Orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Jairo Kenupp Bastos / Banca: José Angelo Silveira Zuanazzi / Resumo: A espécie Trichilia catigua, é uma árvore de 3 a 5 metros de altura, de distribuição ampla nos países da América do Sul, é conhecida como catuaba ou catiguá ou Angelim rosa, é utilizada popularmente como tônico mental e físico e especialmente como estimulante sexual. Cinchonaínas A e B foram escolhidas como marcadores químicos para a padronização do extrato hidroalcóolico de cascas de catuaba por serem as substâncias majoritárias desse extrato e também possuírem atividades antioxidante e antibacteriana. Como os padrões de cinchonaínas ainda não são comercializados foi realizado, neste trabalho, o isolamento, identificação, determinação de pureza absoluta e estudo de estabilidade destes compostos para que possam ser utilizados adequadamente como padrões de trabalho. A purificação das cinchonaínas foi feita em CLAE preparativo, utilizando coluna de fase reversa C18 e gradiente linear de CH3COOH (0,1%) em H2O/MeOH e a identificação foi realizada através da análise dos espectros de massas de alta resolução e RMN de 1H e 13C. Foram realizados também estudos de estabilidade em solução para cinchonaína A, B e extrato hidroalcóolico da casca de catuaba em diferentes condições de armazenamento. Os estudos de estabilidade acelerada foram realizados de acordo com RE 398 da ANVISA em condições de temperatura (40ºC) e umidade (75% UR). Estes estudos indicaram que os padrões de cinchonaína A e B são estáveis quando mantidos secos sob condições ambientais, com prazo de validade estimado de dois anos. No entanto, em solução hidrometanólica (MeOH:H2O 1:1) ocorre rápida oxidação com formação das di - orto - quinonas, indicando que as soluções mães desses padrões não podem ser estocados por mais de 1 dia. O estudo de estabilidade em solução, mostrou que o perfil cromatográfico das soluções hidroalcóolicas da planta não apresentou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trichilia catigua, is a tree which grows 6.56 to 13.12 feet, widely distributed in South America, and is known as catuaba, catiguá or Angelim renders rose-colored and is popular used as mental and physical tonic and especially as sexual stimulant. Cinchonains A and B were chosen as chemical markers to standardize the extract in focus due the major concentration of those substances in the hydroalcoholic extract from bark of catuaba and also due to antioxidant and anti bacterial activities related to them. Since the cinchonains standards are not commercialized, we had to perform the isolation, identification, absolute purity and stability study of these compounds, so that they could be properly used as standards. The cinchonains purification was performed in HPLC using preparative C-18 reverse phase column and H2O/MeOH as solvent, by running a linear gradient. The identification was obtained through high resolution mass spectrum and 1H e 13C NMR (Nuclear Magnetic Resonance). Stability studies were executed in solution of cinchonain A, B and hydroalcoholic extract from bark of catuaba in different storage conditions. The accelerated stability studies were performed according to RE 398, November 12nd of 2004 - ANVISA under temperature of 40 °C and humidity of 75% UR. These studies indicated that standards of cinchonain A and B are stable when they are dried and kept under ambient conditions, having a shelf life estimated of two years. However, in hydromethanol solution (MeOH:H2O 1:1), rapid oxidation occurs leading to di-orthoquinones formation, indicating that stock standards solutions cannot be stored more than 1 day. The stability study on solution showed that the chromatographic profile of the plant hydroalcoholic solution did not present alteration within 7 days, indicating that samples can be prepared and stored during this period. The parameters... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Paschoal Batistuti / Banca: Fernando Luis Fertonani / Banca: Valeria Monterio da Silva Eleutério / Resumo: O presente trabalho consiste no desenvolvimento de um método analítico para determinação de biotina, utilizando-se a potenciometria indireta. O objetivo é apresentar a validação de método analítico como um processo que estime a eficiência do método proposto na rotina do laboratório para garantia da qualidade total. É um método que envolve equipamento simples e pouco dispendioso como o potenciômetro, que possibilita medir com precisão o valor da concentração de biotina. O doseamento quantitativo de biotina baseia-se no estudo das reações oscilantes do analito perante as análises da titulação indireta utilizando potenciômetro automático. A concentração de biotina foi determinada com massa adicionada conhecida numa matriz que simula uma cápsula, contendo aerosil (1%), estearato de magnésio (1%), celulose microcristalina (20%), amido (40%) e lactose q.s.p. Os resultados mostraram um valor médio de biotina (massa adicionada de aproximadamente 25 mg) determinada de 99,4% com desvio-padrão de 0,0345. As condições experimentais como temperatura, vidraria e concentração dos reagentes foram otimizadas. Os parâmetros investigados no processo de validação para demonstrar o desempenho do método foram: especificidade, linearidade, intervalo, precisão tanto repetitividade, quanto intermediária, exatidão e robustez. O tratamento estatístico dos dados da validação do método analítico envolveu a determinação da média, do desvio padrão e do coeficiente de variação. Para obtenção da curva de calibração se fez necessária a determinação da equação da reta, regressão linear e coeficiente de correlação linear. Este método apresenta grande aplicabilidade em soluções turvas, fluorescentes, opacas ou coradas, ou quando não existem, ou não podem aplicar-se indicadores visuais apropriados. Há possibilidade de determinação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work shows the development of an analytical method for the determination of biotin by using indirect potentiometry. The main goal is to present the validation of analytical methods as a process to estimate the efficiency of the proposed methodology in the laboratory routine for the guaranty of total quality. This method involves simple and low cost devices as the potentiometer, which allows the precise measurement of biotin concentration. The quantitative dosing of biotin is based on the study of the oscillating chemical reactions with the analyte by performing the analysis of the indirect titration with an automatic potentiometer. Biotin concentration was determined by adding a known mass to a matrix that simulates a capsule containing aerosol (1%), estearato de magnésio (1%), celulose microcristalina (20%), amido (40%) e lactose q.s.p. The results showed an average value for the determination of biotin (added mass was ca. 25 mg) of 99.4% with a standard deviation of 0.0345. The experimental conditions as temperature, glassware, and concentration of the chemicals were optimized. The investigated parameters of the validation procedure to demonstrate the performance of the method were: specificity, linearity, interval, precision (repeatability and intermediate), exactness and robustness. The statistical treatment of the data for the validation of the analytical method involved the determination of the average value, standard deviation, and the variation coefficient. In order to obtain the calibration curve, the line's equation, the linear regression and the coefficient of linear correlation were determined. This method shows great applicability for turbid, fluorescent, opaque or color solutions, or if an appropriate visual indicator is not available or cannot be applied. The method also shows the possibility for the determination of a sequence of equivalence... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: Os bovinos são divididos em dois grandes grupos, taurinos e zebuínos, cuja divergência genética é de aproximadamente 250 mil anos. Apesar da proximidade filogenética, os grupos respondem de maneira diferente ao teor de energia da dieta. No presente estudo objetivou-se validar o uso do microarranjo BLO+ para estudos de expressão gênica em zebuínos e comparar a expressão gênica no músculo LD de NEL e ANG alimentados com a dieta AE e BE. Oito ANG e oito NEL foram divididos em duas baias e receberam a dieta BE por 28 dias e na seqüência a dieta AE pelo mesmo período. Após cada período, coletou-se amostras do músculo LD, das quais extraíu-se o RNA para os estudos de expressão gênica usando microarranjos. Foram expressos 9.552 e 8.664 genes em ANG e NEL, sendo que 98% dos genes expressos em NEL também foram expressos em ANG, indicando uma alta similidaridade entre as sondas do microarranjo e os transcritos de NEL. Identificaram-se 546 genes DE para ANG e 440 para NEL. Realizou-se a análise funcional desses conjuntos de genes e observou-se diferenças nas categorias funcionais mais representativas entre as raças entre as dietas. A dieta AE estimula de forma mais acentuada a expressão de genes envolvidos no crescimento e desenvolvimento muscular em ANG, enquanto a dieta BE estimula de forma mais acentuada a expressão de genes que codificam proteínas relacionadas à captação de nutrientes endógenos em NEL. Os resultados obtidos sugerem que o microarranjo BLO+ pode ser usado em estudos de expressão gênica com zebuínos e indicam que o nível nutricional da dieta afeta diferentemente a expressão gênica no músculo LD de taurinos e zebuínos. / Abstract: Bovines are divided in two large groups, taurine and zebuine, whose genetic divergence is estimated as 250,000 years before present. Despite of phylogenetic proximity, these groups respond differently to diet energy level. The current study aimed to validate the BLO+ microarray use in zebuine gene expression experiments and evaluate gene expression in LD muscle from NEL and ANG fed with AE and BE diets. Eight ANG and NEL animals were separated in two pens and received BE diet during 28-days period; following animals were fed with AE diet for the same period. After each period, samples from LD muscle were collected, of which RNA was extracted to proceed with gene expression experiment using microarrays. Were expressed 9,552 and 8,664 genes in ANG and NEL, where 98% of expressed genes in NEL were also expressed in ANG, indicating a high similarity between microarray probes and NEL transcripts. Statistical analysis identified 546 genes differentially expressed for ANG and 440 for NEL. These gene groups were submitted to functional analysis and differences in overrepresented functional categories were observed between breeds and diets. AE diet stimulates further the expression of genes related to muscle growth and development in ANG, while BE diet stimulates further the expression of genes involved in endogenous nutrients uptake in NEL. The results obtained suggest that BLO+ microarray can be used in zebuine gene expression studies and indicate that nutritional level of diet affects the differential gene expression in LD muscle from taurine and zebuine beef cattle. / Orientador: Luiz Roberto Furlan / Coorientadora: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Banca: Leandro Márcio Moreira / Banca: Poliana Fernanda Giachetto / Banca: Marcelo Luiz de Laia / Banca: Lúcia Maria Carareto Alves / Doutor

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Marcos Antonio Segatto / Banca: Cristiane Masetto de Gaitani / Banca: Maria Virgínia Costa Scarpa / Banca: Thereza Christina Vessoni Penna / Resumo: A cefoxitina sódica (CAS 33564-30-6), antimicrobiano cefalosporínico, apresenta espectro de atividade contra microrganismos Gram-negativos mais amplo que as cefalosporinas mais antigas. Também é eficaz contra Proteus e Serratia indol-positivos, mostrando alta resistência à hidrólise por b-lactamases. Indicada no tratamento de peritonites e outras infecções intra-abdominais e intrapélvicas; sinusites, infecções ginecológicas, septicemias; endocardites; infecções do trato urinário, gonorréia não complicada, infecções do trato respiratório, ossos, articulações e pele. Apesar de este fármaco ser altamente estudado e pesquisado no que concerne à atividade antimicrobiana, farmacocinética e farmacodinâmica, há poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento de metodologia analítica para esta cefalosporina. Desta forma, pesquisas envolvendo métodos analíticos são de fundamental importância e altamente relevantes para otimizar sua análise na indústria farmacêutica e farmpacia magistral de modo a garantir a qualidade do produto já comercializado. A proposta deste projeto foi desenvolver metodologias de análise para a cefoxitina sódica, fármaco comercializado no mercado médico-farmacêutico brasileiro. Foram desenvolvidos e validados métodos por CLAE com detector UV a 235 nm, com acetonitrila: água: ácido acético 5 M (22 : 78 : 1) como fase móvel e faixa de concentração de 20,0 à 30,0 μg/mL, tempo de retenção de 7,5 minutos. O coeficiente de correlação obtido foi de 0,9995 e a equação da reta y = 335,67x + 2391,9. O teste recuperação média obtido foi de 100,50%, com desvio padrão de 1,70%. O teor médio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sodium cefatoxin (CAS 33564-30-6), a cephalosporinic antibiotic, has a wider spectrum of activity against Gram-negative microrganisms than older cephalosporin. It is also efficient against the indol-positive Proteus and Serratia and has a high resistance to b- lactamases hydrolysis. Sodium cefatoxin is recommended for the treatment of peritonitis and other intra-abdominal and intra-pelvic infections; sinusitis, gynecological infections, septicemy, endocarditis; urinary tract infections, non-complicated gonorrhea, respiratory tract infections, bones, articulations and skin. Although this drug has been strongly studied and many researches have been developed about its antibiotics activity, pharmacokinetics and pharmacodynamics, there are few studies in the literature about the development of analytical methodology to this cephalosporin. Researches dealing with analytical methods are extremely important and highly relevant to optimize its analysis at the pharmaceutical industry and manipulation pharmacy, guaranteeing quality of the commercialized product. This project proposes the development of methodologies for analysis of sodium cefatoxin, a commercialized drug at the medical-pharmaceutical Brazilian market. Methods for CLAE with UV detector at 235nm were developed and validated with acetonitrile: water: acetic acid 5M (22: 78:1) as mobile phase and concentration range of 20.0 to 30.0 μg/mL, detention time of 7.5 minutes. The correlation coefficient obtained was 0.9995 and the line equation y = 335.67x + 2391.9. The medium recovery test was 100.50% with standard deviation of 1.70%. The medium content of sodium cefoxitin determined by CLAE... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O terpinen-4-ol é o principal componente da M. alternifólia, apresenta atividade antiinflamatória, antibacteriana e antifúngica; em estudos recentes in vitro a atividade antineoplásica para linhagens celulares de melanoma (M14) foi demonstrada. O objetivo específico deste trabalho foi verificar a atividade farmacológica in vitro dos isômeros óticos (-) terpinen-4-ol e (+) terpinen-4-ol e do óleo de Melaleuca alternifolia em nove linhagens diferentes de células tumorais, incluindo a célula UACC-62 do melanoma que ainda não havia sido estudada, e a concentração eficaz para o desenvolvimento de formulação que possa ter ação contra o melanoma. Após realização dos ensaios farmacológicos in vitro verificou-se que o (-)terpinen-4-ol apresentou melhor atividade nas linhagens celulares de melanoma, sendo o princípio ativo de escolha para as duas formulações que foram desenvolvidas, testadas e comprovadas a qualidade e estabilidade. Para caracterização das formulações foram efetuados os ensaios reológicos, sendo comprovado que as emulsões desenvolvidas são adequadas para o uso tópico no que diz respeito às suas características reológicas, sendo que as duas apresentaram comportamento de fluxo semelhante, diferindo apenas na área de histerese. Posteriormente foram feitos testes de permeação e retenção cutânea in vitro, para verificar qual formulação permite que o princípio ativo atinja em maior concentração a camada de interesse para atividade contra o melanoma. O método proposto para quantificação do (-)-terpinen-4-ol foi validado e utilizado nos ensaios de estabilidade acelerada, liberação, permeação e retenção cutânea in vitro. Os ensaios de liberação demonstraram que as duas formulações apresentam cinética de zero ordem, com fluxo de 14,62 µg/cm2 /h para formulação 1 e de 6,70 µg/cm2 /h para formulação F2. Na retenção cutânea ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The terpinen-4-ol is the major component of M. alternifolia, has anti-inflammatory, antibacterial and antifungal, in recent studies in vitro anticancer activity for melanoma cell lines (M14) was demonstrated. The specific objective of this study was to assess the in vitro pharmacological activity of optical isomers (-) terpinen-4-ol and (+) terpinen-4-ol and oil of Melaleuca alternifolia in nine different tumor cell lines, including cell UACC -62 melanoma that had not yet been studied, and effective concentration for the formulation development that may have action against melanoma. After performing the in vitro pharmacological tests showed that the (-) terpinen-4-ol showed better activity in melanoma cell lines, with the active ingredient of choice for the two formulations were developed, tested and proven quality and stability. For characterization of the formulations were made the rheological tests and confirmed that the developed emulsions are suitable for topical use in relation to their rheological characteristics, and the two had similar flow behavior, differing only in the area of hysteresis. Subsequent tests were performed permeation and skin retention in vitro, to determine which formulation allows the active ingredient reaches higher concentration in the layer of interest for activity against melanoma. The proposed method for quantification of (-)-terpinen-4-ol was validated and used in accelerated stability testing, release, skin permeation and retention in vitro. The release assays demonstrated that both formulations have zero order kinetics at a rate of 14.62 g/cm2/h for formulation 1 and 6.70 g/cm2/h for formulation F2. In vitro skin retention was found that the F1 showed retention of terpinen-4-ol smaller in the stratum corneum, compared to F2. Conversely, the retention in the epidermis over the dermis of terpinen-4-ol was higher in F1. It was found that formulation F1 ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Virgínia Scarpa / Coorientador: Marcos Antonio Corrêa / Banca: Leila Aparecida Chiavacci / Banca: Renata Fonseca Vianna Lopez / Mestre