O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço é responsável por 90% das neoplasias malignas, nesta região. Molecularmente, inúmeras vias de sinalização, ainda não muito bem compreendidas, são responsáveis pelo seu crescimento e invasão para tecidos vizinhos, além de metástases para órgãos distantes. Este trabalho destinou-se a avaliar o crosstalk entre as vias de sinalização do Wnt e PI3K, quando células de carcinoma epidermóide (HN6 e HN31) e queratinócitos imortalizados (HaCat), foram estimulados com 50nM Wortmannin (metabólito fúngico que mimetiza a função da PTEN) e 10ng/ml EGF (fator de crescimento epitelial). Para isto, proteínas-chave, pertencentes a estas vias, foram localizadas e quantificadas no interior celular: PTEN, ?-catenina, Akt, pAkt e Ciclina D1. As técnicas de imunofluorescência e western blot foram utilizadas, respectivamente, para observar a localização e os níveis destas proteínas, nos diferentes compartimentos celulares. Os resultados mostraram que a ativação da via do PI3K, pelo EGF, promoveu a proliferação celular, independentemente da via de sinalização do Wnt. Quando as células foram tratadas com wortmannin, houve depleção dos níveis citosólicos e totais de pAkt associada ao acúmulo citoplasmático de ciclina D1. Igualmente, não houve alteração nos níveis da proteína ?-catenina. Ademais, detectou-se a presença de PTEN nuclear em todas as linhagens estudadas. Desta forma, estas células de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, apresentaram mecanismos de bloqueio e de ativação da proliferação celular, predominantemente, por atividade das proteínas PTEN (atividades citoplasmática e nuclear) e Akt, após o tratamento com wortmannin e EGF. / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) represents 90% of all head and neck malignancies. Cancer growth, invasion and metastasis are due to several signaling pathways that, unfortunately, are not completely understood. The aim of this study was the crosstalk evaluation between PI3K and Wnt signaling pathways in two different HNSCC cell lines (HN6 and HN31) and HaCat cell line (immortalized keratinocytes), treated with 50nM wortmannin and 10ng/ml EGF (epidermal growth factor). Western blot and imunofluorescence were performed in order to analyze Wnt, PTEN and PI3K signaling key target proteins: PTEN, Akt, CyclinD1 and ?-catenin. Results showed that ?-cateninindependent cellular proliferation was promoted by PI3K signaling pathway EGF-dependent activation. After wortmannin treatment, correlation between decreased phospho-Akt levels and cytosolic cyclin D1 accumulation was found. Also, all cell lines exhibited nuclear PTEN activity. Taking these results together, we conclude that the Cyclin D1 positive and negative modulations, after EGF and wortmannin treatments, were due to, respectively, Akt and PTEN proteins.

O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço é responsável por 90% das neoplasias malignas, nesta região. Molecularmente, inúmeras vias de sinalização, ainda não muito bem compreendidas, são responsáveis pelo seu crescimento e invasão para tecidos vizinhos, além de metástases para órgãos distantes. Este trabalho destinou-se a avaliar o crosstalk entre as vias de sinalização do Wnt e PI3K, quando células de carcinoma epidermóide (HN6 e HN31) e queratinócitos imortalizados (HaCat), foram estimulados com 50nM Wortmannin (metabólito fúngico que mimetiza a função da PTEN) e 10ng/ml EGF (fator de crescimento epitelial). Para isto, proteínas-chave, pertencentes a estas vias, foram localizadas e quantificadas no interior celular: PTEN, ?-catenina, Akt, pAkt e Ciclina D1. As técnicas de imunofluorescência e western blot foram utilizadas, respectivamente, para observar a localização e os níveis destas proteínas, nos diferentes compartimentos celulares. Os resultados mostraram que a ativação da via do PI3K, pelo EGF, promoveu a proliferação celular, independentemente da via de sinalização do Wnt. Quando as células foram tratadas com wortmannin, houve depleção dos níveis citosólicos e totais de pAkt associada ao acúmulo citoplasmático de ciclina D1. Igualmente, não houve alteração nos níveis da proteína ?-catenina. Ademais, detectou-se a presença de PTEN nuclear em todas as linhagens estudadas. Desta forma, estas células de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, apresentaram mecanismos de bloqueio e de ativação da proliferação celular, predominantemente, por atividade das proteínas PTEN (atividades citoplasmática e nuclear) e Akt, após o tratamento com wortmannin e EGF. / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) represents 90% of all head and neck malignancies. Cancer growth, invasion and metastasis are due to several signaling pathways that, unfortunately, are not completely understood. The aim of this study was the crosstalk evaluation between PI3K and Wnt signaling pathways in two different HNSCC cell lines (HN6 and HN31) and HaCat cell line (immortalized keratinocytes), treated with 50nM wortmannin and 10ng/ml EGF (epidermal growth factor). Western blot and imunofluorescence were performed in order to analyze Wnt, PTEN and PI3K signaling key target proteins: PTEN, Akt, CyclinD1 and ?-catenin. Results showed that ?-cateninindependent cellular proliferation was promoted by PI3K signaling pathway EGF-dependent activation. After wortmannin treatment, correlation between decreased phospho-Akt levels and cytosolic cyclin D1 accumulation was found. Also, all cell lines exhibited nuclear PTEN activity. Taking these results together, we conclude that the Cyclin D1 positive and negative modulations, after EGF and wortmannin treatments, were due to, respectively, Akt and PTEN proteins.

Coronary heart disease (CHD) is one of the leading causes of death every year with nearly three-fourths of all deaths caused by the disease. The challenge scientists are facing today is discovering new drugs to protect the heart against cellular damage caused by ischemia-reperfusion injury (I-R injury). Rapamycin is one such drug that has been shown to protect the heart against ischemia-induced cellular injury. Rapamycin(sirolimus) inhibits protein synthesis through inhibition of the mammalian target ofrapamycin (mTOR). This property of rapamycin has led to its current clinical applications in drug-eluting stents and in immunosuppresive treatment to organ transplant patients. The mechanism by which this drug protects against I-R injury is currently unknown. The goal of this study is to elucidate rapamycin's cardioprotective signaling pathway. We hypothesized that upregulation of Akt occurs possibly as part of a positive feedback mechanism following the inhibition of mTOR by rapamycin. Adult male ICRmice were treated with rapamycin (0.25 mg/kg, i.p.), or volume-matched DMSO (solvent for rapamycin), or rapamycin (0.25mg/kg, i.p.) plus wortmannin (WTN, 15µg/kg, i.p.),an inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase, or wortmannin alone (15µg/kg, i.p.). After 30 min of stabilization, the hearts were subjected to 20 minutes of global ischemia and 30 minutes of reperfusion in Langendorff model. In a separate series of experiments mice were either injected with DMSO or rapamycin for 30 minutes, 1 hour, and 2 hours before harvesting the hearts for Western blot analysis of levels of total or phosphorylated Akt at Ser473. Our results showed that rapamycin protected the heart as observed by a reductionin infarct size from 33.8 ± 2.0% in DMSO-treated hearts to 19.3 ± 4.1% in rapamycin-treated hearts; a 43% reduction. This infarct-limiting effect was completely blocked by wortmannin (29.3 ± 4.8%). However, Western blot analysis showed no change in the level of Akt phosphorylation after administration of rapamycin. Our current resultsfurther confirmed rapamycin as a potential cardio-therapeutic drug to limit infarct size,potentially through the PI3K signaling pathway. However, the exact signaling pathway of this protection still remains elusive.

Introdução: A epilepsia do lobo temporal (ELT) é a forma mais frequente de epilepsia em adultos. Um modelo experimental de ELT consiste na indução de status epilepticus (SE) em animais por administração de Pilocarpina. Este modelo induz mudanças patofisiológicas e comportamentais em ratos muito semelhantes às observadas em seres humanos com ELT. Apesar da literatura apresentar dados relacionados às respostas celulares, pouco se conhece a respeito do envolvimento de cascatas de sinalização com insultos epileptogênicos no sistema nervoso. A enzima fosfatidilinositol-3-cinase (PI3K) está envolvida na ativação da cascata de sinalização intracelular da Akt. A Akt é uma proteína cinase especifíca de serina/treonina cuja forma ativa proporciona um controle no crescimento e proliferação celular, bem como induz um sinal de sobrevivência para a proteção de células contra a apoptose. Alguns estudos mostram que a ativação da PI3K é inibida por potentes drogas, tais como a LY294002 e a Wortmanina. A PI3K ativa a Akt e a cascata de sinais extra e intracelulares neuroprotetores pós-insultos. O estudo da ação de inibidores da PI3K em modelos de epilepsia pode fornecer dados sobre o envolvimento da Akt em sinais neuroprotetores. Objetivos: Avaliar o efeito do SE por injeção intra-hipocampal de Pilocarpina na ativação da Akt, bem como os efeitos do bloqueio desta cascata sobre as alterações patológicas observadas no hipocampo de ratos na fase aguda pós-SE. Metodologia: Ratos da cepa Wistar machos (250-300 g) foram divididos em grupos de tratamento, sendo tratados com injeções ipsilaterais na região posterior do hipocampo, com uma hora de intervalo entre drogas, das drogas: Salina e Pilocarpina (grupo Sal+Pilo), LY294002 e Pilocarpina (LY+Pilo) e Wortmanina e Pilocarpina (Wort+Pilo). No grupo considerado como controle foram injetadas as seguintes drogas: Salina e Salina (grupo Sal+Sal) ou Dimetilsulfóxido e Salina (grupo DMSO+Sal). O tempo de SE induzido por Pilocarpina foi fixado em 2 horas. Grupos de animais foram sacrificados nos instantes de 1 dia e 7 dias após o SE e seus encéfalos foram processados objetivando a imuno-histoquímica para NeuN, GFAP e Akt (pan). Resultados: A densidade neuronial na região do hilo do hipocampo foi menor no grupo Sal+Pilo, seguido dos grupos LY+Pilo e Wort+Pilo, avaliando-se os vários níveis de formação hipocampal e região posterior. Para a análise da astrogliose, na camada granular, o grupo LY+Pilo apresentou maior número de astrócitos positivos; na região do hilo hipocampal, os grupos LY+Pilo e Wort+Pilo apresentaram baixa expressão para a proteína Akt, comparados aos grupos Controles; assim como o grupo Wort+Pilo, em CA2, apresentou baixa expressão da proteína Akt somente na região posterior. Os animais Sal+Pilo sobrevida-7dias pós-SE revelaram maior expressão da Akt quando comparados com o grupo Sal+Pilo sobrevida-1dia pós-SE. Quanto à análise comportamental, o grupo Wort+Pilo apresentou maior latência para o início do SE que o grupo Sal+Pilo, não sendo observado diferença de severidade, uma vez atingido o SE. Conclusões: Na hipótese de trabalho, o uso de inibidores da fosforilação de Akt resultaria em maior morte neuronial, astrogliose e expressão inalterada da Akt. Ao contrário do esperado, os grupos que receberam injeções intra-hipocampais de inibidores de Akt, antes da indução de SE, exibiram menor perda neuronial, menor astrogliose e menor expressão da Akt para os vários níveis de formação hipocampal e no hipocampo posterior. Porém, o grupo Sal+Pilo sobrevida-7 dias pós-SE exibiu maior expressão para Akt quando comparado com o grupo Sal+Pilo de sobrevida-1 dia pós-SE. Além disso, o pré-tratamento com Wortmanina demonstrou um maior tempo de latência para o início do SE, o que nos sugere uma maior neuroproteção do que LY294002. / Introduction: Temporal lobe epilepsy (TLE) is the most frequent type of adult human epilepsy. An experimental model of TLE, the Pilocarpine induced epilepsy, followed by pathofisiologic and behavioural alterations in rats resembling human diagnosis with TLE. Although there are several data on cell response in literature, few information exist on the cascade of signals involved in epileptogenesis process of central nervous system. The phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) is involved in activation of Akt intracellular signaling cascade. The serine/threonine kinase Akt, that in active form promote a control of growth and cell proliferation, such as survival sign protecting cells from apoptosis. Some studies have shown that activation of PI3K is blocked by potents pharmacological inhibitors, for example the LY294002 and Wortmannin. PI3K activate Akt and both extra and intracellular cascade signals involved in neuroprotection after seizures. The study of inhibitors mechanism in model of epilepsy can provide information on the involvement of Akt in signals of neuroprotection. Objectives: To evaluate the effects of SE by the intrahippocampal injection of Pilocarpine in Akt activation, and the effects of the blockade of this cascade on pathologic alterations observed in hippocampus of rats in acute phase after SE as well. Methods: Male Wistar rats (weighing 250 to 300 g) were divided in groups treated ipsilaterally with injections in the posterior region of hippocampus with an elapsed time of one hour subsequently after each injection of following substances: Physiological Saline and Pilocarpine (group Sal+Pilo), LY294002 and Pilocarpine (LY+Pilo), and Wortmannin and Pilocarpine (Wort+Pilo). Control groups were treated with the following drugs Saline + Saline (group Sal+Sal) or Dimethylsulphoxide + Saline (DMSO+Sal). A fixed time of 2 hours was considered for evaluating the SE induced by Pilocarpine. Animals were sacrificed 1 day and 7 days after SE, and their brains were processed imunohistochemically for NeuN, GFAP and Akt (pan) detecting. Results: The neuronal density in the hippocampal hilus was lower in the Sal+Pilo group, followed by LY+Pilo and Wort+Pilo groups, this evaluate various levels of hippocampal formation and posterior region. For the analysis of reactive astrogliosis of the granular cell layer, the LY+Pilo group presented a great number of GFAP-positive astrocytes. In the hilar region, the LY+Pilo and Wort+Pilo groups presented a reduced Akt expression compared to the Control group, such as the group Wort+Pilo in CA2, presented a reduced Akt expression only in posterior region. The Sal+Pilo animals with a survival time of 7 days after SE revealed higher Akt expression when compared to the Sal+Pilo animals with a survival time of 1 day. In behavioural analysis, the Wort+Pilo group presented major time of latency to SE than Sal+Pilo group, without differences in the disease severity, once reached the SE. Conclusions: On the contrary to the original hypothesis of this work, the use of inhibitors of Akt phosphorylating resulted in an unaltered neuronal death, astrogliosis and Akt expression. The groups that received intrahippocampal injection of Akt inhibitors before inducing SE exhibited a reduced neuronal loss, astrogliosis and Akt expression to the various levels of hippocampal formation and posterior region. But, to the Sal+Pilo group with a survival time of 7 days after SE induction exhibited greater Akt expression than Sal+Pilo group with a survival time of 1 day after SE induction. However, the pretreatment with Wortmannin displayed major time of latency to SE induction, suggesting this substance as a better neuroprotector than LY294002, according to the methodology applied in this study.

Introdução: A epilepsia do lobo temporal (ELT) é a forma mais frequente de epilepsia em adultos. Um modelo experimental de ELT consiste na indução de status epilepticus (SE) em animais por administração de Pilocarpina. Este modelo induz mudanças patofisiológicas e comportamentais em ratos muito semelhantes às observadas em seres humanos com ELT. Apesar da literatura apresentar dados relacionados às respostas celulares, pouco se conhece a respeito do envolvimento de cascatas de sinalização com insultos epileptogênicos no sistema nervoso. A enzima fosfatidilinositol-3-cinase (PI3K) está envolvida na ativação da cascata de sinalização intracelular da Akt. A Akt é uma proteína cinase especifíca de serina/treonina cuja forma ativa proporciona um controle no crescimento e proliferação celular, bem como induz um sinal de sobrevivência para a proteção de células contra a apoptose. Alguns estudos mostram que a ativação da PI3K é inibida por potentes drogas, tais como a LY294002 e a Wortmanina. A PI3K ativa a Akt e a cascata de sinais extra e intracelulares neuroprotetores pós-insultos. O estudo da ação de inibidores da PI3K em modelos de epilepsia pode fornecer dados sobre o envolvimento da Akt em sinais neuroprotetores. Objetivos: Avaliar o efeito do SE por injeção intra-hipocampal de Pilocarpina na ativação da Akt, bem como os efeitos do bloqueio desta cascata sobre as alterações patológicas observadas no hipocampo de ratos na fase aguda pós-SE. Metodologia: Ratos da cepa Wistar machos (250-300 g) foram divididos em grupos de tratamento, sendo tratados com injeções ipsilaterais na região posterior do hipocampo, com uma hora de intervalo entre drogas, das drogas: Salina e Pilocarpina (grupo Sal+Pilo), LY294002 e Pilocarpina (LY+Pilo) e Wortmanina e Pilocarpina (Wort+Pilo). No grupo considerado como controle foram injetadas as seguintes drogas: Salina e Salina (grupo Sal+Sal) ou Dimetilsulfóxido e Salina (grupo DMSO+Sal). O tempo de SE induzido por Pilocarpina foi fixado em 2 horas. Grupos de animais foram sacrificados nos instantes de 1 dia e 7 dias após o SE e seus encéfalos foram processados objetivando a imuno-histoquímica para NeuN, GFAP e Akt (pan). Resultados: A densidade neuronial na região do hilo do hipocampo foi menor no grupo Sal+Pilo, seguido dos grupos LY+Pilo e Wort+Pilo, avaliando-se os vários níveis de formação hipocampal e região posterior. Para a análise da astrogliose, na camada granular, o grupo LY+Pilo apresentou maior número de astrócitos positivos; na região do hilo hipocampal, os grupos LY+Pilo e Wort+Pilo apresentaram baixa expressão para a proteína Akt, comparados aos grupos Controles; assim como o grupo Wort+Pilo, em CA2, apresentou baixa expressão da proteína Akt somente na região posterior. Os animais Sal+Pilo sobrevida-7dias pós-SE revelaram maior expressão da Akt quando comparados com o grupo Sal+Pilo sobrevida-1dia pós-SE. Quanto à análise comportamental, o grupo Wort+Pilo apresentou maior latência para o início do SE que o grupo Sal+Pilo, não sendo observado diferença de severidade, uma vez atingido o SE. Conclusões: Na hipótese de trabalho, o uso de inibidores da fosforilação de Akt resultaria em maior morte neuronial, astrogliose e expressão inalterada da Akt. Ao contrário do esperado, os grupos que receberam injeções intra-hipocampais de inibidores de Akt, antes da indução de SE, exibiram menor perda neuronial, menor astrogliose e menor expressão da Akt para os vários níveis de formação hipocampal e no hipocampo posterior. Porém, o grupo Sal+Pilo sobrevida-7 dias pós-SE exibiu maior expressão para Akt quando comparado com o grupo Sal+Pilo de sobrevida-1 dia pós-SE. Além disso, o pré-tratamento com Wortmanina demonstrou um maior tempo de latência para o início do SE, o que nos sugere uma maior neuroproteção do que LY294002. / Introduction: Temporal lobe epilepsy (TLE) is the most frequent type of adult human epilepsy. An experimental model of TLE, the Pilocarpine induced epilepsy, followed by pathofisiologic and behavioural alterations in rats resembling human diagnosis with TLE. Although there are several data on cell response in literature, few information exist on the cascade of signals involved in epileptogenesis process of central nervous system. The phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) is involved in activation of Akt intracellular signaling cascade. The serine/threonine kinase Akt, that in active form promote a control of growth and cell proliferation, such as survival sign protecting cells from apoptosis. Some studies have shown that activation of PI3K is blocked by potents pharmacological inhibitors, for example the LY294002 and Wortmannin. PI3K activate Akt and both extra and intracellular cascade signals involved in neuroprotection after seizures. The study of inhibitors mechanism in model of epilepsy can provide information on the involvement of Akt in signals of neuroprotection. Objectives: To evaluate the effects of SE by the intrahippocampal injection of Pilocarpine in Akt activation, and the effects of the blockade of this cascade on pathologic alterations observed in hippocampus of rats in acute phase after SE as well. Methods: Male Wistar rats (weighing 250 to 300 g) were divided in groups treated ipsilaterally with injections in the posterior region of hippocampus with an elapsed time of one hour subsequently after each injection of following substances: Physiological Saline and Pilocarpine (group Sal+Pilo), LY294002 and Pilocarpine (LY+Pilo), and Wortmannin and Pilocarpine (Wort+Pilo). Control groups were treated with the following drugs Saline + Saline (group Sal+Sal) or Dimethylsulphoxide + Saline (DMSO+Sal). A fixed time of 2 hours was considered for evaluating the SE induced by Pilocarpine. Animals were sacrificed 1 day and 7 days after SE, and their brains were processed imunohistochemically for NeuN, GFAP and Akt (pan) detecting. Results: The neuronal density in the hippocampal hilus was lower in the Sal+Pilo group, followed by LY+Pilo and Wort+Pilo groups, this evaluate various levels of hippocampal formation and posterior region. For the analysis of reactive astrogliosis of the granular cell layer, the LY+Pilo group presented a great number of GFAP-positive astrocytes. In the hilar region, the LY+Pilo and Wort+Pilo groups presented a reduced Akt expression compared to the Control group, such as the group Wort+Pilo in CA2, presented a reduced Akt expression only in posterior region. The Sal+Pilo animals with a survival time of 7 days after SE revealed higher Akt expression when compared to the Sal+Pilo animals with a survival time of 1 day. In behavioural analysis, the Wort+Pilo group presented major time of latency to SE than Sal+Pilo group, without differences in the disease severity, once reached the SE. Conclusions: On the contrary to the original hypothesis of this work, the use of inhibitors of Akt phosphorylating resulted in an unaltered neuronal death, astrogliosis and Akt expression. The groups that received intrahippocampal injection of Akt inhibitors before inducing SE exhibited a reduced neuronal loss, astrogliosis and Akt expression to the various levels of hippocampal formation and posterior region. But, to the Sal+Pilo group with a survival time of 7 days after SE induction exhibited greater Akt expression than Sal+Pilo group with a survival time of 1 day after SE induction. However, the pretreatment with Wortmannin displayed major time of latency to SE induction, suggesting this substance as a better neuroprotector than LY294002, according to the methodology applied in this study.

The time- and dose-dependent effects of wortmannin on transepithelial electrical resistance (R(te)) and forskolin-stimulated chloride secretion in T84 monolayer cultures were studied. In both instances, maximal effects developed over 2 h and were stable thereafter. Inhibition of forskolin-stimulated chloride secretion, as measured by the short-circuit current (I(SC)) technique, had an IC50 of 200-500 nM, which is 100-fold higher than for inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), but similar to the IC50 for inhibition of myosin light chain kinase (MLCK) and mitogen-activated protein kinases (MAPK). Previous work demonstrated that 500 nM wortmannin did not inhibit the cAMP activation of apical membrane chloride channels. We show here that 500 nM wortmannin has no affect on basolateral Na/K/2Cl-cotransporter activity, but inhibits basolateral membrane Na/K-ATPase activity significantly. The MLCK inhibitors ML-7 and KT5926 were without affect on forskolin-stimulated I(SC). Similarly, the p38- and MEK-specific MAPK inhibitors SB203580 and PD98059 did not reduce forskolin-stimulated I(SC). In contrast, the non-specific MAPK inhibitor apigenin reduced forskolin-stimulated I(SC) and basolateral membrane Na/K-ATPase activity similar to wortmannin. In isolated membranes from T84 cells, wortmannin did not inhibit Na/K-ATPase enzymatic activity directly. We conclude that one or more MAPK may regulate the functional expression of basolateral membrane Na/K-ATPase by controlling the abundance of enzyme molecules in the plasma membrane.

Wortmannin is a potent inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and membrane trafficking in many cells. To test the hypothesis that cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) traffics into and out of the plasma membrane during cAMP-stimulated epithelial Cl- secretion, we have studied the effects of wortmannin on forskolin-stimulated Cl- secretion by the human colonic cell line T84. At the PI3K inhibitory concentration of 100 nM, wortmannin did not affect significantly forskolin-stimulated Cl- secretion measured as short-circuit current (I(SC)). However, 500 nM wortmannin significantly inhibited forskolin-stimulated I(SC). cAMP activation of apical membrane CFTR Cl- channels in α-toxin-permeabilized monolayers was not reduced by 500 nM wortmannin, suggesting that inhibition of other transporters accounts for the observed reduction in T84 Cl- secretion. Forskolin inhibits apical endocytosis of horseradish peroxidase (HRP), but wortmannin did not alter forskolin inhibition of apical HRP endocytosis. In the absence of forskolin, wortmannin stimulated HRP endocytosis significantly. We conclude that, in T84 cells, apical fluid phase endocytosis is not dependent on PI3K activity and that CFTR does not recycle through a PI3K-dependent and wortmannin-sensitive membrane compartment.

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