Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-28Bitstream added on 2014-06-13T20:58:44Z : No. of bitstreams: 1 carmello_jc_me_arafo.pdf: 701741 bytes, checksum: 55eb9d8f5746ef34ede24573f0c2455a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve por objetivo avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) mediada pelo fotossensibilizador (FS) Photodithazine® (PDZ), associado à luz do tipo LED (660nm). Para tanto, foram utilizados 55 camundongos com aproximadamente 6 semanas de vida, os quais foram submetidos a indução de candidose no dorso da língua. Inicialmente os animais foram imunossuprimidos e no dia seguinte se realizou a inoculação de C. albicans na língua dos mesmos por meio de swabs embebidos na suspensão (107 Ufc/mL). Para a realização da terapia fotodinâmica o FS foi avaliado nas concentrações de 75, 100, 125 e 150mg/L. Tais grupos experimentais foram denominados de (P+L+ 75mg/L, P+L+ 100mg/L, P+L+ 125mg/L, P+L+ 150mg/L) associados a uma dose de luz de 37,5 J/cm2. Para a verificação apenas do efeito da PDZ, a mesma foi aplicada na língua dos animais, sem iluminação (grupos denominados de P+L- 75mg/L, P+L- 100mg/L, P+L- 125mg/L, P+L- 150mg/L). O efeito da luz foi avaliado por meio da iluminação das línguas com dose de luz de 37,5J/cm2, (grupo denominado de P-L+ 37,5J/cm2). Um grupo recebeu apenas inoculação por Candida (grupo P-L-, controle positivo), outro grupo não recebeu nenhum tratamento e nem inoculação fúngica (grupo CN – controle negativo). Após os experimentos realizou-se a recuperação de C. albicans das línguas dos animais por meio de swabs que foram esfregados sobre as mesmas durante 1 minuto. Esses swabs foram embebidos em tubos de ensaio com 1mL de solução salina, e diluições seriadas foram realizadas e colocadas em placas de petri com SDA. Após 48 horas de incubação a 37º C as células fúngicas foram quantificadas e o número de Ufc/mL foi determinado e analisado pelo teste ANOVA (P<.05). Os camundongos foram sacrificados e tiveram as línguas removidas cirurgicamente para realização da análise histológica. Os resultados demonstraram... / The aim of this investigation was to evaluate the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) mediated by photossensitizer Photodithazine® (PDZ) associated with LED light (660nm) for the photoinactivation of C. albicans in a murine model of oral candidosis. Fifty-five 6-week-old female Swiss mice were immunossuppressed and in the next day small cotton pads were soaked in a C. albicans cell suspension (107CFU/mL) and swabbed in the oral cavity of mice. PDT was performed and the PS was applicated topically on the dorsum of the tongue of mice at concentrations 75, 100, 125 and 150mg/L (P+L+75, P+L+100, P+L+125 and P+L+150mg/L) associated with LED at a fluence of 37,5J/cm2. The effect of PS only was tested by application of PDZ for the same period of pre-irradiation time and irradiation at the same concentration as that for the P+L+ group, without the LED illumination (P+L-75, P+L-100, P+L-125 and P+L-150mg/L). To verify the effect of the light only, the group was exposed to the same LED dose mentioned previously (P-L+ 37,5J/cm2), 1 group). The positive control did not receive any PS or light (P-L-). The negative control group (CN) of animals was evaluated and mice did not receive any treatment. After treatment the dorsum of the tongue was swabbed for 1 minute with a cotton pad to recover C. albicans cells and the microbiological evaluation was performed. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined and analyzed by ANOVA test (P<.05). Animals were killed 24 hours after treatment and the tongue of all mice were surgically removed for histological analysis. The results of this investigation demonstrated that PDT was effective in reducing C. albicans recovered from the tongue of mice at concentrations 100, 125 and 150mg/L of PS when compared with the animals from the positive control group (P-L-) (P<0.05). There was no difference between these concentrations... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:26:08Z : No. of bitstreams: 1 lazarin_aa_dr_arafo.pdf: 2142552 bytes, checksum: 63a785fe41ed3de17382a8e94e97b844 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foi proposto avaliar diferentes vernizes experimentais, que apresentam em sua formulação monômeros hidrofílicos ou zwiteriônicos, como método para modificar a superfície de resina acrílica para base de prótese, com o objetivo de prevenir a adesão de C. albicans. Foram confeccionados corpos-de-prova com características superficiais que simulavam a parte polida das próteses (superfície lisa) e com características superficiais que simulavam a parte interna das próteses (superfície rugosa) utilizando-se uma resina para base de prótese específica para micro-ondas (Vipi Wave). Matrizes metálicas com 10 cavidades (13,8 mm de diâmetro e 2 mm de altura) foram incluídas em mufla, entre 2 placas de vidro, para simular a superfície lisa, ou em contato com gesso para obter amostras que simulassem a superfície rugosa da prótese. Todos os corpos-de-prova foram submetidos à mensuração da rugosidade utilizando-se um rugosímetro (Mitutoyo SJ 400) com cutoff de 2,5 mm. A rugosidade superficial foi determinada (Ra-µm) pela média de três mensurações realizadas em cada amostra. Após a leitura da rugosidade, os corpos-de-prova foram divididos em grupo controle (n=72; 36 lisos e 36 rugosos), não recebendo nenhum tratamento superficial, e 12 grupos experimentais (n=72; 36 lisos e 36 rugosos) que receberam uma camada do verniz experimental sendo polimerizado em forno EDG. Os vernizes experimentais apresentaram em sua composição o monômero metil metacrilato (MMA), dois agentes de ligação cruzada (TEGDMA e Bis-GMA) e o foto iniciador MBP (4- metil benzofenona). Além desses componentes, os vernizes identificados pelos códigos P, E e T apresentaram monômeros hidrofílicos em 3 concentrações (25, 30 e 35%). O verniz identificado pelo código M apresentou um monômero zwiteriônico (MZ), nas mesmas... / The aim of the present study was to evaluate the use of different experimental varnishes containing zwitterion or hydrophilic monomers as a manner to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion of C. albicans. For such purpose, specimens with surface characteristics that simulated the polished side of the dentures and the inner side of the dentures were fabricated using a microwave-polymerized denture base acrylic resin (Vipi Wave). Hollow metallic matrices with 10 cavities (13.8 mm diameter x 2 mm high) were flasked either between two glass plates, in order to produce specimens with smooth surfaces that simulated the polished side of the dentures, or in direct contact with the stone, in order to obtain specimens with rough surfaces that simulated the inner side of the dentures. All specimens were subjected to surface roughness readings in a roughness meter (Mitutoyo SJ 400) with cutoff length of 2.5 mm. Surface roughness (Ra, µm) was determined as the average of three random measurements made on each specimen. After the roughness readings, the specimens were randomly assigned to one control group (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens), in which the specimens received no surface treatment, and 12 experimental groups (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens) in which the specimens were coated with one of the experimental varnishes followed by polymerization in an EDG oven. The 12 experimental varnishes presented in their composition the monomer methyl methacrylate (MMA), two crosslinking agents (TEGDMA and Bis-GMA) and a photoinitiator agent (4-methyl benzophenone . MPB). In addition to these components, the experimental varnishes labeled as P, E and T presented hydrophilic monomers at three concentrations (25, 30 and 35%). The experimental varnish labeled as M presented a zwitterion... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Alexandre Luiz Souto Borges / Coorientadora: Cristiane Campos Costa Quishida / Banca: Cesar Rogério Pucci / Banca: Bruno Vinícius Manzolli Rodrigues / Resumo: O objetivo desse estudo foi sintetizar mantas não tecidas de nanofibras (NFs) de Polietilmetacrilato (PEMA) com adição de nistatina (NYS) e avaliar a atividade antimicrobiana nas resinas reembasadoras rígidas e macias. Realizou- se o teste microbiológico da CIM de NYS para a inativação da C. albicans. NFs foram sintetizadas pela técnica da eletrofiação, utilizando-se solução de PEMA puro e NYS e PEMA. Para a síntese das NFs de PEMA, foi produzida uma solução de PEMA dissolvido em Dimetilformamida (DMF) e 1,1,2,2 Tetracloroetano (TCE), logo após foram adicionadas duas concentrações de NYS (10 e 20 mg/ml) obtidas do teste CIM. As amostras foram analisadas em Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Análise de molhabilidade, Análise de Difratometria de Raios-X (DRX) e Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR). Após a análise em MEV foi realizada a média dos diâmetros das fibras com Software ImageJ. As atividades antimicrobianas foram avaliadas por meio do teste de difusão em ágar. As NFs de PEMA apresentaram diâmetro menor, o padrão NF/PEMA apresentou 0,42µm enquanto que a NF/20 1,14 µm e a NF/10 foi de 0,87 µm. As fibras foram consideradas hidrofóbicas por meio da análise de molhabilidade. O DRX e o FTIR comprovaram a presença de PEMA e sugeriram a presença de NYS. O teste de difusão em ágar demonstrou que as fibras não conseguiram inibir a proliferação de C. albicans / Abstract: The objective of the study was to synthesize nanofibers (NFs) of Polyethylmethacrylate (PEMA) with addition of Nystatin (NYS) and to evaluate an antimicrobial activity in rigid and soft resins. Microbiological testing of NYS MIC for inactivation of C. albicans was performed. NFs were synthesized using the electrochemical technique using pure PEMA and NYS and PEMA solutions. For a synthesis of PEMA NFs, a solution of PEMA dissolved in Dimethylformamide (DMF) and 1,1,2,2 Tetrachloroethane (TCE) was produced, following doses of NYS concentrations (10 and 20 mg / ml) obtained from the CIM. As samples were analyzed in Scanning Electron Microscopy (SEM), Goniometer, X-ray Diffraction Analysis (XRD) and Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR). After an SEM analysis, a mean of the fiber diameters was performed with ImageJ Software. The antimicrobial activities were evaluated by means of the agar diffusion test. As the PEMA NFs presented smaller diameter, the NF / PEMA standard showed 0.42 μm whereas NF / 20 1.14 μm and the NF / 10 was 0.87μm. The fibers were considered hydrophobic by means of the wettability analysis. The DRX and the FTIR proved a presence of PEMA and suggested a presence of NYS. The diffusion test on agar demonstrated that as fibers failed to inhibit a proliferation of C. albicans / Mestre

Orientador: Cristiane Yumi Koga Ito / Coorientador: Prof. Konstatin Georgiev Kostov / Banca: Ivanildes Vasconcelos Rodrigues / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Janete Dias Almeida / Banca: Mônica Fernandes Gomes / Resumo: As doenças fúngicas representam grande desafio para a área médica e odontológica devido à crescente prevalência e aumento da resistência aos antifúngicos. O plasma frio sob pressão atmosférica (PFPA) é uma mistura gasosa contendo partículas carregadas, radicais livres e radiação. Sua potencial aplicação em doenças infecciosas foi relatada, contudo a literatura carece de estudo sistemático sobre o efeito antifúngico, mecanismos de ação e potencial citotóxico. Neste trabalho foi avaliado o efeito antifúngico do PFPA sobre Candida albicans através de ensaios em células planctônicas e biofilmes, efeitos sobre a integridade de parede celular e membrana plasmática, morfogênese, produção de exoenzimas, aderência às células epiteliais e efeito no tratamento in vivo de lesões de candidose oral induzida em modelo murino. Ainda, avaliou-se o efeito do PFPA sobre culturas de Trichophyton rubrum, além de efeitos sobre capacidade de adesão de conídios. Ainda, o potencial citotóxico foi investigado usando células epiteliais. PFPA em modo de tensão contínuo (MC) foi capaz de reduzir a aderência de C. albicans às células epiteliais, modular a transição levedura-hifa na cepa SC 5314 e comprometer a viabilidade de biofilmes. PFPA-MC se mostrou citotóxico em parâmetros efetivos frente a biofilmes de C. albicans. Porém, não foi observado efeito citotóxico quando o PFPA foi utilizado em modo de tensão pulsada (MP). A exposição ao PFPA-MP reduziu a invasão de C. albicans no epitélio in vivo. O PFPA... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / ABSTRACT Fungal diseases represent a great challenge to the medical and dental areas, due to the increasing prevalence and antifungal resistance. Atmospheric pressure plasma jet (APPJ) is a gaseous mixture containing charged particles, free radicals and radiation. Its potential application in infectious disease has been reported, however there is still a lack of a systematic study on the antifungal effect, mechanism of action and citotoxicc potential. The general aim of this project was to evaluate the antifungal effect of APPJ on Candida albicans in planktonic and biofilm cultures, effects on cell wall and cell membrane integrity, morphogenesis, exoenzymes production, adherence to epithelial cells and in vivo effect in the treatment of oral candidosis in murine model will be performed. The effect of APPJ on Trichophyton rubrum cultures and on adherence capability were also evaluated. The cytotoxic potential was evaluated in vitro. APPJ in continuous tension mode (CM) was able to reduce the adherence and yeast-hyphae transition in C. albicans SC 5314 and to decrease biofilm viability. APPJ-CM showed cytotoxic effect in the parameters effective to C. albicans biofilm. Conversely, no cytotoxic effect on epithelial cells were observed when pulsed (PM) plasma jet was used. In vivo tests showed that APPJ-PM was able to prevent C. albicans invasion to the epithelium. T. rubrum cultures were affectd by APPJ-PM after 15 minutes of exposure and conidia adherence was impaired by 10 minutes exposure. In conclusion, APPJ showed antifungal effect against C. albicans and T. rubrum and can also impair virulence factors in both microorganisms / Doutor

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Sílvia Maria Rodrigues Querido / Resumo: Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR multiplex é um método preciso, fácil, econômico e rápido... / Abstract: Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR methods is an accurate, easy, economical and quick to.... / Mestre

Orientador: Carmelinda Schmidt Unterkircher / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Keila Maria Roncato Duarte / Banca: Luiz Antonio Guimaraes Cabral / Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Resumo: O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / Abstract: The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-09Bitstream added on 2014-06-13T18:31:37Z : No. of bitstreams: 1 martins_js_me_sjc.pdf: 608313 bytes, checksum: e32f819f13bdf398082ecb9e208a1b5a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre a patogenicidade de C. albicans e C. dubliniensis na candidose bucal em ratos. Foram utilizados 96 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), sendo que 80 animais foram submetidos à indução de candidose experimental no dorso da língua por C. albicans ou C. dubliniensis e 16 ratos não foram infectados por Candida. Após 5 dias da indução da candidose, foram realizados diferentes tratamentos: laser e azul de metileno como fotossensibilizador (Grupo L+F+), apenas laser (Grupo L+F-), apenas fotossensibilizador (Grupo L-F+) e grupo sem laser e fotossensibilizador (Grupo L-F-). Após 1 dia, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar Sabouraud para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Os animais foram submetidos à eutanásia para análise microscópica do dorso da língua. Foi avaliada também a capacidade de produção de fosfolipase e proteinase por C. albicans e C. dubliniensis. Os resultados demonstraram que a quantidade de C. albicans recuperadas da cavidade bucal dos ratos foram semelhantes entre os quatro grupos estudados. C. dubliniensis não foi recuperarada da cavidade bucal dos ratos estudados. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se a presença de várias lesões teciduais induzidas por C. albicans, sendo que no grupo L+F+ essas lesões foram menores em relação aos demais grupos estudados. C. dubliniensis exibiu lesões teciduais discretas sem diferença estatística entre os grupos. Em relação aos fatores de patogenicidade de C. albicans, o grupo L+F+ produziu menor quantidade de fosfolipase e proteinase em relação aos demais grupos. C. dubliniensis produziu menor quantidade de fosfolipase em relação à C. albicans, sem diferença entre os 4 grupos estudados. Entretanto, C. dubliniensis não foi capaz de produzir proteinase... / The objective was to evaluate the effects of photodynamic therapy on the pathogenicity of C. albicans and C. dubliniensis in oral rats candidosis. Were evaluated 96 rats, while 80 were subjected to candidosis experimental induction on the tongue dorsum by C. albicans or C. dubliniensis and 16 rats were not infected. After 5 days of induction candidosis, different treatments were performed: laser and methylene blue as photosensitizers (Group L+F+), laser only (Group L+F-), only photosensitizers (Group L-F+) and without laser neither photosensitizers group (Group L-F). After 1 day, samples of the tongue dorsum were collected and sown on Sabouraud agar for counts of UFC/mL recovered from the oral cavity. The animals were submitted to euthanasia for microscopic analysis. It also evaluated the production capacity of a proteinase and phospholipase C. albicans and C. dubliniensis. The results showed that the amount of C. albicans recovered from rats oral cavity were similar among the four groups. To recover C. dubliniensis of the oral cavity from studied rats was not possible. In microscopic examination of tongue dorsum, was seen the presence of multiple tissue lesions induced by C. albicans, whereas in group L+ F+ these lesions were smaller than in other groups. C. dubliniensis showed slight tissue lesions with no statistic difference between groups. Regarding the factors of pathogenicity of C. albicans, the group L+F+ produced smaller amounts of phospholipase and proteinase compared to other groups. C. dubliniensis produced fewer quantitiy of phospholipase related to C. albicans, without difference between the 4 (four) groups studied. However, C. dubliniensis was not able to produce proteinase. It was concluded that the development of experimental candidosis by C. dubliniensis was less than that induced by C. albicans. Photodynamic therapy was effective on treatment... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Cristiane Duque / Banca: Janaina de Cássia Orlandi Sardi / Resumo: O gênero Candida pode ser encontrado em até 50% dos indivíduos saudáveis não causando danos aparentes, porém, sob condições predisponentes como doenças sistêmicas ou condições fisiológicas, pode tornar-se patogênico causando inflamação e destruição tecidual. Candida spp. na forma de biofilmes são importantes no desenvolvimento de infecções, pois estão associados a altos níveis de resistência a agentes antimicrobianos. Terapias alternativas com extratos naturais abrem novas perspectivas para prevenção e controle das doenças bucais na busca de efeitos terapêuticos favoráveis. O Terpinen-4-ol é um monoterpeno que atua na indução da perda da membrana e apresenta amplo espectro de atividade antimicrobiana e atividade anti-inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antifúngico, sinérgico/aditivo, inibição da adesão em células orais e alteração dos fatores de virulência do Terpinen-4-ol sobre Candida albicans e Candida tropicalis. Assim, foi realizada a identificação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) do Terpinen-4-ol sobre cepas padrão de C. albicans (ATCC 90028) e C. tropicalis (ATCC4563), empregando-se o método de microdiluição em caldo. Biofilmes mono e dual-espécies foram preparados usando o modelo de placa de microtitulação estática e quantificados por unidades formadoras de colônias (UFC/mL). O efeito do Terpinen-4-ol na adesão de C.albicans e C. tropicalis foi realizado em co-cultura com células orais NOK Si como tam... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Candida can be found in up to 50% of healthy individuals without causing apparent damage, however, under predisposing conditions such as systemic diseases or physiological conditions, can become pathogenic causing inflammation and tissue destruction. Candida spp. in the form of biofilms are important in the development of infections because they are associated with high levels of resistance to antimicrobial agents. Alternative therapies with natural extracts open new perspectives for prevention and control of oral diseases in search of favorable therapeutic effects. The Terpinen-4-ol is a monoterpene engaged in membrane loss of induction and presents broad spectrum of antimicrobial and anti-inflammatory activity. The aim of this study was to evaluate the antifungal effect, synergistic / additive inhibition of adhesion on oral cells and modification of virulence factors of Terpinen-4-ol of Candida albicans and Candida tropicalis. Thus, the identification of Minimum Inhibitory Concentration was performed (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) of Terpinen-4-ol on standard strains C. albicans (ATCC 90028) and C. tropicalis (ATCC4563), using the method microdilution broth. Biofilms mono and dual-species were prepared using the microtiter plate static model and quantitated by colony forming units (CFU / mL). The effect of Terpinen-4-ol in the adhesion on C. tropicalis and C. albicans was carried out in co-culture with oral cells NOK Si as well as virulence facto... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Adolfo José da Mota / Banca: Ricardo Sérgio Couto de Almeida / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Samira Esteves Afonso Camargo / Resumo: Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Abstract: Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Silvana Soléo Ferreira dos Santos / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: Interações entre micro-organismos ocorrem na natureza. O conhecimento das modificações estruturais, metabólicas e comportamentais de Candida albicans em interações com outros micro-organismos nos biofilmes, podem esclarecer os eventos que ocorrem quando estes micro-organismos interagem na natureza ou nos tecidos do hospedeiro e podem beneficiar as estratégias de controle da candidose. O objetivo do presente trabalho foi avaliar interações microbianas de C. albicans em biofilmes multiespécies e avaliar a patogenicidade dessas interações. Foram realizadas interações entre cepas padrão de C. albicans, com Acinetobacter baumanni e Klebsiella pneumoniae em biofilmes, avaliando-se a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Foram também avaliadas interações com cepas padrão de Candida albicans com dois isolados clínicos de cada um dos micro-organismos (A. baumannii e K. pneumoniae). A patogenicidade dos micro-organismos isolados e em interações com C. albicans foram avaliadas no modelo experimental Galleria mellonella. Houve aumento no crescimento de C. albicans em biofilme in vitro quando em interação com as cepas clínicas testadas. A interação in vitro de C. albicans com A. baumannii favoreceu o crescimento de C. albicans de forma significativa e não afetou A. baumannii, com maior aumento na interação com as cepas clínicas. Exceto para a cepa clínica 1, a interação com K. pneumoniae também estimulou o crescimento de C. albicans, mas em menor intensidade quando comparado à interação entre C. albicans e A. baumannii. Conclusão: a interação de C. albicans in vitro com A. baumannii ou K. pneumoniae foi favorável para C. albicans exceto em interação com cepa clínica 1 de K. pneumoniae, onde houve redução no crescimento de C. albicans. Houve redução na porcentagem de morte de G. mellonella quando inoculada com C. albicans e cepa clínica 2 de K. pneumoniae ou quando G. mellonella... / Abstract: nteractions among microorganisms occur in nature. The knowledge of structural, metabolic and behavioral modifications of Candida albicans in interactions with other microorganisms in biofilms can clarify the events that occur when those microorganisms interact in nature or in host tissue and can benefit in strategies to control candidiasis. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions of C. albicans in multispecies biofilms and evaluate the pathogenicity of these interactions. Were performed interactions between standards strains of C. albicans with standards strains of Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae in biofilms, evaluating the counts of colony forming units per milliliter (CFU / mL). Were also performed interactions between standard strain of C. albicans with two clinical isolates of each one of the microorganisms (A. baumannii and K. pneumoniae). The pathogenicity of the isolated micro-organisms and in interaction with C. albicans was evaluated in Galleria mellonella experimental model. There was an increase in the growth of C. albicans in in vitro biofilm when interacting with the clinical strains tested. The interaction in vitro between C. albicans and A. baumannii favored the growth of C. albicans significantly and did not affect A. baumannii, with the biggest increase in interaction with the clinical strains. Except for clinical strain 1, the interaction with K. pneumoniae also promoted the growth of C. albicans, but at a lower intensity compared to the interaction between C. albicans and A. baumannii. Conclusion: The interaction in vitro between C. albicans with Acinetobacter baumannii or K. pneumoniae was favorable for C. albicans except in the interaction K. pneumonia clinical strain 1, in which there was a reduction in the growth of C. albicans. There was a reduction in the percentage of G. mellonella death when inoculated with C. albicans... / Mestre