Darbo objektas − ištirti LAAMC SDI genetinių išteklių sodo obelų veislių virusologinę būklę ir taikant chemoterapijos ir termoterapijos metodus devirusuoti 'Connel Red' obels veislės mikroūglius. Darbo metodai: taikant PGR metodą ištirtos 35 introdukuotos obelų veislės įtrauktos į Nacionalinį augalų veislių sąrašą (2011 m.). Taikant chemoterapijos ir termoterapijos in vitro metodus siekta devirusuoti 'Connel Red' obels veislės mikroūglius. Tyrimai vykdyti Sodininkystės ir daržininkystės instituto (LAAMC SDI) sodo augalų genetikos ir biotechnologijos laboratorijoje. Virusų tyrimui 'Connel Red' obels veislės lapai paimti Lietuvos agrarinių ir miškų mokslų centro Sodininkystės ir daržininkystės instituto genetinių išteklių sode ir ištirti PGR metodu. 'Connel Red' obels veislėje aptiktas obelų latentinis chlorotinės dėmėtligės virusas (Apple chlorotic leaf spot virus – ACLSV). Obels veislė 'Connel Red' įvesta į in vitro sistemą. Devirusavimui taikyti termoterapijos ir chemoterapijos metodai. Chemoterapija vykdyta obels mikroūglių viršūnes pasodinant ant MS terpės (braškių dauginimo) + 0,75 mg/l BAP + 30 g sacharozės + 7 g Plant agaro, pH 5,8 su skirtingomis 10, 20, 30, 40 ir 50 mg/l-1 ribavirino koncentracijomis. Augalai kuriems taikyta chemoterapija savaitę laikyti kultivavimo kambaryje (21°C temperatūra, fotoperiodas 16/8 h), o tie kuriems taikyta chemoterapija ir termoterapija papildomai 7 dienas auginti 39 °C temperatūroje. Po devirusavimo mikroūgliai dauginti in vitro ir... [toliau žr. visą tekstą] / Object of the work – the nuclear stock material of Apple trees at the Institute of Horticulture was virus tested by the PCR method, and it was found that the planting material complies with the requirements of it healthy. Prebasic material of Apple in nursery orchard, not found viral infections as well. Chemotherapy and thermotherapy methods were applied for the virus elimination. Method of the work – examined 35 Apple varieties (entered in a National List, 2011), were introduced from different countries in the garden of genetic resources at the Institute of Horticulture for selection purpose. Viruses ASGV, ACLSV and ASPV transmitted only through planting material were identified by PCR method. The aim of the study is to eliminate viruses from the microshoots of the 'Connel Red' apple tree variety by applying the chemotherapy and thermotherapy methods. The tests were carried out in the garden plant genetics and biotechnology laboratory of the Horticulture Institute (LAAMC SDI). For the virus research, leaves of the 'Connel Red' apple tree variety were collected in the garden of genetic resources of the Horticulture Institute of the Lithuanian Research Centre for Agriculture and Forestry, and analysed using the PGR method. The apple chlorotic leaf spot virus – ACLSV – was detected in the 'Connel Red' apple tree variety. The 'Connel Red' apple tree variety was introduced to the in vitro system. Chemotherapy and thermotherapy methods were applied for the virus elimination... [to full text]

Cette étude visait à établir un protocole de cryoconservation pour des apex de vigne et à tester l'efficacité de la cryoconservation pour éliminer des virus de la vigne sélectionnés. Des cultures in vitro de génotypes sains de huit cultivars croates autochtones de vigne, Plavac mali, Maraština, Pošip, Debit, Grk, Lasina, Plavina et Vugava et de génotypes infectés de Plavac mali ont été établies. Les différences de survie, de reprise et des paramètres de croissance observés se sont avérées spécifique des génotypes. Les cultivars infectés se sont montrés moins réactifs que les cultivars sains. Un protocole de cryoconservation basé sur la vitrification avec PVS2 a été établi. Les modifications de la préculture avec le saccharose et l'utilisation de solutions alternatives de cryoconservation n'ont pas amélioré la reprise. A l'opposé, l'état physiologique du matériel végétal a joué un rôle essentiel pour la cryoconservation. Des bourgeons en croissance active prélevés sur des microboutures mononodales ont montré une reprise plus élevée que des bourgeons prélevés directement sur les vitroplants. La position des bourgeons sur la tige des plantes-mères in vitro a affecté la reprise après cryoconservation. L'addition de benzylaminopurine au milieu de culture des microboutures a eu un effet positif sur la reprise après immersion dans l'azote liquide, alors qu'aucun effet positif n'a été observé sur la reprise avec la zéatine riboside ou la proline. Le protocole de cryoconservation établi a permis d'obtenir environ 50% de reprise avec le cultivar Portan et avec trois des quatre cultivars internationaux utilisés. Par contre, aucune reprise ou une reprise très faible a été observée avec les cultivars croates testés. En se basant sur les tests ELISA réalisés, le virus GFLV a été éliminé de 82,4% des apex non cryoconservés et de 77,8% des apex cryoconservés chez le cultivar Chardonnay et le GLRaV-3 a été éliminé de 100% des apex non cryoconservés et cryoconservés chez le cultivar Cabernet Sauvignon. Ces résultats sont à relier à nos études d'immunolocalisation, qui ont montré que le GFLV était présent dans le dôme apical et les tissus méristématiques chez le cultivar Pinot Noir and que le GLRaV-3 était présent dans les tubes criblés chez le cultivar Merlot. La stabilité génétique des plantes régénérées à partir des apex cryoconservés a été étudiée en utilisant les marqueurs AFLP. Avec les huit combinaisons d'amorces utilisées sur les 43 plantes testées, aucun polymorphisme n'a été observé après la préculture au saccharose, le traitement avec la solution de loading et la solution de PVS2 diluée de moitié. Par contre, des fragments polymorphes ont été observés sur des explants non cryoconservés et cryoconservés traités avec la solution PVS2, dont le nombre augmentait avec l'augmentation de la durée d'exposition à la solution PVS2. / This study aimed at establishing a cryopreservation protocol for grapevine shoot tips and at testing the efficiency of cryopreservation in eliminating selected grapevine viruses. In vitro cultures of healthy genotypes of eight Croatian autochthonous grapevine cultivars Plavac mali, Maraština, Pošip, Debit, Grk, Lasina, Plavina and Vugava and of virus-infected genotypes of Plavac mali were successfully established. Differences in survival, regrowth and growth parameters were genotype-specific. Infected cultivars were less reactive compared to healthy ones. A PVS2-based cryopreservation protocol was successfully established. Modifications in sucrose preculture conditions and use of PVS2-derived alternative vitrification solutions did not improve growth recovery. By contrast, the physiological state of the plant material played a critical role in cryopreservation. Actively growing buds sampled from single-node microcuttings displayed higher regrowth compared to buds sampled directly on in vitro plantlets. The position of buds on the stem of in vitro mother-plants affected regrowth after cryopreservation. The addition benzylaminopurine in the shooting medium had a positive effect on regrowth after liquid nitrogen exposure, while no such positive effect was observed with zeatine riboside or proline. The cryopreservation protocol established led to approximately 50% recovery with cultivar Portan and three of the four international cultivars tested. By contrast, no or very low recovery was noted with the Croatian cultivars tested. Based on ELISA tests, the GFLV virus was eliminated from 82.4% of non-cryopreserved samples and from 77.78% of cryopreserved samples in cultivar Chardonnay and the GLRaV-3 virus was eliminated from 100% of both non-cryopreserved and cryopreserved samples in cultivar Cabernet Sauvignon. These results may be related with our immunolocalisation studies, which showed that GFLV was found in the apical dome and meristematic tissues in cultivar Pinot Noir and GLRaV-3 in sieve elements of cultivar Merlot. Genetic stability of plants regenerated from cryopreserved shoot tips was studied using AFLP markers. With the eight AFLP primer combinations employed on the 43 plants tested, no polymorphism was observed after sucrose preculture, treatment with the loading solution and half-strengthPVS2. However, polymorphic fragments were observed in non-cryopreserved and cryopreserved samples treated with PVS2 solution, the number of which increased with increasing durations of exposure to PVS2 solution.