Questa tesi descrive lo stato delle conoscenze degli effetti tossici da micotossine su animali d allevamento, ed alcuni esperimenti condotti per valutare gli effetti indotti da esposizione cronica da micotossine sui ruminanti. Uno studio è stato condotto su 15 aziende specializzate in sistemi di produzione intensiva di carni bovine, situate nel Nord Italia (province di Verona e Mantova), con l'obiettivo di individuare i rischi d esposizione a contaminazione da micotossine. Alcuni metodi di laboratorio sono stati sviluppati: un metodo per la determinazione di ocratossina A (OTA) accumulata in tessuti e organi; Un metodo per valutare gli effetti delle fumonisine sulla biosintesi delle basi sfingoidi sfingosina (So) e sfinganina (Sa); Un metodo per rilevare l addotto AFB1-albumina. La razione totale mescolata (TMR) è risultata positiva alla AF e FB. Tra i singoli alimenti, il mais e la semola glutinata di mais sono stati i principali responsabili della contaminazione del TMR. Il livello di contaminazione è positivamente correlato al contenuto di umidità di mais. Il metodo per la determinazione dell OTA nei tessuti ed organi ha mostrato un buon recupero medio. L'analisi del rapporto Sa/So nel sangue non ha mostrato alcun effetto negativo delle fumonisine sulla biosintesi lipidica. L'addotto AFB1-albumina è risultato positivo per il 18% dei campioni totali di sangue. / The thesis describes the state of knowledge about toxic effects of mycotoxins on farm animals, and some experiments conducted to assess effects induced by chronic exposure to mycotoxins on ruminants. A field study for was carried out on 15 farms specialised for intensive beef production system, located in Northern Italy (provinces of Verona and Mantova), with the aim to identify risks of exposure to mycotoxins contamination. Some laboratory methods were performed: a method for the detection of ochratoxin A (OTA) concentration in tissues and organs; a method for evaluating the effects of fumonisin on biosynthesis of the two sphingoid bases sfingosine (So) and sphinganine (Sa); a method to detect the AFB1-albumin adduct. Total mixed rations (TMR) resulted positive for AF and FB contamination. Among single feedstuffs, corn and corn gluten feed were the main responsible for TMR contamination. Level of contamination was positively related to corn moisture content. The method for the determination of OTA in tissue and organ showed a good mean recovery. The analysis of ration Sa/So in blood did not show any negative effect by fumonisin on the lipidic biosynthesis. The AFB1-albumin adduct was positive on 18% of total blood samples.

O objetivo do presente trabalho foi determinar resíduos de aflatoxinas M1 (AFM1), aflatoxicol (AFL), B1 (AFB1), B2 (AFB2), G1 (AFG1) e G2 (AFG2) não metabolizadas no fígado e rim de frangos de corte, com a finalidade de verificar sua aplicabilidade na avaliação da eficiência de um adsorvente comercial à base de aluminossilicato de cálcio e sódio (HSCAS) incorporado na dieta, bem como determinar o percentual de ligação do adsorvente com a AFB1em ensaios in vitro. Cem frangos de corte (Ross 708), machos, de 1 dia de idade, foram mantidos em baterias metálicas, com acesso ad libitum à ração e água. Utilizou-se um delineamento inteiramente casualizado com 4 tratamentos, sendo cada tratamento composto por 5 gaiolas contendo 5 frangos em cada uma. Os tratamentos foram os seguintes: A) dieta basal (DB), sem adição de HSCAS ou AFB1; B) DB com adição de 0,5% de HSCAS; C) DB com adição de 2,5 mg/kg de AFB1; e D) DB com adição de 2,5 mg/kg de AFB1 e 0,5% de HSCAS. As rações experimentais foram administradas de 1 a 21 dias de vida. No dia 21, 5 frangos de cada tratamento foram insensibilizados com dióxido de carbono, mortos por deslocamento cervical e amostras de fígado e rim foram coletadas para análise de resíduos de AFB1. O HSCAS foi efetivo em se ligar, in vitro, à AFB1, cujos percentuais de ligação variaram de 8,8 a 99,5%, para concentrações do adsorvente entre 0,05 e 100 mg/10 mL. Apesar de o HSCAS ter melhorado, numericamente, o desempenho dos frangos no estudo in vivo, estatisticamente não houve diferença significativa entre os tratamentos C e D. As concentrações de AFB1, AFL, AFG1 e AFB2 foram menores (P<0,05) nos fígados das aves alimentadas com AFB1 adicionado de HSCAS (dieta D), quando comparado com aves alimentadas somente com AFB1 (dieta C). As concentrações de AFB1 também foram menores (P<0,05) nos rins das aves alimentadas com AFB1 adicionado de HSCAS (dieta D) quando comparado com aves alimentadas somente com AFB1 (dieta C). A determinação de resíduos de aflatoxinas no fígado e rins não é aplicável para avaliar a proteção do adsorvente contra efeitos tóxicos das aflatoxinas em frangos de corte, sendo, porém, de grande utilidade para verificar a capacidade do adsorvente em reduzir as concentrações das aflatoxinas residuais nas vísceras de frangos destinadas ao consumo humano. / The objective of the study was to determine residues of aflatoxin M1 (AFM1), aflatoxicol (AFL), B1 (AFB1), B2 (AFB2), G1 (AFG1) and G2 (AFG2) non-metabolized in liver and kidney of broiler chicks, aiming to verify its applicability for evaluation of a commercial adsorbent based-HSCAS efficacy incorporated into the diet, aswell as to determine the binding capacity of a HSCAS for AFB1 in an in vitro testing. One hundred day-old male broilers (Ross 708) were maintained in chick batteries and allowed libitum access to feed and water. A completely randomized design was used with 5 replicate pens of5 chicks assigned to each of 4 dietary treatments from hatch to 21 days. Dietary treatments included: A) basal diet (BD), with no HSCAS or AFB1; B) BD supplemented with 0.5% HSCAS only; C) BD supplemented with 2.5 mg AFB1/kg of feed; and D) BD supplemented with 2.5 mg AFB1/kg of feed and 0.5% HSCAS. On day 21, 5 chicks from each treatment wereinsensibilized with carbon dioxide, killed by cervical dislocation and samples of liverand kidney collected for analysis of AFB1 residues. The HSCAS was effective to binding AFB1 in vitro, with percentage of AFB1 bound varying from 8.8 to 99.5% for adsorbent concentrations between 0.05 and 100 mg/10mL. Although HSCAS has improved numerically the performance of broilers on the in vivostudy, there was no statistically significant difference between treatments C and D. Concentrations of AFB1, AFL, AFG1 and AFB2 were lower (P<0.05) in livers of birds fed AFB1 plus HSCAS (diet D), when compared to birds fed AFB1 alone (diet C). Concentrations of AFB1 were also lower (P<0.05) in kidneys of birds fed AFB1 plus HSCAS (diet D) compared to those fed AFB1 only (diet C). The determination of aflatoxin residues in liver and kidney is not applicable for evaluation of the adsorbent protection against the toxic effects of aflatoxins in broiler chicks, being, however, very useful to verify the adsorbentcapacity to reduce the concentration of aflatoxin residues in the organs of chickens intended for human consumption.

A exposição humana a microrganismos patogênicos e suas toxinas em alimentos constitui um grave problema de saúde pública. O uso indiscriminado de antimicrobianos convencionais promove o aumento da resistência dos microrganismos às principais moléculas existentes no mercado. Além disso, as limitações do uso de substâncias químicas em matérias primas alimentares têm estimulado pesquisas para o desenvolvimento de metodologias eco-amigáveis para evitar a multiplicação de fungos e/ou eliminar suas toxinas. O Staphylococcus aureus é uma das principais bactérias patogênicas que apresenta taxas elevadas de resistência aos antimicrobianos, e por este motivo tem sido objeto de estudo de pesquisas que tentam identificar novos compostos bioativos para o combate de infecções. O Aspergillus parasiticus é um dos principais fungos produtores de aflatoxinas, substâncias carcinogênicas que contaminam diversos tipos de cereais antes e após o processamento. Estudos recentes demonstraram que extratos de plantas possuem atividade antimicrobiana e antifúngica, além de potencial para degradação de micotoxinas. Neste contexto, o presente estudo teve por objetivos avaliar a atividade antimicrobiana in vitro de extratos brutos e liofilizados de folhas de maracujá, araçá, alecrim e orégano sobre células planctônicas de S. aureus e A. parasiticus, bem como verificar a capacidade dos referidos extratos em degradar in vitro a aflatoxina B1 (AFB1), ocratoxina A (OTA) e zearalenona (ZEA). Os efeitos antibacterianos e antifúngicos dos extratos foram avaliados através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida / fungicida mínima (CBM/CFM). Os ensaios de degradação da micotoxinas foram realizados em diferentes tempos de incubação (12-48 h) a 37º C, utilizando-se cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinação das concentrações das micotoxinas. O maracujá não demonstrou atividade antimicrobiana tanto para S. aureus quanto para A. parasiticus. Dos quatro extratos estudados, o araçá demonstrou o maior efeito antibacteriano, cujos valores de CIM para extratos bruto e liofilizado foram 0.39 mg/mL e 0.45 mg/mL, respectivamente. Os menores valores de CIM para A. parasiticus foram obtidos com o orégano liofilizado (8.33 mg/mL) e o araçá bruto (3.215 mg/mL). Contudo, não foi possível identificar valores de CFM para o fungo analisado. Não houve efeito de degradação de OTA e ZEA por nenhum dos extratos avaliados. Todos os extratos reduziram a concentração de AFB1 após 48 h de incubação. A maior porcentagem (60.3%) de redução de AFB1 foi obtida com o extrato de alecrim após 48 h de incubação. A atividade antimicrobiana demonstrada pelos extratos das plantas avaliadas indica um potencial para sua aplicação no combate a bactérias patogênicas e fungos toxigênicos. Este é o primeiro estudo realizado com extratos dessas quatro espécies de plantas que evidenciou a capacidade de redução in vitro de AFB1. / Human exposure to pathogenic microorganisms and their toxins in food is a serious public health problem. The indiscriminate use of conventional antimicrobials increases the resistance of microorganisms to the main molecules available in the market. In addition, limitations on the use of chemical substances in food raw materials have stimulated researches for the development of eco-friendly methodologies to avoid the multiplication of fungi and/or eliminate their toxins. Staphylococcus aureus is one of the major pathogenic bacteria with high rates of antimicrobial resistance, and for this reason it has been the subject of research studies aiming to identify new bioactive compounds to combat infections. Aspergillus parasiticus is one of the main aflatoxin-producing fungi, which are carcinogenic substances that contaminate many types of cereals before and after processing. Recent studies have demonstrated that plant extracts have antimicrobial and antifungal activity, as well as potential for degradation of mycotoxins. In this context, the objective of the present study was to evaluate the in vitro antimicrobial effects of crude and lyophilized extracts of leaves from sweet passion fruit, araçá, rosemary and oregano on planktonic cells of S. aureus and A. parasiticus. The in vitro degradation of aflatoxin B1 (AFB1), ochratoxin A (OTA) and zearalenone (ZEN) by the crude extracts was also investigated. The antimicrobial and antifungal effects were evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal / fungicidal concentration (MBC / MFC). Mycotoxin detoxification assays were conducted at different incubation times (12-48h) at 37 °C. The concentrations of mycotoxins were determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Sweet passion fruit had no antimicrobial activity on S. aureus or A. parasiticus. Out of the four extracts evaluated, araçá showed the highest antimicrobial effect with MIC of 0.39 mg/mL and 0.45 mg/mL for crude and lyophilized extracts, respectively. The lowest MIC values for A. parasiticus were obtained with lyophilized oregano (8.33 mg/mL) and crude araçá (3.215 mg/mL). However, no MFC values were obtained for the analyzed fungi. Although OTA e ZEN were not degraded by any extract evaluated, all extracts reduced the concentration of AFB1 after 48 h of incubation. The highest percentage of AFB1 reduction (60.3%) was obtained with rosemary extract after 48h of incubation. The antimicrobial activity demonstrated by extracts of the evaluated plants indicates a potential for application against pathogenic bacteria and toxigenic fungi. This is the first study carried out with extracts of these four plants species that demonstrated the in vitro ability for AFB1 reduction.

A exposição humana a microrganismos patogênicos e suas toxinas em alimentos constitui um grave problema de saúde pública. O uso indiscriminado de antimicrobianos convencionais promove o aumento da resistência dos microrganismos às principais moléculas existentes no mercado. Além disso, as limitações do uso de substâncias químicas em matérias primas alimentares têm estimulado pesquisas para o desenvolvimento de metodologias eco-amigáveis para evitar a multiplicação de fungos e/ou eliminar suas toxinas. O Staphylococcus aureus é uma das principais bactérias patogênicas que apresenta taxas elevadas de resistência aos antimicrobianos, e por este motivo tem sido objeto de estudo de pesquisas que tentam identificar novos compostos bioativos para o combate de infecções. O Aspergillus parasiticus é um dos principais fungos produtores de aflatoxinas, substâncias carcinogênicas que contaminam diversos tipos de cereais antes e após o processamento. Estudos recentes demonstraram que extratos de plantas possuem atividade antimicrobiana e antifúngica, além de potencial para degradação de micotoxinas. Neste contexto, o presente estudo teve por objetivos avaliar a atividade antimicrobiana in vitro de extratos brutos e liofilizados de folhas de maracujá, araçá, alecrim e orégano sobre células planctônicas de S. aureus e A. parasiticus, bem como verificar a capacidade dos referidos extratos em degradar in vitro a aflatoxina B1 (AFB1), ocratoxina A (OTA) e zearalenona (ZEA). Os efeitos antibacterianos e antifúngicos dos extratos foram avaliados através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida / fungicida mínima (CBM/CFM). Os ensaios de degradação da micotoxinas foram realizados em diferentes tempos de incubação (12-48 h) a 37º C, utilizando-se cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinação das concentrações das micotoxinas. O maracujá não demonstrou atividade antimicrobiana tanto para S. aureus quanto para A. parasiticus. Dos quatro extratos estudados, o araçá demonstrou o maior efeito antibacteriano, cujos valores de CIM para extratos bruto e liofilizado foram 0.39 mg/mL e 0.45 mg/mL, respectivamente. Os menores valores de CIM para A. parasiticus foram obtidos com o orégano liofilizado (8.33 mg/mL) e o araçá bruto (3.215 mg/mL). Contudo, não foi possível identificar valores de CFM para o fungo analisado. Não houve efeito de degradação de OTA e ZEA por nenhum dos extratos avaliados. Todos os extratos reduziram a concentração de AFB1 após 48 h de incubação. A maior porcentagem (60.3%) de redução de AFB1 foi obtida com o extrato de alecrim após 48 h de incubação. A atividade antimicrobiana demonstrada pelos extratos das plantas avaliadas indica um potencial para sua aplicação no combate a bactérias patogênicas e fungos toxigênicos. Este é o primeiro estudo realizado com extratos dessas quatro espécies de plantas que evidenciou a capacidade de redução in vitro de AFB1. / Human exposure to pathogenic microorganisms and their toxins in food is a serious public health problem. The indiscriminate use of conventional antimicrobials increases the resistance of microorganisms to the main molecules available in the market. In addition, limitations on the use of chemical substances in food raw materials have stimulated researches for the development of eco-friendly methodologies to avoid the multiplication of fungi and/or eliminate their toxins. Staphylococcus aureus is one of the major pathogenic bacteria with high rates of antimicrobial resistance, and for this reason it has been the subject of research studies aiming to identify new bioactive compounds to combat infections. Aspergillus parasiticus is one of the main aflatoxin-producing fungi, which are carcinogenic substances that contaminate many types of cereals before and after processing. Recent studies have demonstrated that plant extracts have antimicrobial and antifungal activity, as well as potential for degradation of mycotoxins. In this context, the objective of the present study was to evaluate the in vitro antimicrobial effects of crude and lyophilized extracts of leaves from sweet passion fruit, araçá, rosemary and oregano on planktonic cells of S. aureus and A. parasiticus. The in vitro degradation of aflatoxin B1 (AFB1), ochratoxin A (OTA) and zearalenone (ZEN) by the crude extracts was also investigated. The antimicrobial and antifungal effects were evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal / fungicidal concentration (MBC / MFC). Mycotoxin detoxification assays were conducted at different incubation times (12-48h) at 37 °C. The concentrations of mycotoxins were determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Sweet passion fruit had no antimicrobial activity on S. aureus or A. parasiticus. Out of the four extracts evaluated, araçá showed the highest antimicrobial effect with MIC of 0.39 mg/mL and 0.45 mg/mL for crude and lyophilized extracts, respectively. The lowest MIC values for A. parasiticus were obtained with lyophilized oregano (8.33 mg/mL) and crude araçá (3.215 mg/mL). However, no MFC values were obtained for the analyzed fungi. Although OTA e ZEN were not degraded by any extract evaluated, all extracts reduced the concentration of AFB1 after 48 h of incubation. The highest percentage of AFB1 reduction (60.3%) was obtained with rosemary extract after 48h of incubation. The antimicrobial activity demonstrated by extracts of the evaluated plants indicates a potential for application against pathogenic bacteria and toxigenic fungi. This is the first study carried out with extracts of these four plants species that demonstrated the in vitro ability for AFB1 reduction.

Budding yeast are capable of existing in both a haploid and diploid state. Haploid cells have two mating types, MATa and MATα. When cells from the two mating types come in contact they signal using reciprocal pheromones and pheromone receptors, starting a regulated pheromone response that includes transcription of pheromone-response genes, polarization in the direction of highest pheromone concentration, and cell cycle arrest. Once cells have chosen a mating partner, they must fuse their cell walls, plasma membranes, and nuclei to form a single diploid cell.

Le aflatossine sono tra i composti naturali conosciuti più cancerogeni. Queste molecole, tossiche sia per gli animali sia per l’uomo, sono prodotte su importanti colture, quali mais, arachidi e cotone da differenti specie fungine di Aspergillus in particolare quelli afferenti alla sezione Flavi. In Italia il principale fungo responsabile della contaminazione da aflatossine su mais è A. flavus e l’area più esposta alla contaminazione è il nord della penisola dove si localizza circa il 90% della coltivazione del mais. Generalmente, le condizioni climatiche in questa area non sono favorevoli alla contaminazione da aflatossine; comunque stress idrico e alte temperature possono verificarsi durante il ciclo di crescita del mais favorendo la produzione di AFB1 da parte del fungo e determinando un accumulo superiore ai limiti di legge, come accadde nel 2003. Infatti, a partire dal 2003 più attenzione è stata dedicata alla caratterizzazione della popolazione italiana di A. flavus associate alla coltivazione del mais e allo sviluppo di una valida tecnica, come il controllo biologico degli isolati tossigeni mediante l’utilizzo di isolati non tossigeni, per ridurre la contaminazione da aflatossine. / Aflatoxins are the most carcinogenic natural compound known in nature. These molecules, toxic for animal and humans, are produced on important economic commodities worldwide by the secondary metabolism of several fungal species of Aspergilli of the section Flavi. In Italy the principal responsible of aflatoxins contamination on maize is A. flavus and the more exposed area to contamination is the northern of the peninsula where almost 90% of the cultivation is located. Generally, climatic conditions in this area are not favourable for aflatoxins contamination; however, reduced rainfall and increased temperature during maize developing season can occur along with associated levels of AFB1 exceeding the legal limits, as happened in 2003. Since this year, more attention has been dedicated to characterize Italian A. flavus populations associated with maize cultivation and to develop a useful tool to reduce aflatoxins contamination. To accomplish this goal, vegetative compatibility analysis, identification of atoxigenic isolates, evaluation of the ability of atoxigenic isolates to reduce in vitro aflatoxins produced by toxigenic isolates in vitro, selection of atoxigenic isolates potentially useful as biocontrol agents, individuate deletions in the aflatoxin biosynthesis gene cluster of selected atoxigenic isolates and biocontrol field trial with the selected potential biocontrol agents were achieved.

Le aflatossine sono potenti sostanze cancerogene presenti in natura. L'aflatossina b1 viene poco degradata nel rumine ed è escreta nel latte come aflatossina M1 con un carry over del 1-3%. Nel presente lavoro è stata studiata l'apparizione delle aflatossine nel sangue conseguente all'ingestione orale di un bolo contaminato per verificare come queste tossine sono assorbite nel tratto digestivo delle vacche da latte. La comparsa nel plasma e nel latte attraverso una mucosa tipicamente non di assorbimento per determinare il possibile meccanismo che regola l'assorbimento delle aflatossine è stato un ulteriore oggetto di studio. Un'altra prova è stata effettuata con vacche da latte per studiare il carry-over dell'aflatossina B1 nel latte in relazione al livello produttivo e alle cellule somatiche, come indicatore di processi infiammatori nella mammella. La capacità sequestrante di diversi tipi di adsorbenti è stata comparata in prove in vitro condotte in differenti condizioni sperimentali. Anche il comportamento del complesso aflattosina-adsorbente nel tratto digestivo di vacche in lattazione è stato studiato in vivo per mezzo della misurazione della presenza di aflatossina M1 nel latte. Una prova in vivo è stata effettuata per verificare l'effetto che la pellettatura o la semplice miscelazione di adsorbenti nei mangimi può avere nel migliorare l'efficienza di sequestro. / Aflatoxins are the most potent natural carcinogenic compound present in nature. Aflatoxin B1 is poorly degraded in the rumen and is excreted in milk as aflatoxin M1 with a carry-over rate of 1-3%. The present work investigated rate and schedule of aflatoxins plasma appearance following an oral contaminated bolus to verify how these toxins are absorbed in the gastro-intestinal tract of dairy cows. Aflatoxins plasma and milk appearances were also investigated using a non-absorbing mucosa to understand the possible aflatoxins absorption mechanism through mucous membranes. A trial was carried out in lactating dairy cows to study the carry over of ingested aflatoxin B1 in milk as aflatoxin M1 in relation to milk yield and somatic cells count, the latter as indicator of udder inflammatory processes. sequestering capacity of different kinds of mycotoxins sequestering agents were compared in vitro trial carried out at different experimental conditions. The behaviour of the aflatoxins-adsorbents complexes through digestive tract of lactating dairy cows were also investigated in vivo by measuring appearance of aflatoxin M1 into milk. An in vivo trial was conducted to verify if effect of pelletizing or simply mixing processes is useful to improve mycotoxins sequestering agents efficacy in dairy cow nutrition.

Student Number : 9902006N - MSc(Med) Dissertation - School of Medicine - Faculty of Health Sciences / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common primary malignant tumour of the liver. Aflatoxin B1 (AFB1) is a potent hepatocarcinogen, and dietary iron overload has been shown to contribute to HCC development in black africans. Both are well studied hepatotoxins. The aim of this study was to use a Wistar rat model over a 12 month period to investigate synergy and the extent thereof between AFB1 ingestion and dietary iron overload. 25ug/day of AFB1, reconstituted in DMSO, was administered by gavaging the animals, over a period of 10 days with a 2 day interval in between. The chow diet was supplemented with 0.75% (w/w) ferrocene iron. Experimental subjects were divided into 4 groups. Group 1 was fed the normal chow diet. Group 2 was fed 0.75% (w/w) ferrocene iron alone. Group 3 was gavaged 250μg AFB1 alone. Group 4 was fed the 0.75% (w/w) ferrocene iron and gavaged 250μg AFB1. A number of assays were conducted to investigate synergy. Colorimetric assays were used to measure serum iron, total-iron binding capacity, ALT, AST, GGT, nitrite production, lipid peroxidation and hydroxyproline concentrations. ELISA’s were used to determine ferritin, 8-isoprostane and 8-hydroxyguanosine concentrations. Nontransferrin bound iron was measured using an HPLC method. A chemiluminescent assay was used to measure superoxide anion production. Cytokines were measured using a suspension array system. Mutagenicity was assessed using the Ames mutagenicity assay using salmonella typhimirium strains TA97, TA98, TA100 and TA102. Iron profiling indicated that iron overloading occurred with the ingestion of the ferrocene diet. Biomarkers of oxidative stress, as illustrated by the measurement of 8-hydroxyguanosine and lipid peroxidation, showed additive synergistic effects between the two carcinogens. The anti-inflammatory interleukin-10 was shown to be markedly elevated with the co-administration of the two carcinogens, indicating the elevated inflammatory processes. Additive synergistic effects were noted in terms of the liver disease marker ALT. The salmonella typhimirium strain TA102 used in the Ames mutagenicity test showed increased colony counts with respect to the coadministration of carcinogens (P<0.05), although no synergistic effect was noted. In a few of the presented parameters, the AFB1 group was not significantly different to the control group, although significant differences between the Fe group and the Fe + AFB1 groups were noted. The implication of which is that the presence of AFB1 is increasing the activity of Fe as a carcinogen, thereby acting as a co-carcinogen. Examples of such parameters illustrating this are presented in the results section including serum ALT, serum nitrite, liver and serum lipid peroxidation, liver and serum 8-hydroxyguanosine, some of the mutagenicity assays, and interleukin-10. The conclusion of this study suggests that AFB1 acts as a co-carcinogen in the presence of iron overloading, implying that a synergistic relationship between these two toxins exists.