Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial and cytotoxic effect of the methanol extract of the seed and pulp of Myrciaria dubia (camu camu) against Streptococcus mutans (ATCC 25175) and Streptococcus sanguinis (ATCC 10556). Materials and Methods: For the present in vitro experimental study two methanolic extracts were prepared from the seed and pulp of Myrciaria dubia (camu camu) to be tested against Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis. Ten independents tests were prepared for each type of extract, using Clorhexidine at 0.12% solution as a positive control. The method used was agar diffusion test preparing wells with the experimental solutions cultivated in anaerobic conditions for 48 hours at 37°C, after this time the growth inhibition halo was analysed in millimeters using a vernier. Meanwhile, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the cytotoxic effect (CC50) over Jurkat T cell line was found. Results: The methanolic seed extract had more antibacterial effect over Streptococcus mutans with an inhibitory halo of 21.36mm ± 6.35, while the pulp had 16.20mm ± 2.08. For the Streptococcus sanguinis group the inhibitory halo were 19.21mm ± 5.18 and 19.34mm ± 2.90 for the methanolic seed and pulp extract respectively. The MIC for the pulp extract was 125µg/ml for both strains, whereas for the seed antibacterial activity was observed even at low concentrations. Finally the CC50 for the seed extract was at a higher concentration than 800 µg/ml and 524.37µg/ml for the pulp exactract. Conclusions: The methanolic seed and pulp extract of Myrciaria dubia (camu camu) had antibacterial effect against Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis. These extracts were not cytotoxic. / Objetivo: evaluar in vitro el efecto antibacteriano y citotóxico del extracto metanólico de semilla y pulpa de la Myrciaria dubia (camu camu) sobre cepas de Streptococcus mutans (ATCC 25175) y Streptococcus sanguinis (ATCC 10556). Materiales y métodos: el estudio fue experimental in vitro. Se utilizaron los extractos metanólicos de la semilla y pulpa de Myrciaria dubia (camu camu) sobre las cepas de Streptococcus mutans y Streptococcus sanguinis. Para cada extracto se realizaron 10 pruebas independientes y como control positivo se utilizó la Clorhexidina al 0.12%. Se utilizó el método de difusión en agar con pocillos con las soluciones experimentales en condiciones de anaerobiosis por 48 horas a 37°C, para luego proceder a la lectura de los diámetros del halo de inhibición con un vernier. Asimismo, se halló la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos y se determinó el efecto citotóxico (CC50) sobre la línea celular Jurkat. Resultados: el extracto metanólico de la semilla tuvo mayor efecto antibacteriano sobre el Streptococcus mutans con halos de 21.36mm ± 6.35, mientras que la pulpa tuvo 16.20mm ± 2.08. Para el grupo de Streptococcus sanguinis, se observó que los halos de inhibición fueron de 19.21mm ± 5.18 y 19.34mm ± 2.90 para los extractos de semilla y pulpa respectivamente. La CMI del extracto de la pulpa se encontró en la concentración de 125µg/ml para ambas cepas, mientras que para el caso de la semilla se pudo observar actividad antibacteriana aún en bajas concentraciones. Finalmente, la CC50 del extracto de la semilla fue en una concentración mayor a 800 µg/ml y de la pulpa fue 524.37µg/ml. Conclusiones: se determinó que existe efecto antibacteriano del extracto metanólico de la semilla y pulpa de la Myrciaria dubia (camu camu) sobre cepas de Streptococcus mutans y Streptococcus sanguinis. Los extractos metánolicos de este fruto no fueron citotóxicos. / Tesis

Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of Physalis peruviana on Streptococcus mutans (ATCC 25175) and Streptococcus sanguinis (ATCC 10556). Materials y Methods: The present in vitro experimental study was to determinate the antibacterial effect of the fruit of Physalis Peruviana’s methanolic extract against Streptococcus mutans (ATCC 25175) and Streptococcus sanguinis (ATCC 10556) and Clorhexidine (CHX) as control group, the minimum inhibitory concentration (MIC) and citotoxicity. For the antibacterial assay, 14 wells were prepared from the extract and Clorhexidine 0.12% as a positive control for each bacteria. The method used was agar diffusion test preparing wells with the experimental solutions cultivated in anaerobic conditions for 48 hours at 37ºC, after this time, the growth inhibition was analysed in milimiters. with wells. Results: It was found antibacterial effect of the metanolic extract of the fruit in Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis. In the first group, the inhibicion halo of the extract was 19.15mm ± 1.83 and for Clorhexidine 25.78mm ± 2.27, while for the group of Streptococcus sanguinis, the Physalis Peruviana’s extract had 18.56mm ± 1.59 for inhibicion halos and 22.92mm ± 1.96 for Clorhexidine. On the other hand, the extract’s MIC was 50mg/ml. Finally, the methanolic extract of Physalis peruviana inhibited 50% of viability cells (CC50) at 241.01ug/ml concentration. Conclusions: The methanolic extract of Physalis Peruviana had antibacterial effect against Streptococcus mutans and Streptococcus sanguinis. Besides, this fruit wasn’t citotoxic for Jurkat’s line cell. / Objetivo: evaluar in vitro el efecto antibacteriano del extracto metanólico de Physalis peruviana sobre cepas de Streptococcus mutans (ATCC 25175) y Streptococcus sanguinis (ATCC 10556). Materiales y Métodos: el presente estudio fue de tipo experimental in vitro. Se evaluó el efecto antibacteriano del extracto metanólico del fruto de Physalis peruviana frente a cepas de Streptococcus mutans (ATCC 25175) y Streptococcus sanguinis (ATCC 10556) y la Clorhexidina (CHX) como grupo control, determinando la concentración mínima inhibitoria (CMI) y citotoxicidad. Para realizar la actividad antibacteriana se trabajó con una muestra de 14 pocillos por grupo, mediante el método de difusión en agar con pocillos. Por otro lado, para la MIC se utilizó el método de dilución en caldo en medio Brain Heart infusión Broth (BHI) y para evaluar la citotoxicidad se empleó la línea celular Jurkat mediante el ensayo de MTT. Resultados: se observaron halos de inhibición de 19.15mm ± 1.83 para el extracto de physalis peruvina y 25.78mm ± 2.27 para la clorhexidina sobre Streptococcus mutans, mientras que para el grupo de Streptococcus sanguinis, se observaron halos de inhibición de 18.56mm ± 1.59 del extracto de la planta y 22.92mm ± 1.96 para la clorhexidina. Por otro lado, la MIC del extracto fue de 50mg/ml. Finalmente, el extracto metanólico de la Physalis peruviana inhibió la viabilidad celular al 50% (CC50) en una concentración de 241.01ug/ml. Conclusiones: el extracto metanólico de Physalis Peruviana tuvo efecto antibacteriano sobre cepas de Streptococcus mutans y Streptococcus sanguinis. Además, no fue citotóxico para la línea celular Jurkat. / Tesis

[ES] En la presente tesis doctoral se ha desarrollado una metodología multidisciplinar para la evaluación del potencial fotoquímico y fotobiológico in vitro de los fármacos inhibidores de la poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP), combinando tanto estudios fotofísicos y de caracterización como estudios fotobiológicos en biomoléculas modelo y en cultivos celulares, concretamente en queratinocitos humanos inmortalizados (HaCaT). Así, el objetivo general es investigar si estos fármacos, en combinación con la radiación solar, son capaces de inducir reacciones de fotosensibilidad y, por tanto, poder alertar a los oncólogos de estos hallazgos para que puedan indicar pautas de fotoprotección adecuadas a sus pacientes, y así prevenir estos efectos indeseados. Esta tesis se divide en un total de 7 capítulos. En el primero (introducción), se recogen los hitos más importantes relacionados con los inhibidores de la PARP, así como un resumen acerca de las reacciones de fotosensibilización y de los mecanismos químicos y biológicos involucrados en las mismas. Tras una exhaustiva búsqueda bibliográfica acerca de estos fármacos, se hizo un primer cribado de los cinco de la tercera y última generación (rucaparib, talazoparib, niraparib, olaparib y veliparib), identificando así tres de ellos como posibles agentes fotosensibilizantes: rucaparib, talazoparib y niraparib, cuyo estudio se describe en profundidad en los capítulos 4, 5 y 6 de la tesis. En el capítulo 4 se evalúa la fototoxicidad del rucaparib (RCP), un fármaco que, a pesar de tener un cromóforo indol en su estructura química, posee un desplazamiento batocrómico hacia la región UVA de la luz solar, siendo así capaz de inducir reacciones de fotosensibilidad. Se observó mediante experimentos de fluorescencia y fotólisis de destello láser que, tras absorción de luz en esta región del espectro, tiene lugar la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), que podrían ser las responsables de generar un daño fotooxidativo hacia el ADN celular y a las proteínas transmembranales, originando como resultado una foto(geno)toxicidad. Además, se estableció que el mecanismo de la muerte celular fotoinducida por RCP es por apoptosis. El capítulo 5 se centra en la evaluación del perfil de fotoseguridad de talazoparib (TLZ), el cual, tras su irradiación con luz UVA da lugar a un fotoproducto que, tras su aislamiento y caracterización, resultó no presentar fotorreactividad. Este fotoproducto resultó además ser el responsable de reducir significativamente el potencial fototóxico del fármaco original, ya que no se detectaron especies transitorias tras su irradiación con luz UVA. Además, para el TLZ se reveló la producción in vitro de ROS, especies que podrían ser las responsables de generar un daño fotooxidativo tanto hacia el ADN celular como a las proteínas de membrana, originando como resultado una foto(geno)toxicidad. En el capítulo 6 se evalúa la fototoxicidad del niraparib (NRP) y su principal metabolito (N-M1). A pesar de que ambos compuestos resultaron ser fototóxicos, dicha fototoxicidad no afectó igual a las principales dianas celulares, ya que el daño fotooxidativo de NRP se observó en lípidos, en proteínas transmembranales y en el ADN celular, mientras que en N-M1 se aprecia fundamentalmente en las proteínas de membrana. Además, la toxicidad observada del NRP en células de cáncer de ovario (A2780 y A2780cis) indicó que este fármaco podría contemplarse como candidato para su uso en un futuro en la terapia fotodinámica para el tratamiento del cáncer de ovario. Finalmente, con todo ello se concluye que estos fármacos de la familia de los inhibidores de la PARP (RCP, TLZ y NRP) son capaces de inducir reacciones de fotosensibilidad, con valores de factor de fotoirritación (PIF) de 41, 7 y 46, respectivamente. / [CAT] En la present tesi doctoral s'ha desenvolupat una metodologia multidisciplinària per a l'avaluació del potencial fotoquímic i fotobiològic in vitro dels fàrmacs inhibidors de la poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP), combinant tant estudis fotofísics i de caracterització com estudis fotobiològics en biomolècules model i en cultius cel·lulars, concretament en queratinòcits humans immortalitzats (HaCaT). Així, l'objectiu general és investigar si aquests fàrmacs, en combinació amb la radiació solar, són capaços d'induir reaccions de fotosensibilitat i, per tant, poder alertar als oncòlegs d'aquestes fites perquè puguen indicar pautes de fotoprotecció adequades als seus pacients, i així previndre aquests efectes no desitjats. Aquesta tesi es divideix en un total de 7 capítols. En el primer (introducció), es recullen les fites més importants relacionades amb els inhibidors de la PARP, així com un resum sobre les reaccions de fotosensibilització i dels mecanismes químics i biològics involucrats en aquestes. Després d'una exhaustiva cerca bibliogràfica sobre aquests fàrmacs, es va fer un primer estudi dels cinc de la tercera i última generació (rucaparib, talazoparib, niraparib, olaparib i veliparib), identificant així tres d'ells com a possibles agents fotosensibilizants: rucaparib, talazoparib i niraparib, l'estudi del qual es descriu en profunditat en els capítols 4, 5 i 6 de la tesi. En el capítol 4 s'avalua la fototoxicitat del rucaparib (RCP), un fàrmac que, malgrat tindre un cromòfor indole en la seua estructura química, posseeix un desplaçament batocròmic cap a la regió UVA de la llum solar, sent així capaç d'induir reaccions de fotosensibilitat. Mitjançant experiments de fluorescència i fotòlisi de flaix làser es va observar que, després de l¿absorció de llum en aquesta regió de l'espectre, té lloc la generació d'espècies reactives d'oxigen (ROS), que podrien ser les responsables de generar un dany fotooxidatiu cap a l'ADN cel·lular i a les proteïnes transmembranals, originant com a resultat una foto(geno)toxicitat. A més, es va establir que el mecanisme de la mort cel·lular fotoinduïda per RCP és per apoptosi. El capítol 5 se centra en l'avaluació del perfil de fotoseguretat de talazoparib (TLZ), el qual, després de la seua irradiació amb llum UVA dona lloc a un fotoproducte que, després del seu aïllament i caracterització, va resultar no presentar fotorreactivitat ninguna. Aquest fotoproducte va resultar a més ser el responsable de reduir significativament el potencial fototòxic del fàrmac original, ja que no es van detectar espècies transitòries després de la seua irradiació amb llum UVA. A més, per al TLZ es va revelar la producció in vitro de ROS, espècies que podrien ser les responsables de generar un dany fotooxidatiu tant cap a l'ADN cel·lular com a les proteïnes de membrana, originant com a resultat una foto(geno)toxicitat. En el capítol 6 s'avalua la fototoxicitat del niraparib (*NRP) i el seu principal metabòlit (N-M1). A pesar que tots dos compostos van resultar ser fototòxics, aquesta fototoxicitat no va afectar per igual a les principals dianes cel·lulars, ja que el dany fotooxidatiu de NRP es va observar en lípids, en proteïnes i en l'ADN cel·lular, mentre que en N-M1 s'aprecia fonamentalment en les proteïnes de membrana. A més, la toxicitat observada del NRP en cèl·lules de càncer d'ovari (A2780 i A2780cis) va indicar que aquest fàrmac podria contemplar-se com a candidat per al seu ús en un futur en la teràpia fotodinàmica per al tractament del càncer d'ovari. Finalment, amb tot això es conclou que aquests fàrmacs de la família dels inhibidors de la PARP (RCP, TLZ i NRP) són capaços d'induir reaccions de fotosensibilitat, amb valors de factor de fotoirritació (PIF) de 41, 7 i 46, respectivament. / [EN] In this doctoral thesis, a multidisciplinary methodology has been performed for the evaluation of the in vitro photochemical and photobiological potential of the poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitors, combining photophysical and photobiological studies in biomolecules and cell cultures, specifically in human immortalized keratinocytes (HaCaT). Thus, the general objective is to investigate if these drugs, in combination with solar radiation, can trigger photosensitivity reactions; this will allow oncologists to indicate appropriate photoprotective guidelines to their patients in order to prevent these undesirable effects. This thesis is divided into 7 chapters. The first one (introduction) contains the essential issues concerning PARP inhibitors, a background of the photosensitization reactions and a description of the involved chemical and biological mechanisms. After in-depth bibliographical research about these drugs, a screening of the five PARP inhibitors (rucaparib, talazoparib, niraparib, olaparib and veliparib) of the third and last generation was carried out, identifying three of them as possible photosensitizing drugs: rucaparib, talazoparib and niraparib. Their behaviour is thoroughly described in chapters 4, 5 and 6. Chapter 4 evaluates the phototoxicity of rucaparib (RCP), a drug that possess an indole chromophore in its chemical structure but displays a bathochromic shift towards the UVA region of sunlight, which makes it able to induce photosensitivity reactions. Generation of reactive oxygen species (ROS) after UVA light absorption was detected by fluorescence and laser flash photolysis experiments. These species could generate photooxidative damage to cellular DNA and transmembrane proteins, resulting in photo(geno)toxicity. In addition, it was established that the mechanism of RCP photoinduced cell death is by apoptosis. Chapter 5 focuses on the photosafety profile of talazoparib (TLZ), a compound that, after UVA irradiation, gives rise to a photooxidized product; after isolation and characterization, the photoproduct did not display any photoreactivity, and no transient species were detected after UVA light irradiation. Therefore, it was responsible for the significantly reduced phototoxic potential of the parent drug. Additionally, for TLZ, in vitro ROS production was detected. These species could lead to photooxidative damage to both cellular DNA and membrane proteins, resulting in photo(geno)toxicity. Chapter 6 deals with the phototoxicity of niraparib (NRP) and its main metabolite (N-M1). Although both compounds are phototoxic, the phototoxicity was found to be different for the main cellular targets: thus, the photooxidative damage of NRP was noticed in lipids, transmembrane proteins and cellular DNA, whereas in N-M1 it was mainly observed in membrane proteins. In addition, NRP was cytotoxic in ovarian cancer cells (A2780 and A2780cis), indicating that this drug could be considered as a future candidate for its use in photodynamic therapy to treat ovarian cancer. Finally, it can be concluded that these PARP inhibitors (RCP, TLZ and NRP) are able to induce photosensitivity disorders, with PIF values of 41, 7 and 46, respectively. / We thank the Agencia Estatal de Investigación (PID2020-115010RB-I00/AEI/10.13039/501100011033 and the Generalitat Valenciana (CIAICO/2021/061 and ACIF/2018/153 fellowship for A. M.-P. / Mateos Pujante, A. (2023). Evaluación del potencial fotoquímico y fotobiológico de los inhibidores de la poli (ADP-ribosa) polimerasa [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/196092