in the immune response to polysaccharide C. After new combinations of meningococcal C conjugate vaccine to other vaccines, we concluded that DTP and Hib vaccines induce a positive interaction in immune response to that vaccine. Regarding in vivoneutralization, there was a decrease of tetanus and diphtheria components potency when Short-Hair guinea pigs were immunized with DTP-Hib combined to B and C meningococcal conjugate vaccines. In contrast, when total IgG in Swiss mice immunizedwith the two combinations (DTP-Hib and DTP-Hib/B/C) was quantified, no significant difference was observed. Pirogenicity test in rabbits proved that complete combined vaccine increase the temperature of these animals, probably due to the presence of Bordetella pertussisand Neisseria meningitidisgroup B outer membrane vesicle. Although it was not possible comparision with standardized test, ELISA was a satisfactory test in studing immune response in mice. Although preliminary, the results are important because introduce new perspectives for other combinations could be done to atempt the required demands of National Immunization Program.