Temperature is arguably the most important abiotic factor influencing the embryonic development in ectothermic species. Incubation temperature has demonstrated effects on offspring phenotypes in ectotherms, including traits such as sex, size, shape, colouration and post-hatch growth and survival. However, in endotherms the influence temperature has on development is relatively unexplored due to the narrow range of temperatures that embryonic endotherms are exposed to during develop. Megapode birds utilize environmental heat sources to incubate their eggs and therefore provide a potential model to test how temperature influences embryonic development and offspring phenotypes in endotherms. I used the Australian Brush-turkey (Alectura lathami), a megapode bird that incubates its eggs in mounds of soil and leaf litter to investigate the effects of temperature on embryonic development and chick morphology. Previous reports of Australian Brush-turkey incubation mound temperatures relied on spot measurements and theoretical modeling and thus have not provided a comprehensive examination of the range of temperatures Brush-turkey embryos are exposed to and how these might vary during the course of incubation. Therefore to examine the range of temperatures experienced by developing embryos I continuously recorded the temperature of eggs and mound material at naturally occurring positions within incubation mounds over the full developmental period. As in previous studies I found the average incubation temperature to be about 34°C, however egg temperatures typically fluctuated more than previously reported or predicted from modeling. The thermal tolerance of Brush-turkeys is remarkable compared to non-megapode birds, with embryos developing successfully despite prolonged exposure to sub-optimal temperatures over the range 25-40°C. I also demonstrated that the incubation period was negatively correlated with mean incubation temperature. To simplify the examination of temperature effects on embryonic development, constant temperature artificial incubation of Brush-turkey eggs was used to determine influence of incubation temperature on the energetics of embryonic development and the sex ratio, morphology and chemical composition of chicks. Because initial investigation of mound temperatures determined the mean incubation temperature in Brush-turkeys to be 34°C this was used as the preferred temperature for constant temperature incubation with 32°C and 36°C representing low and high temperatures respectively. Previously, the sex ratio of Brush-turkey chicks at hatching was shown to be temperature dependent. A thermally sensitive period early in development resulted in more females hatching from high temperature and more males hatching from low temperatures with an equal ratio at the preferred temperature. Using molecular sexing techniques to determine the sex of both failed embryos and chicks that hatched, I established that at laying the sex ratio of eggs was 50:50, and that temperature-dependent sex-biased embryo mortality was the mechanism behind the skewed sex ratio of chicks hatching from non-preferred temperatures. Low incubation temperature increased female embryonic mortality and high incubation temperature increased male embryonic mortality. This represents a novel mechanism operating to alter sex ratios in a bird species and offers an unparalleled system to explore sex allocation theory. It is well established that temperature influences the rate of development and the morphology of offspring in reptilian species. Also, in a previous study using artificially incubated Brush-turkey eggs, temperature was found to affect the mass of chicks but not their size (linear dimensions). This finding suggests that at different incubation temperatures the amount of yolk converted into tissue during embryonic development is influenced by incubation temperature. I tested this hypothesis by incubating eggs at different constant temperatures and found high incubation temperatures produce chicks with lighter yolk-free bodies and heavier residual yolks but similar linear dimensions compared to chicks hatching from lower temperatures. Because eggs incubated at low temperatures have longer incubation periods, I hypothesized the proportion of lipid in the yolk-free body would be higher in chicks emerging from eggs incubated at low temperature because more time is available for the conversion of yolk to fat bodies during embryonic development. This hypothesis was not supported as the composition of yolk-free chicks (total water, lipid, protein and ash) was not temperature dependent. A previous study in Malleefowl (Leipoa ocellata), another megapode bird, found that the total energetic cost of production was influenced by incubation temperature. Such that embryos developing at low temperatures required 72% more energy than embryos developing at high temperatures. However these findings were contrary to expectation from studies of reptilian incubation where the energetic cost of development is independent of temperature. Therefore I tested the hypothesis that the total energetic cost of development is temperature dependent in the Australian Brush-turkey. I used bomb calorimetry to measure the energy content of freshly laid eggs and of chicks (both the yolk-free body and residual yolk) that had hatched from eggs incubated 32oC, 34oC and 36oC. I found that the total energy content of chicks at hatching was greater in chicks emerging from eggs incubated at 34oC and 36oC compared to eggs incubated at 32oC. My thesis work demonstrated that incubation temperature is more variable for Brush-turkey embryos than for non-megapode birds and that even a small difference in temperature can have important effects on chick sex ratios, morphology and energy reserves. I have shown that incubation under artificial constant temperature conditions can significantly alter the developmental trajectories and phenotypic outcomes for chicks. In addition to laboratory based work, future studies should continue to examine how embryonic development and chick attributes are influenced by temperatures experienced under natural incubation conditions. Furthermore, investigation is required to determine how incubation temperature induced differences in hatchling phenotypes influence the post-hatch grow and fitness of chicks.

O saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião durante o período em que a placenta verdadeira ainda não está completamente formada. É responsável pela hematopoiese, pois dele se desenvolvem os primórdios das células sanguíneas, bem como parte do sistema circulatório primitivo do embrião. Tivemos como objetivo caracterizar a área transicional do saco vitelino para o intestino primitivo através de análise macroscópica, microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e reação imunohistoquímica para detecção de células germinativas (Oct-4). Foram realizados cortes seqüenciais de todos os embriões para permitir a visualização da estrutura como um todo. Nas amostras obtidas, pudemos observar a presença do saco vitelino com a área de conexão com intestino primitivo composto por inúmeras ilhotas vasculares que correspondem aos vasos envolvidos pelas células vitelínicas e células mesenquimais. No interior dos vasos identificamos hemangioblastos em grande quantidade. A camada correspondente ao mesênquima é delgada e com células alongadas e endoderma da membrana vitelínica é composto por células endodérmicas, grandes, uni ou binucleadas. Tal arranjo celular se assemelha a uma glândula devido a sua arquitetura em ilhas vasculares somado às camadas teciduais. O epitélio do intestino primitivo inicia sua diferenciação com células colunares estratificadas e bordadura em escova seguido de células mesenquimais indiferenciadas. A área transicional entre o saco vitelínico e o intestino primitivo é estreita em relação à luz destas duas estruturas com células de formato irregular, constituindo um delicado revestimento no lúmen contendo hemangioblastos. No mesênquima da área transicional inúmeros e pequenos capilares foram observados com hemangioblastos em seu interior. Em embriões e fetos submetidos à imunohistoquímica, verificamos células reativas como o metanefro, gônadas, parênquima hepático e saco vitelino. / The yolk sac is the main source of embryo nutrition during the period that true placenta are not still formed and responsible by hematopoieses because from it were developed the blood cells, as a part of embryo primitive circulatory system. We aimed to characterize the transitional area between the yolk sac and the primitive intestine by light microscopy, transmission electron microscopy and detection of germ cell lines by Oct-4 immunohistochemistry. Were done in all embryos serial sections to permit the identification for all structures. Were possible identify the yolk sac connection with primitive intestine composed by many blood islet corresponding to relation with yolk and mesenchymals cells. Inside the vessels were identified hemangioblasts. The layer corresponding to mesenchyme is thin and with elongated cells and the vitellinic membrane endoderm is composed by large, uni or binucleate endodermic cells. This shape is similar to a gland related to their architecture, vessels islets and tissue layers. Primitive intestine epithelium begins their differentiation with stratified columnar cells and undifferentiated mesenchymals cells. This transitional area is thin related to their lumen with irregular shape and constituted by delicate lumen basement and hemangioblast. Inside the mesenchyme there are many smaller capillaries observed with hemangioblast in it. Embryos and fetus submitted to immunohistochemistry and were verified positive cells like metanefrons, gonads, hepatic parenchyma and yolk sac.

Os roedores murídeos são melhor conhecidos em relação à placentação, porém descrições para outros grupos como os cricetídeos incluindo os \"camundongos do Novo Mundo\" ainda são escassos. Recentemente à placenta e as membranas fetais tem sido considerados fontes promissoras para a obtenção de células-tronco. Em particular, o saco vitelino é estruturalmente diverso e desempenha várias e importantes funções. Por essa razão, o objetivo deste trabalho foi descrever a placentação corioalantóidea e vitelina em Necromys lasiurus. Além de avaliar o potencial do saco vitelino como uma fonte de células-tronco mesenquimais. Para tanto, um total de 10 placentas variando de início ao final de gestação foram analisadas através de técnicas de histologia, imunohistoquímica e microscopia eletrônica, bem como através do cultivo e diferenciação celular, citometria de fluxo e imunocitoquímica. A placenta corioalantóidea discoidal era organizada em uma zona labiríntica, zona juncional e decidua. O labirinto era a região mais importante para as trocas materno-fetal. Próximo ao final da gestação ele apresentou uma barreira hemotricorial com espessura média de 2,41 µm. A zona juncional era composta por sincício e citotrofoblasto. Células trofoblásticas gigantes localizavamse entre a zona juncional e a decidua, assim como nas margens laterais da placenta. A morfologia do saco vitelino visceral invertido variou de acordo com a sua localização e relação com a placenta e o útero. Quando cultivadas, as células aderentes do saco vitelino formaram colônias fibroblastóide (92,13%) e expressaram marcadores de células-tronco mesenquimais e alguns para células precursoras de células-hematopoiéticas. As células apresentaram sucesso quanto às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica e não desenvolveram formação tumoral quando injetadas em camundongo nude. Com isso, essas células-tronco despontam como uma fonte terapêutica promissora para a terapia celular. / Murine rodents are well investigated in regard to placentation, but data for other groups such as cricetids including New World mice or Sigmodontinae are sparse. Recently the placenta and fetal membranes are regarded to be promising sources for obtaining stem cells. In particular, the yolk sac is structurally diverse and shows important functions throughout gestation. For this reason, this study aims to describe the chorioallantoic and yolk sac placentation in Necromys lasiurus. In addition, the potential of the yolk sac as a source for mesenchymal stem cells that are not well studied so far will be evaluated. In total, 10 individuals from early gestation to near term were investigated by means of histology, immunohistochemistry and electron microscopy as well as cell culture and differentiation, flow citrometry and immunocytochemistry. The discoidal chorioallantoic placenta was organized in a labyrinth zone, junctional zone, and decidua. The labyrinth was most import for maternal-fetal exchange processes. It possessed a hemotrichorial barrier of about 2.41 µm thickness near term. The junctional zone included syncytial areas and cytotrophoblasts. Trophoblast giant cells were located between the junctional zone and decidua as well as in the lateral margins of the placenta. The morphology of the inverted visceral yolk sac varies according to its location and relationship with the placenta and uterus. When cultured, the adherent cells of the yolk sac formed fibroblastoid colonies (92.13%) and expressed mesenchymal stem cells markers, and some hematopoietic precursor cells markers. They showed successful osteogenic, adipogenic, and chondrogenic differentiation and did not develop tumors when transferred to nude mice. Thus, these cells resulted as stem cells with promising therapeutic values for cell therapy.

O saco vitelino é o único anexo embrionário presente em todas as espécies animais cuja função é manter o desenvolvimento primário do feto até que a placenta assuma esta função. Além disso, ele desempenha funções importantes como: nutrição do embrião, síntese proteica, atividade fagocitária, transferência de materiais e hematopoiese. A utilização de células-tronco embrionárias gera muitas discussões devido às questões éticas associadas à obtenção destas células, além de questões religiosas e também as relações de baixa plasticidade das células-tronco adultas motivam os pesquisadores ao crescente interesse em outras fontes de célulastronco. Com isso, células provenientes de tecidos como as dos anexos embrionários chamam cada vez mais atenção devido à sua facilidade de acesso, crescimento rápido e boa plasticidade. Nosso grupo tem demonstrado que as células do saco vitelino têm boa capacidade de proliferação e são multipotentes. Vários pesquisadores vêm demonstrando que o período no qual as células são obtidas pode ser de fundamental importância para a diferenciação. Sendo assim, neste projeto tivemos como objetivo estabelecer e caracterizar células-tronco de saco vitelino de cães em dois estágios gestacionais, visando analisar de forma comparativa o perfil de expressão de marcadores mesenquimais, hematopoiéticos e pluripotência de forma a entender o comportamento das mesmas. Neste trabalho observamos que as células de saco vitelino obtidas de gestações com 40 e 50 dias aderiram ao plástico, tiveram morfologia fibroblastóide, boa proliferação celular, se diferenciaram em adipócitos, condrócitos e ostéocitos e expressaram alguns marcadores mesenquimais, sugerindo assim ser uma célula-tronco mesenquimal. Além disso, não levaram à formação tumoral quando injetadas em camundongos imunossuprimidos, nudes. / The yolk sac is an embryonic attachment present in all animal species, which function is to keep the primary development of the fetus until the placenta assumes this function. Moreover, it plays important roles as: nutrition of the embryo, protein synthesis, phagocytic activity, transfer of materials and hematopoiesis. The use of embryonic stem cells generates many discussions because of the ethical and religious issues associated with the obtaintion of these cells. Also the relationship of low plasticity of adult stem cells motivates researchers to explore other sources of stem cells. Thus, cells from tissues such as the embryonic anexes call more attention, due to its ease of access, rapid growth and good plasticity. Our group has shown that cells of the yolk sac has good ability to proliferate and are multipotent. Several researchers have shown that the period in which the cells are obtained can be critical for differentiation. Therefore, in this project we aimed to establish and characterize stem cells from dog yolk sac in two stages of pregnancy, in order to analyze comparatively the expression profile of mesenchymal, hematopoietic and plurypotency markers, and study their behavior and plasticity potencial in vitro. In this study we observed that yolk sac cells obtained from pregnancies at 40 and 50 days adhered to plastic, had fibroblast like-morphology, good cell proliferation and differentiated into adipocytes and osteocytes and expressed some mesenchymal markers, therefore suggesting to be a mesenchymal stem cell. Also, they did not lead to tumor formation when injected into immunosuppressed mice, nude.

As amostras foram obtidas de éguas adultas, totalizando 42 animais, sendo 30 destinados à descrição e caracterização da placenta e anexos embrionários/fetais. Os outros 12 animais foram destinados ao cultivo celular das membranas vitelinas e amnióticas. Os embriões foram mensurados obtendo Crow-Rump e fixados para descrição morfológica. Os fragmentos vitelínicos e amnióticos foram cultivados em meio α-MEM, suplementado com 20% de soro fetal bovino, 1% de aminoácidos não essenciais, 1% de glutamina e 1% de antibiótico, incubados a 37º C e 5% de CO2. Quanto ao material obtido, o córion é a membrana mais externa ao embrião, morfologicamente constituído por epitélio colunar e mesênquima ricamente vascularizado e rico em fibras colágenas. O alantóide é bem desenvolvido e vascularizado, constituído por epitélio simples pavimentoso e por microvilosidades. O âmnio é uma membrana avascular e delgada constituída por uma única camada de células pavimentosas, membrana basal e mesênquima. O saco vitelino exibe um aspecto amarelado com vasos na superfície, constituído por duas camadas celulares entremeadas por mesênquima vascularizado. A cinta coriônica aparece como um halo ao redor do concepto no ponto onde as membranas do alantóide e saco vitelino se encontram. Em relação aos embriões em geral, notamos a presença do prosencéfalo em formação, arcos branquiais, vesícula óptica pigmentada, neuróporo cranial aberto expondo o chamado 4º ventrículo encefálico, e uma flexura cervical acentuada. Notamos a impressão cardíaca; os membros torácicos e pélvicos apresentam formato de "remo". Nos fetos em geral observamos as cavidades orais e nasais delimitadas externamente; o crescimento do pavilhão auricular e início do crescimento da orelha externa; formação do aparelho ungueal nos membros torácicos e pélvicos. As costelas tornam-se mais proeminentes e algumas estruturas já apresentam ossificações Morfologicamente às células vitelinas e amnióticas exibem morfologia fibroblastóide e epitelióide. As células progenitoras isoladas do saco vitelino e do âmnio, na quinta passagem, demonstraram cariótipo normal (2n=64). A população de células do saco vitelino apresentou um crescimento progressivo, não constante até a quinta passagem, e em P10 um declínio acentuado. Para a membrana amniótica, a população celular apresentou um crescimento constante, não linear, até a oitava passagem, e em P10 um declínio acentuado. À imunocitoquímica, as células do saco vitelino e da membrana amniótica, apresentaram-se imunopositivas para: Oct-4, Nanog, SSEA-3, vimentina, citoqueratina 18 (ck18) e PCNA. Tanto as células do saco vitelino como as da membrana amniótica expressaram os seguintes marcadores: CD 45, CD 105, Oct3/4, Nanog, CD 34 e Stro-1. As duas linhagens celulares demonstraram capacidade de diferenciação em adipócitos, osteócitos e condrócitos e não apresentaram potencial carcinogênico em camundongos NUDE. / The samples were obtained from adult mares, totalizing 42 animals, being 30 for the description and characterization of the placenta and embryonic annexes / fetus. The other 12 animals were used for the cell culture of amniotic membranes and yolk sac. The embryos were measured obtaining Crow-Rump and fixed for morphological description. The vitelline and amniotic fragments were cultured in α-MEM, supplemented with 20% fetal bovine serum, 1% nonessential amino acids, 1% glutamine and 1% antibiotic, incubated at 37 º C and 5% CO2. As for the material obtained, the chorion is the outer embryo membrane, consisting of morphologically columnar epithelium and mesenchyme richly vascularized and rich in collagen fibers. The allantois is well vascularized and developed, consisting of a simple squamous epithelium and with the presence of microvilli. The amnion is an avascular membrane consisting of a single thin layer of squamous cells, basal membrane and mesenchyme. The yolk sac exhibits a yellowish appearance with surface vessels, consisting of two cell layers interspersed with a vascularized mesenchyme. The chorionic girdle appears as a halo around the fetus at the point where the allantoid membranes and the yolk sack meet. Regarding embryos in general, the presence of the forebrain in formation, branchial arches, pigmented optic vesicle, open cranial neuropore exposing the so called 4th encephalic ventricle, and pronounced cervical flexure were noticed. The cardiac impression was observed and the fore and hindlimbs had a \"paddle\" shape. Fetuses in general had the nasal and oral cavities externally defined; presented the growth of the auricular pavilion and early growth of the external ear; and formation of the nail apparatus in fore and hindlimbs. The ribs become more prominent and some structures already presented ossification. Morphologically the yolk and amniotic cells was presented as fibroblastoid and epithelioid. The progenitor cells isolated from the yolk sac and the amnion, in the fifth passage, showed normal karyotype (2n = 64). The cells population in the yolk sac showed a progressive growth, not constant until the fifth passage, and a marked decline in P10. For the amniotic membrane, the cell population showed a constant growth, not linear, until the eighth passage, and a marked decline in P10. In immunocytochemistry, the yolk sac cells and amniotic membranes presented themselves as immunopositive for: Oct-4, Nanog, SSEA-3, vimentin, cytokeratin 18 (CK18) and PCNA. Either the yolk sack as the aminiotic membranes expressed the markers CD 45, CD 105, Oct3 / 4, Nanog, CD 34 and Stro-1. Both cell lines demonstrated the capacity to differentiate into adipocytes, osteocytes and chondrocytes and had no carcinogenic potential in NUDE mice.

Em vista das limitações éticas em torno da obtenção de células-tronco de fetos humanos, o cão é uma alternativa para estes estudos. Além disso, a terapia celular proporciona novas expectativas para o tratamento na espécie. Realizamos o estudo comparativo das células isoladas de saco vitelino, fígado e medula óssea de fetos caninos. As células foram analisadas microscopicamente e ultra estruturalmente. O imunofenótipo das células foi avaliado através de marcadores. Caracterizamos a plasticidade, o cariótipo e o potencial teratogênico destas células. Após expansão as células progenitoras formaram colônias com morfologia fibroblastóide. As células progenitoras do saco vitelino e medula óssea são compostas por: células com alta proporção núcleo-citoplasma e células com citoplasma rico em organelas, enquanto que as células progenitoras do fígado eram semelhantes à célula epitelial e células ricas em organelas. As células-progenitoras dos três tecidos fetais foram positivas para os anticorpos nestina e vimentina, mas negativas para CD45 e CD13. Células progenitoras de medula óssea foram positivas para o marcador CD44. Células progenitoras do fígado e medula óssea expressaram a proteína citoqueratina-18, enquanto as do saco vitelino expressaram ve-caderina. Células positivas para Oct3/4 foram detectadas em todas as células progenitoras. As células-progenitoras do saco vitelino e medula óssea diferenciaram-se em tecidos ósseo, cartilaginoso e muscular; já as do fígado para tecido ósseo e muscular. Nenhum tipo celular diferenciou-se em adipócitos. As células progenitoras da medula óssea diferenciaram em células semelhantes a neurônios. Sugere-se a presença de progenitores semelhantes a células mesenquimais e epiteliais. Todas as células mantiveram o cariótipo estável e não formaram tumores. Células progenitoras de medula óssea apresentaram maior capacidade de proliferação e diversidade de diferenciação. Sugere-se que estas células são possíveis candidatas para a terapia celular. / The use the human fetuses for stem cells isolation have ethical limitations. In this context the dog is an excellent candidate to fetal stem cells. Furthermore, these cells can be used in cell therapy of canine diseases We aimed at isolation and comparative characterization of progenitor cells from yolk sac, liver and bone marrow of canine fetuses. Cells were characterized using stem cells antibodies. Differentiation assays as well as karyotype analysis were performed. Teratogenic properties this cells were evaluated. After establishment of primary culture, best proliferation potential was observed in bone marrow progenitor cells. Bone marrow and liver progenitor cells were more efficient in CFU-F assay, then yolk sac progenitor cells. Evidenced by TEM cells with a high nuclear-to-cytoplasmic ratio and cells with cytoplasm rich in organelles. Cells isolated from liver showed epithelial-like morphology and cytoplasm rich in organelles. The yolk sac, liver bone marrow cells reacted positively with nestin and vimentin, being negative to CD45 and CD13 antibodies. Additionally bone marrow progenitor cells were positive to CD44. Bone marrow and liver progenitor cells reacted positively with cytokeratin 18. Yolk sac progenitor cells were positive to ve-cadherin. A few Oct3/4 positive cells were found in yolk sac, liver and bone marrow. Yolk sac and bone marrow progenitor cells showed successful osteogenic, chondrogenic, myogenic differentiation. Differentiation liver progenitor cells were able to bone and muscle cells. The bone marrow progenitor cells were able to produce neuron-like cells. None of progenitor cells showed adipogenic differentiation. The study suggests the presence of mesenchymal-like and epithelial-like progenitor cells. All the karyotype remained and failed to induce the formation of tumors. Stem cells from bone marrow showed high diversity of differentiation than other cell types. It is suggested that these cells are possible candidates for cell therapy.

A placenta é encontrada apenas em mamíferos, e é resultado do sucesso da implantação do blastocisto no útero, representando um órgão funcional de trocas materno-fetais, sendo também um importante órgão endócrino. Na família Cricetidae e Subfamília Sigmodontinae englobam os ratos e camundongos da América do Sul. Devido à semelhança entre a morfologia da placenta e o processo de placentação dos roedores com a placenta humana, estes animais representam um interessante modelo para estudos relacionados à placentação. O objetivo deste estudo foi descrever a morfologia da placenta e a placentação em 5 espécies de sigmodontes (Necromys lasiurus, Oryzomys subflavus, Oryzomys sp., Oryzomys megacephalus e Oligoryzomys sp.). Nas análises macroscópicas constatou-se que a placenta desse grupo apresenta um formato discóide, sendo classificada como zonária discoidal. Na microscopia observou-se que a placenta é do tipo corioalantóidea, labiríntica, hemocorial, com zonas de espongiotrofoblasto e uma região de decídua materna. A placenta vitelina é vilosa, completamente invertida e persistia até o final da gestação. Somente em Oryzomys subflavus foi observada na placenta vitelina uma intensa atividade hemofágica, evidenciada pela técnica de Tricrômo de Masson. A barreira placentária nas espécies Necromys lasiurus e Oryzomys sp. é do tipo hemotricorial, existindo três camadas trofoblásticas adjuntas ao endotélio do capilar fetal separando os sistemas sanguíneos materno e fetal. As células trofoblásticas gigantes foram observadas em diferentes regiões da placenta. Em todas as espécies as células deciduais foram positivas para reação histoquímica de ácido periódico de Schiff (P.A.S.). / Placenta is found only in mammals and it is result of the success of blastocyst implantation in the uterus, representing a functional organ to maternal-fetal exchanges and it is also an important endocrine organ. The Family Cricetidae and Subfamily Sigmodontinae include the rats and mice from South America. Due to the similarity of both the placenta morphology and the placentation between rodents and human, these animals represent an interesting model for studies related to the placenta and placentation. The aim of this research was to describe the placenta morphology and placentation in 5 species of sigmodonts (Necromys lasiurus, Oryzomys subflavus, Oryzomys sp., Oryzomys megacephalus Oryzomys sp. and Oligoryzomys sp.). In the macroscopic analysis the placenta shows a discoid shape, it is classified as discoid type. The microscopy results showed the placenta is chorioallantoic, labyrinth, hemochorial, with areas of spongio zone and a region of maternal decidua. The yolk sac placenta is villous, completely inverted and persisted until the end of pregnancy. Only in Oryzomys subflavus was observed in the yolk sac placenta an intense hemophagous activity, evidenced by the Masson\'s trichrome stain. The placental barrier in Necromys lasiurus and Oryzomys sp. is of the hemotrichorial type, composed by three trophoblast layers more the fetal capillary endothelium to separate the maternal and fetal blood systems. The trophoblast giant cells were observed in different regions of the placenta. In all species the decidual cells were positive to histochemical reaction using periodic acid-Schiff (PAS).

O objetivo deste estudo foi caracterizar morfologicamente o desenvolvimento inicial da gestação bovina proveniente de monta natural, com idades compreendidas entre 15 a 70 dias, e de fecundação in vitro (FIV) com 35 dias, com ênfase no desenvolvimento placentário inicial, e diferenciação das estruturas extra embrionárias. Para tanto, foram utilizados 141 conceptos, provenientes de monta natural, e sete conceptos obtidos pela técnica de FIV. Após as coletas, os conceptos foram dissecados, mensurados macroscopicamente e fotodocumentados. As membranas extra-embrionárias foram cortadas em fragmentos de 5 cm2, e, em seguida fixadas em paraformoldeído 4%, para análise por microscopia de luz, e glutaraldeído 2,5%, para utilização em microscopia eletrônica de varredura e transmissão. As membranas extra-embrionárias e fetais apresentaram graus variáveis de desenvolvimento ao longo dos períodos analisados. O aparecimento macroscópico da vascularização do alantóide, sua tentativa de se fundir com o cório e o aparecimento efetivo dos primeiros cotilédones em desenvolvimento, foram eventos observados em embriões a partir de 1,9±0,27 cm de \"Crown-Rump\" (CR) (30 a 40 dias da gestação). O CR médio, o peso do embrião, o peso do saco gestacional e os comprimentos do cório e âmnio aumentaram gradativamente com o evoluir da gestação. O epitélio alantoidiano apresentou um dimorfismo celular a partir de 0,9 cm de CR (15 a 20 dias de gestação), porém, mostrou-se imaturo até o feto atingir o comprimento de 7,2 cm de CR (60 a 70 dias da gestação). O trofoblasto apresentou células mononucleadas e células gigantes binucleadas em diferentes níveis ao longo da gestação. O saco vitelino persistiu até 70 dias de gestação, e o seu epitélio apresentou indícios de atividade funcional até 50 dias de gestação. De todos os parâmetros mensurados na análise macroscópica, somente o comprimento o CR e o saco vitelino apresentaram diferença significativa entre os conceptos de monta natural e de FIV. Nos conceptos de monta natural, o comprimento do saco vitelino foi de 5,53 cm, em média, e nos conceptos de FIV, de apenas 1,07 cm. Todavia, faz-se necessário analisar um número maior de animais submetidos a FIV para corroborar a diferença encontrada nestas medidas. Os resultados sugerem ainda a existência de uma placenta vitelínica ativa, importante para a manutenção da gestação, que se estabelece temporariamente entre a placenta coriovitelínica e alantovitelínica transitória e a placenta cório-alantóide definitiva. / The main goal of this study was to describe morphology and the early gestational development of 15 to 70 day-old bovine embryos obtained by natural mating and 35 day-old bovine embryos obtained by in vitro fertilization (IFV) technique. One hundred and forty-one concepts originated by natural mating and seven by IVF technique were used. All concepts were dissected, macroscopically measured and photographed. Extraembryonic membranes were cut in 5 cm2 fragments and fixed in 4% paraformoldehyde for light and Scanning Electron Microscopy (SEM) and in 2.5% glutaraldehyde for Transmition Electron Microscopy (TEM). Ali membranes showed different stages of development during analyzed periods. The beginning of allantois macroscopic vascularization, the attempt of fusion between allantois and chorium membranes and the effective development of the first cotyledons were observed in 30-to-40 day-old embryos with 1.9± 0.24 cm of Crown-Rump (CR) length. The average CR, the embryos and gestational sac weight, the chorion and amnion length increased during gestation. The allantoic epithelia showed a cellular dimorphism with 0.9 em CR, however, the maturation has not happened until the foetal length of 7.2 em CR. The trophoblast showed different levels of mononucleate cells and binucleate giant cells. The yolk sac persisted until 70 days of gestation and the epithelium seemed functionally activated until 50 days of gestation. The CR and yolk sac size were the only measured macroscopic parameter showingdifference between natural mating and FIV concepts. Yolk sac size presented average values of 5.53 cm and 1.07 cm for natural mating and FIV concepts, respectively. Therefore, it is necessary to analyze a higher number of FIV embryos to corroborate that observed yolk sac size difference. All results obtained in this study suggest the existent of an active vitelline placenta, important to the gestational maintenance and temporarily establish between the transitory choriovitelline placenta and the permanent chorioallantoic placenta.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第22324号 / 医博第4565号 / 新制||医||1041(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 髙折 晃史, 教授 竹内 理, 教授 生田 宏一 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

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